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常见风湿病实验检查专家讲座.pptx

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,单击此处编辑母版标题样式,3,2,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,常见风湿病试验检验,风湿病病因学检验.,RA HLA-DRB10405 0409风险高达58.2%.,SLE HLA-DQB1(nRNP),DQa(SSA/SSB),DQW6(Sm),DQB1(TCR).,AS HLA-B27.,3,1,2,常见风湿病实验检查专家讲座,第1页,BS HLA-B51.,PMDM HLA-B8,DR3,DR1.HLA-DRB1,ancestral haplotype祖单倍体 8.1。TNF-,-308A,SSC HLA-DR1,DR5,DRQI;P1A2/FN等位,基因与肺纤维化,Scl-70阳性呈正相关。,SS HLA-DR3.DRBI0602,03(与肾小管酸中毒及SSB亲密相关,DQAI0504,DQBI0202。,RF HLA-DR4.,OA HLA-A1,B8.,3,2,2,常见风湿病实验检查专家讲座,第2页,HLA研究进展,HLA抗原基因多态性,决定了其所表示HLA抗原分子多态性,也决定了HLA系统免疫应答多样性与复杂性。近年来HLA 基因分型迅猛发展,使得HLA 基因分型愈加准确,简便和实用。HLA 基因分型当前大致分为:,限制性片段长度多态性方法PCR-RFLP(restriction fragment length polymophism)。PCR-SSOP 是以核酸杂交为基础分型技术。PCR扩增特定基因片段,与(sequence specific oligonucleotide probes)序列特异性寡核苷酸探针杂交,进行分析判定。,基因芯片或微阵列技术(gene chip or DNA microarray):,3,3,2,常见风湿病实验检查专家讲座,第3页,该技术其原理类似于反向斑点杂交。它是指大规模集成电路控制机器人在尼龙膜或硅片等固相支持物表面有规律地合成代表不一样基因寡核苷酸探针,或液相合成探针后,经过点样仪点样于固相支持物表面。这些探针与放射性标识物或荧光素标识样品DNA或 cDNA互补核酸序列相结合,经过放射自显影或荧光检测,对杂交结果进行计算机软件处理分析,取得杂交信号强度及分布模式图,反应样品中基因表示情况。,PCR-SSCP(single-strand conformation polymorphism)可检测DNA 片段中不一样位置点突变,而无须象PCR-RFLP 那样,必须选择适当限制酶,使其识别位点恰好位于等位基因特异性核苷酸序列处。,3,4,2,常见风湿病实验检查专家讲座,第4页,PCR-SSP(SEQUENCE SPECIFIC PRIMES)是近年唯一针对急诊和尸体器官移植而设计。其原理是经过序列特异性引物SSP,特异扩增目标DNA 片段,再经过凝胶电泳等伎俩,判断被扩增序列存在。,作为第3代遗传标识SNP单核苷酸多态位点,(single nucleotide polymorphism)。已经有MHC-SNP分型试剂盒面市。,分子超型及抗原结合肽超基序发觉,表明可从功效上对类分子进行分类使得该技术更为合理,简明和实用,对于疾病相关性研究和异体移植有重大意义。,3,5,2,常见风湿病实验检查专家讲座,第5页,AS相关遗传原因,1:HLA是一必需致病基因,但其遗传风险为1650%。其亚型有23个之多,从B27012723。与AS相关是270527042701等等。,2:CYP2D6LMP7和TNF308等TNF-,等位,基因;bosak报道HLA-2Bw4Cw1/2DR1基因频率均高于健康人群。这提醒HLA-ABCDR和DQ区域有与AS发病易感基因存在;HLA-B60增加了AS依赖HLA-B27发病易感性。,3,6,2,常见风湿病实验检查专家讲座,第6页,链球菌感染检测,1 咽拭子培养 2025%,SZ(链球菌酶)检,2ASO500 50%,3DNA酶-B210 85%,4ASK(抗链球菌激酶)8,5AH(抗透明质酸酶)128,6ANDS(抗核苷酸)80%,大于4周25%,OTHER:1.白细胞及中性粒,细胞.2.