白首乌甾苷复合酶法提取工艺优化及保肝活性分析.pdf

基金项目:江苏省农业科技自 主创新资金项目(编 号:C X )作者简介:宋婉钰,女,哈尔滨商业大学在读硕士研究生.通信作者:李春阳(),男,江苏省农业科学院农产品加工研究所研究员,博士.E m a i l:l i c h u n y a n g c o m收稿日期:改回日期:D O I:/j s p j x 文章编号 ()白首乌甾苷复合酶法提取工艺优化及保肝活性分析O p t i m i z a t i o no f c o m p l e xe n z y m a t i ce x t r a c t i o np r o c e s so fs t e r o i d a l g l y c o s i d e s f r o mC y n a n c h u ma u r i c u l a t u mR o y l ee xW i g h t a n d i t sh e p a t o p r o t e c t i v ea c t i v i t y宋婉钰,S ONG W a n y u,戴静DA IJ i n g冯进F ENGJ i n李春阳L IC h u n y a n g马永强MAY o n g q i a n g(哈尔滨商业大学食品工程学院,黑龙江 哈尔滨 ;江苏省农业科学院农产品加工研究所,江苏 南京 ;浙江科技学院生物与化学工程学院,浙江 杭州 )(C o l l e g eo fF o o dE n g i n e e r i n g,H a r b i nU n i v e r s i t yo fC o mm e r c e,H a r b i n,H e i l o n g j i a n g ,C h i n a;I n s t i t u t eo fA g r o p r o d u c tP r o c e s s i n g,J i a n g s uA c a d e m yo fA g r i c u l t u r a lS c i e n c e s,N a n j i n g,J i a n g s u ,C h i n a;C o l l e g eo fB i o l o g ya n dC h e m i c a lE n g i n e e r i n g,Z h e j i a n gU n i v e r s i t yo fS c i e n c ea n dT e c h n o l o g y,H a n g z h o u,Z h e j i a n g ,C h i n a)摘要:目的:为开发白首乌保肝高值化产品提供依据.方法:以多年生白首乌为原料,采用单因素试验及响应面法,考察酶解时间、酶解温度、复合酶用量和酶解p H对白首乌甾苷得率的影响;通过乙醇诱导H e p G 肝细胞损伤模型研究谷丙转氨酶(A l a n i n et r a n s a m i n a s e,A L T)、乳酸脱 氢 酶(L a c t a t e d e h y d r o g e n a s e,L DH)及 谷 胱 甘 肽(G l u t a t h i o n e,G S H)的含量和细胞形态变化.结果:在酶解时间 m i n、温度 、酶用量 和p H的条件下,实际得率为().与模型组相比,白首乌可明显抑制肝损伤细胞中A L T、L DH含量,显著提高细胞内的G S H水平,恢复细胞损伤.结论:复合酶法可有效提取白首乌甾苷;白首乌甾苷具有保肝作用.关键词:白首乌;甾苷;复合酶法;保肝活性A b s t r a c t:O b j e c t i v e:R e s p o n s es u r f a c em e t h o d o l o g yw a su s e dt oo p t i m i z et h e e x t r a c t i o n p r o c e s s o fs t e r o i d a lg l y c o s i d e sf r o mC y n a n c h u ma u r i c u l a t u mR o y l ee x W i g h tb yc o m p l e xe n z y m a t i cm e t h o d,a n di t se f f e c t so na l c o h o ld e h y d r o g e n a s ea c t i v i t ya n dh u m a nh e p a t o m ac e l l H e p G w e r ea n a l y z e d M e t h o d s:F o u re x p e r i m e n t a l f a c t o r s;e n z y m o l y s i s d u r a t i o n,t e m p e r a t u r e,c o m p o u n de n z y m ed o s ea n dp H w e r eu