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单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,本幻灯片资料仅供参考，不能作为科学依据，如有不当之处，请参考专业资料。谢谢,课题1 微生物试验室培养,专题2 微生物的培养与应用,1.提供营养和条件,2.预防污染,第1页,微生物类群,原生生物：,原核生物:,真菌:,病毒:,如酵母菌,单细胞动植物,如草履虫、单细胞藻类等,无细胞结构,真核细胞,细菌、蓝藻,原核细胞,第2页,(1)依据你所掌握知识，分析造成生产失败根源是什么?,(2)由此可见，研究和应用微生物前提是什么？,根源在于发酵物中混入了杂菌,预防杂菌入侵，取得纯净培养物,第3页,一、培养基,微生物生存环境和营养物质,1.基本成份：,碳源、氮源、水、无机盐,碳源,无机碳源：,有机碳源：,CO,2,、CO,3,2,-,、HCO,3,-,牛肉膏、蛋白胨等,自养微生物,异养微生物,氮源,无机氮源：,有机氮源：,NH,4,、NO,3,-,牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等,注：含,CHON有机物,是,异,养型微生物,碳源,、,氮源,、,能源,第4页,一、培养基,微生物生存环境和营养物质,1.基本成份：,碳源、氮源、水、无机盐,碳源,无机碳源：,有机碳源：,CO,2,、CO,3,2,-,、HCO,3,-,牛肉膏、蛋白胨等,自养微生物,异养微生物,氮源,无机氮源：,有机氮源：,NH,4,、NO,3,-,牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等,注：含,CHON有机物,是,异,养型微生物,碳源,、,氮源,、,能源,第5页,1.基本成份：,碳源、氮源、水、无机盐,2.特殊营养：,维生素、碱基等,（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）,3.pH、氧气需求：,4.种类：,固体培养基,液体培养基,有,无,凝固剂琼脂,分离 判定,工业 生产,化学成份：,物理性质：,天然培养基 合成培养基,一、培养基,第6页,划分标准,培养基种类,特点,用途,物理性质,化学成份,天然培养基,合成培养基,用途,判别培养基,培养基种类,不加凝固剂,加凝固剂，如琼脂,工业生产,微生物分离、判定、活菌计数、保藏菌种,含化学成份不明确天然物质,工业生产,培养基成份明确,分类、判定,在培养基中加入某种化学物质,以抑制不需要微生物生长,促进所需要微生物生长,培养、分离出特定微生物,在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以判别不一样种类微生物,判别不一样种类微生物,选择培养基,液体培养基,固体培养基,第7页,加入青霉素培养基:,不加氮源无氮培养基:,不加含碳有机物无碳培养基:,几个选择培养基举例：,分离酵母菌、霉菌等真菌,分离固氮菌,分离自养型微生物,唯一碳源为纤维素培养基,分解纤维素细菌,第8页,牛肉膏蛋白胨培养基 是一个应用最广泛和最普通细菌基础培养基,。,1000ml牛肉膏蛋白胨培养基配方,H,2,O 定容至1000ml,Nacl 5g,蛋白胨 10g,牛肉膏 5g,琼脂20.0g,分析营养组成？,第9页,5.配制标准,目标明确：,营养全方面、浓度适宜、百分比恰当,适宜pH值：,有机碳源,异养型：,依据微生物,种类、培养目标,选择原料,自养型：,不加碳源,加入缓冲剂,细菌偏碱，真菌偏酸,（CO,2,碳源）,生产,科研,第10页,耐高温需保持干燥 物品，160170 12小时,接种环、接种针等 金属用具,7075、30min,80、15min,100、56min,消毒,灭菌,定义,方法,较为,温和,理化方法，,杀死,部分有害菌体,（,不,包含芽孢、孢子）,强烈,理化方法，,杀死,全部微生物,（包含,芽孢、孢子,）,煮沸消毒法,巴氏消毒法,化学药剂,紫外线,灼烧灭菌,干热灭菌,酒精、氯气、石炭酸等,高压蒸汽灭菌,培养基，,100KPa、,121、1530min,预防外来杂菌污染,1.消毒与灭菌：,二、无菌技术,第11页,请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。假如需要，请选择适当方法。,（1）培养细菌用培养基与培养皿,（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管,（3）试验操作者双手,思考,第12页,2.无菌范围：,试验操作空间消毒,操作者手、衣着消毒,试验用具灭菌,试验操作过程,二.无菌技术：,预防外来杂菌污染,1.消毒与灭菌：,酒精灯旁操作,超净工作台,第13页,四、大肠杆菌纯化培养,分散成单个细胞,形成单个菌落,3.功效：,单个,或少数菌体,2.特征：,大小、形状、光泽度、,颜色、透明度等。,判定菌种,主要依据,固体,培养基上,大量繁殖,子细胞群体,1.定义：,第14页,1000ml牛肉膏蛋白胨培养基配方,H,2,O 定容至1000ml,Nacl 5g,蛋白胨 10g,牛肉膏 5g,琼脂20.0g,制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,1.计算：,培养基用量,依配方计算各成份用量,2.称量：,3.溶化：,牛肉膏黏稠，用称量纸称取,牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖,牛肉膏、称量纸、少许水加热溶解,取纸,蛋白胨、NaCl,琼脂,补水定容,4.调pH、分装、封口：,5.灭菌：,6.倒平板：,培养基、培养皿,第15页,倒平板,约50,预防皿盖上水珠落入培养基，造成污染,灼烧灭菌，,预防瓶口微生物污染培养基,第16页,制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,纯化大肠杆菌：,平板划线法：,菌种,划3个平板,1个不划线,1.