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摘要
二十一世纪大家生活水平发生了翻天覆地改变, 生活水平有了质飞跃, 但同时越来越多多种疾病也让大家痛苦不堪, 用现代人话说就是富贵病, 吃好, 运动少。为此现在人最为关心是自己健康。很多企业都全力研发多种新药来处理现在多种疾病, 有中药也有西药, 我企业为浙江海正药业股份有限企业就有生产通络生骨胶囊, 关键用于改善股骨头内血液供给血液循环、 营养供给, 促进股骨头内坏死组织和血管修复再生, 缓解关节疼痛, 促进死骨吸收, 加速新骨形成, 其原药材为木豆叶。所以本人会对木豆叶作简单介绍。对木豆叶中牡荆苷这一有效成份作简单分析。不一样株高木豆叶牡荆苷含量是不相同, 那么到底株高多少牡荆苷含量是最高最适合作为通络原料, 为此将用高效液相色谱法对不一样株高牡荆苷做简单分析。
关键词: 木豆叶 高效液相色谱法 牡荆苷
目录
一、 木豆叶概述
(一) 木豆叶形态特征……………………………………………………………5
（二）木豆叶分布与生物学特征…………………………………………………5
（三）木豆叶药用…………………………………………………………………5
二、 牡荆苷分析测定
（一）仪器与试剂……………………………………………………………………6
（二）对照品溶液制备……………………………………………………………6
（三）供试品溶液制备……………………………………………………………6
（四）测定方法………………………………………………………………………6
（五）小结……………………………………………………………………………14
三、 整个分析过程碰到问题及处理方法
（一）取样要有代表性(处理方法: 打粉要细、 要均匀)…………………………15
（二）浓缩时防治冲液（处理方法: 浓缩要少许数次）…………………………15
（三）定容要完全……………………………………………………………………15
四、 结论…………………………………………………………………………………15
五、 参考文件……………………………………………………………………………16
引言
中国学者从90年代开始对木豆叶进行了新药研究, 关键集中在用木豆诊疗外伤、 烧伤、 感染和抗菌消炎等研究。尤其是广州中医药大学袁浩教授在研究中发觉木豆叶对诊疗股骨头缺血性坏死有神奇功效, 研制和开发了国家级新药“通络生骨胶囊”, 我企业为浙江海正药业于取得了国家新药证书并进行产业化生产。
现在, 多采取黄酮、 牡荆苷、 多糖等作为药材质量控制指标。很多学者对木豆叶中黄酮、 牡荆苷、 多糖有不一样深度研究, 因为工作关系, 本人将对不一样株高木豆叶中牡荆苷含量做一次简单分析, 做出简单结论。不一样产地木豆叶株高不一样, 牡荆苷含量也各异, 到底多少株高木豆叶牡荆苷含量是最高, 综合其她检测项目, 多少株高木豆叶是最适合作为中药通络生骨胶囊原药材？故本试验采取高效液相色谱法, 对云南产不一样株高（15cm、 30cm、 45cm、 60cm、 70cm）木豆叶进行牡荆苷含量分析测定, 为质量控制提供参考。
一、 木豆叶概述
（一） 木豆叶形态特征
木豆英文名为pigeon pea, 别名黄豆树, 三叶豆等, 是现在世界上唯一用途最多豆类作物, 其根、 茎、 叶、 花、 荚全身是宝, 综合价值极高, 含有显著药用价值。木豆作为含有显著生态和经济效益速生灌木, 伴随其经济用途与社会用途广泛发展, 中国木豆产业发展展现勃勃生机。
木豆属于豆科, 蝶形花亚科, 菜豆族, 木豆亚族木豆属。木豆为落叶灌木多分枝, 茎粗大至几厘米, 老枝无毛, 棱不显著, 嫩枝5棱状, 被短毛而呈灰白色, 棱间槽沟状深绿色。叶互生, 三出复叶, 小叶片与叶柄连接处略膨大, 密被微毛, 偶见柔软尖状托叶2枚。叶披针形至椭圆形, 叶端渐尖。叶背被灰白色微毛具不显著腺点, 气清香。叶面绿色无光泽, 柔软无光滑感。种子略扁, 类圆形, 新株肥足可大如黄豆, 种皮黄褐色至红褐色, 种脐白色, 子叶两枚肥大。
（二） 木豆叶分布与生物学特征
