T∕ZZB 0404-2018 食品添加剂 叶黄素.pdf

前 言 本标准按照GB/T 1.12009给出的规则起草。 本标准由浙江省品牌建设联合会提出并归口。 本标准由绍兴市质量技术监督检验院牵头组织制定。 本标准主要起草单位：浙江医药股份有限公司。 本标准参与起草单位：浙江医药股份有限公司新昌制药厂、绍兴市质量技术监督检测院（排名不分先后）。 本标准主要起草人：求子勤、吴建江、晁红娟、杜锡勇、黄行舟、许新德、张利英、温善萍、吕少风、王建刚、吕红、李晶晶、蒙雅娟。 本标准由绍兴市质量技术监督检测院负责解释。 食品添加剂 叶黄素 1 范围 本标准规定了食品添加剂叶黄素的基本要求、技术要求、试验方法、检验规则、标签、包装、运输和贮存、质量承诺等。 本标准适用于以万寿菊（Tagetes erecta L.）油树脂为原料，经皂化、提取精制而成的食品添加剂叶黄素。 分子式：C40H56O2 相对分子量：568.88（按2016年国际相对原子质量） 结构式： OHHO 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 5009.32016 食品安全国家标准 食品中水分的测定 GB 5009.42016 食品安全国家标准 食品中灰分的测定 GB 5009.112014 食品安全国家标准 食品中总砷及无机砷的测定 GB 5009.122017 食品安全国家标准 食品中铅的测定 GB 5009.27 植物油中多环芳烃的测定 气相色谱-质谱法 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 81702008 数值修约规则与极限数值的表示与判断 GB 264052011 食品添加剂 叶黄素 GB 29924 食品安全国家标准 食品添加剂标识通则 GB/T 30642 食品抽样检验通用导则 3 基本要求 3.1 原料要求 主要原料万寿菊（Tagetes erecta L.）油树脂应符合附录A的要求。 3.2 生产工艺和设备 3.2.1 生产工艺应使用乙醇为溶剂，采用碱液水解、反应-结晶、离心或过滤、干燥及粉碎等工序。 3.2.2 应采用一步结晶法，反应和结晶在同一工序完成。 3.2.3 应配备反应-结晶设备系统、晶体分离设备系统、真空干燥设备系统及粉碎设备系统。 3.3 检测能力 3.3.1 应配备紫外-可见分光光度计、高效液相色谱仪、气相色谱仪、原子吸收分光光度计等设备。 3.3.2 应具备总类胡萝卜素含量、叶黄素含量、玉米黄质含量、其他单一杂质、干燥失重、灰分、正己烷、乙醇、铅、总砷等项目的检验能力。 4 技术要求 4.1 感官要求 应符合表1的规定。 表1 感官要求 项目 要求 检验方法 色泽 桔黄色至桔红色 取适量样品置于清洁、干燥的白瓷盘中，在自然光线下，观察其色泽和组织状态。 组织状态 粉末 4.2 理化指标 应符合表2的规定。 表2 理化指标 项目 指标 总类胡萝卜素，/ 80.0 叶黄素，/ 74.0 玉米黄质，/ 8.5 其他单一杂质（占总类胡萝卜素）， 1.0 干燥失重，/ 1.0 灰分，/ 1.0 正己烷/ （mg/kg） 50 乙醇/（mg/kg） 500 铅(以Pb计)/（mg/kg） 1.0 总砷(以As计)/（mg/kg） 3.0 苯并（）芘/（g/kg） 2.0 5 试验方法 5.1 一般要求 实验用水应符合GB/T 6682的规定，试验中所用溶液在未注明何种溶剂配制时，均指水溶液。 5.2 鉴别 5.2.1 在 5.4 测定总类胡萝卜素含量试验中，试样液在 446 nm 附近有最大吸收，且 A446 nm/A474 nm应为1.091.14。(A446 nm指试样液在 446 nm 处的吸收值；A474 nm指试样液在 474 nm 处的吸收值) 5.2.2 在测定叶黄素含量试验中，试样液在液相色谱图中的主峰保留时间应与标准溶液中叶黄素的保留时间相同，标准溶液和试样液分别按 GB 264052011 中 A.4.4.1 和 A.4.4.2 规定的方法配制。 5.3 感观检验 按GB 264052011中3.1规定执行。 5.4 总类胡萝卜素含量 按GB 264052011中A.3规定执行。 5.5 叶黄素和玉米黄素含量 按GB 264052011中A.4规定执行。 5.6 其他单一杂质 样品处理和测定按GB 264052011中A.4规定执行，结果计算按公式（1）计算： 100=tvRRX . (1) 式中： X 样品中单一杂质含量； R V 色谱图中单一峰面积值； R T 样品溶液中除溶剂峰外的所有峰的峰面积之和。 