HJ 347.2－2018 水质 粪大肠菌群的测定 多管发酵法(环境保护).pdf

中华人民共和国国家环境保护标准 HJ 347.22018 部分代替 HJ/T 3472007 水质 粪大肠菌群的测定 多管发酵法 Water qualityDetermination of fecal coliformManifold zymotechnics 2018-12-26 发布 2019-06-01 实施 生 态 环 境 部 发 布 HJ 347.22018 i 中华人民共和国生态环境部 公 告 2018 年 第 73 号 为贯彻中华人民共和国环境保护法 ，保护生态环境，保障人体健康，规范生态环境监测工作，现批准水质 粪大肠菌群的测定 滤膜法等五项标准为国家环境保护标准，并予发布。 标准名称、编号如下。 一、 水质 粪大肠菌群的测定 滤膜法 （HJ 347.12018） ； 二、 水质 粪大肠菌群的测定 多管发酵法 （HJ 347.22018） ； 三、 水质 细菌总数的测定 平皿计数法 （HJ 10002018） ； 四、 水质 总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定 酶底物法 （HJ 10012018） ； 五、 水质 丁基黄原酸的测定 液相色谱- 三重四极杆串联质谱法 （HJ 10022018） 。 以上标准自 2019 年 6 月 1 日起实施，由中国环境出版集团出版，标准内容可在生态环境部网站（ 自以上标准实施之日起， 水质 粪大肠菌群的测定 多管发酵法和滤膜法（试行） （HJ/T 3472007）废止。 特此公告。 生态环境部 2018 年 12 月 26 日 HJ 347.22018 iii 目 次 前 言. iv 1 适用范围.1 2 规范性引用文件.1 3 术语和定义.1 4 方法原理.1 5 干扰和消除.1 6 试剂和材料.2 7 仪器和设备.2 8 样品.3 9 分析步骤.3 10 结果计算与表示.5 11 精密度和准确度.5 12 质量保证和质量控制.6 13 废物处理.6 附录 A（资料性附录） 最大可能数（MPN）表 .7 附录 B（资料性附录） 粪大肠菌群检验记录及报告推荐格式 .11 HJ 347.22018 iv 前 言 为贯彻中华人民共和国环境保护法和中华人民共和国水污染防治法 ，保护生态环境，保障人体健康，规范水中粪大肠菌群的测定方法，制定本标准。 本标准规定了测定地表水、地下水、生活污水和工业废水中粪大肠菌群的多管发酵法。 本标准是对水质 粪大肠菌群的测定 多管发酵法和滤膜法（试行） （HJ/T 3472007）多管发酵法部分的修订。 本标准首次发布于 2007 年，原起草单位为中国环境监测总站。本次为第一次修订。 本次修订的主要内容如下： 完善了方法原理的表述； 增加了 12 管法和 15 管法的检出限； 分析步骤中增加了 12 管法，完善了样品稀释方法； 增加了规范性引用文件、术语和定义、干扰和消除、仪器和设备、样品采集、样品保存、精密度和准确度、质量保证和质量控制、废物处理等章节； 将 MPN 表移至附录中。 自本标准实施之日起，水质 粪大肠菌群的测定 多管发酵法和滤膜法 （试行） （HJ/T 3472007）废止。 本标准的附录 A 和附录 B 为资料性附录。 本标准由生态环境部生态环境监测司、法规与标准司组织制订。 本标准起草单位：辽宁省环境监测实验中心。 本标准验证单位：大连市环境监测中心、丹东市环境监测中心站、锦州市环境监测中心站、辽阳市环境监测站、沈阳市疾病预防控制中心和辽宁北方环境检测技术有限公司。 本标准生态环境部 2018 年 12 月 26 日批准。 本标准自 2019 年 6 月 1 日起实施。 本标准由生态环境部解释。 HJ 347.22018 1 水质 粪大肠菌群的测定 多管发酵法 1 适用范围 本标准规定了测定水中粪大肠菌群的多管发酵法。 