s e da sr e s p o n s e st oas i n g l e f a c t o re x p e r i m e n t o f t h eR e s p o n s eS u r f a c eM e t h o d o l o g yo nt h es t e r o i d a l g l y c o s i d ey i e l d s,u s i n gp e r e n n i a lCa u r i c u l a t u ma st h et a r g e t m a t e r i a l T h e a l c o h o l i n d u c e d h e p a t o c y t e d a m a g em o d e l o fH e p G w a su s e dt oi n v e s t i g a t et h ec o n t e n t so fA L T,L DH,a n dG S Ha n dc h a n g e si nc e l ls h a p e R e s u l t s:T h er e s u l t ss h o w t h a t t h e o p t i m u m e x t r a c t i o n c o n d i t i o n s o f s t e r o i d a lg l y c o s i d ee n z y m ew e r eo b t a i n e da ta ne n z y m o l y s i sd u r a t i o no f m i n,a t e m p e r a t u r eo f ,e n z y m ed o s eo f a n dp Ho f C o n s e q u e n t l y,t h ea c t u a le x t r a c t i o nr a t eo f()w a sa c h i e v e du s i n gt h eo p t i m i z e dp r o c e s sc o n d i t i o n s,w h i c hw a sc l o s e t ot h ee x p e c t e dv a l u e C o m p a r e dw i t ht h em o d e lg r o u p,i ts i g n i f i c a n t l ys u p p r e s s e st h eg r o w t ho fA L Ta n dL DHw h i l e i n c r e a s i n gt h ea m o u n to fi n t r a c e l l u l a rG S H,a n dt h ec e l ld a m a g ew a s r e s t o r e d C o n c l u s i o n:T h e c o m p o u n de n z y m em e t h o dc a ne f f e c t i v e l ye x t r a c tt h es t e r o i d a lg l y c o s i d e so fC y n a n c h u ma u r i c u l a t u mR o y l e e xW i g h t;s t e r o i d a l g l y c o s i d e s o fCa u r i c u l a t u mh a v eh e p a t o p r o t e c t i v ee f f e c t K e y w o r d s:C y n a n c h u m a u r i c u l a t u mR o y l ee x W i g h t;s t e r o i d a lg l y c o s i d e s;c o m p l e xe n z y m a t i cm e t h o d;h e p a t o p r o t e c t i v ea c t i v i t y目前酒精性肝损伤的治疗以去除病因和辅助治疗为主,首要方法是戒酒,以减少酒精摄入;营养支持也是从控制饮酒量,增加免疫力等方面来缓解酒精性肝损伤;而药物干预则一般不建议使用,避免对肝脏造成进一步的负担,所以多从保肝、抗纤维化、抗炎和抗氧化等活性功能方面寻找效果好的药食同源食材、中药材,进行辅助治F OO D&MA CH I N E R Y第 卷第期 总第 期|年月|疗.白 首 乌 是 萝 藦 科 鹅 绒 藤 属 植 物 耳 叶 牛 皮 消(C y n a n c h u ma u r i c u l a t u mR o y l ee x W i g h t)的干燥块根,其中江苏滨海白首乌产量占了全国.经研究发现,与滨海白首乌活性功能密切相关的成分主要涉及甾苷类、多糖类和苯酮类.滨海白首乌味甘微苦,年被国家卫计委批准作为有传统食用习惯的普通食品,其具有补肾益肝、养血益精、抗衰老等功效.