据相关资料显示, 现在世界上90多个国家有木豆栽培, 亚洲是世界上最大木豆产区, 面积和产量均占世界木豆生产92%以上, 其中印度又是世界上最大木豆生产国, 亚洲除印度之外, 缅甸、 尼泊尔、 中国、 孟加拉也有较大面积木豆生产。中国木豆栽培也比较多, 关键分布于长江以南海南、 云南、 广西、 贵州、 广东以及福建、 湖南、 四川、 江西、 浙江等省区。据估量, 以前每年种植面积一直徘徊在3500-4000公顷, 总产量约为3000吨, 1997年开始, 针对中国农业生产、 水土保持以及消费习惯实际需要, 从国际半干旱热带作物研究全部选择引进木豆改良品种进行推广, 到现在中国木豆种植面积已经上升到15000公顷以上。
木豆生命力强, 耐旱、 耐寒、 木豆是短日性或中日性植物, 较喜温, 长温度范围10-35℃, 最适温度11-29℃, 光照愈短, 愈能促进花芽分化, 提早开花成熟。因为属多年越冬植物, 要尽可能避免越冬时遭受冻害, 所以木豆对温度要求较为严格。最好选择在月平均气温不低于5℃地域种植, 温度低于-5℃时, 木豆种植则会受到冻害。较耐干旱, 在年降雨量仅为380mm地域也能支持生长。木豆对土壤要求不严, 能适应多种类型土壤, 沙土、 土、 石烁土都能种植, 适宜土壤PH值在5-7。现在新培育部分相对矮化和生育期较短品种, 可在南北纬45°范围内栽培。
（三） 木豆叶药用
中国、 印度、 西非、 加勒比地域及其她很多国家民间均以木豆不一样部位入药。在印度, 用木豆嫩叶外敷以诊疗外伤, 木豆叶粉末被用作祛除膀胱结石药品。木豆叶用盐腌制后汁液被用作诊疗黄疸。木豆叶被用作诊疗大家（尤其是女性）生殖系统及其她皮肤感染。木豆在中国作为传统中药和民间药, 应用广泛。
木豆叶药用功效显著, 可诊疗外伤、 烧伤, 可止痛、 消肿、 止血, 其消炎止痛功效优于水杨酸。叶煎剂对咳嗽、 腹泻等有效。
中国广东省药材标准中对木豆叶功效与主治描述为: 活血化瘀, 消肿止痛, 补肾健骨, 去腐生肌, 用于瘀血肿痛, 股骨头缺血性坏死, 外治水痘及多种感染创面。
木豆根部有清热解毒、 利湿止血、 止痛和杀虫作用, 主治咽喉肿痛, 痔疮出血, 血淋水肿, 小便不利。
木豆叶假如制成通络生骨胶囊能够诊疗股骨头缺血性坏死, 那么株高多少木豆叶效果最好呢。接下来分析分析不一样株高牡荆苷含量。
二、 牡荆苷分析测定
（一）仪器与试剂
仪器: 高效液相色谱仪(Agilent1100)
色谱柱: Kromasil C18 250*4.6mm
十万分之一天平: CP225D
数控超声清洗器: KQ5200DA
试剂: 无水甲醇（分析纯）
色谱甲醇（色谱纯）
无水乙醇（分析纯）
冰醋酸（分析纯）
三氯甲烷（分析纯）
牡荆苷对照品（国家标准）
（二）对照品溶液制备
精密称取在110℃干燥至恒重牡荆苷对照品适量, 加50%甲醇制成每1ml含0.1mg溶液, 即得。
（三）供试品溶液制备
取本品15cm、 30cm、 45cm、 60cm、 70cm木豆叶打成粉1g, 精密称定, 各置具塞锥形瓶中, 各加三氯甲烷50ml, 超声处理30min, 滤过, 弃去三氯甲烷液, 药渣挥干, 精密加入100ml甲醇, 称定重量, 超声处理60min, 取出放冷, 再称定重量, 用甲醇补足减失重量, 摇匀, 滤过, 滤液蒸干, 残渣用10ml水溶解, 上预先处理好D101型大孔吸附树脂柱(1.5cm*10cm), 先用100ml水洗柱, 流速2ml/min, 弃去水洗脱液, 再依次用100ml50%乙醇和100ml95%乙醇洗脱, 搜集50%乙醇和100ml95%乙醇洗脱液, 蒸干, 残渣用50%甲醇溶解并转移至10ml容量瓶中, 用50%甲醇稀释至刻度, 摇匀, 即得。
（四）测定方法
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂; 先以甲醇-0.05%冰醋酸（26:74）洗脱50min, 再以甲醇-0.05%冰醋酸（90:10）洗脱15min, 检测波长267nm, 理论板数按牡荆苷峰计算, 不低于6000.