本标准适用于地表水、地下水、生活污水和工业废水中粪大肠菌群的测定。 本方法的检出限：12 管法为 3 MPN/L；15 管法为 20 MPN/L。 2 规范性引用文件 本标准引用了下列文件或其中的条款。凡是未注明日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T 14581 水质 湖泊和水库采样技术指导 HJ 494 水质 采样技术指导 HJ/T 91 地表水和污水监测技术规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 粪大肠菌群 fecal coliforms 又称耐热大肠菌群（thermotolerant coliforms） 。44.5培养 24 h，能发酵乳糖产酸产气的需氧及兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌。 3.2 最大可能数 most probable number（MPN） 又称稀释培养计数，是一种基于泊松分布的间接计数法。利用统计学原理，根据一定体积不同稀释度样品经培养后产生的目标微生物阳性数， 查表估算一定体积样品中目标微生物存在的数量 （单位体积存在目标微生物的最大可能数） 。 4 方法原理 将样品加入含乳糖蛋白胨培养基的试管中，37初发酵富集培养，大肠菌群在培养基中生长繁殖分解乳糖产酸产气， 产生的酸使溴甲酚紫指示剂由紫色变为黄色， 产生的气体进入倒管中， 指示产气。44.5复发酵培养，培养基中的胆盐三号可抑制革兰氏阳性菌的生长，最后产气的细菌确定为是粪大肠菌群。通过查 MPN 表，得出粪大肠菌群浓度值。 5 干扰和消除 5.1 活性氯具有氧化性，能破坏微生物细胞内的酶活性，导致细胞死亡，可在样品采集（8.1）时加入硫代硫酸钠溶液（6.7）消除干扰。 HJ 347.22018 2 5.2 重金属离子具有细胞毒性，能破坏微生物细胞内的酶活性，导致细胞死亡，可在样品采集（8.1）时加入乙二胺四乙酸二钠溶液（6.8）消除干扰。 6 试剂和材料 除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂或生物试剂，实验用水为蒸馏水或去离子水。 6.1 乳糖蛋白胨培养基。 蛋白胨 10 g 牛肉浸膏 3 g 乳糖 5 g 氯化钠 5 g 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液 1 ml 将蛋白胨、牛肉浸膏、乳糖、氯化钠加热溶解于 1 000 ml 水中，调节 pH 至 7.27.4，再加入 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液 1 ml，充分混匀，分装于含有倒置小玻璃管的试管中，115高压蒸汽灭菌 20 min，储存于冷暗处备用。也可选用市售成品培养基。 6.2 三倍乳糖蛋白胨培养基：称取三倍的乳糖蛋白胨培养基（6.1）成分的量，溶于 1 000 ml 水中，配成三倍乳糖蛋白胨培养基，配制方法同上。 6.3 EC 培养基。 胰胨 20 g 乳糖 5 g 胆盐三号 1.5 g 磷酸氢二钾 4 g 磷酸二氢钾 1.5 g 氯化钠 5 g 将上述成分或含有上述成分的市售成品加热溶解于 1 000 ml 水中，然后分装于有玻璃倒管的试管中，115高压蒸汽灭菌 20 min，灭菌后 pH 应在 6.9 左右。 注：配制好的培养基（6.16.3）避光、干燥保存，必要时在 53冰箱中保存，通常瓶装及试管装培养基不超过 36 个月。配制好的培养基要避免杂菌侵入和水分蒸发，当培养基颜色变化，或体积变化明显时废弃不用。 6.4 无菌水：取适量实验用水，经 121高压蒸汽灭菌 20 min，备用。 