迄今已报道的白首乌甾苷种类约有 余种,其中滨海白首乌的甾苷种类众多远胜其他品种的白首乌.目前,研究人员采用的各种不同方法提取天然植物中甾苷成分,常见提取方法得到白首乌甾苷提取量一般在 m g/g.有研究发现,热回流法和常温浸渍法提取,随着白首乌甾苷浓度的增加,对A B T S自由基、D P P H自由基清除率也在不断增强,但缺点是该方法在提取过程中由于连续加热,白首乌粉末在蒸馏烧瓶提取溶剂中受热时间较长,对于白首乌甾苷结构会产生一定的破坏,导致提取率不高.而超临界C O萃取法具有操作温度低,分离效率高且无溶剂残留等优点,但从经济角度考虑,此方法仪器设备价格昂贵,成本高.又因酶解破壁技术可大幅增加活性物质的提取量.白首乌细胞壁在果胶酶和半纤维素酶的作用下会使组织结构软化、通透性增加,甚至分离原有结构,使细胞中活性物质溶出.研究拟优化白首乌复合酶法提取工艺,提高白首乌甾苷提取率,通过乙醇诱导H e p G 肝细胞损伤模型研究A L T、L DH酶活性及G S H含量和细胞形态变化,以期为白首乌保肝高值化产品研发提供理论依据.材料与方法材料与仪器材料与试剂二年生白首乌:滨乌一号,盐城果老首乌科技有限公司;乙醇:分析纯,国药集团化学试剂有限公司;果胶酶:万U/g,希杰尤特尔生物科技有限公司;半纤维 素 酶:万U/g,上海 源 叶生 物 科 技 有 限公司;乙醇 脱 氢 酶:U/m g,上 海 源 叶 生 物 科 技 有 限公司;谷丙转氨酶、乳酸脱氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶测试盒:南京建成海浩生物科技有限公司;MEM培养基、胎牛血清、胰蛋白酶和双抗(青霉素、链霉素):美国G I B C O公司;水飞蓟素和MT T:上海阿拉丁生化科技股份有限公司.主要仪器设备台式低速离心机:L K型,湖南可成仪器设备有限公司;紫外可见 分光 光度 计:型,上 海 棱 光 技 术 有 限公司;旋转蒸发仪:R E A型,上海亚荣生化仪器厂;真空冷冻干燥机:F D A 型,北京莱万生物技术有限公司;细胞培养箱:型,美国赛默飞公司.方法白首乌甾苷提取将白首乌用组织捣碎机粉碎,过 目筛后得到白首乌粉,保存于 条件.称取 g白首乌粉,按一定比例加入 乙醇溶液,调节至适当p H,用m果胶酶m半纤维素酶提 取,酶 解 时 每 m i n搅拌次,升温至 保持 m i n,冷却至室温并静置 m i n.r/m i n离心 m i n,取上清液,残渣二次提取离心,合并上清液,冷藏静置h后过滤,浓缩(、r/m i n)至无醇味,得白首乌提取液.白首乌甾苷纯化将上述提取液转入分液漏斗中,用等体积的乙酸乙酯萃取次,再用水饱和正丁醇()溶 液 萃 取次,得 黄 色 水 相 溶 液,浓 缩(、r/m i n)后经大孔树脂柱(A B 树脂用 的乙醇浸泡 h后装柱,并用 的乙醇淋洗至无白色,盐酸溶液与氢氧化钠溶液分别浸泡并洗至中性)纯化后冷冻干燥(、d).不同工艺提取的白首乌甾苷对乙醇脱氢酶活性的影响称取 g白首乌粉,加入 乙醇溶液,分别按表的参数用热回流法、常温浸渍法、超声辅助法(超声功率为 W,频率为 k H z),以及复合酶法(p H、酶用量)提取后,在 r/m i n下离心 m i n并收集上清液,残渣次提取离心,合并上清液,下冷藏静置h后过滤,减压浓缩至无醇味,得质量浓度为g/m L白首乌样品,进行白首乌甾苷得率及乙醇脱氢酶活性对比.每种方法组平行取平均值.A DH酶激活率的检测取 m L试管,加m Lp H焦磷酸钠缓冲液,m L氧化型辅酶I(NA D),m L 乙醇溶液,白首乌甾苷质量浓度为,m g/m L的 试 样 各 取m L,每 组个 平表不同方法提取工艺条件T a b l eE x t r a c t i o np r o c e s sc o n d i t i o n s f r o md i f f e r e n tm e t h o d s提取方法提取温度/提取时间/h料液比(g/m L)热回流法 常温浸渍法 超声辅助法 复合酶法|V o l ,N o 宋婉钰等:白首乌甾苷复合酶法提取工艺优化及保肝活性分析行.混匀 后 置 于 水 浴 m i n,之 后 向 管 中 加 入m LA DH酶溶液,对照管则由蒸馏水代替试样.混匀后立即测定其吸光度值(n m),每隔 s读数一次,连续m i n.用蒸馏水调定零点,按式()和式()计算每分钟平均吸光度的活性及激活率.EAVW,()QEEE ,()式中:E 每分钟还原m o lNA D所需酶量,U/m L;E 样品组酶活力,U/m L;E 空白组酶活力,U/m L;A n m处每分钟吸光度增加值;V 溶液体积,m L;W 每毫升酶溶液中含酶量,m g/m L;NA DH的克分子吸光值系数;Q A DH酶激活率,.单因素试验按的提取方法,试验基本条件定为料液比(g/m L)、p H、m果胶酶m半纤维素酶、酶用量、酶解温度 和酶解时间 m i n,分别 考 察 料 液 比,(g/m L)、p H(,)、复合酶(m果胶酶m半纤维素酶分别为,)、酶用量(,)、酶解温度(,)和酶解时间(,m i n)对白首乌甾苷得率的影响.