不同孔径3D打印三周期极小曲面基元支架调控成骨细胞生物学行为的研究.pdf

实实实实实实实实实实实验验验验验验验验验验验研研研研研研研研研研研究究究究究究究究究究究不同孔径 D打印三周期极小曲面基元支架调控成骨细胞生物学行为的研究程德斌,张昭,付军,刘冬,范宏斌(空军军医大学附属西京医院骨科,陕西 西安 )摘要:目的基于 D打印三周期极小曲面(t r i p l yp e r i o d i cm i n i m a ls u r f a c e s,T PMS)基元支架,探索不同孔径对成骨细胞MC T E 增殖和分化的影响,为 D打印个性化假体多孔结构的设计提供理论基础.方法基于T PMS和选择性激光熔化(s e l e c t i v e l a s e rm e l t i n g,S LM)设计和制造具有种孔径(m、m和 m)的T PMS基元支架.将不同孔径的支架与成骨细胞MC T E 共培养,通过细胞计数试剂(c e l l c o u n t i n gk i t ,C C K )、细胞骨架染色、碱性磷酸酶(a l k a l i n ep h o s p h a t a s e,A L P)活性和蛋白质印迹法(w e s t e r nb l o t,WB)分析评价其对成骨细胞增殖和分化的影响.结果扫描电镜显示成功制造了不同孔径的 D打印T PMS基元支架,并且成骨细胞MC T E 在支架中展现了良好的黏附性.C C K 实验的结果表明,随着孔径的增大,MC T E 的增殖性也明显增加.此外,T PMS基元支架在孔径大小为 m时A L P的活性最高.WB分析进一步发现型胶原蛋白(c o l l a g e nt y p e,C o l)、R u n t相关转录因子(R u n t r e l a t e dt r a n s c r i p t i o nf a c t o r,R u n x)和骨桥蛋白(o s t e o p o n t i n,O P N)在 m组的表达同样最高.结论随着孔径的增大,D打印T PMS基元支架更有助于成骨细胞增殖,而在孔径大小为 m时最有助于成骨细胞分化.关键词:D打印;三周期极小曲面;成骨细胞;孔径;分化M o d u l a t i o no fO s t e o b l a s tB i o l o g i c a lB e h a v i o rb y DP r i n t e dT r i p l yP e r i o d i cM i n i m a l S u r f a c e sP r i m i t i v eS c a f f o l d sw i t hD i f f e r e n tP o r eS i z e sC h e n gD e b i n,Z h a n gZ h a o,F uJ u n,L i uD o n g,F a nH o n g b i n(D e p a r t m e n to fO r t h o p a e d i c sS u r g e r y,X i j i n gH o s p i t a l,A i rF o r c eM i l i t a r yM e d i c a lU n i v e r s i t y,X ia n ,C h i n a)A b s t r a c t:O b j e c t i v e T oe x p l o r et h ee f f e c t so fd i f f e r e n tp o r es i z e so f Dp r i n t e dt r i p l yp e r i o d i cm i n i m a ls u r f a c e s(T PM S)p r i m i t i v es c a f f o l d so nt h ep r o l i f e r a t i o na n dd i f f e r e n t i a t i o no fo s t e o b l a s t s MC T E,a n dt op r o v i d eat h e o r e t i c a l b a s i s f o r t h ed e s i g no f s u b s e q u e n t Dp r i n t e dp e r s o n a l i z e dp r o s t h e t i cp o r o u s s t r u c t u r e s M e t h o d s D e s i g na n df a b r i c a t i o no fT PM Ss u b s t r a t es c a f f o l d sw i t ht h r e ep o r es i z e s(m,ma n d m)w e r ec o n d u c t e db a s e do nT PM Si m p l i c i t s u r f a c ef u n c t i o n sa n ds