时间(min)
甲醇
0.05%冰醋酸
柱温（℃）
0-50
26
74
30
50-65
90
10
30
65-80
26
74
30
ST1表现理论塔板数, 其她ST以简短汇报模式, 不表现理论塔板数
通常ST进6针, 样品做平行样
对照品图谱跟不一样株高木豆叶样图谱以下:
因为图谱为扫描件, 所以不是很清楚, 请谅解
ST1: 岀峰时间为37.544.峰面积为2242.7, 理论塔板数为12201大于6000
ST2: 岀峰时间为37.510.峰面积为2184.9
ST3: 岀峰时间为37.375.峰面积为2182.2
ST4: 岀峰时间为37.569.峰面积为2183.1
ST5: 岀峰时间为37.620.峰面积为2184.7
ST6: 岀峰时间为37.497.峰面积为2187.2
株高为15cm样-1: 牡荆苷岀峰时间为37.366, 峰面积为986.9
株高为15cm样-2: 牡荆苷岀峰时间为37.547, 峰面积为982.2
（四） 小结
从6针牡荆苷对照品图谱跟株高为15cm两个平行样能够看出, 牡荆苷岀峰时间为37.5+(-)0.2min,现将图谱峰面积数据汇总以下:
ST1
峰面积2242.7
出峰时间37.544
ST2
峰面积2184.9
出峰时间37.510
ST3
峰面积2182.2
出峰时间37.375
ST4
峰面积2183.1
出峰时间37.569
ST5
峰面积2184.7
出峰时间37.620
ST6
峰面积2187.2
出峰时间37.497
平均峰面积
2194.1
株高
峰面积
木豆叶质量
出峰时间
15cm-1
986.9
1.00034g
37.366
15cm-2
982.2
1.00003g
37.547
30cm-1
1201.9
1.00043g
37.618
30cm-2
1187.0
1.00067g
37.473
45cm-1
517.0
1.00056g
37.542
45cm-2
569.8
1.00132g
37.528
60cm-1
478.1
1.00012g
37.536
60cm-2
500.4
1.00045g
37.769
70cm-1
867.8
1.00067g
37.788
70cm-2
836.2
1.00060g
37.842
牡荆苷含量%=(样品峰面积*标准品浓度*10*100)/(标准品平均峰面积*质量)
由上面分析得出, 在不考虑其她成份条件下, 株高为30cm木豆叶牡荆苷含量是最高。（木豆叶质量指标关键包含牡荆苷、 黄酮、 多糖）
三、 分析过程碰到问题及处理方法
（一）取样要有代表性(处理方法: 打粉要细、 要均匀)
每批木豆叶药材抵达企业少则几吨, 多则几十吨几百吨, 为此取样比较麻烦, 为此我们取样时候尽可能要有代表性, 在打粉过程中要尽可能打细, 打好粉后要混合均匀, 在称量检测。
（二）浓缩时防治冲液（处理方法: 浓缩要少许数次）
从供试品溶液制备中, 能够看到, 整个过程我们要浓缩两次, 第一次为水, 温度不宜过高（80℃以内）, 第二次是乙醇跟水混合液, 温度控制在65℃左右, 因为在浓缩过程中轻易冲液, 所以我们自浓缩时要少许数次以避免冲液。
（三）定容要完全
最终我们定容10ml容量瓶中, 所以我们要少许数次尽可能定容完全, 以免影响结果。
总而言之, 在整个过程每一个步骤我们都要仔细认真对待, 任何一个步骤出现失误, 都要影响最终止果, 所以一定要小心。
四、 结论
在不考虑其她原因（如黄酮、 牡荆苷等）条件下, 由以上试验得出结论是株高为30cm木豆叶牡荆苷含量是最高。所以我们在选材时不宜选择株高过高木豆叶, 因为木豆叶购置时都是以重量计算, 而且过高株高牡荆苷含量不高。本结果仅供参考。
五、 参考文件
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