白首乌甾苷得率按式()计算白首乌甾苷得率.Rmm ,()式中:R 甾苷含量,;m 甾苷样品含量,g;m 白首乌粉质量,g.H e p G 细胞试验适宜浓度的确认将处于对数生长期的H e p G 细胞培养于含 胎牛血清(F B S),抗生素的MEM培养基中,置于,C O的培养箱中培养.待细胞铺满 培养瓶时,采用m L 胰酶消化m i n,加入培养基终止消化,吹打,离心后,配制成 L的细胞悬液,接种于 孔板,L/孔.细胞预培养 h后,加入质量浓度为,m g/m L白首乌甾苷待测样品,处理 h后用MT T法检测细胞活率.其中,白首乌甾苷样品溶于培养基,用 m滤 膜过 滤灭 菌 后使 用 .每 组个平行.酒精肝损伤细胞模型建立及白首乌甾苷保肝活性分析根据的方法培养细胞 h,白首乌甾苷组加入质量浓度分别为,m g/m L的待测样品、m g/m L水飞蓟素组、模型组,正常对照组则加入等量培养液分别处理细胞 h后,结束试验.用试剂盒测定培养基中A L T和L DH含量,来观察细胞损伤程度;测定细胞内的G S H含量,来观察细胞内氧化还原平衡状态;用倒置显微镜观察细胞状态及生长状况 .每组个平行.数据处理单因素数据分析采用O r i g i n软件,响应面优化采用D e s i g n E x p e r t 软 件 进 行 设 计 及 结 果 与 方 差分析.结果与分析白首乌甾苷对乙醇脱氢酶活性的影响由图可知,白首乌甾苷质量浓度为 m g/m L时,乙醇 脱 氢 酶 活 性 最 高;在 白 首 乌 甾 苷 质 量 浓 度 m g/m L时,随着白首乌甾苷质量浓度不断提高,乙醇脱氢酶活性也在不断增大;白首乌甾苷质量浓度为m g/m L时,乙醇脱氢酶激活率降低至 .说明白首乌甾苷对乙醇脱氢酶的活性具有一定的促进作用.由图可知,复合酶法的白首乌甾苷得率及乙醇脱氢酶激活率最大,提取效果最佳.单因素试验由图可知,单一酶法不如复合酶法提取的白首乌甾苷得率高,乙醇脱氢酶活性大;当m果胶酶m半纤维素酶时,乙醇脱氢酶激活率和白首乌甾苷得率最大.由 图(a)可 知,当 溶 剂 用 量 过 大,超 过(g/m L)时,会导致试剂损耗、仪器能耗增加且回收困难,使得增大料液比提取量反而减小,且料液比为 (g/m L)时,白首乌甾苷得率增长最快,因此,最适料液比选为(g/m L).由图(b)可知,随着酶解时间的增加,白首乌甾苷得图白首乌甾苷质量浓度对乙醇脱氢酶激活率的影响F i g u r e E f f e c to fs t e r o i d a lg l y c o s i d e s c o n c e n t r a t i o nf r o mC y n a n c h u m a u r i c u l a t u mR o y l e e xW i g h to na c t i v i t yr a t eo fa l c o h o ld e h y d r o g e n a s e营养与活性NUT R I T I ON&A C T I V I T Y总第 期|年月|图提取方法对白首乌甾苷得率及乙醇脱氢酶激活率的影响F i g u r eE f f e c to fd i f f e r e n te x t r a c t i o n m e t h o d so nt h ey i e l d so f s t e r o i d a l g l y c o s i d e s f r o mC y n a n c h u ma u r i c u l a t u mR o y l ee x W i g h ta n da c t i v i t yo fa l c o h o l d e h y d r o g e n a s e图酶配比对白首乌甾苷得率及乙醇脱氢酶激活率的影响F i g u r eE f f e c to f e n z y m e r a t i oo nt h ey i e l d so f s t e r o i d a lg l y c o s i d e s f r o mC y n a n c h u ma u r i c u l a t u mR o y l ee xW i g h ta n da c t i v i t yo fa l c o h o l d e h y d r o g e n a s e图料液比、酶解时间、酶解温度、酶用量和p H对白首乌甾苷得率影响F i g u r eE f f e c to f r a t i oo fm a t e r i a l t o l i q u i d,e n z y m o l y s i sd u r a t i o n,t e m p e r a t u r e,d o s a g eo f e n z y m ea n dp Ho nt h ey i e l d so f s t e r o i d a l g l y c o s i d e s f r o mC y n a n c h u ma u r i c u l a t u mR o y l ee xW i g h t率逐渐升高,当酶解时间为 m i n时,甾苷已基本溶出,此时甾苷得率为 .