生物制药技术.doc

一
1、 基因工程—— 答: 是将一个生物细胞基因分离出来, 在体外进行酶切和连接并插入载体分子组成遗传物质新组合, 引入一个宿主细胞后使目基因得以复制和表示技术。
2、 酶法制药——利用酶催化功效经底物转化为药品过程。
3、 超氧化物歧化酶（SOD）——是广泛存在于生物体内多种组织一个金属酶, 是机体细胞抵御氧化损伤最关键酶之一。
4、 培养基——是微生物、 植物和动物组织生长和维持用人工配置养料。
5、 植物细胞工程——以植物细胞为基础单位在体外条件下进行培养、 繁殖和人为操作, 改变细胞一些生物学特征, 从而改良品种加速繁育植物个体或取得有用物质技术。
1、 卵磷脂——卵磷脂属于一个混合物, 是存在于动植物组织以及卵黄之中一组黄褐色油脂性物质, 其组成成份包含磷脂、 胆碱、 脂肪酸、 甘油、 糖脂、 甘油三酸脂以及磷脂。
2、 基因工程药品——是指重组DNA技术生产多肽、 蛋白质、 酶、 激素、 疫苗、 单克隆抗体和细胞因子等。
3、 固定化酶——指限制或固定于特定空间位置酶。
4、 细胞工程技术——应用细胞生物学和分子生物学原理和方法, 经过某种工程学手段, 在细胞整体水平或细胞器水平上, 依据大家需要和设计来改变细胞内遗传物质或取得细胞产品一门综合科学技术。
5、 生物药品——生物药品是利用生物体、 生物组织或其成份, 综合应用生物学、 生物化学、 微生物学免疫学、 生物分离与纯化技术和药学原理与加工方法进行加工、 制造而成一大类预防诊疗、 诊疗疾病物质。
二
1、 国外生物制药发展方向突出表现在以下多个方面: 克隆技术、 血管生长、 艾滋病疫苗、 药品基因组学。
2、 生物药品提取和纯化可分为5个关键步骤: 预处理、 固液分离、 浓缩、 纯化、 和产品定型(干燥,制丸, 挤压, 造粒制片)。
3、 微生物药品通常对热、 酸、 碱、 酶不稳定, 则应尽可能在 低温 、 清洁 和严格化学条件下快速操作。
4、 动物细胞体外培养培养基包含 天然培养基、 合成培养基 和无血清培养基三种。
5、 酶和细胞固定化方法: 载体结合、 交联、 包埋、 吸附。
6、 制备基因工程药品基础程序: 取得目基因→构建重组质粒→构建基因工程菌（或细胞）→培养工程菌（或细胞）→产物分离纯化→除菌过滤→半成品和成品检定→包装。
7、 测定海藻酸钠固定化中性蛋白酶酶活性采取福林-酚法。
1、 国外生物制药发展方向突出表现在以下多个方面: 克隆技术、 血管生长、 艾滋病疫苗、 药品基因组学。
2、 生物药品提取和纯化可分为5个关键步骤: 预处理、 固液分离、 浓缩、 纯化、 和产品定型(干燥,制丸, 挤压, 造粒制片)。
3、 微生物药品通常对热、 酸、 碱、 酶不稳定, 则应尽可能在 低温 、 清洁 和严格化学条件下快速操作。
4、 动物细胞体外培养培养基包含 天然培养基、 合成培养基 和无血清培养基三种。
5、 酶和细胞固定化方法: 载体结合、 交联、 包埋、 吸附。
6、 制备基因工程药品基础程序: 取得目基因→构建重组质粒→构建基因工程菌（或细胞）→培养工程菌（或细胞）→产物分离纯化→除菌过滤→半成品和成品检定→包装。
7、 测定海藻酸钠固定化中性蛋白酶酶活性采取_福林-酚法。
三
1、 自然界中多倍体动物出现几率高于植物 （×）
2、 三倍体高度不育是因为绝大多数配子中染色体数目不正常 （√）
3、 玉米素是最新发觉植物天然细胞分裂素（×）。
4、 产黄青霉菌生长分为三个不一样代谢时间期, ①菌丝生长繁殖期②青霉素分泌期③菌丝自溶期。 （√）
