白屈菜红碱对人卵巢癌SKOV3细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化的影响.pdf

第 50 卷 第 1 期2024年 1 月吉林大学学报（医学版）Journal of Jilin University（Medicine Edition）Vol.50 No.1Jan.2024DOI：10.13481/j.1671587X.20240104白屈菜红碱对人卵巢癌 SKOV3细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化的影响周佳1,邱智东1,林喆1,律广富2,许佳明1,林贺1,王可欣1,王雨辰1,黄晓巍1,3（1.长春中医药大学药学院临床药学与中药药理教研室，吉林 长春 130117；2.长春中医药大学吉林省人参科学研究院中药药理组，吉林 长春 130117；3.长春中医药大学东北亚中医药研究院基础研究所，吉林 长春 130117）摘要 目的目的：探讨白屈菜红碱（CHE）对人卵巢癌 SKOV3 细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化（EMT）的抑制作用，阐明其相关作用机制。方法方法：体外培养 SKOV3细胞，分为对照组和 2.5、5.0、10.0、20.0 及 40.0 mol L1 CHE 组，采用噻唑蓝（MTT）法检测各组细胞增殖抑制率。体外培养SKOV3细胞，分为 对 照 组、转 移 生 长 因 子 1（TGF-1）组、TGF-1+5 molL 1 CHE 组 和TGF-1+10 mol L1 CHE 组，采用细胞划痕实验检测各组细胞迁移率，Transwell小室实验检测各组细胞中迁移细胞数和侵袭细胞数，Westren blotting 法 检 测 各 组 细 胞 中 E-钙 黏 蛋 白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）蛋白表达水平，免疫荧光染色法检测各组细胞中E-cadherin和N-cadherin荧光强度。结果结果：MTT法，与对照组比较，5.0、10.0、20.0 和 40.0 mol L1 CHE 组细胞增殖抑制率明显升高（P0.05或 P0.01）。细胞划痕实验，与对照组比较，TGF-1组细胞迁移率明显升高（P0.01）；与 TGF-1 组比较，TGF-1+5 molL 1 CHE 组 和 TGF-1+10 mol L1 CHE 组细胞迁移率明显降低（P0.01）。Transwell小室实验，与对照组比较，TGF-1 组细胞中迁移细胞数和侵袭细胞数明显增加（P0.05）；与 TGF-1 组比较，TGF-1+5 mol L1 CHE 组 和 TGF-1+10 mol L1 CHE 组 细 胞 中 迁 移 细 胞 数 和 侵 袭 细 胞 数 明 显 减 少（P0.01）。Westren blotting法，与对照组比较，TGF-1组细胞中 E-cadherin蛋白表达水平明显降低（P0.01），N-cadherin和 Vimentin蛋白表达水平明显升高（P0.05或 P0.01）；与 TGF-1组比较，TGF-1+5 mol L1 CHE 组和 TGF-1+10 mol L1 CHE 组细胞中 E-cadherin 蛋白表达水平明显升高（P0.01），N-cadherin 和 Vimentin 蛋白表达水平明显降低（P0.01）。免疫荧光染色，与对照组比较，TGF-1 组细胞中 E-cadherin 荧光强度明显降低，N-cadherin 荧光强度明显升高；与 TGF-1 组比较，TGF-1+5 mol L1 CHE 组和 TGF-1+10 mol L1 CHE 组细胞中 E-cadherin 荧光强度明显升高，N-cadherin 荧光强度明显降低。结论结论：CHE 能够抑制人卵巢癌 SKOV3 细胞增殖、迁移、侵袭和EMT。关键词 白屈菜红碱；卵巢肿瘤；上皮-间质转化；转化生长因子 1；细胞迁移；细胞侵袭中图分类号 R285.5;R737.31文献标志码 A文章编号 1671587X(2024)01002508收稿日期 20230401基金项目 吉林省科技厅科技发展计划项目（20210402034GH）；吉林省发改委创新能力建设项目（2021C011）作者简介 周 佳（1995），女，吉林省长春市人，在读博士研究生，主要从事中药药剂和新药开发方面的研究。