6.5 硫代硫酸钠（Na2S2O35H2O） 。 6.6 乙二胺四乙酸二钠（C10H14N2O8Na22H2O） 。 6.7 硫代硫酸钠溶液：（Na2S2O3）=0.10 g/ml 称取 15.7 g 硫代硫酸钠（6.5） ，溶于适量水中，定容至 100 ml，临用现配。 6.8 乙二胺四乙酸二钠溶液：（C10H14N2O8Na22H2O）=0.15 g/ml 称取 15 g 乙二胺四乙酸二钠（6.6） ，溶于适量水中，定容至 100 ml，此溶液可保存 30 d。 7 仪器和设备 7.1 采样瓶：500 ml 带螺旋帽或磨口塞的广口玻璃瓶。 7.2 高压蒸汽灭菌器：115、121可调。 7.3 恒温培养箱或水浴锅：允许温度偏差 370.5、440.5。 7.4 pH 计：准确到 0.1 pH 单位。 HJ 347.22018 3 7.5 接种环：直径 3 mm。 7.6 试管：300 ml、50 ml、20 ml。 7.7 一般实验室常用仪器和设备。 注：玻璃器皿及采样器具试验前要按无菌操作要求包扎，121高压蒸汽灭菌 20 min 备用。 8 样品 8.1 样品采集 点位布设及采样频次按照 GB/T 14581、HJ/T 494 和 HJ/T 91 的相关规定执行。 采集微生物样品时，采样瓶（7.1）不得用样品洗涤，采集样品于灭菌的采样瓶中。清洁水体的采样量不低于 400 ml，其余水体采样量不低于 100 ml。 采集河流、湖库等地表水样品时，可握住瓶子下部直接将带塞采样瓶插入水中，距水面 1015 cm处，瓶口朝水流方向，拔瓶塞，使样品灌入瓶内然后盖上瓶塞，将采样瓶从水中取出。如果没有水流，可握住瓶子水平往前推。采样量一般为采样瓶容量的 80%左右。样品采集完毕后，迅速扎上无菌包装纸。 从龙头装置采集样品时，不要选用漏水龙头，采水前将龙头打开至最大，放水 35 min，然后将龙头关闭，用火焰灼烧约 3 min 灭菌或用 70%75%的酒精对龙头进行消毒，开足龙头，再放水 1 min，以充分除去水管中的滞留杂质。采样时控制水流速度，小心接入瓶内。 采集地表水、废水样品及一定深度的样品时，也可使用灭菌过的专用采样装置采样。 在同一采样点进行分层采样时，应自上而下进行，以免不同层次的搅扰。 如果采集的是含有活性氯的样品，需在采样瓶灭菌前加入硫代硫酸钠溶液（6.7） ，以除去活性氯对细菌的抑制作用（每 125 ml 容积加入 0.1 ml 的硫代硫酸钠溶液） ；如果采集的是重金属离子含量较高的样品，则在采样瓶灭菌前加入乙二胺四乙酸二钠溶液（6.8） ，以消除干扰（每 125 ml 容积加入 0.3 ml的乙二胺四乙酸二钠溶液） 。 注：15.7 mg 硫代硫酸钠（6.5）可去除样品中 1.5 mg 活性氯，硫代硫酸钠用量可根据样品实际活性氯量调整。 8.2 样品保存 采样后应在 2 h 内检测，否则，应 10以下冷藏但不得超过 6 h。实验室接样后，不能立即开展检测的，将样品于 4以下冷藏并在 2 h 内检测。 9 分析步骤 9.1 样品稀释及接种 9.1.1 15 管法 将样品充分混匀后， 在 5 支装有已灭菌的 5 ml 三倍乳糖蛋白胨培养基 （6.2） 的试管中 （内有倒管） ，按无菌操作要求各加入样品 10 ml，在 5 支装有已灭菌的 10 ml 单倍乳糖蛋白胨培养基（6.1）的试管中（内有倒管） ， 按无菌操作要求各加入样品 1 ml， 在 5 支装有已灭菌的 10 ml 单倍乳糖蛋白胨培养基 （6.1）的试管中（内有倒管） ，按无菌操作要求各加入样品 0.1 ml。 对于受到污染的样品，先将样品稀释后再按照上述操作接种，以生活污水为例，先将样品稀释 104倍，然后按照上述操作步骤分别接种 10 ml、1 ml 和 0.1 ml。15 管法样品接种量参考表见表 1。 当样品接种量小于 1 ml 时，应将样品制成稀释样品后使用。