5、 真菌产生抗生素关键有青霉素、 红霉素、 头孢菌素 （×）
6、 固定化酶形状有颗粒状、 纤维状、 膜状固定化酶和粉末状固定化酶 （ × ）
7、 在基因工程中使用限制性核酸内切酶, 其作用是识别并切割特定DNA核苷酸序列（√）。
8、 基因工程中常见载体是病毒（×）
9、 将卵磷脂样品与对照品分别配成氯仿溶液, 用GF254硅胶板进行层析, 展开剂氯仿: 甲醇: 水（65:25:4） （ √）
10、 在海藻酸钠固定中性蛋白酶试验中, 加入固定化酶与海藻酸钠溶液体积之比是2: 1 。 （×）
1、 取得生物制药原料关键路径是应用动、 植物细胞培养与微生物发酵 （√）
2、 干扰素是糖类药品（×）。
3、 玉米素是最早发觉植物天然细胞分裂素（√）。
4、 产黄青霉素生长分为三个不一样代谢时间期, ①菌丝生长繁殖期②青霉素分泌期③菌丝自溶期。 （√）
6、 真菌产生抗生素关键有青霉素、 红霉素、 头孢菌素 （×）
6、 固定化酶形状有颗粒状、 纤维状、 膜状固定化酶和管状固定化酶 （ √ ）
7、 在基因工程中使用限制性核酸内切酶, 其作用是识别并切割特定DNA核苷酸序列（√）。
8、 基因工程中常见载体是质粒（√）
9、 将卵磷脂样品与对照品分别配成氯仿溶液, 用GF254硅胶板进行层析, 展开剂氯仿: 甲醇: 水（65:25:4） （ √）
10、 在海藻酸钠固定中性蛋白酶试验中, 加入固定化酶与海藻酸钠溶液体积之比是1:2 。 （√）
四
１、 以下不是酶提取关键方法是（ D ）
A水溶液法
B有机溶剂法
C表面活性剂法
D热变性法
2、 海藻酸钠固定中性蛋白酶常见固定方法是（ B ）
A吸附法
B包埋法
C交联法
D共价结正当
3、 基因工程单元操作次序是（A）。
A．酶切, 连接, 转化, 筛选, 验证;
B．酶切, 转化, 连接, 筛选, 验证;
C．连接, 转化, 筛选, 验证, 酶切;
D．验证, 酶切, 连接, 筛选, 转化。
4、 大家利用基因工程方法, 用大肠杆菌生产人类胰岛素, 这一过程不包含到（D）。
A.用合适酶对胰岛素基因与运载体进行切割并连接;
B.把重组后DNA分子导入受体细胞内并进行扩增;
C.检测重组DNA分子是否导入受体细胞内并表示出对应性状;
D.检测目基因是否发生结构上改变。
5、 卵磷脂制备中不需要试验器材是（ B ）
A、 离心机 B、 分液漏斗 C、 旋转蒸发仪 D、 紫外分光光度计
6、 海藻酸钠固定中性蛋白酶常见固定方法是（ B ）
A.吸附法
B.包埋法
C.交联法
D.共价结正当
7、 下列属于细胞因子类动物细胞培养技术生产药品是 （A）
A干扰素 B黄体生成素 C乙肝疫苗 D神经生长因子
8、 下列不属于生化药品是: （B）
A、 氨基酸B、 生物碱 C、 蛋白质D、 酶
9、 能用于防治血栓酶类药品有（D）
A. SOD; B. 胰岛素; C. L-天冬酰胺酶; D. 尿激酶
10、 青霉素发酵时, 用于消泡首选天然物质是（ D ）
A、 花生油
B、 色拉油
C、 橄榄油
D、 大豆油
１、 卵磷脂制备中不需要试验器材是（ B ）
B、 离心机 B、 分液漏斗 C、 旋转蒸发仪 D、 紫外分光光度计
2、 基因工程单元操作次序是（A）。
A．酶切, 连接, 转化, 筛选, 验证;
B．酶切, 转化, 连接, 筛选, 验证;
C．连接, 转化, 筛选, 验证, 酶切;
D．验证, 酶切, 连接, 筛选, 转化。
3、 以下不是酶提取关键方法是（ D ）
A水溶液法
