绿茶对小鼠降血压作用.doc

机能学实验设计大纲

实验名称:绿茶对小鼠降血脂作用

课题来源：自选

设计班级：2013级临床医学本科3班

设计人员：张利

设计日期：2015年4月18日

指导老师：官璇

成都医学院实验技术教研室
2006年制

一、 实验设计的目的意义：实验设计的目的意义，国内外研究现状，存在的问题，解决问题的思路。

目的与意义:利用动物高血脂造模复制高血脂模型，利用直接使用不同浓度的绿茶对小鼠降血脂的方法。大量研究资料表明，高血脂症是脑卒、冠心病、心肌梗死、猝死的危险因素。此外，高血脂症也是促进高血压、糖耐量异常、糖尿病的一个重要危险因素。 高血脂症还可导致脂肪肝、肝硬化、胆石症、胰腺炎、眼底出血、失明、周围血管疾病、跛行、高尿酸血症。由此可见高血脂对人类的危害颇大，此实验在于探讨绿茶是否对降血压起到一定作用，为日常生活中的食疗起到指导作用。
国内外研究现状：茶色素是是从绿茶中提取出的水溶性酚类色素。中国人几千年来喝茶的传统，有研究表明，茶叶中可能含有一些有利降血脂降血压作用的物质。以胆固醇和甘油三酯水平过高或伴有血清高密度脂蛋白胆固醇水平过低为特征的高脂血症是引起动脉粥样硬化进而导致冠心病、高血压和脑血管疾病的主要原因，抑制胆固醇的吸收、体内合成及促进胆固醇与甘油三酯的体内代谢成为主要研究方向，降血脂药物阿托伐他汀(atorvastatin ,Lipitor)临床应用比较广泛。中科院上海生科院生化与细胞所宋保亮研究组近期在“高血脂”相关研究上取得进展。宋保亮研究组通过研究揭示了饮食胆固醇高效吸收的分子机制。一个名叫“NPC1L1”的蛋白质和两个名叫“Flotillin-1”和”Flotillin-2”的同源蛋白相互作用，形成一个含有高浓度胆固醇的特殊膜结构域，犹如载有大量胆固醇的卡车一般，将人们饮食中所含的大量胆固醇高效摄取进入细胞。同时，宋保亮研究组发现了一种全新作用机制的降脂化合物—“白桦酯醇”。这种化合物能抑制胆固醇和甘油三酯合成，有效预防肥胖症、动脉粥样硬化症和ＩＩ型糖尿病。在某些研究中运用细胞靶向治疗，为高血脂的治疗提出另外的解决方案。
存在的问题：探究不同浓度茶色女素对降血脂的影响时，未能找到其最适浓度，检测指标的合理性，豚鼠实验数目过少造成实验偶然性等等。
解决问题的思路：通过分组和重复试验，利用高脂饮食饲喂或灌胃一段时间后制作成的高血脂豚鼠模型，用不同浓度的茶色素灌胃豚鼠并检测其单位血浆中胆固醇，甘油三酯，低密度脂蛋白，高密度脂蛋白的量，观察茶色素的降血脂作用。并作实验对照和空白对照。

参考文献：
1，《茶色素抗高血脂症及降压作用的临床观察》
2，《实验动物与比较医学》2012年第2期沈龙海，张填
3，《糖尿病患者血脂变化的临床观察》2007年第6张12卷，临床与实验医学杂志
4，《心血管病学进展》2008年第S1期王玉丽
5，降血脂药物的研究进展》2014年3期王海勇，王林
6，《高血脂动物模型及其评价》

二、实验设计方案（实验设计目标,拟解决的主要问题, 实验动物设计,实验专业设计，实验统计设计,实验方法设计，可行性分析,预期结果，实验设计工作时间安排）。
（一）实验设计目标，拟解决的关键问题
设计目标：探讨绿茶是否可以作为一种辅助药物对降血脂起到一定的作用，在于指导某些慢性疾病的食疗作用。
拟解决的关键问题：茶色素的不同量，实验模型的制备，对试验性高血脂的模型进行分组，实验的检测指标及其结果分析。
（二）实验设计
1、实验动物设计
我们选用豚鼠作为实验动物，有以下几点理由：
1）、豚鼠易得到，容易饲养，在科研工作中被广泛利用。
2） 、豚鼠在血浆脂蛋白构成、胆固醇和脂蛋白代谢对饮食胆固醇和对药物的反应方面与人类有许多相似之处。
3）豚鼠对高脂肪高胆固醇饮食尤其是高胆固醇饮食非感，通常饲料中加入少量的胆固醇（最低可达0.04%）即可形成较为明显的高胆固醇血症，尤其血浆LDL-C升高变化最为显著。豚鼠建立高脂血症模型具有饲料配方简单、胆固醇含量较低且与人类胆固醇摄入量相当等优点