按无菌操作要求方式吸取 10 ml 充分HJ 347.22018 4 混匀的样品，注入盛有 90 ml 无菌水（6.4）的三角烧瓶中，混匀成 110 稀释样品。吸取 110 的稀释样品 10 ml 注入盛有 90 ml 无菌水的三角烧瓶中，混匀成 1100 稀释样品。其他接种量的稀释样品依次类推。 注：吸取不同浓度的稀释液时，每次必须更换移液管。 生活饮用水等清洁水体也可使用 12 管法。 表 1 15 管法样品接种量参考表 接种量/ml 样品类型 10 1 0.1 102 103 104 105 水源水 湖泊（水库） 地表水 河流 生活污水 处理前 废水 工业废水 处理后 地下水 9.1.2 12 管法 将样品充分混匀后，在 2 支装有已灭菌的 50 ml 三倍乳糖蛋白胨培养基（6.2）的大试管中（内有倒管） ，按无菌操作要求各加入样品 100 ml，在 10 支装有已灭菌的 5 ml 三倍乳糖蛋白胨培养基（6.2）的试管中（内有倒管） ，按无菌操作要求各加入样品 10 ml。 9.2 初发酵试验 将接种（9.1）后的试管，在 370.5下培养 24 h2 h。 发酵试管颜色变黄为产酸，小玻璃倒管内有气泡为产气。产酸和产气的试管表明试验阳性。如在倒管内产气不明显，可轻拍试管，有小气泡升起的为阳性。 9.3 复发酵试验 轻微振荡在初发酵试验（9.2）中显示为阳性或疑似阳性（只产酸未产气）的试管，用经火焰灼烧灭菌并冷却后的接种环（7.5）将培养物分别转接到装有 EC 培养基（6.3）的试管中。在 44.50.5下培养 24 h2 h。转接后所有试管必须在 30 min 内放进恒温培养箱或水浴锅（7.3）中。培养后立即观察，倒管中产气证实为粪大肠菌群阳性。 9.4 对照试验 9.4.1 空白对照 每次试验都要用无菌水（6.4）按照步骤 9.19.3 进行实验室空白测定。 9.4.2 阳性及阴性对照 将粪大肠菌群的阳性菌株 （如大肠埃希氏菌Escherichia coli） 和阴性菌株 （如产气肠杆菌Enterobacter aerogenes）制成浓度为 3003000 MPN/L 的菌悬液，分别取相应体积的菌悬液按接种（9.1）的要求接种于试管中，然后按初发酵试验（9.2）和复发酵试验（9.3）要求培养，阳性菌株应呈现阳性反应，阴性菌株应呈现阴性反应，否则，该次样品测定结果无效，应查明原因后重新测定。 HJ 347.22018 5 10 结果计算与表示 10.1 结果计算 接种 12 份样品时，查附录 A 中表 A.1 可得每升粪大肠菌群 MPN 值。 接种15份样品时， 查附录A中表A.2得到MPN值， 再按照式 （1） 换算样品中粪大肠菌群数 （MPN/L） ： MPN100Cf=值 （1） 式中：C样品中粪大肠菌群数，MPN/L； MPN 值每 100 ml 样品中粪大肠菌群数，MPN/100 ml； 100为 1010 ml，其中，10 将 MPN 值的单位 MPN/100 ml 转换为 MPN/L，10 ml 为 MPN表中最大接种量； f实际样品最大接种量，ml。 10.2 结果表示 测定结果保留至整数位，最多保留两位有效数字，当测定结果100 MPN/L 时，以科学计数法表示；当测定结果低于检出限时，12 管法以“未检出”或“3 MPN/L”表示；15 管法以“未检出”或“20 MPN/L”表示。粪大肠菌群检验记录及报告推荐格式参见附录 B。 11 精密度和准确度 11.1 精密度 6 个实验室对低浓度 （地下水， 浓度均值为 54 MPN/L） 、 中浓度 （地表水， 浓度均值为 2.7104 MPN/L）和高浓度（生活污水，浓度均值为 2.8107 MPN/L）三个不同浓度粪大肠菌群的实际样品和有证标准样品（浓度为 3 670 MPN/L，可接受范围为 3307 710 MPN/L）进行了 6 次重复测定：实验室内相对标准偏差范围分别为 2.3%3.8%、2.0%11%、1.1%5.4%和 5.1%17%；实验室间相对标准偏差分别为 3.4%、11%、1.6%和 5.4%；实验室间 95%置信区间见表 2。 