糖蛋白及粘蛋白等.,3,8,2,常见风湿病实验检查专家讲座,第8页,CRP,IL-1,IL-6,TNFa,TG,PF4,白细胞,粘着游走,CRP,凝血纤溶,系统亢进,ICAM-1,VCAM-1,E-SELECTIN,血小板,凝集亢进,血小板,释放反应,感染,外伤,免疫异常,恶性增生物,3,9,2,常见风湿病实验检查专家讲座,第9页,CRP与炎症,CRP是主要炎性因子,其致炎作用包含:激活补体、刺激细胞因子分泌、上调内皮细胞黏附分子表示、抑制一氧化氮合成、增加纤溶酶原激活物抑制剂-1水平与活性、增强巨噬细胞对低密度脂蛋白摄取及单核细胞化学趋化性、上调血管担心素-1型受体表示等.,CRP与肥胖关系亲密,而且脂肪细胞也可分泌CRP.,CRP水平随年纪增高而升高,女性较高,吸烟、感染和一些药品可使其增高;而饮酒和一些药品可使其降低.,3,10,2,常见风湿病实验检查专家讲座,第10页,生化检验,1.Ca,P,Fe等电解质.,2.UA,磷酸钙双水化合物CPP等.,3.肝,肾,血常规等功效检验.,4.CPK,LDH同功酶,肌球蛋白,肌凝蛋白重链,肌钙蛋白I(TnI),等肌酶谱检验.,5.蛋白及蛋白电泳检验.,6.雌激素,泌乳素等激素检验.,7.维生素,骨钙素,TRAP,Pyd,Dpyd等.,3,11,2,常见风湿病实验检查专家讲座,第11页,雌激素和催乳素PRL,大家都知道神经-内分泌-免疫调整网络功效失调,会影响发生和发展。,PRL(prolatin)已被证实含有免疫调整作用,对细胞和体液免疫都有促进作用,而且免疫细胞也能产生PRL样物质,发挥自分泌和旁分泌作用。大量研究表明在SLE中PRL与可松CS比值增高反与病情进展相关。男性患者PRL水平升高而雄激素功效低下,认为PRL可抑制睾酮生成,在病因中起作用。但也有些人认为不是经过其抑制雄激素而起作用。另外用bromocriptine BRC溴隐停使PRL降低可使SLE病情改进。在RA已证实PRL是AA(adjuvant arthritis)形成必要条件。国外报道在RA中PRL水平上升发生率为10.8%。,3,12,2,常见风湿病实验检查专家讲座,第12页,SS,PA,Reiter等风湿病都有PRL水平升高。当前认为1.可能与可诱导核细胞产生IgM,IgA,IgG,ds-DNA和ANA及IgM类RF,ANA滴度增加而且PRL水平与ANA相平行。IgG类ds-DNA与抗甲状腺微粒体抗体TMA合成增加,同时伴ESR增快,淋巴细胞降低。2.PRL基因在第6号染色体短臂上,与HLA基因复合体非常近。生殖危险因子与RA病因相互作用可能是其原因。SLE女性患者HLA-DRB10301和PRL基因之间连锁不平衡也是原因之一。3.降低甾类物产生允许作用。PRL水平升高在甾类激素分泌降低情况下起主要作用。首先糖皮质激素能拮抗PRL刺激作用,而性激素对免疫调整作用随性别而异。另首先PRL可影响甾类激素产生,也可拮抗糖皮质激素抑制作用。,3,13,2,常见风湿病实验检查专家讲座,第13页,4.PRL与细胞因子 PRL和IL-2在免疫方面起协同作用,从而促进AID发生。同时PRL也可促进滑膜纤维母细胞增殖,并促进IL-6,IL-8生成。,而雌激素和雌激素受体在免疫调整和对许多风湿病发病机制,本身抗体产生,及对其病理进程影响巨大。早已为众人所熟悉。,3,14,2,常见风湿病实验检查专家讲座,第14页,滑液正常值,PH 7.3-7.43 7.38,WBC(/L)(13180)63,N 0-15 7,L 0-78 24,单核细胞 0-71 48,滑膜细胞 0-12 4,蛋白质(g/L)12-30 18,P(%)56-63 60,A(%)37-44 40,透明质酸盐(g/L)3,3,15,2,常见风湿病实验检查专家讲座,第15页,滑液分析,外观 WBC PC 粘蛋白 滑液与血清 微生物,试验 Glu差异(ml/ml)晶体等,正常 清楚,灰黄 0200 10%良好 无差异 _,I类,(非炎性积液)清楚,稍浊 504000 30%良好 无差异 _,II类(非感染 偶有LE细胞,轻度炎性)清楚,稍浊 09000 20%良好 无差异 补体降低,III类(非感染,重度炎性)混浊 100160,000 70%不 良 10 30 补体降低晶体等,IV类(感染 炎性),感染 高度混浊 150250,000 90%不 良 90 细菌培养阳性,结核,混浊 2500100,000 60%不良 70 结核培养阳性,3,16,2,常见风湿病实验检查专家讲座,第16页,滑液表现,I II III IV,OA RA 细菌性 创伤,肢端肥大症 AS 结核性 骨折,骨坏死 PA 淋球菌 血友病,Paget病 SS 神经病性患节炎,SLE PM/DM,NPA BD,SS,C,WG,Wilson RF,淀粉样变 REA,结节性红斑 IBD,软骨病 白血病,激素治疗 一部分细菌性,3,17,2,常见风湿病实验检查专家讲座,第17页,分子生物技术,1.目标DNA起源,从组织或细胞中提取.,经过载体取得DNA片段.,认为mRNA模板利用逆转录酶合成互补DNA(cDNA).,DNA合成:经过ligation,PCR,probe来完成.,2.重组DNA技术:分子构建,细胞转移,宿主细胞判定.,3.