e l e c t i v el a s e rm e l t i n g(S LM)T h es c a f f o l d sw i t hd i f f e r e n tp o r es i z e sw e r ec o c u l t u r e dw i t ho s t e o b l a s t sMC T E a n dt h e i re f f e c t so no s t e o b l a s tp r o l i f e r a t i o na n dd i f f e r e n t i a t i o nw e r ee v a l u a t e db yC C K ,C y t o s k e l e t o ns t a i n i n g,a l k a l i n ep h o s p h a t a s ea c t i v i t ya n dw e s t e r nb l o t(WB)a n a l y s i s R e s u l t s S c a n n i n ge l e c t r o nm i c r o s c o p ys h o w e dt h a tT PM Sp r i m i t i v e s c a f f o l d sw i t hd i f f e r e n t p o r e s i z e sw e r e s u c c e s s f u l l y f a b r i c a t e da n do s t e o b l a s t sMC T E s h o w e dg o o da d h e s i o n i nt h es c a f f o l d s T h er e s u l t so fC C K e x p e r i m e n t s i n d i c a t e dt h a t t h ep r o l i f e r a t i o no fMC T E i n c r e a s e ds i g n i f i c a n t l y w i t hi n c r e a s i n gp o r es i z e I na d d i t i o n,t h eT PM Sp r i m i t i v es c a f f o l de x h i b i t e dt h eh i g h e s t a l k a l i n ep h o s p h a t a s ea c t i v i t ya tap o r es i z eo f m WBa n a l y s i sf u r t h e rr e v e a l e dt h a tt h ee x p r e s s i o no fc o l l a g e nt y p e(C o l),R u n tr e l a t e dt r a n s c r i p t i o nf a c t o r(R u n x)a n do s t e o p o n t i n(O P N)p r o t e i n sw e r ea l s oh i g h e s t i nt h e m g r o u p C o n c l u s i o nA st h ep o r es i z ei n c r e a s e d,t h e Dp r i n t e dT PM Ss c a f f o l dd e m o n s t r a t e se n h a n c e do s t e o b l a s tp r o l i f e r a t i o n F u r t h e r m o r e,ap o r es i z eo f mi so p t i m a l f o ro s t e o b l a s td i f f e r e n t i a t i o n K e yw o r d s:Dp r i n t i n g;t r i p l yp e r i o d i cm i n i m a l s u r f a c e s;o s t e o b l a s t s;p o r es i z e;d i f f e r e n t i a t i o n基金项目:国家自然科学基金();陕西省国际科技合作重点项目(GH Z D );陕西省自然科学基金(S F );本文共同第一作者:张昭;本文通信作者:范宏斌程德斌,张昭,付军,等不同孔径 D打印三周期极小曲面基元支架调控成骨细胞生物学行为的研究J实用骨科杂志,():J o u r n a l o fP r a c t i c a lO r t h o p a e d i c sV o l ,N o ,N o v 钛及其合金由于优异的生物力学性能和生物相容性,目前已成为骨科植入物中最受欢迎的材料之一,并广泛应用于肿瘤、创伤等骨科相关疾病.天然骨组织是互相联通的多孔结构,由外层骨皮质和内层骨小梁组成.