同步荧光法测定药片中的维生素B2和B6.doc

同步荧光法测定复合维生素B片中的维生素B2和B6

一、 实验背景
B族维生素是一类重要的水溶性维生素，人体缺乏B族维生素可导致多种疾病的发生，如口角炎等。而人体自身无法合成B族维生素，因此只能通过摄取食物获得，也可通过服用维生素药片加以补充。因此，各种维生素B的含量测定对于复合维生素B片的质量评价十分重要。

二、实验目的
1、学习和掌握同步荧光光谱法测定的原理。
2、学习和掌握荧光分光光度计的使用方法。
3、学习用标准曲线法进行定量分析。

三、实验原理
B族维生素中，维生素B2和维生素B6为荧光物质，因此可采用荧光光谱法对其进行定量测定。但由于它们的荧光光谱部分重叠，从而影响了同时定量分析的准确性。
同步荧光光谱法是荧光分析中的一种重要技术。与常规荧光分析法相比，同步荧光分析法具有简化谱图、提高选择性、减少光散射干扰等特点，尤其适合多组分混合物的分析。同步荧光分析法与常规荧光测定方法最大的区别是：同时扫描激发和发射两个单色器波长，由测得的荧光强度信号与对应的激发波长（或发射波长）构成光谱图，称为同步荧光光谱。
在同步荧光测定中，当实验条件一定且被测组分的浓度较低时，其同步荧光信号强度I与浓度c成正比，即
I = Kc
据此可对被测组分进行定量分析。
本实验采用同步荧光光谱法对复合维生素B片中的维生素B2和维生素B6进行同时测定。以维生素B2和维生素B6混合标准溶液的同步荧光光谱强度对其浓度绘制标准曲线，再根据被测样品溶液的同步荧光强度，由标准曲线计算出复合维生素B片中维生素B2和维生素B6的含量。

四、仪器与试剂
1、仪器
F-4600荧光分光光度计（日立），1cm石英样品池，分析天平，研钵，25mL、100mL容量瓶，5ml、10ml吸量管，吸耳球。
2、试剂
维生素B2（40µg/mL），维生素B6（5µg/mL），0.2mol/L Na2HPO4-0.1 mol/L柠檬酸缓冲溶液（pH 7.0），复合维生素B片。

五、实验步骤
1、维生素混合溶液的配制
分别准确移取0.50mL、1.00mL、1.50mL、2.50mL、3.50mL维生素B2、维生素B6于25mL的容量瓶中，加入10mL缓冲溶液，用水稀释至刻度，摇匀，得到1-5号维生素混合标准溶液。
2、药片样品溶液的制备
取复合维生素B片10片，于研钵中研磨成粉。称取约0.05g的粉末，精密称定。用去离子水水溶解并定容至100 mL，摇匀，待用。
准确移取上述溶液5.00mL于25 mL容量瓶中，加入10 mL缓冲溶液，用水稀释至刻度，摇匀，待测。
3、样品的测试
按荧光光谱仪的操作规程开启仪器并预热20分钟，按下述方法设置仪器参数并进行测定。
1）仪器参数设置
打开荧光光谱测试软件FL Solutions，在method的general中选择波长扫描模式，在instrument中选择Synchronous（同步扫描），设置参数Ex Start WL=280nm，Ex End WL=520 nm，Em=320nm，其他参数选择默认值。
2）同步荧光测定的参数优化
选择1号维生素B混合标准溶液进行同步荧光测定的参数优化。分别设置Em值=320nm、340nm、350nm、360nm和380nm，使得同步荧光中参数Δλ分别为40、60、70、80、100nm，记录维生素B2和B6的荧光峰值强度，得到最佳的Δλ值。
3）标准曲线的绘制
在选定的最佳Δλ下，对2-5号维生素B混合标准溶液进行同步荧光测定，记录维生素B2和B6的荧光强度，根据维生素B2和B6的浓度和荧光强度绘制标准曲线。
4）样品测定
在选定的最佳Δλ时，对复合维生素B片样品溶液进行同步荧光测定，记录维生素B2和B6的荧光强度，根据维生素B2和B6的标准曲线计算复合维生素B片中维生素B2和B6的含量。

六、数据记录与结果分析
1、记录同步荧光实验条件和相关参数
Δλ/nm
40
60
70
80
100
VB6荧光峰值强度I

VB2荧光峰值强度I

2、记录实验数据，绘制标准曲线
维生素B2
浓度c/(µg/mL)

荧光强度I

维生素B6
浓度c/(µg/mL)

荧光强度I

3、复合维生素B片维生素 B2和B6的含量测定

B2
B6
荧光强度I

含量(mg/g)

七、思考题
1、简述荧光光谱法的基本原理。与吸收光谱法相比，荧光光谱法有哪些特点？
2、为什么同步荧光法可使光谱简化、谱带变窄？
3、Δλ值对同步荧光光谱有哪些影响？

八、参考文献
[1] 许金钩，王尊本. 荧光分析法（第三版）, 北京：科学出版社，2006
[2] 朱明华，胡坪. 仪器分析（第四版），北京：高等教育出版社，2008
[3] 李耀群，黄贤智等. 维生素B2和B6的同步荧光分析法及其在维生素复合制剂中的应用，药学学报，1992，27：52-56
[4] 蒋淑艳，金树伟. 同步荧光法同时测定药物中维生素B1、B2、B6的条件研究，药物分析杂志，1997，17：182-184

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