表 2 实验室间 95%置信区间 低浓度/（MPN/L） 中浓度/（MPN/L） 高浓度/（MPN/L） 有证标准样品/（MPN/L） 均值 95%置信区间 均值 95%置信区间 均值 95%置信区间 均值 95%置信区间 54 4762 2.7104 9.61037.9104 2.8107 2.21073.6107 3 725 2 4135 751 11.2 准确度 6 个实验室对含粪大肠菌群浓度为 3 670 MPN/L（可接受范围为 3307 710 MPN/L）的标准样品进行了 6 次重复测定：相对误差范围为6.2%8.4%；相对误差最终值为1.7%10.6%。 注：微生物检测数据为偏态分布，其测定结果全部经以 10 为底对数转换后进行计算。 HJ 347.22018 6 12 质量保证和质量控制 12.1 培养基检验 更换不同批次培养基时要进行阳性和阴性菌株检验，将粪大肠菌群的阳性菌株（如大肠埃希氏菌 Escherichia coli）和阴性菌株（如产气肠杆菌 Enterobacter aerogenes）制成浓度为 3003 000 MPN/L的菌悬液。若使用的是定性标准菌株，配制方法为先进行预实验，摸清浓度后按目标为 3003 000 MPN/L 稀释；若使用的是定量标准菌株，则可按照给定值直接稀释。稀释后分别取相应水量的菌悬液按接种（9.1）的要求接种于试管中，然后按初发酵试验（9.2）和复发酵试验（9.3）要求培养，阳性菌株应呈现阳性反应，阴性菌株应呈现阴性反应。 12.2 对照试验 12.2.1 空白对照 每次试验都要用无菌水做实验室空白测定（9.4.1） ，培养后的试管中不得有任何变色反应。否则，该次样品测定结果无效，应查明原因后重新测定。 12.2.2 阳性及阴性对照 定期按照 9.4.2 进行阳性及阴性对照试验，阳性菌株应呈现阳性反应，阴性菌株应呈现阴性反应，否则，该次样品测定结果无效，应查明原因后重新测定。 13 废物处理 使用后的废物及器皿须经 121高压蒸汽灭菌 30 min 或使用液体消毒剂（自制或市售）灭菌。灭菌后，器皿方可清洗，废物作为一般废物处置。 HJ 347.22018 7 附 录 A （资料性附录） 最大可能数（MPN）表 表 A.1 12 管法最大可能数（MPN）表 100 ml 样品量的阳性瓶数 0 1 2 10 ml 样品量的阳性管数 1 L 样品中粪大肠菌群数 1 L 样品中粪大肠菌群数 1 L 样品中粪大肠菌群数 0 3 4 11 1 3 8 18 2 7 13 27 3 11 18 38 4 14 24 52 5 18 30 70 6 22 36 92 7 27 43 120 8 31 51 161 9 36 60 230 10 40 69 230 注：接种 2 份 100 ml 样品，10 份 10 ml 样品，总量 300 ml。 表 A.2 15 管法最大可能数（MPN）表 各接种量阳性份数 95%置信限 各接种量阳性份数 95%置信限 10 ml 1 ml 0.1 ml MPN/100 ml 下限 上限 10 ml 1 ml 0.1 ml MPN/100 ml 下限 上限 0 0 0 2 3 0 0 8 1 19 0 0 1 2 0.5 7 3 0 1 11 2 25 0 0 2 4 0.5 7 3 0 2 13 3 31 0 0 3 5 3 0 3 16 0 0 4 7 3 0 4 20 0 0 5 9 3 0 5 23 0 1 0 2 0.5 7 3 1 0 11 2 25 0 1 1 4 0.5 11 3 1 1 14 4 34 0 1 2 6 0.5 15 