多孔结构已经被证实是调控植入物骨界面整合的重要因素.D打印技术不仅能在钛合金假体与骨的接触面制造相互连接的大孔结构来促进新生骨长入,而且能通过多孔结构降低钛合金的弹性模量,从而减少或避免应力屏蔽.然而,由于 D打印工艺的局限性,目前临床上使用多孔结构多为孔径大小在 m的晶胞结构.虽然较大的孔径大小有利于骨长入,但植入物的强度会因此降低.此外,在一些研究中,有研 究 人 员 建 议 骨 长 入 的 最 佳 孔 径 应 为 m.然而,其他研究表明 m孔径大小可能促进细胞增殖,并加速骨生长 .目前关于诱导骨生成的最适孔径仍有争议.近期,三周期极小曲面(t r i p l yp e r i o d i cm i n i m a l s u r f a c e s,T PMS)结构以其优异的力学性能和光滑的局部拓扑结构引起了广泛的关注,其特殊的孔隙度和结构可以通过定义权重函数和空间依赖函数来形成.在曲面微分几何中最小曲面的定义是指平均曲率为零的曲面,它可以在个独立方向上无限延伸 .碰巧的是,骨小梁的平均曲率接近于零,有学者认为组织生长过程是曲率驱动的,这意味着T PMS结构可能会促进骨组织再生.因此,本研究旨在基于 D打印T PMS基元支架探索不同孔径对成骨细胞MC T E 增殖和分化的影响,并为后续 D打印个性化假体多孔结构的设计提供理论基础.资料与方法 D打印T PMS基元支架的设计及制造T PMS是一种特殊的三维周期曲面,将空间划分为个或多个子空间.T PMS多 孔 支 架 具 有 优 越 的 力 学 性 能 和 表 面 积 比.本研 究 应 用T PMS函 数 方 程 来 设 计T PMS基 元 支 架:P r i m i t i v e c o s(x)c o s(y)c o s(z).通过调控函数式的参数来构建不同孔径结构的支架(见图),随后导出S T L格式的文件将其输入至选择性激光熔融(s e l e c t i v el a s e rm e l t i n g,S LM)设备进行加工制造.打印的原材料为T i A l V粉末,粒径 m,密度为 g/c m.设置激光功率为 W,激光扫描速度可达 mm/s.图 D打印T PMS基元支架示意图扫描电镜评估支架结构参数扫描电镜(T e n e o V SF E I公司,美国)被用于对 D打印T PMS基元支架进行形貌分析.在进行形貌分析之前,用金钯覆盖T PMS基元支架表面,采用I m a g eJ软件计算.MC T E 细胞的培养小鼠胚胎成骨细胞前体细胞MC T E 购自武汉普鲁塞生物有限公司,并培养于含 胎牛血清和双抗(青霉素和链霉素)的D u l b e c c o氏培养基(D u l b e c o osm o d i f i e de a g l em e d i u m,DMEM)培养基中,培养瓶置于、C O的培养箱中,每d换液次,当细胞生长至 时进行传代.细胞骨架染色在 孔培养板中将MC T E 细胞接种于不同孔径的 D打印T PMS基元支架表面,接种密度为每孔,分别共培养至第天.用磷酸盐缓冲盐溶液(p h o s p h a t eb u f f e r e ds a l i n e,P B S)冲洗次后,用戊二醛固定细胞 m i n,P B S随后清洗,加入异硫氰酸荧光素(F I T C)鬼笔环 肽 工 作 液 避 光 孵 育 m i n,随 后P B S冲 洗,加 入DA P I染核m i n.应用倒置荧光显微镜进行观察,并对不同激发光对应的荧光照片进行M e r g e处理.细胞增殖活性检测将MC T E 细胞在上述不同孔径的T PMS基元钛片中培养,分别共培养至d、d、d、d.在每个时间点,弃去上清液后,每孔加入mL新鲜培养液和 比例的细胞计数试剂(c e l l c o u n t i n gk i t ,C C K ).孵育h后,通过酶标仪检测孔板在 n m处的吸光值(o p t i c a ld e n s i t y,OD),每个样本设置个复孔.碱性磷酸酶(a l k a l i n ep h o s p h a t a s e,A L P)活性测定将MC T E 细胞在上述不同孔径的T PMS基元钛片中培养,同时设置空白对照组(MC T E 细胞在普通培养板中培养).在培养d、d和 d后,根据A L P检测试剂盒的说明,检测不同分组在 n m波长下的吸光度值,总蛋白浓度用二辛可宁酸(b i c i n c h o n i n i ca c i d,B C A)蛋白定量法进行测定.蛋白质印迹法(w e s t e r nb l o t,WB)法检测成骨相关蛋白实用骨科杂志第 卷,第 期,年 月表达在不同分组(空白对照、m、m、m)与MC T E 细胞培养 d后,用R I P A裂解液提取各组的蛋白.裂解液以 r p m离心 m i n后收集上清液,定量蛋白浓度.