无蛋白血滤液的制备.doc

实验一 无蛋白血滤液的制备
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无蛋白血滤液制备的基本原理是以蛋白质沉淀剂沉淀蛋白，用过滤法或离心法除去沉淀的蛋白。常用的方法有三氯醋酸法、氢氧化锌法、黑灯改良法及福林-吴宪法（钨酸法），本实验采用最后一种方法，即钨酸法制备无蛋白滤液。

·实验原理： 钨酸钠与硫酸混合，生成钨酸。血液中的蛋白质在pH小于其等电点的溶液中时，可被钨酸沉淀。沉淀液过滤或离心，上清液即为无色、透明、pH约为6的无蛋白血滤液。可供非蛋白氮、血糖、氨基酸、尿素、尿酸及氯化物等项目测定使用。

·实验试剂：10%钨酸钠溶液，1/3 mol/L硫酸溶液

·实验对象：新鲜鸡血

·操作步骤：
取50ml锥形瓶或大试管1支，吸取充分混匀的抗凝血1份（1ml），擦净管外血液，缓慢放入锥形瓶或试管底部
准确用10ml移液管加入7ml蒸馏水，随加随摇，但也不能过于剧烈
再加入1ml硫酸溶液，随加随摇
放置约5min后，若振摇亦不再发生泡沫，说明蛋白质已完全变性沉淀，用滤纸过滤后即得完全无色的无蛋白血滤液

·实验过程（附图）：

1.取 样
这是未加入蒸馏水的抗凝血，可观察到血色鲜艳明亮，没有凝血块或杂质

2.加清水混匀

蒸馏水随加随摇于血液中后可以观察到无任何变化，只是血液颜色稍稍变浅，血液粘稠度有所下降

3.加入硫酸溶液

加入硫酸溶液并混匀后，可以观察到血液颜色变得暗淡，但并没有出现凝聚等反应现象，这一步主要是为钨酸（钠）与血液中的蛋白反应提供酸性环境。

4.加入钨酸钠溶液

加入钨酸钠溶液并且混匀后，可观察到血液颜色变为棕褐色，且变得浑浊有气泡；容器壁上有痕渍，这是因为血液中的蛋白与钨酸作用而发生沉淀的结果

5.过滤收集清液

滤过后可看到离心管中的血清液无色澄澈，故实验操作成功

附录：以上实验过程（图片）是第二次操作的结果，第一次操作时因为加入试剂时过快，没有做到随加随摇，故有很多气泡，效果不是很理想，遂又操作了一次。现附上第一次操作的图片以作对比。

2014.10.17（兴农楼208）