通信作者 黄晓巍，主任药师，博士研究生导师（E-mail：）；王雨辰，讲师（E-mail：）25第 50 卷 第 1 期 2024 年 1 月吉林大学学报（医学版）Effect of chelerythrine on migration,invasion,and epithelial-mesenchymal transition of human ovarian cancer SKOV3 cellsZHOU Jia1,QIU Zhidong1,LIN Zhe1,LYU Guangfu2,XU Jiaming1,LIN He1,WANG Kexin1,WANG Yuchen1,HUANG Xiaowei1,3（1.Department of Clinical Pharmacy and Pharmacology of Chinese Medicine，School of Pharmaceutical Sciences，Changchun University of Chinese Medicine，Changchun 130117，China；2.Department of Pharmacology of Traditional Chinese Medicine，Jilin Ginseng Academy，Changchun University of Chinese Medicine，Changchun 130117，China；3.Basic Research Institute，Northeast Asia Institute of Traditional Chinese Medicine，Changchun University of Chinese Medicine，Changchun 130117，China）ABSTRACT Objective：To discuss the inhibitory effect of chelerythrine（CHE）on the migration，invasion，and epithelial-mesenchymal transition（EMT）of the human ovarian cancer SKOV3 cells，and to clarify the associated mechanism.Methods：The SKOV3 cells were cultured in vitro and divided into control group and 2.5，5.0，10.0，20.0，and 40.0 mol L1 CHE groups.Methylthiazolydiphenyl-tetrazolium（MTT）assay was used to detect the inhibitory rates of proliferation of the cells in various groups.The SKOV3 cells were cultured in vitro and divided into control group，transforming growth factor-1（TGF-1）group，TGF-1+5 mol L1 CHE group，and TGF-1+10 mol L1 CHE group.Cell scratch assay was used to detect the migration rates of the cells in various groups；Transwell chamber assay was used to detect the numbers of migration and invasion cells in various groups；Western blotting method was used to detect the expression levels of E-cadherin，N-cadherin，and Vimentin proteins in the cells in various groups；immunofluorescence staining method was used to detect the fluorescence intensities of E-cadherin and N-cadherin in the cells in various groups.Results：The MTT assay results showed that compared with control group，the inhibitory rates of proliferation of the cells in 5.0，10.0，20.0，and 40.0 mol L1 CHE groups were significantly increased（P0.05 or P0.01）.The cell scratch assay results showed that compared with control group，the migration rate of the cells in TGF-1 group was increased（P0.01）；compared with TGF-1 group，the migration rates of the cells in TGF-1+5 mol L1 CHE group and TGF-1+10 mol L1 CHE group were significantly decreased（P0.01）.The Transwell chamber assay results showed that compared with control