随后,取 g蛋白样本经煮沸、上样、电泳和转膜后,与脱脂奶粉封闭,用抗型胶原蛋白(c o l l a g e nt y p e,C o l)(武 汉 三 鹰 生 物 技 术 有 限 公 司,A P,)、R u n t相 关 转 录 因 子(R u n tr e l a t e dt r a n s c r i p t i o nf a c t o r,R u n x)(武汉三鹰生物技术有限公司,A P,)、骨桥蛋白(o s t e o p o n t i n,O P N)(武汉三鹰生物技术有限公司,A P,)和G a p d h(武汉三鹰生物技术有限公司,A P,)在孵育过夜.最后,加入二抗()在室温下孵育h,并用电化学发光(e l e c t r o c h e m i l u m i n e s c e n c e,E C L)试剂显影观察.I m a g eJ被用于分析各个蛋白的相对表达量.统计学方法采用G r a p h P a dP r i s m进行统计分析,所有数据均以(xs)表示.单因素方差分析被用于评估多组间差异,P 为差异有统计学意义.结果 D打印T PMS基元支架表面形貌观察扫描电镜发现S LM精确制造出了不同孔径的T PMS基元支架,与设计图一致,具 有 均 匀 分 布 互 相 连 通 的 多 孔 结 构(见 图).T PMS基元支架参数实际值比较:m组孔径大小和孔径率分别为()m、(),m组分别为()m、(),m组分别为()m、().不同孔径支架对细胞黏附和增殖的影响细胞骨架染色提示成骨细胞在不同孔径的支架上黏附良好,增殖旺盛(见图).通过C C K 试剂检测了细胞增殖情况,结果发现不同孔径支架的细胞增殖性在培养到第天时均随着培养时 间 和 孔 径 的 增 加 而 增 加(见 图).与 m组 相 比,图扫描电镜观察不同孔径T PMS基元支架的形貌图不同孔径T PMS基元支架中成骨细胞的细胞骨架形态J o u r n a l o fP r a c t i c a lO r t h o p a e d i c sV o l ,N o ,N o v 图C C K 实验评估细胞在 D打印T PMS基元支架不同孔径组中的增殖活性图MC T E 与不同孔径 D打印T PMS基元支架共培养的A L P活性图WB分析MC T E 与不同孔径T PMS基元支架共培养第 天的成骨相关 m组 的 增 殖 活 性 升 高 程 度 最 高,这 表 明 大 孔 径 的T PMS基元支架更适于细胞增殖.不同孔径支架对细胞A L P活性的影响培养第天和第 天时,T PMS基元支架上培养的MC T E 细胞的A L P活性均明显高于空白对照组,并且随着时间的增加,A L P活性也明显升高(见图).值得注意的是,在不同孔径的T PMS基元支架之间发现 m孔径的T PMS基元支架上的A L P活性最高,明显高于 m和 m.不同孔径支架对细胞成骨分化的作用培养 d时WB分析检测了成骨分化相关蛋白C o l、R u n x 和O P N的表达(见图).结果发现,T PMS基元支架组中MC T E 细胞成骨分化相关蛋白表达水平显著高于空白对照组,差异有统计学意义(P ).此外,与之前的结果一致的是,T PMS基元 m组中成骨分化相关蛋白的表达量最高.讨论骨肿瘤切除后的大段骨缺损对骨科医生来说仍然是一个挑战.在过去的几年中,钛及其合金因其优异的抗压强度和良好的生物相容性而被广泛研究用于骨缺损的重建,并展现了有前景的临床结果.特别是T i A l V是目前临床修复骨缺损的首选材料.然而,T i A l V具有一定的生物惰性,经过抛光处理后几乎没有骨整合能力 .此外,T i A l V的弹性模量远高于骨皮质和骨小梁,当假体和骨组织的弹性模量不同时,两者之间的应力传递会不均匀,产生应力屏蔽,最终导致假体松动或断裂.为了克服这些问题,越来越多的研究者关注探索多孔T i A l V在骨修复中的应用价值.T PMS是一种通过数学函数设计的高度可控的均质多孔结构,与传统的晶胞结构相比,T PMS结构通常具有多种优势.首先,其可以通过随意控制函数来实现孔径、孔隙率等重要参数调整,能更好地适应力学性能的要求;其次,其高表面积体积比的特点能进一步增强细胞黏附、迁移、增殖和营养运输;第三,由于其结构均匀,T PMS展现出了出色的应力分布 .以往的研究对不同T PMS结构的力学性能、渗透性和疲劳行为进行了探索,并从理论上证实了其在骨组织再生中的可行性 .尽管T PMS结构展现了良好的临床应用前景,但是其调控细胞行为的最适孔径目前仍不清楚.多孔支架的孔径大小在调控成骨细胞增殖和分化中起着关键作用.随着基于粉末的金属熔材增材制造技术的发展,如选择性激光熔化、电子束熔化或直接金属激光烧结等,可以设计并加工处不同的相对密度、直径、孔径和结构的复杂结构.S LM作为最常用的金属增材制造技术之一,利用激光完全熔化金属粉末,然后逐层固化金属粉末来形成复杂的结构.