精子DNA碎片检测.ppt

,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,精子,DNA,碎片检测,1,检测原理,没有,DNA,碎片的精子在经过酸变性和去掉核蛋白后,DNA,扩散形成特征性的光晕，而带有,DNA,碎片化的精子不会产生这种特征性的光晕，根据光晕的有无和大小判断精子,DNA,碎片化的程度,2,1.,男性不育检测的新指标,（,1,）,最新的世界卫生组织统计数据显示，在已婚夫妇中，非意愿性不孕不育的发生率为,7%-46%,，并呈逐年增加的趋势，,目前精液常规检查项目不能全面评估男性生育力，,随着我国工业化程度的增高，环境污染的逐渐加重，人精神压力的不断增加，因此，精子,DNA,的检测能够对不育病因做出合理，准确的诊断，有助于选择合适的助孕手段。,3,（,2,）,DNA,碎片程度反映精子遗传物质的完整性，精子,DNA,发生碎片化对生育将会产生负面影响，造成不育和反复流产,.,精子,DNA,碎片化程度被认为是一个新的，评价精液质量和预测生育能力的指标,4,（,3,）,男性不育检测的现状，精子数量，密度活率和抗精子抗体，这些检验项目的结果判断和分析主观性较强。经国内外专家研究发现，男性不育患者的,DNA,碎片会明显增多，精子,DNA,的完整性是判断精子质量的有效依据。因此检测精子,DAN,的完整性对不育患者精子质量的评估具有极大的价值,.,5,2,精子,DNA,碎片化对生育的影响,（,1,）不育男性精子,DNA,碎片化程度,正常男性精液中存在含有,DNA,碎片化的精子比例为（,13.1,+,7.3,）,%,，而不育男性精液中存在含有,DNA,的碎片化的精子比例为（,40.9,+,14.3,）,%,有显著性差异，把,DNA,碎片化程度,20%,作为分界值，区别不育和生育力正常的特异度是,89.4%,，敏感度是,96.9%,。,6,（,2,）精子,DNA,碎片化与精液常规检查指标关系,精子,DNA,碎片化指数是一个稳定性高的指标，不随季节发生变化。精子,DNA,碎片化程度与精子前向运动负相关，与精子正常形态比例负相关。精索静脉曲张患者的活动力密度和形态分析可在正常范围但是精子,DNA,碎片化程度明显高于正常,7,（,3,）与体外受精,IVF,受精率的关系,精子,DNA,碎片化程度与,IVF,胞浆内单精子注射的受精率呈显著负相关，,DNA,碎片化的精子形成原核障碍导致受精率降低，当,DNA,碎片化的精子比例超过,10%,时，受精率明显降低。,8,（,4,）与,IVF,原核质的关系,按照原核前体的数目和分布将原核形态分为,4,组，,DNA,碎片化程度高的精子形成形态欠佳发育潜能低的；原核比例明显高于,DNA,碎片化程度低的精子,（,5,）,IVF,胚胎质量及囊胚形成率的关系,精子,DNA,化程度与囊胚形成率呈负相关，当阳性精子比例小于,20%,时，囊胚形成率比当该比例大于,20%,时提高了,50%,9,（,6,）胚胎种植率和妊娠率与,DNA,碎片化呈负相关,(7),精子,DNA,碎片化与反复流产有关,10,3.,精子,DNA,碎片化的发生机制,(1),精子发生过程中异常染色质包装,染色质是由一条,DNA,分子缠绕无数核小体核心而连成一条串珠样的长链形成的核蛋白纤维，染色体是指细胞分裂时由,DNA,蛋白质纤维螺旋化后形成的棒状小体染色体是基因的载体，染色体在分裂的过程中由间期细胞进入分裂期时染色质纤维经过四级折叠，长度压缩,8400,倍形成光学显微,11,镜下可见的染色体。当细胞分裂结束再而进入间期时，染色体经过解旋又恢复成染色质形态。它主要是疾病和药物和环境毒物引起,12,(2),低氧和氧自由基的形成,氧自由基（,ROS,）过多和抗氧化酶的平衡失调导致的,ROS,过多，会造成精子,DNA,单链和双链的断裂主要原因是,睾丸局部温度增高（精索静脉曲张）,13,(3),凋亡异常,细胞死亡的方式有三种凋亡是其中的一种它是指细胞的程序化死亡在一定的生理和病理条件下，遵循自身的程序，自动结束其生命的过程最后细胞脱落立体或分解被其他细胞吞噬通常是一种生理变化另外包括胀亡是细胞渗透压发生变化吸收大量水分使细胞肿胀死亡，胀亡坏死多是指炎性的病理性变化,引起,14,病因包括 年龄增大，吸烟，等。,研究证实空气污染和吸烟均会导致精子异常凋亡使,DNA,的碎片化程度增高,15,4,精子,DNA,碎片检测适应症,（,1,）不育症患者无精子症除外,（,2,）不良生活习惯吸烟 饮酒 蒸桑拿,（,3,）习惯性流产，胚胎停育患者的配偶,（,4,）有不良生育史患者的配偶,（,5,）为了优生自愿检查,（,6),接受过化疗或放射,16,5.,参考值,精子,DNA,碎片率正常,15,碎片率异常大于,15%,表示男性生育力有降低的趋势无论是自然妊娠还是人工助孕成功率还有降低的可能，且,IVF/ICS,助孕有流产风险增加的可能,17,6.,精子,DNA,碎片化临床指导目的,筛选精子,DNA,碎片化程度小的精液冷冻，然后通过,ICSI,治疗多次助孕治疗失败患者获得妊娠的成功,18,筛选方法,1,睾丸获得精子的,DNA,碎片化程度明显低于射出精子，因此可以使用睾丸取精和,ICSI,治疗精子,DNA,碎片化,2,精子上游法（密度梯度离心）处理后能够显著降低,DNA,碎片化精子的比例,19,7,治疗,口服抗氧化剂可以降低精子,DNA,碎片化程度，提高治疗的成功率，口服抗氧剂（口服,VC,、,VE,、左卡尼汀、抗氧化的中药等）能够显著降低不育患者的精子,DNA,碎片化程度，显著调高,ICSI,的临床妊娠率和胚胎种植率,20,8,小结,众多研究结果证实，精子,DNA,碎片化检测意义重要，能够反映精子遗传物质的完整性，深入的评估男性的生育能力，预测治疗结局和指导治疗,21,谢谢,22,体细胞有丝分裂是在每次分列时染色体(DNA)复制一次，然后将复制后染色体平均分配至两个子细胞，因此每一子细胞所含染色体的数目和亲代的细胞一样均为二倍体减数分裂的特点是连续两次分裂中染色体只复制一次，结果形成的四个生殖细胞中，染色体数目减少一半成为单倍体,23,