3 1 2 17 5 46 0 1 3 7 3 1 3 20 6 60 0 1 4 9 3 1 4 23 0 1 5 11 3 1 5 27 0 2 0 4 0.5 11 3 2 0 14 4 34 0 2 1 6 0.5 15 3 2 1 17 5 46 0 2 2 7 3 2 2 20 6 60 0 2 3 9 3 2 3 24 0 2 4 11 3 2 4 27 HJ 347.22018 8 续表 各接种量阳性份数 95%置信限 各接种量阳性份数 95%置信限 10 ml 1 ml 0.1 ml MPN/100 ml 下限 上限 10 ml 1 ml 0.1 ml MPN/100 ml 下限 上限 0 2 5 13 3 2 5 31 0 3 0 6 0.5 15 3 3 0 17 5 46 0 3 1 7 3 3 1 21 7 63 0 3 2 9 3 3 2 24 0 3 3 11 3 3 3 28 0 3 4 13 3 3 4 32 0 3 5 15 3 3 5 36 0 4 0 8 3 4 0 21 7 63 0 4 1 9 3 4 1 24 8 72 0 4 2 11 3 4 2 28 0 4 3 13 3 4 3 32 0 4 4 15 3 4 4 36 0 4 5 17 3 4 5 40 0 5 0 9 3 5 0 25 8 75 0 5 1 11 3 5 1 29 0 5 2 13 3 5 2 32 0 5 3 15 3 5 3 37 0 5 4 17 3 5 4 41 0 5 5 19 3 5 5 45 1 0 0 2 0.5 7 4 0 0 13 3 31 1 0 1 4 0.5 11 4 0 1 17 5 46 1 0 2 6 0.5 15 4 0 2 21 7 63 1 0 3 8 1 19 4 0 3 25 8 75 1 0 4 10 4 0 4 30 1 0 5 12 4 0 5 36 1 1 0 4 0.5 11 4 1 0 17 5 46 1 1 1 6 0.5 15 4 1 1 21 7 63 1 1 2 8 1 19 4 1 2 26 9 78 1 1 3 10 4 1 3 31 1 1 4 12 4 1 4 36 1 1 5 14 4 1 5 42 1 2 0 6 0.5 15 4 2 0 22 7 67 1 2 1 8 1 19 4 2 1 26 9 78 1 2 2 10 2 23 4 2 2 32 11 91 1 2 3 12 4 2 3 38 1 2 4 15 4 2 4 44 1 2 5 17 4 2 5 50 1 3 0 8 1 19 4 3 0 27 9 80 1 3 1 10 2 23 4 3 1 33 11 93 1 3 2 12 4 3 2 39 13 110 1 3 3 15 4 3 3 45 1 3 4 17 4 3 4 52 1 3 5 19 4 3 5 59 HJ 347.22018 9 续表 各接种量阳性份数 95%置信限 各接种量阳性份数 95%置信限 10 ml 1 ml 0.1 ml MPN/100 ml 下限 上限 10 ml 1 ml 0.1 ml MPN/100 ml 下限 上限 1 4 0 11 2 25 4 4 0 34 12 93 1 4 1 13 4 4 1 40 14 110 1 4 2 15 4 4 2 47 1 4 3 17 4 4 3 54 1 4 4 19 4 4 4 62 1 4 5 22 4 4 5 69 1 5 0 13 4 5 0 41 16 120 1 5 1 15 4 5 1 48 1 5 2 17 4 5 2 56 1 5 3 19 4 5 3 64 1 5 4 22 4 5 4 72 1 5 5 24 4 5 5 81 2 0 0 5 0.5 13 5 0 0 23 7 70 2 0 1 7 1 17 5 0 