由于其优良的机械性能、高精度、高构建分辨率和卓越的定制性,S LM在制造复杂精确的结构方面展现了巨大的优势,特别是金属假体的制造.Y a n等之前应用S LM技术制造了具有 的高孔隙率的T PMS植入物,其弹性模量和孔隙率可以根据人体骨骼的水平进行调整,从而减少或避免了应力屏蔽,并明显延长植入物的使用寿命.S z a t k i e w i c z等 以 L不锈钢为基材用S LM制造了T PMS支架,并评估了其不同参数下的弹性模量、屈服强度、平台应力和能量吸收关系,为设计和制造更高效的轻质结构提供了新的思路.L i等 通过S LM技术制实用骨科杂志第 卷,第 期,年 月造了超大尺寸的T PMS基元支架,并通过不断优化基元结构参数同时提高了力学性能和渗透性能,为骨组织重建的力学和生物性 能 提 供 很 好 的 解 决 方 案.因 此,本 研 究 中 应 用S LM分别 制 造 了 孔 径 为 m、m和 m的T PMS基元支架,细胞增殖分析发现 m组中细胞增殖活性最高,而 m组中的细胞增殖活性最低.随着孔径的增加,成骨细胞的增殖活性也明显增高,这一观点已经得到了国内外大量学者的认可,.大量的研究表明,几百微米(m)的多孔结构能为细胞增殖提供足够的空间,有利于营养物质的交换和代谢产物的排出 .与孔径为 m的T PMS基元支架相比,孔径为 m的T PMS基元支架的细胞密度和代谢活性显著增加.S o l l a z z o等 应用转录组分析发现成骨细胞的增殖高度依赖于孔径大小.当孔径超过 m时,细胞的增殖率随着孔径地增加而增加.孔径大小决定了多孔支架的渗透系数,使整个支架形成了高度互相联通的结构,为位于支架中心的细胞提供足够的氧气和营养物质,从而更适合细胞的培养和增殖.据报道,在骨形成的不同阶段(增殖、分化和矿化)中,成骨相关标志物的上调或下调表达决定了未成熟的成骨细胞向成熟的成骨细胞转化.本研究中随着培养时间的增加,MC T E 细胞A L P活性在实验组中的表达均增加,在 m组中的含量达到最高值.A L P在矿化组织的细胞中高度表达,在成骨细胞发育过程中是诱导其早期矿化的表现之一.A L P能通过调节局部无机磷酸盐沉积速率,降低细胞外焦磷酸盐浓度,来促进细胞外基质矿化 .随着在T PMS基元支架上细胞A L P活性的增加,细胞向成熟骨细胞表型分化和矿化的能力逐渐增强.此外,本研究还评估了成骨关键标志物C o l、R u n x 和O P N蛋白的表达来进一步验证成骨细胞表型的变化.C o l与A L P一样是广泛认可的成骨细胞分化的早期标记物之一,可以促进细胞成骨分化,并反映成骨分化的表型特征.R u n x 是成骨细胞分化和成熟的关键特异性转录因子,能编码一种参与间充质前体成骨分化过程的蛋白,与其他转录因子协同在骨形成和生长中发挥重要作用.R u n x 的激活能诱导特异性成骨细胞标志物的表达,包括C o l 和骨A L P .O P N是一种分泌蛋白,参与了骨重塑和代谢过程.O P N不仅是神经内分泌介导调节骨量的重要因素,还参与成骨细胞的多种生物活动,包括增殖、迁移和黏附等.本研究中WB分析发现 m中细胞的C o l、R u n x 和O P N基因在蛋白水平的表达程度仍然最高,这个发现与之前的研究一致.Z h a o等 发现 D打印多孔T i A l V支架孔径为()m时有利于骨长入和血管形成.R a n等 通过体内实验同样证明孔径为()m的多孔T i A l V植入物有利于新生骨向植入物孔内生长,保证了骨植入物的远期稳定性.细胞所在的表面的曲率已被证明在调控组织再生方面起着关键的作用 .与平面培养的对照组相比,骨细胞在 D打印T PMS基元支架中均出现了不同程度的分化.T PMS基元结构具有优异的力学强度和接近于零的凹面曲率,类似于骨小梁的平均曲率,.这意味着较低的曲率可能是T PMS基元支架诱导骨细胞的成熟和分化的关键因素,并且孔径大小为 m的T PMS基元支架更有利于骨再生,这为 D打印多孔结构的设计提高了新的思路.本研究通过体外实验初步证明了 D打印T PMS基元支架促进MC T E 细胞增殖和分化,并为T PMS结构的拓扑结构在骨再生中的设计提供新的参考依据.但T PMS基元支架调控细胞行为的具体潜在机制仍然不清楚,未来仍需要大量的体外实验和动物实验,进一步揭示T PMS基元支架的骨整合作用,为临床转化提供夯实基础.参考文献:张正也,刘晓奇,庄金鹏,等 D打印钛合金在骨科的临床应用及进展J实用骨科杂志,():S i k a v i t s a sV I,T e m e n o f fJ S,M i k o sAG B i o m a t e r i a l sa n d b o n e m e c h a n o t r a n s d u c t i o nJ B i o m a t e r i a l s,():Y a nC,H a oL,H u s s e i n A,e ta l T i A l Vt r i p l yp e r i o d i c m i n i m a ls u r f a c es t r u c t u r e sf o rb o n ei m p l a n t sf a b r i c a t e dv i as e l e c t i v el a s e r m e l t i n gJ JM e c hB e h a vB i o m e dM a t e