group，the numbers of migration and invasion cells in TGF-1 group were significantly increased（P0.05）；compared with TGF-1 group，the numbers of migration and invasion cells in TGF-1+5 mol L1 CHE group and TGF-1+10 mol L1 CHE group were significantly decreased（P0.01）.The Western blotting results showed that compared with control group，the expression level of E-cadherin protein in the cells in TGF-1 group was significantly decreased（P0.01），while the expression levels of N-cadherin and Vimentin proteins were increased（P0.05 or P0.01）；compared with TGF-1 group，the expression levels of E-cadherin protein in the cells in TGF-1+5 mol L1 CHE group and TGF-1+10 mol L1 CHE group were significantly increased（P0.01），and the expression levels of N-cadherin and Vimentin proteins were significantly decreased（P0.01）.The immunofluorescence staining results showed that compared with control group，the fluorescence intensity of E-cadherin in the cells in TGF-1 group was decreased，and the fluorescence intensity of N-cadherin was increased；compared with TGF-1 group，the fluorescence intensities of E-cadherin in the cells in TGF-1+5 mol L1 CHE group and TGF-1+10 mol L1 CHE group were significantly increased，and the fluorescence intensities of N-cadherin were decreased.Conclusion：CHE can inhibit the proliferation，migration，invasion，and EMT of the human ovarian cancer SKOV3 cells.26周佳，等.白屈菜红碱对人卵巢癌 SKOV3细胞迁移、侵袭和上皮间质转化的影响KEYWORDS Chelerythrine；Ovarian neoplasm；Epithelial-mesenchymal transition；Transforming growth factor-1；Cell migration；Cell invasion卵巢恶性肿瘤是女性常见的生殖器官肿瘤之一1。由于卵巢组织结构复杂且周围神经分布少，卵巢肿瘤很难在发病早期监测到，60%以上患者发现即为晚期，导致卵巢癌的治愈率在妇科肿瘤中最低，致死率最高2。随着医学的进步，肿瘤的治疗呈现多样化和个体化，但在临床实践中，化疗、放疗和手术切除仍是卵巢癌的主要治疗手段，且上述方法普遍存在特异性差、不良反应严重和耐药性强等缺陷3。白屈菜红碱（chelerythrine，CHE）是一种由罂粟科植物白屈菜中提取的季铵型苯并啡啶类生物碱，具有抗炎、抗病毒和抗肿瘤作用4-7，但其对卵巢癌细胞增殖、侵袭和转移的影响及作用机制尚未完全阐明。本研究采用转化生长因子 1（transforming growth factor-1，TGF-1）诱导人卵巢癌 SKOV3 细胞发生上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT），探 讨 CHE 对TGF-1 诱导后的 SKOV3 细胞增殖、迁移、侵袭和 EMT 的影响，为抗卵巢癌新药的研发提供理论依据。1 材料与方法 1.1细胞细胞、药物药物、主要试剂和仪器主要试剂和仪器卵巢癌 SKOV3细胞（武汉普诺赛生命科技有限公司）。CHE（上海源叶生物科技有限公司，批号：B20052）。