随着酶解时间的继续增加,不会再大幅提高白首乌甾苷得率.这是因为酶促反应趋于饱和,若继续延长酶解时间,浪费资源,且操作效率低,所得甾苷量也不高.因此,酶解时间选为 m i n.由图(c)可知,酶解温度 时,白首乌甾苷得率最大为 .酶解温度不宜过高,否则扩散速度过快,部分成分易挥发,反而影响白首乌甾苷的提取.由图(d)可知,酶用量时,白首乌甾苷得率最大为 .这是由于随着酶用量的增加,对白首乌细胞壁结构的破坏逐渐增强,增加了白首乌细胞壁的通透性,使白首乌甾苷更易溶出.当酶用量达到时,酶促反应达到饱和状态,白首乌甾苷的溶出处于平衡.因此,最适酶用量为.由图(e)可知,p H时,白首乌甾苷得率最大,为 ;p H或都会破坏白首乌细胞壁,影响白首乌甾苷提取量.酶解法提取天然植物有效活性成分时,p H为酶活力变化是否稳定的重要因素之一.在酶活|V o l ,N o 宋婉钰等:白首乌甾苷复合酶法提取工艺优化及保肝活性分析性最适p H下进行提取,果胶酶和半纤维素酶才能发挥最大作用,从而促进白首乌有效成分的溶出,提高白首乌甾苷提取率.因此,最适p H为.响应面分析响应面优化试验设计综合单因素试验结果,选择酶解温度、p H值、酶解时间以及酶用量为自变量(见表),以白首乌甾苷得率为响应值,采用B o x B e n h n k e n优化工艺条件.响应面试验设计及结果见表.表响应面优化试验因素及水平设计T a b l eF a c t o r sa n d l e v e l so f t h er e s p o n s es u r f a c ee x p e r i m e n t水平A酶解温度/Bp HC酶解时间/m i n D酶用量/表响应面试验设计及结果T a b l eR e s p o n s e s u r f a c em e t h o dd e s i g na n dt e s t r e s u l t s试验号ABCD白首乌甾苷得率/二次回归模型的建立利用D e s i g n E x p e r t 软件对响应面结果(表)进行分析,并建立二次回归模型,拟合得到白首乌甾苷得率与提取条件之间的二次多元回归方程:Y A B C D A B A C AD B C B D C D A B C D.()回归模型的显著性分析由表可知,该模型P 极显著,失拟项P 不显著,回归模型R ,调整相关系数RA d j ,且该方程除A C、A D两项对白首乌甾苷得率的影响不显著外,其余项均显著.四因素对白首乌甾苷得率的影响顺序为:酶用量酶解时间p H酶解温度.表回归模型及方差分析T a b l eA n a l y s i so fv a r i a n c eo f t h er e g r e s s i o ne q u a t i o n来源平方和自由度均方F值P值模型 A B C D A B A C A D B C B D C D A B C D 残差 失拟项 纯误差 总误差 表示差异显著(P);表示差异极显著(P ).由图可知,两因素交互响应面坡度呈较陡峭趋势,酶用量、酶解时间、p H和酶解温度两两间的交互作用均对白首乌甾苷得率有显著影响.A B、B C、B D以及C D等高线为椭圆形;A C和A D等高线近似圆形,交互作用较小.酶解温度与酶用量、酶解时间的交互作用对白首乌甾苷得率均不显著.响应面分析结果与回归模型的显著性分析结果一致,说明结果可靠有效.营养与活性NUT R I T I ON&A C T I V I T Y总第 期|年月|图两因素的交互作用对白首乌甾苷得率的等高线图和响应面图F i g u r eC o n t o u rm a p sa n dr e s p o n s es u r f a c ep l o t so fv a r i a b l ep a r a m e t e r so nt h ey i e l d so f s t e r o i d a l g l y c o s i d e sf r o mC y n a n c h u ma u r i c u l a t u mR o y l ee xW i g h t验证实验由数据分析得到预测模型为:酶解温度 、p H 、酶 解 时 间 m i n、酶 用 量,白首乌甾苷得率为.结合实验室实际情况,在酶解温度、p H、酶解时间 m i n和酶用量 的条件下进行次平行验证实验,白首乌甾苷实测得率为(),与预测值相吻合,验证了该预测模型的稳定性及准确性.细胞毒性试验细胞试验最适浓度由图可知,白首乌甾苷质量浓度m g/m L时对细胞有显著毒性作用,白首乌甾苷质量浓度为m g/m L时对细胞生长有显著促进作用.因此,白首乌甾苷浓度m g/m L为乙醇诱导肝细胞损伤的最适浓度.