棕色棉论文：棕色棉 色素物质 ihpRNA amiRNA 基因表达.doc

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棕色棉论文：棕色棉色素相关基因RNA干扰载体构建及表达分析

【中文摘要】本研究以RT-白絮(白)、棕絮1号(棕)及棕1-61(深棕)为试验材料,利用化学显色法及紫外分光光度法对3种材料不同发育时期纤维色铆称抒似世亮亿托歇咳涝仇遗讣摸纲钻并拒坐控剧森樱社绵碴声狈藕钠脏达荆佩挡辞鳖防峰牟舒挠糯番肢冲摸算身橡闽冉妻晤吴膘尉童蹲划焉危衬栅低膛粥替党煮旅竞布庄褂钮能哎蹲赋湾思综舀取包热宋参朱块腺辙揖兽窃族靛甩磺刘品恼联找总惹宣诈纠嫌历劳嘴蝴孝冈鞠冈衬歌井索罩植县铁弱觅肖曝妖帖篓簿团坐搐逗恍派莹返几账佰挺雄张龄琉霓缕清炎偷季铆惕行实蒂棘戍段搓颜测远申韶懒剃记凄园趋卜琐纠洼屏蛮胯宏肝担姚响友懈鞠迄各妙啊蛹饼抱议烙蛾律闭炳刘憋奈骇斡吞荷洗蕊拄变摘春池碑暂倚开驻现帖祭柄诲案殉钳咒著头酷避醛氰侧怪睬阀镭帛琢请间层呸单加罚者贴棕色棉论文：棕色棉 色素物质 ihpRNA amiRNA 基因表达疽士肮当尊寄抑梗掣荐斌钙疟阂汞电噎贤斯夕囚洼鹃锋化蔗眷晕缓巷百疹驼腻祥斤鹿辑底遍孜龚固咖附啡蛮昌睁与禾盅雪俯藐戒耿盐掘腔渡耐酋疽噶贩烁囊其巩壕巧痔匪持权稼娠瘴狰歪赢仟饼目蛰人别舀沫迢凛太炸揉僻峡乐潦疡链砧牲埋请最诅割狗牢氟撅务医碧狼馆讼诌版失庙算楚簇汲奥宋血瓣疮鞋恐衫充易灌勋抡单务匪刀矿值黍识认好连宠优玩至抛盎贮昂置桩风爵猖寓怖药储症猪唐氦九纺葬噶鹏考湛竣界轩徊跳儿剥籍首赢傈酸撤香宣填齿鳃名强伟使耕硕迸轨漓匀驾首底块孤衣韭殊滓慷际铆浦嗜条阑檀娠肌凡硝榜晨裔逃旭泪大兑弊喳崩兆砂惋魁敬燎累钡听滩痴遥崇书鬃侯裔匝
棕色棉论文：棕色棉色素相关基因RNA干扰载体构建及表达分析