5.7 干燥失重 按GB 5009.32016中的第二法规定执行。 5.8 灰分 按GB 5009.42016中的第一法规定执行。 5.9 正己烷、乙醇和甲醇 5.9.1 仪器和设备 气相色谱仪，带氢火焰离子检测器（FID）和顶空进样器。 5.9.2 参考色谱条件 5.9.2.1 色谱柱：DB-624 毛细管柱，30m0.53mm，膜厚 3.0m；或其他等效色谱柱。 5.9.2.2 载气：氦气或氮气。 5.9.2.3 载气流量：3.0 mL/min。 5.9.2.4 进样口温度：220。 5.9.2.5 柱温：40，保持 3min，以 3.5/min 升至 65，再以 20/min 升至 220，保持 5 min。 5.9.2.6 检测器温度：235。 5.9.2.7 进样体积：1 mL 定量环。 5.9.2.8 分流比：3：1。 5.9.3 顶空条件 5.9.3.1 顶空瓶温：80。 5.9.3.2 定量环温度：85。 5.9.3.3 传输线温度：100。 5.9.3.4 顶空瓶平衡时间：40.0min。 5.9.3.5 气相循环时间：30.0min。 5.9.3.6 加压时间：0.2min。 5.9.3.7 定量环填充时间：0.2min。 5.9.3.8 定量环平衡时间：0.05min。 5.9.3.9 进样时间：1.0min。 5.9.3.10 顶空瓶压力：13.8psi。 5.9.4 分析步骤 5.9.4.1 对照溶液制备 5.9.4.1.1 对照溶液 1：精密吸取 1.5 L 正己烷于 100 mL 容量瓶，用二甲基甲酰胺（DMF）稀释至刻度，摇匀，吸取 25.0 mL 至 50 mL 容量瓶，用 DMF 定容，此为对照液 1。（该对照液中正己烷浓度约为5.0 g/mL）。 5.9.4.1.2 对照溶液 2：精密吸取 12.5 L 乙醇于 100 mL 容量瓶，用二甲基甲酰胺（DMF）稀释至刻度，摇匀，吸取 25.0 mL 至 50 mL 容量瓶，用 DMF 定容，此为对照液 2。 （该对照液中乙醇浓度约为50.0 g/mL）。 5.9.4.1.3 对照溶液 3：精密吸取 0.5 L 甲醇于 100 mL 容量瓶，用二甲基甲酰胺（DMF）稀释至刻度，摇匀， 吸取 25.0 mL 至 100 mL 容量瓶， 用 DMF 定容， 此为对照液 3。 （该对照液中甲醇浓度为 1.0 g/mL） 。 5.9.4.1.4 灵敏度溶液配制：吸取各对照液 1.0 mL 于 10 mL 容量瓶，用 DMF 定容，摇匀。（灵敏度溶液中正己烷浓度约为 0.5 ug/mL，乙醇浓度约为 5.0 ug/mL，甲醇浓度约为 0.1g/mL）。 5.9.4.2 样品溶液制备 称取约300 mg（精确至0.1 mg）试样，置于10 mL顶空瓶，加3.0 mL DMF稀释，摇匀。 5.9.4.3 系统适应性要求 取上述5.8.4.1对照溶液3.0 mL于10 mL顶空瓶，连续进6针，主峰理论板数应不小于5000，峰面积RSD应不大于10.0，灵敏度溶液中主峰信噪比应不小于3。 5.9.5 结果计算 用外标法计算样品中的正己烷和乙醇含量，以正己烷、乙醇质量分数w 3计，数值以毫克每千克（mg/kg）表示，按下式计算： 6310=XRRXCACAw . (2) 式中： A X 样品溶液中正己烷、乙醇或甲醇的峰面积的数值； C R 对照液中正己烷、乙醇或甲醇的浓度的数值，单位为毫克每毫升（mg/mL）； A R 对照液中正己烷、乙醇或甲醇的峰面积的数值； C X 样品溶液的浓度的数值，单位为毫克每毫升（mg/mL） 。 5.10 铅 按GB 5009.122017 第一法中的规定执行。 5.11 总砷 按GB 5009.112014第一篇第一法或第二法中的规定执行。 5.12 苯并 () 芘 按GB 5009.27中的规定执行。 6 检验规则 6.1 检验分类 分为出厂检验和型式检验。 6.2 抽样 按GB/T 30642中的规定执行。 6.3 组批 产品以同一批投料、同一条生产线生产、包装完好的产品为一批，按批编号，单批不超过2吨。 6.4 出厂检验 出厂检验项目为外观和性状，总类胡萝卜素含量、叶黄素含量、玉米黄质含量、其他单一杂质、干燥失重、灰分、正己烷、乙醇、铅、总砷，按批检验放行。 6.5 型式检验 型式检验为全项目检验，有下列情形之一时，应进行型式检验： a) 本产品的原料、工艺、设备有大的改变，应进行型式检验； b) 产品停产后，恢复生产时； c) 批量生产时，每 6 个月周期性进行一次； d) 出厂检验结果与上述型式检验有较大差异时； e) 当用户对产品质量有较大的异议时； f) 当国家产品质量监督管理机构提出要求时。 