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化妆品中甲醛检测方法
（征求意见稿）
1 适用范围
本方法要求了采取柱前衍生化液相色谱-紫外检测法测定化妆品中甲醛（以游离甲醛计）（CAS : 50-00-0）方法。
本方法适适用于化妆品中甲醛含量测定（以游离甲醛计）。
2 方法提要
甲醛测定采取柱前衍生化法, 甲醛与2,4-二硝基苯肼反应生成黄色2, 4-二硝基苯腙（见图1）, 经高效液相色谱分离, 紫外检测器在355 nm波长下检测, 依据保留时间定性, 峰面积定量, 以标准曲线法计算含量。本方法对甲醛检出限为0.01 µg, 定量下限为0.052 µg。若取0.2 g样品, 本方法对甲醛检出浓度为0.0005%, 最低定量浓度为0.0026%。

图1 甲醛衍生化反应式
3 试剂和材料
除另有要求外, 所用试剂均为分析纯, 水为去离子水。
3.1 甲醛标准物质（标示量: 10.4 mg/mL）。
3.2 2, 4-二硝基苯肼, 纯度 ≥ 99.0%。
3.3 氯仿, 色谱纯, 含量 ≥ 99.9%。
3.4 盐酸(r20 =1.19 g/mL)。
3.5 氢氧化钠。
3.6 磷酸氢二钠（Na2HPO4•12H2O）。
3.7 磷酸二氢钠（NaH2PO4•2H2O）。
3.8 乙腈, 色谱纯。
3.9 甲醇, 色谱纯。
3.10 去离子水。
3.11 2, 4-二硝基苯肼盐酸溶液: 称取2, 4-二硝基苯肼（3.2） 0.20 g, 置于锥形瓶中, 先加浓盐酸（3.4）40 mL使溶解, 必需时可超声助溶, 再加去离子水（3.10）60 mL, 摇匀, 即得。
3.12 氢氧化钠溶液[r（NaOH）= 1 mol/L]: 称取NaOH（3.5）10 g, 加水适量溶解后, 转移到250 mL量瓶中, 用去离子水（3.10）稀释并定容至刻度, 摇匀, 即得。
3.13磷酸缓冲溶液（5 mol/L）: 精密称定NaH2PO4•2H2O（3.7）2.28 g和Na2HPO4•12H2O（3.6）12.67 g, 加水适量溶解后, 转移到100 mL量瓶中, 加水稀释至刻度, 摇匀, 即得。
3.14 乙腈水溶液（9+1）: 量取乙腈（3.8）180 mL, 置锥形瓶中, 加水20 mL, 摇匀, 即得。
3.15 空白化妆品样品: 选择不含甲醛化妆品作为空白样品。
3.16 系列浓度甲醛标准溶液: 精密量取甲醛标准物质水溶液（3.1）1 mL置于10 mL量瓶中, 加乙腈水溶液（3.14）稀释至刻度, 摇匀, 即得质量浓度为1.04 mg/mL甲醛贮备液, 然后根据表1进行标准溶液配制。
表1 甲醛系列标准溶液配制
工作溶液
溶液初始浓度
量取体积
定容终体积
标准工作溶液终浓度
贮备溶液
10.4 mg/mL
1 mL
10 mL
1.04 mg/mL
标准溶液1
1.04 mg/mL
2.5 mL
10 mL
260 μg/mL
标准溶液2
1.04 mg/mL
2 mL
10 mL
208 μg/mL
标准溶液3
1.04 mg/mL
1 mL
10 mL
104 μg/mL
标准溶液4
104 μg/mL
5 mL
10 mL
52.0 μg/mL
标准溶液5
104 μg/mL
1 mL
10 mL
10.4 μg/mL
标准溶液6
10.4 μg/mL
5 mL
10 mL
5.2 μg/mL

4 仪器
4.1 高效液相色谱仪: 含有紫外检测器。
4.2 分析天平: 感量0.001 g。
4.3 超声波清洗仪。
4.4 离心机。
5 测定步骤
5.1 样品处理
称取化妆品样品0.20 g（正确至0.001 g）, 置具塞刻度管中, 加乙腈水溶液（3.14）至2 mL, 涡旋2 min, 使混匀, 以5000 rpm转速离心5 min, 取上清液1.0 mL置5 mL 离心管中, 加水2 mL, 涡旋30 s, 混匀, 正确量取上述样品溶液1 mL置10 mL离心管中, 加2, 4-二硝基苯肼盐酸溶液（3.11）0.4 mL, 涡旋1 min, 静置2 min, 加磷酸缓冲液（3.13）0.4 mL, 再加氢氧化钠溶液（3.12）2 mL, 涡旋10 s, 然后加入4 mL 氯仿（3.3）, 涡旋3 min, 静置10 min, 取氯仿层溶液1.0 mL置离心管中, 以5000 rpm转速离心10 min, 取上清液, 备用。
5.2 色谱条件
色谱柱: C18色谱柱（250 × 4.6 mm, 5 μm）;
流动相: 甲醇+水（60+40）;
流速: 1.0 mL/min;
柱温: 25 ℃;
检测波长: 355 nm;
进样体积: 10 µL;
运行时间: 25 min。
5.3 甲醛标准工作曲线制备
精密量取5.2 μg/mL、 10.4 μg/mL、 52 μg/mL、 104 μg/mL、 208 μg/mL、 260 μg/mL系列标准工作溶液各1.0 mL置5 mL 离心管中, 加水2 mL, 涡旋30 s, 混匀, 然后取上述溶液1.0 mL置10 mL离心管中, 加2, 4-二硝基苯肼盐酸溶液（3.11）0.4 mL, 涡旋1 min, 静置2 min, 加磷酸缓冲液（3.13）0.4 mL, 再加氢氧化钠溶液（3.12）2 mL, 涡旋10 s, 然后加入4 mL 氯仿（3.3）, 涡旋3 min, 静置10 min, 取氯仿层溶液1.0 mL置离心管中, 以5000 rpm转速离心10 min, 取上清液, 备用。
5.4 测定
在“5.2”项色谱条件下, 取“5.3”项下处理得到标准曲线溶液分别进样, 进行液相色谱分析, 以系列标准溶液浓度为横坐标, 甲醛衍生物2, 4-二硝基苯腙峰面积为纵坐标, 进行线性回归, 建立标准曲线, 得到回归方程。取“5.1”项下处理得到待测溶液进样10 μL, 依据测定甲醛衍生物2, 4-二硝基苯腙峰面积, 代入标准曲线计算甲醛质量浓度。按“7计算”, 计算样品中甲醛含量。
6 平行试验
按以上步骤操作, 对同一样品独立进行测定取得两次独立测试结果绝对差值不得超出算术平均值10%。
7 计算
rV
w（甲醛）= ———— × 100%
m×103
式中: w（甲醛）——化妆品中甲醛含量, %;
m ——样品取样量, g;
r ——代入标准曲线计算得到待测样液中甲醛质量浓度, mg /mL;
V ——样品定容体积, 本方法为2 mL。
7 回收率和精密度
多家试验室验证平均回收率为99.9% - 104%, 相对标准偏差小于7%（n=6）。
8 色谱图

甲醛标准溶液衍生化反应后高效液相色谱图
色谱峰: 甲醛衍生物（2, 4-二硝基苯腙）（TR=16.7 min）