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计数培养基适用性检验验证方案
目 录
1. 验证目:
细菌、 霉菌及酵母菌计数用培养基应进行培养基适用性检验。此次验证目是确定营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基适合细菌、 霉菌及酵母菌数测定。
2. 参考标准: 中国药典二部附录XI J微生物程度检验法。
3. 验证项目: 营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基适用性检验。
4.验证小组人员及职责:
4.1验证小组人员:
小组人员职务
姓 名
所在部门
职 务
组 长

质量部
经 理
组 员

质量部

组 员

质量部
检验员
4.2验证人员职责及要求
4.2.1按验证方案及相关文件实施验证。
4.2.2认真观察并做好验证原始统计。
4.2.3对实施验证结果负责。
5. 合格标准: 被检培养基上菌落平均数大于对照培养基上菌落平均数70%, 且菌落形态大小与对照培养基上菌落一致。
6. 试验材料:
6.1. 被验证产品: 营养琼脂培养基、 玫瑰红钠琼脂培养基
6.2. 仪器设备:
6.2.1. *********蒸汽灭菌器
6.2.2.*********净化工作台
6.2.3. *********净化操作台
6.2.4. *********霉菌培养箱 (23～28℃)
6.2.5. *********电热恒温培养箱 (30～35℃)
6.2.6. *********远红外烘箱
6.2.7 *********电热鼓风干燥箱
6.2.8*********微波炉
6.3. 验证用培养基
名称
生产厂家
批号
营养琼脂培养基

营养肉汤培养基

玫瑰红钠琼脂培养基

改良马丁培养基

改良马丁琼脂培养基

营养琼脂对照培养基

玫瑰红钠琼脂对照培养基

酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基

6.4. 验证用菌株: （第 代）
验证菌株
培养基
培养温度
培养时间（小时）
大肠埃希菌
营养肉汤
30—35℃
18—24
金黄色葡萄球菌
营养肉汤
30—35℃
18—24
枯草芽孢杆菌
营养肉汤
30—35℃
18—24
白色念珠菌
改良马丁培养基
23—28℃
24—48
黑曲霉菌
改良马丁琼脂培养基
23—28℃
5—7（天）
7. 菌液制备
7.1. 接种大肠埃希菌、 金黄色葡萄球菌、 枯草芽孢杆菌新鲜培养物 至营养肉汤培养基或营养琼脂培养基中, 培养 18～24 小时; 接种白色念珠菌 新鲜培养物至改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基中, 培养 24～48 小时。上 述培养物用 0.9%无菌氯化钠溶液制成每 1ml 含菌数为 50～100cfu 菌悬液。接 种黑曲霉新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中, 培养 5～7 天, 加入 3～ 5ml 含 0.05％（v/v）聚山梨酯 80 0.9%无菌氯化钠溶液, 将孢子洗脱。然后, 用适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内, 用含 0.05％（v/v）聚山梨酯 80 0.9% 无菌氯化钠溶液制成每 1ml 含孢子数 50～100cfu 孢子悬液。
菌悬液在室温下放置应在 2 小时内使用, 若保留在 2～8℃可在 24 小时内使 用。黑曲霉孢子悬液可保留在 2～8℃, 在验证过贮存期内使用。
8.菌液计数: （每种菌液接种2个平皿）
大肠埃希菌、 金黄色葡萄球菌与枯草芽孢杆菌分别取1ml接种至营养琼脂培养基中, 置30～35℃培养48小时; 白色念珠菌、 黑曲霉分别取1ml接种至玫瑰红钠琼脂培养基, 置23～28℃培养72小时。
菌落计数结果（2个平皿计数取平均值）见下表
菌落计数结果（cfu∕ml）
试验次数
10-5稀释
10-6稀释
10-7稀释
1
2
3
1
2
3
1
2
3
大肠埃希菌

金黄色葡萄球菌

枯草芽孢杆菌

白色念珠菌

黑曲霉

9.适用性检验:
取大肠埃希菌、 金黄色葡萄球菌、 枯草芽孢杆菌各 50～100cfu, 分别注入无菌平皿中, 立刻倾注营养琼脂培养基, 每株试验菌平行制备 2 个平皿, 混匀, 凝固, 置 30～35℃培养 48 小时, 计数; 取白色念珠菌、 黑曲霉各 50～100cfu, 分别注入无菌平皿中, 立刻倾注玫瑰红钠琼脂培养基, 每株试验菌平行制备 2 个平皿, 混匀, 凝固, 置 23～28℃培养 72 小时, 计数; 取白色念珠菌 50～100cfu, 注入无菌平皿中, 立刻倾注酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基, 平行制备 2 个平皿, 混匀, 凝固, 置 23～28℃培养 72 小时, 计数。同时, 用对应对照培养基由中国药品生物制品检定所研制与分发。
替换 被检培养基进行上述试验。
9.2. 结果见附表
10. 结论

附表1:
计数培养基适用性检验验证统计
试验时间 年 月 日 完成时间 年 月 日
验证菌株
平皿号
供试品组
cfu∕ml

对照培养基组
cfu∕ml

回收率%
应≥70%

大肠埃希菌
(培养3天计数)
1

--
2

--
平均值

金黄色葡萄球菌
(培养3天计数)
1

--
2

--
平均值

枯草芽孢杆菌
(培养3天计数)
1

--
2

--
平均值

白色念珠菌
(培养5天开始计数)
1

--
2

--
平均值

黑曲霉菌
(培养5天开始计数)
1

--
2

--
平均值

结论

复核人 试验人