6.6 数值修约 按GB/T 81702008中的“修约比较法”规则执行。 7 标签、包装、运输和贮存 7.1 标签 应符合GB 29924的规定。 7.2 包装 采用真空密封包装，包装材料应无毒无害，并符合相应的食品级或药用级标准要求。 7.3 运输 运输过程中应避光、防潮、防高温、防止包装破损，不得与有毒有害的物质混运。 7.4 贮存 冷藏贮存（28），不得与有毒有害物质混储。 8 质量承诺 8.1 在规定的包装、贮存条件下，自生产之日起原包装保质期为 24 个月。 8.2 产品质量有异议时，应在 24 小时内作出处理响应，及时为用户提供服务和解决方案。 A A 附 录 A （规范性附录） 万寿菊（Tagetes erecta L.）油树脂技术要求 A.1 技术要求 技术要求应符合表A.1。 表A.1 技术要求 项目 指标 外观 深棕色蜡状固体 叶黄素/（g/kg） 100.0 乙氧基喹啉 不得检出 不溶物（50m截留率）， 0.01 苯并（）芘/（g/kg） 100 A.2 试验方法 A.2.1 外观 在充足的光线下观察。 A.2.2 叶黄素含量 A.2.2.1 试液配制 混合溶液：取正己烷、丙酮、乙醇、甲苯按10767的体积比混合。 10硫酸钠溶液：称取10 g（精确至0.1mg）无水硫酸钠至100 mL水中溶解。 40氢氧化钾甲醇溶液：称取40 g（精确至0.1mg）氢氧化钾，用甲醇溶解并稀释至100 mL。 A.2.2.2 测定 A.2.2.2.1 取样品适量在56水浴中加热5 min，使其变成液体。 A.2.2.2.2 称取融化后的样品溶液0.1 g（精确至0.1mg） ，置于100 mL容量瓶中，加入60 mL混合溶剂，摇动使其溶解，用混合溶解定容，摇动 1min。 A.2.2.2.3 称取上述溶液10 mL，置于锥形瓶中，加入20 mL混合溶剂、2 mL 40氢氧化钾甲醇溶液，摇动1 min后，按上冷凝管防止溶剂挥发，在56水浴中皂解20 min。流动水冷却至常温。 A.2.2.2.4 吸取30 mL正己烷至已皂解的锥形瓶中，加10硫酸钠溶液38 mL，摇动1 min后，静止60 min。 （上清液约50 mL） A.2.2.2.5 吸取上清液 5 mL至50 mL容量瓶中，用正己烷定容，摇匀。 A.2.2.2.6 用1 cm石英比色杯，以正己烷做空白，在474 nm波长处测定供试品溶液的吸光度值A，按下式计算含量，叶黄素含量（X）为： 5102365050100)/(=WFAkggX . (3) 式中： A供试品溶液在474 nm波长处吸光度； W供试品称样量，g； 2361试验液在混合溶液中波长474 nm处的吸收系数，mL/g.cm-1； F偏离因子，通常为1。 A.2.3 乙氧基喹啉检测方法 A.2.3.1 仪器设备 气相色谱仪、分析天平（0.1mg） A.2.3.2 试剂 异丙醇 A.2.3.3 测试条件 仪器：气相色谱仪（如Aglient 6890/7890）。 色谱柱：HP-5（30 m0.32 mm0.25 m）毛细管柱或等效柱。 载气：N2。 检测器：FID。 进样口温度：250。 检测器温度：270。 柱温：70，保持1min，以8/min升至160，再以5/min升至220，保持5 min。 载气流量：3.0 mL/min。 分流比：501。 进样体积：L。 A.2.3.4 溶液配制 对照溶液：称取乙氧基喹啉对照品0.006g，加异丙醇20 mL溶解。 供试品溶液：称取供试品约2.0 g于50 mL烧杯中，加异丙醇20 mL，盖上密封膜，摇动混合物15min，使其完全溶解。用滤膜过滤到1.5 mL气相色谱瓶中。 A.2.3.5 测试方法 分别取对照溶液和供试品溶液进样，记录色谱仪，供试品溶液色谱图中应未检测出乙氧基喹啉峰。 A.2.4 不溶物测定 A.2.4.1 仪器设备 真空泵、真空过滤装置、分析天平（0.1 mg）、恒温干燥箱、三角瓶（250 mL）、50 m滤布。 A.2.4.2 试剂 6#溶剂油 A.2.4.3 测试方法 取万寿菊油树脂约10 g于三角瓶中，加入100 mL 6#溶剂油溶解，使用预先置于40干燥箱中烘至恒重的50 m滤布抽滤，再用6#溶剂冲洗至无色，然后把滤布再烘至恒重。 A.2.4.4 计算 按下式计算不溶物的截留率。 %100MM-M12=不溶物截留率 . (4) 式中： M试样重； M1滤布重； M2滤布和不溶物总重。 A.2.5 苯并（）芘 按GB 5009.27的规定执行。 _