r,():Z h a n gT,W e iQ,Z h o uH,e ta l T h r e e d i m e n s i o n a l p r i n t e d i n d i v i d u a l i z e dp o r o u si m p l a n t s:An e w i m p l a n t b o n e i n t e r f a c ef u s i o nc o n c e p tf o rl a r g eb o n ed e f e c tt r e a t m e n tJ B i o a c t M a t e r,():Y a oY,Y a n gY,Y eQ,e ta l E f f e c t so fp o r es i z ea n dp o r o s i t yo nc y t o c o m p a t i b i l i t ya n do s t e o g e n i cd i f f e r e n t i a t i o no fp o r o u st i t a n i u mJJ M a t e rS c iM a t e rM e d,():T a n i g u c h iN,F u j i b a y a s h iS,T a k e m o t o M,e ta lE f f e c to fp o r es i z eo nb o n e i n g r o w t hi n t op o r o u st i t a n i u mi m p l a n t sf a b r i c a t e db ya d d i t i v em a n u f a c t u r i n g:A n i nv i v oe x p e r i m e n tJ M a t e rS c iE n gC M a t e rB i o lA p p l,():F r o s c hK,B a r v e n c i kF,L o h m a n nCH,e ta l M i g r a t i o n,m a t r i xp r o d u c t i o na n dl a m e l l a rb o n ef o r m a t i o no fh u m a no s t e o b l a s t l i k e c e l l s i np o r o u s t i t a n i u mi m p l a n t sJ C e l l sT i s s u e sO r g a n s,():K a p f e rS C,H y d eS T,M e c k eK,e ta l M i n i m a ls u r f a c es c a f f o l dd e s i g n sf o rt i s s u ee n g i n e e r i n g J B i o m a t e r i a l s,():J o u r n a l o fP r a c t i c a lO r t h o p a e d i c sV o l ,N o ,N o v L iL,S h i J,Z h a n gK,e ta l E a r l yo s t e o i n t e g r a t i o ne v a l u a t i o n o f p o r o u s T i A l V s c a f f o l d s d e s i g n e db a s e do n t r i p l yp e r i o d i cm i n i m a l s u r f a c em o d e l sJJO r t h o pT r a n s l a t,():J i n n a iH,W a t a s h i b a H,K a j i h a r a T,e ta l S u r f a c ec u r v a t u r e so ft r a b e c u l a rb o n em i c r o a r c h i t e c t u r eJB o n e,():刘佳辛,贾鹏,门玉涛,等基于三周期极小曲面骨小梁结构的设计及优化J中国组织工程研究,():Z e k r yKM,Y a m a m o t oN,H a y a s h iK,e ta l R e c o n s t r u c t i o no f i n t e r c a l a r yb o n ed e f e c t a f t e r r e s e c t i o no fm a l i g n a n tb o n eJJO r t h o pS u r g(HK),():C h e nZ,Y a nX,Y i nS,e t a lI n f l u e n c e o f t h ep o r e s i z ea n dp o r o s i t yo fs e l e c t i v el a s e rm e l