B有机溶剂法
C表面活性剂法
D热变性法
4、 进行动物细胞培养时, 通常选择培养材料是（ D ）
A．衰老退化动物组织细胞
B．成熟动物个体体细胞
C．动物受精卵细胞
D．动物胚胎或幼龄动物个体细胞
5、 在抗生素生物合成中, 菌体用来组成抗生素分子而本身分子又没有显著改变物质为（ A ）
A、 前体
B、 促进剂
C、 消沫剂
D、 抗体
6、 下列不属于生化药品是: （B）
A、 氨基酸B、 生物碱 C、 蛋白质D、 酶
7、 下列属于细胞因子类动物细胞培养技术生产药品是 （ A）
A干扰素 B黄体生成素 C乙肝疫苗 D神经生长因子
8、 能用于防治血栓酶类药品有（D）
A. SOD; B. 胰岛素; C. L-天冬酰胺酶; D. 尿激酶
9、 青霉素发酵时, 用于消泡首选天然物质是（ D ）
A、 花生油
B、 色拉油
C、 橄榄油
D、 大豆油
10、 相关动物细胞培养叙述错误是（ D ）
A．用于培养细胞大都取自胚胎或幼龄动物器官或组织
B．将所取组织先用胰蛋白酶等进行处理使其分散成单个细胞
C．在培养瓶中要定时用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离, 制成悬浮液
D．动物细胞培养只能传50代左右, 所培养细胞会衰老死亡
五
1、 生物制药发展关键经过了哪多个过程（满分5分, 每点1分）
a天然生物材料提取制药
b发酵工程制药
c酶工程制药
d细胞工程制药
e基因工程制药
2、 酶类药品基础要求是什么？（满分5分, 每点1分, 最低0分）
答: （1）在生理pH下, 含有高活性和稳定性
（2）对其作用底物含有较高亲和力
（3）在血清中半衰期较长
（4）纯度高
（5）免疫原性较低或无免疫原性
（6）有些酶需要辅酶或ATP和金属离子。
3、 单克隆抗体生产技术路线是怎样？（满分5分, 每点1分, 最低0分）
（1）动物免疫与免疫脾细胞悬液制备
（2）骨髓瘤细胞取得与培养
（3）细胞融合
（4）融合细胞筛选
（5）分泌抗体融合细胞筛选
（6）单克隆抗体大量生产
4、 基因工程制药特点。(满分5分, 每项1分)
答: ①能够大量生产过去难以取得生理活性蛋白和多肽, 为临床使用提供有力保障;
②能够提供足够数量生理活性物质, 方便对其生理和生化结构进行深入研究, 从而扩大这些物质应用范围;
③应用基因工程技术能够发觉、 挖掘更多内源性生理活性物质;
④内源性生理活性物质在作为药品使用时存在不足之处, 能够经过基因工程和蛋白质工程进行改造和去除;
⑤利用基因工程技术可取得新化合物, 扩大药品筛选起源。
1. 酶类药品基础要求是什么？（5分, 错、 少每点扣1分, 最低0分）
答: （1）在生理pH下, 含有高活性和稳定性 （2）对其作用底物含有较高亲和力 （3）在血清中半衰期较长 （4）纯度高 （5）免疫原性较低或无免疫原性 （6）有些酶需要辅酶或ATP和金属离子。
2、 抗生素生产通常工艺过程（5分, 每步1分）
菌种→a孢子制备→b种子制备→c发酵发酵液预处理→d提取精制→e产品生成
3、 简述单克隆抗体生产技术路线（5分, 每步1分, 最低0分）
（1）动物免疫与免疫脾细胞悬液制备
（2）骨髓瘤细胞取得与培养
（3）细胞融合
（4）融合细胞筛选
（5）分泌抗体融合细胞筛选
（6）单克隆抗体大量生产
4、 生物药品根据药品化学结构和特征有哪些类型？（满分5分, 每类1分, 最低0分）
（1）氨基酸类药品及其衍生物
（2）多肽和蛋白类药品
（3）酶类药品
（4）核酸及其降解物和衍生物