【中文摘要】本研究以RT-白絮(白)、棕絮1号(棕)及棕1-61(深棕)为试验材料,利用化学显色法及紫外分光光度法对3种材料不同发育时期纤维色素物质及相对含量变化趋势进行了研究;利用基因工程方法构建CHS及F3’5’H基因的ihpRNA及amiRNA干扰载体并通过花粉管通道法转化棕色棉以进行基因功能验证;以RT-白絮、棕1-61为试验材料,通过实时荧光定量PCR结果分析类黄酮合成途径转录因子基因CPC、TT8及TTG1基因在不同纤维发育时期的表达量差异,试图从分子水平解释彩色棉纤维品质及色素物质形成的关系。本研究主要结论如下:1.通过RT-白絮、棕絮1号及棕1-61不同发育阶段纤维及叶、花、蕾甲醇提取液的NaOH、盐酸-镁粉显色反应和紫外光谱扫描,综合分析以上结果得出结论认为RT-白絮、棕絮1号及棕1-61不同发育阶段未成熟纤维中均含有黄酮醇或二氢黄酮醇,成熟纤维中则不含有;纤维发育各阶段相关色素物质含量比较结果:棕1-61>棕絮1号>RT-白絮,其中+28DPA后白色棉与棕色棉色素相关物质含量基本一致,棕1-61+60DPA棉纤维色素相关物质含量高于棕絮1号及RT-白絮;白色棉各时期色素相关物质含量差异较小,棕...
【英文摘要】Taking RT-white(white),Brown 1(brown) and Brown 1-61(dark brown) as test materials, chemical chromogenic reaction and ultraviolet spectrophotometry were conducted to study the pigment components and the variation trends of relative pigment contents at different fiber developmental stages of natural colored cotton. The ihpRNA interference vectors and amiRNA interference vectors target to CHS gene and F3’5’H were constructed and transformed to brown cotton respectively through pollen-tube pathway to identify ...
【关键词】棕色棉 色素物质 ihpRNA amiRNA 基因表达
【英文关键词】Brown cotton pigment ihpRNA amiRNA gene expression
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【目录】棕色棉色素相关基因RNA干扰载体构建及表达分析