t e dT i A l V E L Ip o r o u ss c a f f o l d o n c e l lp r o l i f e r a t i o n,o s t e o g e n e s i sa n db o n e i n g r o w t hJ M a t e rS c iE n gC M a t e rB i o lA p p l,():W a n gC,X uD,L iS,e ta l E f f e c to fp o r es i z eo nt h ep h y s i c o c h e m i c a l p r o p e r t i e s a n d o s t e o g e n e s i s o fT i A l Vp o r o u ss c a f f o l d sw i t hb i o n i cs t r u c t u r eJA C SOm e g a,():K a r i m i p o u r F a r d P,B e h r a v e s h AH,J o n e s T a g g a r tH,e ta l E f f e c t so fd e s i g n,p o r o s i t ya n db i o d e g r a d a t i o no nm e c h a n i c a la n d m o r p h o l o g i c a lp r o p e r t i e so fa d d i t i v e m a n u f a c t u r e dt r i p l yp e r i o d i c m i n i m a ls u r f a c es c a f f o l d sJJM e c hB e h a vB i o m e dM a t e r,():W a n gN,M e e n a s h i s u n d a r a m G K,K a n d i l y aD,e ta lA b i o m e c h a n i c a le v a l u a t i o n o n c u b i c,o c t e t,a n dT PM Sg y r o i dT i A l Vl a t t i c es t r u c t u r e sf a b r i c a t e db ys e l e c t i v el a s e r m e l t i n ga n dt h ee f f e c t so ft h e i rd e b r i so nh u m a no s t e o b l a s t l i k ec e l l sJ B i o m a t e r i a l sa d v a n c e s,():C a s t r oA P G,R u b e nR B,G o n c a l v e sS B,e t a l N u m e r i c a la n de x p e r i m e n t a le v a l u a t i o no fT PM S g y r o i ds c a f f o l d sf o rb o n et i s s u eJ C o m p u tM e t h o d sB i o m e c hB i o m e dE n g i n,():张昭,朱东泽,党竞医,等 D打印技术在骨肿瘤精准化治疗中的研究进展J生物骨科材料与临床研究,():张建国,赵晟,胡凤玲,等S LM打印T i A l V不同晶格结构多孔材料的力学性能J有色金属工程,():李海亮,贾德昌,杨治华,等选区激光熔化 D打印钛合金及其复合材料研究进展J材料科学与工艺,():S z a t k i e w i c zT,L a s k o w s k aD,B a a s zB,e ta l T h e i n f l u e n c eo f t h es t r u c t u r ep a r a m e t e r so nt h em e c h a n i c a lp r o p e r t i e so f c y l i n d r i c a l l ym a p p e dg y r o i dT PM Sf a b r i c a t e db y s e l e c t i v e l a s e rm e l t i n gw i t h Ls t a i n l e s s s t e e l p o w d e rJ M a t e r i a l s(B a s e l,S w i t z e r l a n d),():L i Z,C h e nZ,C h e nX,e ta l E f f e c to fu n i tc o n f i g u r a t i o n sa n dp a r a m e t e r so nt h ep r o p e r t i e so fT i A l Vu n i