接种：,接种环,预防划破培养基,（重复试验）,（空白对照）,四、大肠杆菌纯化培养,第17页,第18页,第19页,平板划线时不能划破培养基，为何？,一旦划破，会造成划线不均匀，难以到达分离单菌落目标；,二是存留在划破处单个细胞无法形成规矩菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状菌落。,第20页,问题讨论,1.为何在操作第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，依然需要灼烧接种环吗？为何？,操作第一步灼烧接种环是为了防止接种环上可能存在微生物污染培养物,杀死上次残留菌种，确保使下一次划线时，菌种直接起源于上次划线末端，从而经过划线次数增加，使每次划线时菌种数目逐步降低，方便得到菌落。,及时杀死接种环上残留菌种，防止细菌污染环境和感染操作者。,第21页,问题讨论,2.在灼烧接种环之后，为何要等其冷却后再进行划线？,3.在作第二次以及其后划线操作时，为何总是从上一次划线末端开始划线？,答：以免接种环温度太高，杀死菌种。,答：划线后，线条末端细菌数目比线条起始处要少，每次从上一次划线末端开始，能使细菌数目伴随划线次数增加而逐步降低，最终能得到由单个细菌繁殖而来菌落。,第22页,6支试管，分别加入9ml无菌水,1ml,10,1,1ml,10,2,1ml,10,3,1ml,10,4,1ml,10,5,1ml,10,6,稀释涂布平板法：,a.梯度稀释菌液：,菌液,微量 移液器,第23页,第24页,稀释涂布平板法：,a.梯度稀释菌液：,b.涂布平板：,不超出0.1ml,各梯度分别涂布3个平板,1个不涂布作空白对照,滴,灼,试,涂,稀释10,3,倍,稀释10,4,倍,稀释10,5,倍,第25页,平板划线法：,制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,纯化大肠杆菌：,1.接种：,稀释涂布平板法：,2.培养：,将,接种后,培养基和一个,未接种,培养基,放入37恒温箱中培养12h24h后，,观察并统计,四、大肠杆菌纯化培养,第26页,五、课题结果评价,培养12 h与24 h后大肠杆菌菌落大小会有显著不一样,（一）培养基制作是否合格,假如未接种培养基在恒温箱中保温12 d后无菌落生长，说明培养基制备是成功，不然需要重新制备。,（二）接种操作是否符合无菌要求,假如培养基上生长菌落颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落特点，则说明接种操作是符合要求；假如培养基上出现了其它菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未到达要求，需要分析原因，再次练习。,（三）是否进行了及时细致观察与统计,第27页,1.暂时保藏：,试管固体斜面培养基上,4,2.长久保留：,菌种易被污染、变异,甘油管藏,1ml甘油1ml菌液,20,六、课题延伸（菌种保藏）,第28页,本课题知识小结,微生物试验室培养,培养基,无菌技术,制备牛肉蛋白胨固体培养基,纯化大肠杆菌,结果分析与评价,培养基类型,培养基营养物质,防止杂菌污染方法,试验室惯用消毒方法,试验室惯用灭菌方法,平板划线法,稀释涂布法,（步骤）,第29页,【典例解析】,例1:关于微生物营养物质叙述中，正确是(),A.是碳源物质不可能同时是氮源,B.凡碳源都提供能量,C.除水以外无机物只提供无机盐,D.无机氮源也能提供能量,解析：,不一样微生物，所需营养物质有较大差异，要针对微生物详细情况分析。对于A、B选项，它表示是不完整。有碳源只能是碳源，如二氧化碳；有碳源可同时是氮源，如NH,4,HCO,3,；有碳源同时是能源，如葡萄糖；有碳源同时是氮源，也是能源，如蛋白胨。对于C选项，除水以外无机物种类繁多，功效也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物碳源；NaHCO,3,，可作为自养型微生物碳源和无机盐；而NaCl则只能提供无机盐。对于D选项，无机氮源提供能量情况还是存在，如NH,3,可为硝化细菌提供能量和氮源。,D,第30页,例2：下面对发酵工程中灭菌了解不正确是(),A.预防杂菌污染,B.毁灭杂菌,C.培养基和发酵设备都必须灭菌,D.灭菌必须在接种前,解析：灭菌是微生物发酵过程一个主要步骤。A说是灭菌目标，因为发酵所用菌种大多是单一纯种，整个发酵过程不能混入其它微生物（杂菌），所以是正确；B是错误，因为灭菌目标是预防杂菌污染，但实际操作中不可能只毁灭杂菌，而是毁灭全部微生物。C是正确，因为与发酵相关全部设备和物质都要灭菌；发酵所用微生物是灭菌后专门接种，灭菌必须在接种前，假如接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。,B,第31页,编号,成份,含量,粉状硫,10g,（NH,4,）,2,SO,4,0.4g,K,2,HPO,4,4.0g,MgSO,4,9.25g,FeSO,4,0.5g,CaCl,2,0.5g,H,2,O,100ml,例3右表是某微生物培养基成份，请据此回答：,（1）右表培养基可培养微生物类型是,。,（2）若不慎将过量NaCl加入培养基中。,如不想浪费此培养基，可再加入,。,自养型微生物,含碳有机物,第32页,（3）若除去成份，加（CH2O），,该培养基可用于培养,。,（4）表中营养成份共有,类。,（5）不论何种培养基，在各种成份都溶化后分装前，要进行是,。,（6）右表中各成份重量确定标准是,。,（7）若右表培养基用于菌种判定，应该增加成份是,。,固氮微生物,3,调整pH,依微生物生长需要确定,琼脂（或凝固剂）,第33页,
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