培养基中A L T、L DH含量由图、图可知,模|V o l ,N o 宋婉钰等:白首乌甾苷复合酶法提取工艺优化及保肝活性分析与对照组相比,P;P;P 图白首乌甾苷样品对肝细胞活力的影响F i g u r eE f f e c to f s t e r o i d a lg l y c o s i d e sf r o mC y n a n c h u ma u r i c u l a t u mR o y l e e x W i g h t o n h e p a t o c y t ev i a b i l i t y模型组与对照组相比P;保护剂组与模型组相比P;P 图乙醇诱导肝细胞损伤的A L T含量F i g u r eA L Tc o n t e n to f e t h a n o l i n d u c e dh e p a t o c y t e i n j u r y型组肝细胞A L T和L DH水平均高于对照组.将模型组与对照组比较,发现当乙醇诱导细胞损伤时会导致细胞内A L T以及上清液中L DH的升高,而白 首乌 甾 苷在 m g/m L的质量浓度范围内可减轻此种损伤(P),当白首乌甾苷质量浓度为m g/m L时,随白首乌甾苷质量浓度的升高,A L T和L DH水平逐渐下降.将水飞蓟素组、白首乌甾苷组与模型组分别比较,发现细胞A L T和L DH含量均下降.细胞内G S H含量由图可知,与模型组相比,细胞内G S H含量随着白首乌甾苷质量浓度的增加而增加,推测白首乌甾苷质量浓度为 m g/m L时可通过提高G S H含量来减轻由于乙醇导致的肝细胞损伤.说明白首乌甾苷可以在一定范围内通过调节细胞内氧模型组与对照组相比P;保护剂组与模型组相比P;P 图乙醇诱导肝细胞损伤的L DH活性影响F i g u r eE f f e c to fL DHa c t i v i t yo f e t h a n o l i n d u c e dh e p a t o c y t e i n j u r y图乙醇诱导肝细胞损伤的胞内G S H含量影响F i g u r eE f f e c to f i n t r a c e l l u l a rG S Hc o n t e n to ne t h a n o l i n d u c e dh e p a t o c y t e i n j u r y化应激反应来保护肝脏.细胞形态由图 可知,对照组细胞生长状况良好,已铺满培养皿底部且呈融合多边形结构.模型组细胞数量明显降低,无法铺满培养皿底部,且有部分细胞收缩成圆形,损伤了细胞原有形态.水飞蓟素组和白首乌甾苷组的细胞数量与对照组接近,但细胞形态上与对照组有所区别,部分细胞呈现出与模型组类似的细胞收缩呈圆形的情况.由此证明了白首乌对乙醇诱导造成的肝细胞损伤有保护作用,可使细胞数量增加,接近对照组,并对部分细胞形态有恢复作用.营养与活性NUT R I T I ON&A C T I V I T Y总第 期|年月|图 H e p G 细胞形态图F i g u r e M o r p h o l o g yo fH e p G c e l l s结论复合酶法在白首乌甾苷得率和乙醇脱氢酶活性方面提取效果最好,其最佳提取工艺为、p H、m i n和酶用 量 ,该 条 件 下 白 首 乌 甾 苷 实 测 得 率 为().白首乌甾苷提取物对肝脏具有保护作用,可减少酒精对人体的影响,并且显著提高了细胞内的G S H水平,可增强氧自由基的清除,抑制超氧阴离子毒性,减轻氧化应激及脂质过氧化,最终得出白首乌甾苷具有很好的解酒保肝作用的结论.参考文献1 印鑫,丁永芳,邵久针,等.白首乌的研究进展J.中草药,2019,50(4):9921 000.YIN X,DING Y F,SHAO J Z,et al.Research progress onCynanchi BungeiRadixJ.Chinese Traditional and Herbal Drugs,2019,50(4):9921 000.2 WANG L,CAI F J,ZHAO W,et al.Cynanchum auriculatumRoyleex Wight.,Cynanchum bungeiDecne.andCynanchum wilfordii(Maxim.)Hemsl.:Current Research and ProspectsJ.Molecules,2021,26(23):7 0657 105.3 CHAIZ,HUANGWY,ZHAOX,etal.Preparation,characterization,antioxidant activity and protective effect againstcellularoxidativestressofpolysaccharidefromCynanchumauriculatumRoyle ex WightJ.International Journal of BiologicalMacromolecules,2018,119:1 0681 076.4 UCHIKURA T,TANAKA H,SUGIWAKI H,et al.Preliminaryquality evaluation and characterization of phenolic constituents inCynanchi wilfordiiRadixJ.Molecules,2018,23(3):656667.5 庄子锐,王明亮,彭蕴茹,等.