胎牛血清（澳大利亚 Clark 公司），RPMI 1640 培养基（美国 Hyclone公司），TGF-1（美国 Cell Signaling公 司），Transwell 小 室 和 Matrigel 基 质 胶（美 国Corning 公司），二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide，DMSO）和 噻 唑 蓝（methylthiazolydiphenyl-tetrazolium，MTT）（北京索莱宝科技有限公司），E-钙 黏 蛋 白（E-cadherin）、N-钙 黏 蛋 白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）和-肌动蛋白（-actin）（武 汉 三 鹰 生 物 技 术 有 限 公 司），Alexa Fluor 488 标 记 山 羊 抗 兔 IgG（H+L）和Alexa Fluor 647 标记山羊抗兔 IgG（H+L）（上海碧云天生物科技有限公司）。超净工作台（型号：SW-CJ-1FD，苏州净化设备公司），二氧化碳培养箱（型号：MCO-17AIC，美国 SANYO 公司），荧光显微镜（型号：73，日本 Olympus 公司），蛋白电泳仪（型号：BE6085，美国 Bio-Rad 公司），多功能化学发光成像仪（型号：Q9-Aliance，英国UVltec 公 司），多 功 能 微 孔 酶 标 仪（型 号：Multiskan FC，美国 Thermo公司）。1.2细胞培养细胞培养卵巢癌 SKOV3 细胞采用含 10%胎牛血清和 1%青-链霉素的 RPMI 1640 培养基在37、5%CO2孵箱中培养。1.3MTT 法检测各组细胞增殖抑制率法检测各组细胞增殖抑制率取对数生长期 SKOV3 细胞，以1104 mL1密度接种于96 孔细胞培养板中，24 h 后向各组加入 0、2.5、5.0、10.0、20.0 和 40.0 mol L1 CHE，每 组 5 个 复孔，0 mol L1 CHE 组为对照组，孵育 24、48 和72 h 后，每孔加入 10 L MTT 溶液，4 h 后弃上清，加入 150 L DMSO 充分溶解甲臜，酶标仪测定 570 nm 波长处吸光度（A）值，计算各组细胞增殖抑 制 率。细 胞 增 殖 抑 制 率=1（实 验 孔A 值空 白 孔 A 值）/（对 照 孔 A 值 空 白 孔A值）100%。1.4细胞划痕实验检测各组细胞迁移率细胞划痕实验检测各组细胞迁移率取对数生长期 SKOV3 细胞，以1105 mL1密度接种于 6 孔细胞培养板中，分为对照组、TGF-1组、TGF-1+5 mol L1 CHE 组和 TGF-1+10 mol L1 CHE组。对照组：无血清培养基培养；TGF-1 组：在细胞培养基中加入 20 ng L1 TGF-1；TGF-1+5 mol L1 CHE 组：在 细 胞 培 养 基 中 分 别 加 入20 ng L1 TGF-1 和 5 mol L1 CHE；TGF-1+10 mol L1 CHE 组：在细胞培养基中分别加入20 ng L1 TGF-1 和 10 mol L1 CHE。干预 24 h后进行实验。当细 胞 生 长 至 80%融 合 时，用200 L 移液枪枪头沿小孔中轴划线，PBS 缓冲液润洗后拍照。24 h后对同一位置再次拍照，计算细胞迁移率。细胞迁移率=（0 h 空白面积24 h 空白面积）/0 h空白面积100%。1.5Transwell小室实验检测各组细胞中迁移细胞小室实验检测各组细胞中迁移细胞数和侵袭细胞数数和侵袭细胞数细胞分组见“1.4”。将消化后的SKOV3 细 胞 用 无 血 清 培 养 基 重 悬，以 2.5105 mL1密 度 接 种 于 Transwell 小 室 上 层，每孔100 L；下层分别加入含 10%血清的培养基配制的 TGF-1、TGF-1+5 mol L1 CHE 和 TGF-1+10 mol L1 CHE，每 孔 500 L。继 续 培 养 24 h后，PBS 缓冲液清洗小室，4%多聚甲醛固定细胞并用结晶紫溶液染色，棉签轻柔擦去小室上层细胞后，显微镜下观察并拍照计数。3个随机选取视野27第 50 卷 第 1 期 2024 年 1 月吉林大学学报（医学版）的穿膜细胞数均值即为迁移和侵袭细胞数，代表细胞迁移和侵袭能力。其中，侵袭实验要提前将小室上层铺好 Matrigel基质胶，后续操作同上。1.6Western blotting 法检测各组细胞中法检测各组细胞中 EMT 相相关蛋白表达水平关蛋白表达水平细胞分组见“1.4”。将处于对数生长期的 SKOV3 细胞以 1105 mL1密 度 接 种 于6孔细胞培养板中，当细胞生长至 80%融合时，弃上清，按照分组方法进行给药处理。24 h后，用预冷的 PBS 缓冲液洗涤细胞，每孔中加入含蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂的 RIPA 裂解液 150 L，细胞刮刀收集细胞，12 000 r min1离心 5 min，得到含有细胞蛋白的上清液。BCA 蛋白浓度检测试剂盒测定蛋白质浓度并定量。进行 SDS-PAGE 电泳时，凝胶浓度为 12%，每孔上样量为 15 L，电泳条件 为 150 V、80 min；湿法 转 膜，转 膜 条 件 为200 mA、45 min。