（5）糖类药品
（6）细胞因子类
（7）生物制品类
六
1. 叙述基因工程药品生产基础过程。（10分）
答: （1）上游阶段: （以下每步1分）
第一步, 首先用人工合成方法或从供体细胞DNA中直接分离出目基因;
第二步, 将目基因与运载体结合, 实现重组DNA构建;
第三步, 将重组DNA分子导入受体细胞, 让外源目基因得以大量扩增或表示;
第四步, 为了受体细胞表现出特定性状说明目基因完成了表示过程, 要对重组子进行筛选与判定;
五步, 做好重组体在宿主细胞表示中调控及检测, 以确保目基因表示产量、 稳定性、 生物学活性和表示产物分离纯化。此阶段工作关键在试验室内完成。
（2）下游阶段: (以下每点1分)
此阶段是将试验室结果产业化、 商品化, 关键包含
a.工程菌大规模发酵最好参数确立,
b. 基因工程菌发酵工艺控制（接种量、 温度、 溶解氧浓度、 pH）,
c. 基因工程药品分离纯化,
d. 基因工程药品质量控制等。
e. 还有新型生物反应器研制, 高效分离介质及装置开发, 分离纯化优化控制, 高纯度产品制备技术, 生物传感器等一系列仪器表设计和制造, 电子计算机优化控制等。
1、 试叙述青霉素提炼工艺步骤。（10分）
（1）工艺步骤: （3分）
发酵滤液 ①一次BA萃取液 ② 一次水提取液 ③ 二次BA萃取液 ④脱色液 ⑤ 结晶混悬液 ⑥ 湿晶体 ⑦ 青霉素工业盐
（2）工艺关键点: （每点1分）
① 萃取 : 用15%硫酸调整ｐＨ2.0—2.2, 按1: （3.5—4.0）体积比加入乙酸丁酯（BA）及适量破乳剂, 在5℃左右进行逆流萃取。
② 反萃取: 按1: （4--5）体积比加入1.5% NaHCO3缓冲液（ｐＨ6.8—7.2）, 在5℃左右进行逆流反萃取。
③ 再次萃取: 用15%硫酸调整ｐＨ2.0—2.2, 按1: （3.5—4.0）体积比加入乙酸丁酯（BA）, 在5℃左右进行逆流萃取。
④ 脱色: 加入粉末活性炭, 搅拌15—20分钟脱色, 然后过滤。
⑤ 形成青霉素钾盐并结晶: 按脱色液中青霉素含量计算所需钾量110%加入25%乙酸钾丁醇溶液, 在真空度>0.095MPa及45--48℃下共沸结晶。
⑥ 过滤、 洗涤: 过滤, 前后用少许丁醇和乙酸乙酯各洗涤晶体2次。
⑦ 真空干燥: 在>0.095MPa真空及50℃下干燥。
七
1、 请简述用海藻酸钠固定中性蛋白酶关键工艺条件, 并谈谈影响固定化率原因。
答: （1）最好工艺条件为: 海藻酸钠浓度3．0％, 固定化酶液量与海藻酸钠体积比1: 2, 固定化时间2．5h, CaCl2浓度3.0％, 由此制得固定化酶固定化率可达97．5％, 固定化酶活性为3600U／g, 其热稳定性、 pH值稳定性均极显著高于游离酶。（6分）
（2）固定化酶质量受海藻酸钠浓度、 固定化酶量、 固定化时间以及CaCl2浓度影响。（4分）
1、 请卵磷脂制备试验原理。（10分）
利用卵磷脂可溶性于乙醇性质, 将卵黄溶于乙醇, 卵磷脂从卵黄中转移到乙醇溶液中, 可分离提取出来, 而蛋白质等一些杂质从沉淀物中除去。（3分）
但因为乙醇溶剂抽提时, 其她脂质也一起被抽提, 如甘油三酯、 甾醇等。利用卵磷脂不溶于丙酮性质, 用丙酮从粗卵磷脂溶液中沉淀磷脂, 能使卵磷脂与其她脂质和胆固醇分离开来。（3分）
无机盐和卵磷脂可生成络合物沉淀, 所以可利用金属盐沉淀剂将卵磷脂从溶液中分离出来, 由此除去蛋白质、 脂肪等杂质, 再使用合适溶剂萃取出无机盐和其她磷脂杂质, 这么可大大提升卵磷脂纯度。（4分）