白首乌 C21甾苷通过TLR4 通路防治大鼠肝肾纤维化的作用研究J.中国中药杂志,2021,46(11):2 8572 864.ZHUANG Z R,WANG M L,PENG Y R,et al.Effect of C21steroidal glycoside ofCynanchum auriculatumon liver and kidneyfibrosis throughTLR4 pathway J.China Journal of ChineseMateria Medica,2021,46(11):2 8572 864.6 张明,沈明晨,陈镭,等.白首乌的化学成分、药理作用及栽培技术综述J.江苏农业科学,2022,50(2):2229.ZHANG M,SHEN M C,CHEN L,et al.Chemical constituents,pharmacological effects and cultivation techniques ofCynanchumauriculatumJ.Jiangsu Agricultural Sciences,2022,50(2):2229.7 陈其燕,石云,洪键.滨海白首乌多糖的提取与药理活性研究进展J.现代农业科技,2020(19):215216,220.CHEN Q Y,SHI Y,HONG J.Research progress on extraction andpharmacologicalactivityofPolysaccharidefromBinhaisCynanchum auriculatumJ.Modern Agricultural Science andTechnology,2020(19):215216,220.8 许慧卿.滨海白首乌甾苷提取工艺优化及其抗氧化活性研究D.南京:南京农业大学,2019:224.XU H Q.Optimization on the extraction of steroidal glycosidesfrom BinhaisCynanchum auriculatumRoyle ex Wight and itsantioxidant activityD.Nanjing:Nanjing Agricultural University,2019:224.9 田鹭.超临界 CO2萃取白首乌中 C21甾苷的工艺研究D.镇江:江苏大学,2009:3356.TIAN L.Extraction of C21steroidal glycosides fromCynanchumauriculatumRoyle ex wight with supercritical carbon dioxideD.Zhenjiang:Jiangsu University,2009:3356.10 李文君,王成章,张水晶,等.多元复合酶降解黄姜薯蓣皂苷元的工艺研究J.生物质化学工程,2014,48(4):2327.LI W J,WANG C Z,ZHANG S J,et al.Study on the degradationof Diosgeninbymultiplexenzyme J.BiomassChemicalEngineering,2014,48(4):2327.11 WU Z H,WANG Y Y,MENG X,et al.Total C21 steroidalglycosides,isolated from the root tuber ofCynanchum auriculatumRoyle ex Wight,attenuate hydrogen peroxideinduced oxidativeinjury and inflammation in L02 cellsJ.International Journal ofMolecular Medicine,2018,42(6):3 1573 170.12 梁诗,李煊,陈良华,等.野菊水提物和醇提物抗氧化及保肝活性研究J.亚热带植物科学,2019,48(4):329333.LIANG S,LI X,CHEN L H,et al.Study on antioxidant andhepatoprotective activities of water extracts and alcohol extracts ofwild chrysanthemumJ.Subtropical Plant Science,2019,48(4):329333.(下转第 页)|V o l ,N o 宋婉钰等:白首乌甾苷复合酶法提取工艺优化及保肝活性分析GUO L L,ZHOU L Y,BI J F,et al.Studies on dry tec