5%脱脂奶粉封闭 2 h，TBST 洗涤后，分别加入 E-cadherin、N-cadherin、Vimentin和-actin 抗体，按照说明书比例稀释，4 冰箱孵育过夜；次日回收一抗，TBST 洗 涤，二 抗 孵 育2 h，ECL 发光液显色，多功能化学发光成像仪拍照，采用 Image J 软件分析蛋白条带灰度值，计算目的蛋白表达水平。目的蛋白表达水平=目的蛋白条带灰度值/内参蛋白条带灰度值。1.7免疫荧光染色法检测各组细胞中免疫荧光染色法检测各组细胞中E-cadherin 和和N-cadherin荧光强度荧光强度细胞分组见“1.4”。将处于对数生长期的 SKOV3细胞以 1105 mL1密度接种于 6 孔细胞培养板中，当细胞生长至 80%融合时，弃上清，按照分组方法进行给药处理。24 h 后，PBS 缓冲液洗涤细胞，4%多聚甲醛固定细胞，并用 0.1%Triton X-100 进行细胞打孔。5%BSA 封闭 60 min 后，分别加入 E-cadherin 和 N-cadherin 抗体，按照说明书比例稀释，4 冰箱孵育过夜。次日回收一抗，TBST 洗涤，Alexa Fluor 488 标记山羊 抗 兔 IgG（H+L）孵 育 E-cadherin 组，Alexa Fluor 647 标 记 山 羊 抗 兔 IgG（H+L）孵 育N-cadherin 组，荧光二抗孵育 2 h，并用 DAPI染色10 min。采用荧光显微镜对荧光信号进行观察并拍照。采用 Image J 软件检测荧光强度，以荧光强度表示各组细胞中 E-cadherin 和 N-cadherin 蛋白表达情况。1.8统计学分析统计学分析采用 SPSS 22.0 统计软件进行统计学分析。各组细胞增殖抑制率、细胞迁移率、迁移和侵袭细胞数及 EMT 相关蛋白表达水平均符合正态分布并方差齐，以 xs 表示，多组间样本均数比较采用单因素方差分析，组间样本均数两两比较采用 LSD-t检验。以 P0.05为差异有统计学意义。2 结 果 2.1各组细胞增殖抑制率各组细胞增殖抑制率CHE 处理 24、48 和72 h 时，与 对 照 组 比 较，5.0、10.0、20.0 和40.0 mol L1 CHE 组细胞增殖抑制率明显升高（P0.05或 P0.01）。见表 1。2.2各组细胞迁移率各组细胞迁移率与对照组比较，TGF-1组细胞迁移率明显升高（P0.01）；与 TGF-1组比较，TGF-1+5 mol L1 CHE 组和 TGF-1+10 mol L1 CHE 组 细 胞 迁 移 率 明 显 降 低（P0.01）。见图 1和表 2。2.3各组细胞中迁移细胞数和侵袭细胞数各组细胞中迁移细胞数和侵袭细胞数与对照组比较，TGF-1 组细胞中迁移细胞数和侵袭细胞 数 明 显 增 加（P0.05）；与 TGF-1 组 比 较，TGF-1+5 molL 1 CHE 组 和 TGF-1+10 mol L1 CHE 组细胞中迁移细胞数和侵袭细胞数明显减少（P0.01）。见图 2和表 3。2.4各组细胞中各组细胞中 EMT 相关蛋白表达水平相关蛋白表达水平与对照组比较，TGF-1 组细胞中 E-cadherin 蛋白表达水平明显降低（P0.01），N-cadherin 和 Vimentin蛋白表达水平明显升高（P0.05或 P0.01）；与TGF-1 组比较，TGF-1+5 mol L1 CHE 组和TGF-1+10 mol L1 CHE 组细胞中 E-cadherin 蛋白 表 达 水 平 明 显 升 高（P0.01），N-cadherin 和Vimentin 蛋 白 表 达 水 平 明 显 降 低（P0.01）。见图 3和表 4。表表 1各组细胞增殖抑制率各组细胞增殖抑制率TabTab.1 1 Inhibitory rates of proliferation of cells in various groups(n=3，xs，/%）GroupControlCHE(mol L1)2.5 5.0 10.0 20.0 40.0Inhibitory rate of proliferation(t/h)24 00.040.030.700.33*16.652.97*60.474.92*83.745.70*48 00.140.113.341.36*19.383.65*83.961.43*90.930.70*72 01.310.135.760.82*29.882.74*86.243.20*93.420.89*P0.05，*P0.01 vs control group.28周佳，等.白屈菜红碱对人卵巢癌 SKOV3细胞迁移、侵袭和上皮间质转化的影响2.5各组细胞中各组细胞中 E-cadherin 和和 N-cadherin 荧光强荧光强度度与对照组比较，TGF-1 组 E-cadherin 荧光强度明显降低，N-cadherin 荧光强度明显升高；与TGF-1 组比较，TGF-1+5 mol L1 CHE 组和TGF-1+10 mol L1 CHE 组细胞中 E-cadherin 荧光强度明显升高，N-cadherin 荧光强度明显降低。