1 31 11 89 2 0 2 9 2 21 5 0 2 43 15 110 2 0 3 12 3 28 5 0 3 58 19 140 2 0 4 14 5 0 4 76 24 180 2 0 5 16 5 0 5 95 2 1 0 7 1 17 5 1 0 33 11 93 2 1 1 9 2 21 5 1 1 46 16 120 2 1 2 12 3 28 5 1 2 63 21 150 2 1 3 14 5 1 3 84 26 200 2 1 4 17 5 1 4 110 2 1 5 19 5 1 5 130 2 2 0 9 2 21 5 2 0 49 17 130 2 2 1 12 3 28 5 2 1 70 23 170 2 2 2 14 4 34 5 2 2 94 28 220 2 2 3 17 5 2 3 120 33 280 2 2 4 19 5 2 4 150 38 370 2 2 5 22 5 2 5 180 44 520 2 3 0 12 3 28 5 3 0 79 25 190 2 3 1 14 4 34 5 3 1 110 31 250 2 3 2 17 5 3 2 140 37 340 2 3 3 20 5 3 3 180 44 500 2 3 4 22 5 3 4 210 53 670 2 3 5 25 5 3 5 250 77 790 2 4 0 15 4 37 5 4 0 130 35 300 2 4 1 17 5 4 1 170 43 490 2 4 2 20 5 4 2 220 57 700 2 4 3 23 5 4 3 280 90 850 2 4 4 25 5 4 4 350 120 1 000 2 4 5 28 5 4 5 430 150 1 200 2 5 0 17 5 5 0 240 68 750 HJ 347.22018 10 续表 各接种量阳性份数 95%置信限 各接种量阳性份数 95%置信限 10 ml 1 ml 0.1 ml MPN/100 ml 下限 上限 10 ml 1 ml 0.1 ml MPN/100 ml 下限 上限 2 5 1 20 5 5 1 350 120 1 000 2 5 2 23 5 5 2 540 180 1 400 2 5 3 26 5 5 3 920 300 3 200 2 5 4 29 5 5 4 1 600 640 5 800 2 5 5 32 5 5 5 2 400 800 注 1：接种 5 份 10 ml 样品、5 份 1 ml 样品、5 份 0.1 ml 样品。 注 2：如果有超过三个的稀释度用于检验，在一系列的十进稀释当中，计算 MPN 时，只需要用其中依次三个的稀释度，取其阳性组合。选择的标准是：先选出 5 支试管全部为阳性的最大稀释（小于它的稀释度也全部为阳性试管） ，然后再加上依次相连的两个更高的稀释。用这三个稀释度的结果数据来计算 MPN 值。 HJ 347.22018 11 附 录 B （资料性附录） 粪大肠菌群检验记录及报告推荐格式 表 B.1 粪大肠菌群测定检验记录 项目名称： 检验日期： 年 月 日 检验方法 方法依据 灭菌锅型号 出厂编号 培养箱型号 出厂编号 培养基灭菌温度/ 培养温度/ 样品编号： 查表结果：粪大肠菌群数 MPN/100 ml 稀释度： 结果： MPN/L 标本接种/ml 初发酵 复发酵 阳性管数/个 检验者： 校对： 审核： 注 1：初发酵和复发酵后面的表格里，产酸产气的用“+”表示，否则用“”表示。 注 2：可根据实际工作需要自行设计表格，至少要包括上述信息。 表 B.2 粪大肠菌群测定数据报告 样品来源 采/送样日期 分析日期 样品数量 样品状态 监测点位 样品编号 监测频次 标准方法名称 标准方法编号 测定值： 监测结果： 备注 注：可根据实际工作需要自行设计表格，至少要包括上述信息。