核酸测定和应用,DNA/RNA印迹,PCR,原位/斑点杂交.,DNA序列测定.,3,18,2,常见风湿病实验检查专家讲座,第18页,ANAs,ANA是指抗细胞内DNA,RNA,AHA,no-AHA,phospholipid蛋白质分子及其复合物成份抗体.Miescher于1957年发觉。,1957年Ceppelini发觉DNA:ssDNA,dsDNA.,AHA:H1,H2A,H2B,H3,H4.,ENA:Sm,Nrnp,rRNP,SSA/SSB,ScL-70,Jo-1,PM-1,PCNA,RA33,centromere.,3,19,2,常见风湿病实验检查专家讲座,第19页,DNA研究,DNA大分子能够存在于循环中或黏附于各种器官微血管结构,这些循环或器官原位抗原型DNA均能够与循环抗dsDNA自体抗体发生反应,形成抗原抗体免疫复合物,激活炎症系统,如补体路径。在器官引发 免疫复合物介导疾病,引发关节炎,血管炎,肾炎等临床表现。dsDNA抗体水平于疾病活动性,尤其与LN有亲密关系。也可作为临床复发指标。,SLE中抗DNA抗体是异基因。血清抗体和单克隆抗DNA抗体可识别不一样分子核酸表位,如磷脂,蛋白,多糖和细胞结构。这说明DNA本身不可能做为免疫原来诱导DNA抗体产生。同时这种抗体多反应性可能与个体Ig不一样区域多结合位点或不一样抗原相同表位相关。,3,20,2,常见风湿病实验检查专家讲座,第20页,抗DNA抗体产生与NO相关,活性氧可在细胞分裂中期造成淋巴细胞染色体损害和断裂,使淋巴细胞功效失常或凋亡,释放大量核抗原产生本身抗体。NO在SLE中参加产生本身抗体,NO抑制粒细胞活性,诱导其凋亡,抑制吞噬细胞释放促炎介质,抑制T细胞增殖和IL-2释放,阻止T辅助细胞分化Th1细胞,造成细胞免疫功效低下,大量本身抗体产生。在凋亡期间完整核抗原大量释放能够提供细胞外足够核抗原来促进免疫反应,诱导抗体产生。,3,21,2,常见风湿病实验检查专家讲座,第21页,DNA免疫,哺乳动物含有免疫学特征温和,结构简单特点,单纯DNA分子不能有效诱导免疫反应,抗哺乳动物DNA抗体产生与抗原交叉反应或多克隆B细胞活化相关。而细菌DNA因为免疫原性强,结构复杂,能有效地诱导机体对宿主自体细胞以外DNA序列区域直接产生免疫应答。SLE病人抗DNA抗体主要是Ig1和Ig3而且需要T细胞参加,且与全部DNA保守序列结合。这与健康人抗DNA抗体(Ig2)不一样.,经过基因重组技术,将编码有特定蛋白抗原裸露质粒DNA注入体内,表示出抗原蛋白,诱导其抗体表示及T细胞依赖细胞裂解等一系列特异性免疫应答。DNA免疫不但能够诱导体液免疫还可诱生特异性以CTL为代表细胞免疫应答。,3,22,2,常见风湿病实验检查专家讲座,第22页,OTHER ANTIBODY,RA:,Sa99%,AKA(抗角质蛋白抗体)95%-100%,APF(抗核周因子)40%-50%,AFA(抗聚角蛋白微丝蛋白抗体)为共同抗原决定族。,RF(IgG,IgM,IgA)80%,RA3389.8%.CCP(抗环瓜氨酸肽抗体)46.6%(96.6%),其中IgG型为53%,IgM型为58%。A-p68A(为糖蛋白成份GRP,也称免疫球蛋白结合蛋白Bip binding protein;实际上是一个内质网分子伴侣。)67.8%;91.3。常见于RF阴性患者并出现于RA早期。,SLE:,ds-DNA40-90%,AHA3080%,Sm35%,Nrnp20-35%,SSA25-40%,SSB10-15%,hsp40-50%,APL20-50%.anti-neuronal antibodies,anti-N(,血清中62.0%。脑脊液中47.4%),3,23,2,常见风湿病实验检查专家讲座,第23页,抗细胞膜DNA本身抗体(autoantibidies to membrane associated DNA,抗 mDNA。)90.0%(98.8%);AuA(以Ds-DNA和AHA为靶抗原);抗端粒抗体(抗原为真核细胞末端DNA中高度重复TTAGGG/CCCTAA序列)60%(91%)。C1qAb(42,.,86%;有肾损害为8 8,.,33%)。CRPAb与SLESLEDAI总IgG/dsDNA滴度呈正相关,。,PM/DM:Jo-1 18-20%,pl-730%,Takayasu artertis (抗主动脉抗体)1:32,BD APL ANCA+,3,28,2,常见风湿病实验检查专家讲座,第28页,血管炎抗体,1 ANCA:,2 AECA(anti-endothelial cell antibodies,AECA):,BD 40%;TA37%;MPA36%;PA44%;C-S33%;GCA50%;OTHER62%.,3 anti-PR3(蛋白酶3,),anti-MPO(髓过氧化物酶),3,29,2,常见风湿病实验检查专家讲座,第29页,
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