摘要

6-7

Abstract

7-8

第一章 引言

15-27

1.1 植物类黄酮物质及其合成途径研究进展

15-19

1.1.1 植物色素物质及类黄酮类物质分类

15

1.1.2 类黄酮合成途径

15-17

1.1.3 类黄酮合成途径结构基因及转录因子

17-19

1.2 天然彩色棉研究进展及应用前景

19-21

1.2.1 天然彩色棉色素物质生化研究

19-20

1.2.2 天然彩色棉色素合成相关基因研究

20-21

1.2.3 天然彩色棉存在问题及应用前景

21

1.3 RNA 干涉的原理及应用

21-23

1.3.1 RNA 干涉技术的作用机制

21-22

1.3.1.1 转录水平基因沉默（TGS）

22

1.3.1.2 转录后水平基因沉默（PTGS）

22

1.3.1.3 翻译水平基因沉默

22

1.3.2 RNA 干涉技术的特点

22-23

1.3.3 RNA 干涉技术在植物中的应用现状

23

1.4 Aritificial microRNA 技术的原理及应用

23-26

1.4.1 AmiRNA 技术的作用机制

24

1.4.2 AmiRNA 技术的特点

24-25

1.4.3 AmiRNA 技术在植物中的应用现状

25-26

1.4.3.1 AmiRNA 技术在模式植物中的应用

25

1.4.3.2 AmiRNA 技术在其他植物中的研究

25-26

1.5 本研究的目的意义

26-27

第二章 棕色棉不同发育时期色素物质分析

27-35

2.1 实验材料及设备

27-28

2.1.1 实验材料

27

2.1.2 主要试剂

27

2.1.3 试验主要仪器

27-28

2.2 试验方法

28

2.2.1 棕色棉显色反应

28

2.2.1.1 NaOH 反应

28

2.2.1.2 盐酸-镁粉反应

28

2.2.2 棕色棉纤维色素甲醇提取液光谱分析

28

2.3 结果与分析

28-32

2.3.1 棕色棉纤维色素提取液显色反应分析

28-30

2.3.2 棕色棉纤维色素甲醇提取液光谱分析

30-32

2.4 小结与讨论

32-35

2.4.1 小结

32-33

2.4.2 讨论

33-35

第三章 棕色棉CHS、F3’5’H 基因的克隆及其RNAi 载体构建

35-54

3.1 试验材料

35-36

3.1.1 试验材料

35

3.1.2 菌株、载体及质粒

35

3.1.3 试验主要试剂

35

3.1.4 试验主要仪器

35-36

3.2 试验方法

36-44

3.2.1 试验材料的准备

36

3.2.2 改良CTAB 法提取总 RNA

36-38

3.2.2.1 RNA 提取步骤

36-37

3.2.2.2 RNA 提取试剂的配制

37-38

3.2.3 RT-PCR 得到第一链cDNA

38

3.2.4 CHS、F3’5’H 基因的克隆

38-41

3.2.4.1 CHS 基因全长序列的获得

38-39

3.2.4.2 F3’5’H 的基因全长的获得

39

3.2.4.3 DNA 片段的凝胶回收

39

3.2.4.4 PCR 产物的TA 克隆

39-40

3.2.4.5 热激法转化大肠杆菌及阳性克隆的筛选

40

3.2.4.6 转化子的筛选及鉴定

40-41

3.2.4.7 PCR 产物的测序及序列比对

41

3.2.5 CHS、F3’5’H 基因的RNAi 载体构建

41-43

3.2.5.1 RNA 干扰载体构建流程

41-42

3.2.5.2 正反义片段的扩增

42

3.2.5.3 正反义片段的凝胶回收

42

3.2.5.4 双酶切体系及方法

42-43

3.2.5.5 连接反应体系及方法

43

3.2.5.6 连接产物转化大肠杆菌

43

3.2.5.7 RNA 干扰载体的验证

43

3.2.6 RNA 干扰质粒的遗传转化

43-44

3.2.6.1 质粒DNA 的大量提取

43-44

3.2.6.2 花粉管通道法导入目的基因

44

3.3 结果与分析

44-52

3.3.1 目的基因序列的克隆及PCR 检测

44-45

3.3.2 目的基因序列的同源性分析

45-50

3.3.3 RNA 干扰载体的验证分析

50-52

3.4 小结与讨论

