等电点沉淀法分离RNA-生化分离技术.pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,学习目标,了解两性离子与等电点的相关知识；,能够,进行等电点沉淀法操作,。,重难点,重点：了解等电点沉淀法的原理；,难点：了解盐析沉淀的原理，掌握盐析常用中性盐的选择。,两性离子与等电点,1,等电点沉淀法的原理,2,目录,等电点沉淀法操作,3,一,.,两性离子与,等电点,1.,两性离子,一,.,两性离子与,等电点,2,.,等电点,一,.,两性离子与,等电点,2,.,等电点,二,.,等电点沉淀法的,原理,等电点沉淀法是利用蛋白质在等电点时溶解度最低而各种蛋白质又具有不同等电点的特点进行分离的方法。,二,.,等电点沉淀法的,原理,在等电点时，蛋白质分子以两性离子形式存在，其分子净电荷为零,(,即正负电荷相等,),，此时蛋白质分子颗粒在溶液中因没有相同电荷的相互排斥，分子相互之间的作用力减弱，其颗粒极易碰撞、凝聚而产生沉淀，所以蛋白质在等电点时，其溶解度最小，最易形成沉淀物。等电点时的许多物理性质如黏度、膨胀性、渗透压等都变小，从而有利于悬浮液的过滤。,二,.,等电点沉淀法的,原理,不同的蛋白质，具有不同的等电点,同一种蛋白质在不同条件下，等电点不同,目的药物成分对,pH,值的要求,采用几种方法结合来实现沉淀分离,三,.,等电点沉淀法,操作,1,.,等电点沉淀法应用,除杂蛋白,等电点不同,酸碱性,多法结合,初步纯化,三,.,等电点沉淀法,操作,2.,等电点沉淀法操作时注意事项,1,偏移,2,稳定性,3,水化,4,回收率,