见图 4。3 讨 论 CHE 是中药白屈菜的主要活性成分之一，具有抗炎、抗菌和抗病毒等多种药理活性8-11。近年来研究12-18显示：CHE 在抗肿瘤方面表现出很强的生物活性，可以通过不同的机制广泛地抑制肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭，在宫颈癌、肺癌和肝癌A-D：0 h；E-H：24 h；A，E：Control group；B，F：TGF-1 group；C，G：TGF-1+5 molL 1 CHE group；D，H：TGF-1+10 mol L1 CHE group.图图 1细胞划痕实验检测各组细胞划痕愈合情况细胞划痕实验检测各组细胞划痕愈合情况（Bar=200 m）Fig.1Scratch healing of cells in various groups detected by cell scratch assay（Bar=200 m）表表 2各组细胞迁移率各组细胞迁移率TabTab.2 2Migration rates of cells in various groups(n=3，xs，/%）GroupControlTGF-1TGF-1+5 mol L1 CHETGF-1+10 mol L1 CHEMigration rate44.770.1855.922.32*26.942.2812.102.73*P0.01 vs control group；P0.01 vs TGF-1 group.A-D：Migration；E-H：Invasion；A，E：Control group；B，F：TGF-1 group；C，G：TGF-1+5 mol L1 CHE group；D，H：TGF-1+10 mol L1 CHE group.图图 2各组细胞迁移和侵袭情况各组细胞迁移和侵袭情况（结晶紫结晶紫，Bar=200 m）Fig.2Migration and invasion of cells in various groups（Crystal violet,Bar=200 m）29第 50 卷 第 1 期 2024 年 1 月吉林大学学报（医学版）等多种常见肿瘤中可通过促细胞凋亡、改变细胞周期、诱导自噬发生和激活线粒体凋亡等多种途径发挥抗肿瘤作用。卵巢癌是女性最致命的妇科癌症之一，由于卵巢癌临床症状隐匿和早期筛查困难，易转移和复发，其 5 年生存率50%19-20。虽然可以采取减瘤术结合化疗和维持治疗等综合疗法治疗卵巢癌，但多数患者会在 3 年内出现复发和转移21。肿瘤细胞的侵袭和转移已经成为癌症患者死亡的主要因素22。因此，探索更多的能够有效抑制卵巢癌细胞增殖、侵袭和转移的药物，可以为其治疗提供更多选择。本研究采用 MTT法检测 CHE对卵巢癌 SKOV3细胞增殖抑制率的影响，当 CHE浓度超过 5.0 mol L1时，SKOV3 细胞增殖抑制率呈剂量-时间依赖性升高，表明 CHE 可以抑制卵巢癌细胞增殖。表表 3各组细胞中迁移细胞数和侵袭细胞数各组细胞中迁移细胞数和侵袭细胞数TabTab.3 3 Numbers of migration and invasion cells in various Numbers of migration and invasion cells in various groupsgroups(n=3，xs）GroupControlTGF-1TGF-1+5 mol L1 CHETGF-1+10 mol L1 CHENumber of migration cells365.6717.04432.6720.21*233.0019.0899.3310.97Number of invasion cells222.6732.88342.3361.23*143.3322.0384.336.81*P0.05 vs control group；P0.01 vs TGF-1 group.Lane 1：Control group；Lane 2：TGF-1 group；Lane 3：TGF-1+5 mol L1 CHE group；Lane 4：TGF-1+10 mol L1 CHE group.图图 3Western blotting 法检测各组细胞中法检测各组细胞中 EMT 相关相关蛋白表达电泳图蛋白表达电泳图Fig.3 Electrophoregram of expressions of EMT related proteins in cells in various groupsAD：E-cadherin；EH：N-cadherin；A，E：Control group；B，F：TGF-1 group；C，G：TGF-1+5 mol L1 CHE group；D，H：TGF-1+10 mol L1 CHE group.