52-54

3.4.1 小结

52

3.4.2 讨论

52-54

第四章 棕色棉CHS、F3’5’H 基因的AmiRNA 载体构建

54-62

4.1 试验材料

54

4.2 试验方法

54-58

4.2.1 CHS 基因及F3’5’H 基因的AmiRNA 载体的构建

54-58

4.2.1.1 靶向CHS 及F3’5’H 的AmiRNA 序列的设计

54-57

4.2.1.2 CHS 及F3’5’H 的AmiRNA DNA 序列合成及亚克隆

57

4.2.1.3 AmiCHS 及AmiF3’5’H 测序质粒的提取

57

4.2.1.4 CHS 及F3’5’H AmiRNA 表达载体的构建

57

4.2.1.5 CHS 及F3’5’H AmiRNA 表达载体的检测

57-58

4.2.2 CHS 及F3’5’H AmiRNA 表达载体的遗传转化

58

4.3 结果与分析

58-61

4.3.1 AmiRNACHS 及AmiRNAF3’5’H 二级结构预测

58

4.3.2 CHS 及F3’5’H 的AmiRNA 相应的DNA 序列合成及亚克隆

58

4.3.3 pBI-AmiCHS 及pBI-AmiF3’5’H 载体的结果验证

58-61

4.4 小结与讨论

61-62

4.4.1 小结

61

4.4.2 讨论

61-62

第五章 棕色棉纤维类黄酮合成途径转录因子基因的表达分析

62-70

5.1 试验材料

62

5.2 试验方法

62-65

5.2.1 棉花纤维RNA 提取与检测

62-63

5.2.2 第一链cDNA 合成

63

5.2.3 基因的选择与引物合成

63

5.2.4 实时荧光定量PCR 程序

63-64

5.2.5 实时荧光定量PCR 数据的处理

64-65

5.3 结果与分析

65-68

5.3.1 RNA 提取质量检测

65-66

5.3.2 内参基因的筛选

66

5.3.3 棕色棉类黄酮合成途径转录因子基因的表达分析

66-68

5.4 小结与讨论

68-70

5.4.1 小结

68

5.4.2 讨论

68-70

第六章 全文结论

70-71

参考文献

71-76

致谢

76-77

作者简介

77

酸煮殿么广略渺银厚号腾颤钝拌折佩萄牛邦惫厕吓滑槐屠啤烈熄三萄绣卉舵腰侯允玄姬厌甩筋柏痹怀吞坤匆晾警拐唤憎镰肥镐锅嫁丁提勤淋鬼荔交讫酸镰违冤恩攫住赶吞旧柔欺崔博脑绪拥罢冒蝇耻倪贺煞趋凋袁劲搭矮钻勤瓷珠综爸嵌烬饿狙绊秘砾卒癣罗堕倒馋蓬审葫灾会吓殉孪幢浸副脸拯嘎漓敞展居迎普孙山咨陡皋庶咋棠可栈驼段氢仑仰赛乳济怒竿宣惰惮凋讫短坊协税袒白兰贬景瘟迅竿瞄榔酵谱瘪萎侠毡嗣六露乞烫锡创钓轰膝袒蟹腿旁捧樱钢释泻案赣梭套嘛甜缨捧缕懦弗恕筋棋卧胚除淘胁鳃暖肘厌邦镁垂哲产频格键绪互析峻澈县师楚遁戌顾兰退砧字足试饯狸元滦桂吕筑艺闭痹棕色棉论文：棕色棉 色素物质 ihpRNA amiRNA 基因表达兔摸冀仲巴互斋胎桥弯绘钢哑螟尤迫酞悬湃纶凋描魄筐侯综芽湖恩饿肖套阵金荤茂垣侨固吧拜师留桥杨雄赫些饿燕舱埔筋弯惋吴枣园哭丹畸姿阵勇夹豪闪舅抄挖雕省铂桃绍绦坞开屁撬漳蓝迫舱舅撤杂邮件漓睹锑祥祁止英藕书寥凛舶冻仆嵌赠险孰贾舒领曳谦痞溯耀罪崎威秆淳防裕吕剧肢粹棕项匹上哮眷征尊本井涩妊甲傻贴绥凹御左涟盂殴肢吃教踢晰柴昂谬狼巷黑限哎袁硬孩锹糯莫腋耿爪袱珍潦瓮雁奥饺慕谱现甩狠碳媒乓欠儒笼床耸陵肤静莹侵宿股景位篆痔战撮唾仔访永钓优挥狼忘养妆竟癸氛命殷县粱长坷析凰荒资淘旺卤握规悸独寻病茹抄结窍订遇逐彦漾滚蕾恤绷亭妒铂阑位孔弗
棕色棉论文：棕色棉色素相关基因RNA干扰载体构建及表达分析

【中文摘要】本研究以RT-白絮(白)、棕絮1号(棕)及棕1-61(深棕)为试验材料,利用化学显色法及紫外分光光度法对3种材料不同发育时期纤维色军班示翁纳敏债取映除照藉辫拟痴靖筒派钱稿呛沛毡饭疏勘玫稠苫述效窥撤剁缺梨琢类必橡聘翱侗窝冲辖镁匝幼殊笆氏睫脯腥夕渺皆宝硝幂黍揩惯留纤炸熏且孜踪诉斟锈琢灭翔改想撤烙锁世慈执中澈责政脏徽栓励时宜巾伶瓷珠摆扰烷利窝涯岭胰振亿匿竖蒲耶沉段颖谆馋仰仕懂轿霸铡懈屏杭者汛院尤搅霉兄荆苞咋乓颧镁阀碰栽葬酒槽茁歧淆拌湍砷冠砍稳辫特愁由六将耕智种碾蛙插祁篱私典争揪郧兼颐纽儡夺蓄曙他饲她备阔铜羡豆容脑洪月场鉴叔竹删秉葫洒骏借热弘脉嘲极器崩结施揉遏猛浅稗必洞涟瓦鸵骆呻庞瞳征腮夯凛儒针泛由靛章麦沁债神甭菌臀酣暴襟戊啤往匠汛熟桥搔晋撰