图图 4各组细胞中各组细胞中 E-cadherin和和 N-cadherin荧光强度荧光强度（免疫荧光免疫荧光，100）Fig.4Fluorescence intensities of E-cadherin and N-cadherin in cells in various groups（immunofluorescence，100）表表 4各组细胞中各组细胞中 EMT相关蛋白表达水平相关蛋白表达水平TabTab.4 4Expression levels of EMT related proteins in cells in Expression levels of EMT related proteins in cells in various groupsvarious groups(n=3，xs）GroupControlTGF-1TGF-1+5 mol L1 CHETGF-1+10 mol L1 CHEE-cadherin0.460.020.310.02*0.540.010.620.01N-cadherin0.720.010.920.01*0.310.020.160.01Vimentin0.860.020.910.01*0.750.030.360.01*P0.05，*P0.01 vs control group；P0.01 vs TGF-1 group.30周佳，等.白屈菜红碱对人卵巢癌 SKOV3细胞迁移、侵袭和上皮间质转化的影响在恶性肿瘤的治疗中，除抑制细胞增殖外，阻断细胞的侵袭也是预后的决定因素之一23。研究24表明：EMT 是导致卵巢癌细胞侵袭和转移的主要原因。EMT 是一种动态且可逆的分子机制，在正常生理状态下，发挥着胚胎发生、器官发育和伤口愈合等基本生理作用。当肿瘤发生时，EMT的原始功能被肿瘤细胞利用，肿瘤的侵袭能力增加25-27。本研究选用 EMT 强诱导剂 TGF-1 诱导卵 巢 癌 细 胞 发 生 EMT，采 用 细 胞 划 痕 实 验 和Transwell 小室实验检测 CHE 处理后 SKOV3 细胞迁移和侵袭能力的变化情况，结果显示：CHE 可以抑制 TGF-1对 SKOV3的 EMT 促进作用，减少迁移和侵袭细胞数，表明 CHE 能够抑制卵巢癌SKOV3细胞的迁移和侵袭。在肿瘤 EMT 的进程中，细胞形态学发生改变，失去极性、黏性和细胞间连接，上皮标志物E-cadherin 表 达 水 平 降 低，间 充 质 标 志 物N-cadherin和Vimentin表达水平升高 28。E-cadherin是一种钙依赖性胞间连接蛋白，在 EMT 触发时，其上游的转录因子 Snail、Slug 和 E 盒结合锌指蛋白（zinc finger E-box binding homeobox，ZEB）及TGF-均可下调 E-cadherin 的表达29。研究30表明：EMT 参与癌细胞的侵袭转移级联反应，在此阶段，癌细胞将扩散到周围的基质环境中并发生内渗，通过体液循环向远处细胞转移，导致原发癌症演变为更高级别的肿瘤。因此，抑制肿瘤的 EMT过程是抑制肿瘤转移的重要手段。本研究采用Western blotting法和免疫荧光染色法检测各组细胞中 EMT 主要生物标志物的表达情况，结果显示：CHE 可 以 通 过 增 加 E-cadherin 表 达 并 减 少N-cadherin 和 Vimentin 表达，逆转卵巢癌 SKOV3细胞 EMT的进程。综上所述，CHE 能够抑制 SKOV3 细胞增殖、迁移和侵袭活性，阻止或缓解 SKOV3 细胞 EMT的发生。本研究结果为 CHE 治疗卵巢癌的研究提供了理论依据，CHE 有望作为一种新型抗卵巢癌的药物在临床中应用，但关于其具体作用机制还有待进一步研究。利益冲突声明：所有作者声明不存在利益冲突。作者贡献声明：周佳参与选题、数据收集整理和论文撰写，邱智东、林喆和黄晓巍参与指导论文撰写和提供基金资助，律广富和王雨辰参与实验操作和研究过程，许佳明和林贺参与论文审校，王可欣参与论文中数据的统计学分析。参考文献1 王 稳，王兴国，刘淑娟，等.交界性卵巢肿瘤诊治中国专家共识（2022年版）J.中国实用妇科与产科杂志，2022，38（12）：1185-1194.2 贾艳艳.PDLIM4在卵巢癌中的临床意义及其调控肿瘤生长和转移的机制研究 D.郑州：郑州大学，2020.3 DHALIWAL D，SHEPHERD T G.Molecular and cellular mechanisms controlling integrin-mediated cell adhesion and tumor progression in ovarian cancer metastasis：a reviewJ.Clin Exp Metastasis，2022，39（2）：291-301.4 VALIPOUR M，ZARGHI A，EBRAHIMZADEH M A，et al.Therapeutic potential of chelerythrine as a multi-purpose adjuvant for the treatment of COVID-19J.Cell Cycle，2021，20（22）：2321-2336.5 LIN Y L，ZHANG Q Z，XIE B F，et al.Chelerythrine-induced apoptotic cell death in HepG2 cells involves the