2、实验专业设计
选用豚鼠作为实验动物，构建豚鼠高血脂模型，给予不同浓度的由绿茶中提取出的茶色素，观察对实验性降血脂治疗作用，观察豚鼠单位血液量中胆固醇，甘油三酯（TG），低密度脂蛋白（LDL），高密度脂蛋白（HDL）等实验结果检测指标。
3、实验统计设计
实验统计设计中应始终贯彻随机、对照、重复三大原则。
（1）随机：选正常成年健康体重相近的豚鼠30只，雌雄各占一半，随机分为A、B、C、D、E五组，每组6只豚鼠且雌雄各占一半。
（2）对照：本组实验做了空白对照和实验对照，在前面的专业设计里已经提及。
（3）重复：本实验采用的是每实验小组有6只豚鼠，具有一定的重复性。
（4）统计数据收集：本实验搜集计量资料，初步确定对各组实验数据的比较分为实验值和基础值比较。表一表示豚鼠用高脂饲料喂食或灌胃后制成的高血脂动物模型中血脂检测指标的值.表二表示在豚鼠正常饮食情况下，A组为空白对照组生理盐水灌胃，B、C、D、E组分别用10mL/kg,30mL/kg,50mL/kg,70mL/kg茶色素灌胃，记录到各种血脂测定指标的变化。
表1 实验数据收集记录表

各种血脂测定指标（mmol/l)

A
B
C
D
E
A1~A5
B1~B5
C1~C5
D1~D5
E1~E5
胆固醇

甘油三酯

低密度脂蛋白

高密度脂蛋白

表二实验数据记录表
各种血脂测定指标（mmol/l)

A
B（10mL/kg)
C(30mL/kg)
D(50mL/kg)
E(70mL/kg)
A1~A5
B1~B5
C1~C5
D1~D5
E1~E5
胆固醇

甘油三酯

低密度脂蛋白

高密度脂蛋白

（5） 统计数据分析
本实验采用计量资料来测定各种指标的数值，表一与表二比较，分析血脂检测的各项指标。

4、实验方法设计
实验技术路线

豚 鼠

A组对照组

生理盐水灌胃

B,C,D,E组实验组

E组70mL/kg的茶色素

C组30mL/kg的茶色素

D组50mL/kg的茶色素

B组10mL/kg的茶色素

测 定 四 种 血 脂 指 标

实验技术方法
（1）随机抽样：随机30只正常的豚鼠，随机平分成5组，每组6只且雌雄各占一半。
（2）模型复制：由于豚鼠对高脂肪高胆固醇饮食特别敏感，采用高脂饮食（胆固醇、猪胆盐。猪油蛋黄粉、奶粉普通饲料按照一定的比例配制而成）饲喂或灌胃诱导高脂血症。
（3）处理措施：每组实验动物分别给予浓度为2、4、6和8 mg/ml的茶色素，对照组以生理盐水代替，每天灌胃一次，连续7天。
（4）取材：比较几种采血方法，心脏采血最适宜。取血前应探明心脏搏动最强部位，通常在胸骨左缘的正中，选心跳最显的部位作穿刺。针头宜稍细长些，以免发生手术后穿刺孔出血。成年豚鼠每周采血应不超过10ml为宜。
（5）各种血脂检测指标的测定：通过血脂检测仪测定血液中各种检测指标的值。
（三）可行性分析:
1、豚鼠易得到，容易侍养，在科研工作中被广泛利用。
2、豚鼠在血浆脂蛋白构成、胆固醇和脂蛋白代谢对饮食胆固醇和对药物的反应方面与人类有许多相似之处。
3、豚鼠对高脂肪高胆固醇饮食尤其是高胆固醇饮食非感，通常饲料中加入少量的胆固醇（最低可达0.04%）即可形成较为明显的高胆固醇血症，尤其血浆LDL-C升高变化最为显著。豚鼠建立高脂血症模型具有饲料配方简单、胆固醇含量较低且与人类胆固醇摄入量相当等优点
4、手术器材和设备均为实验室常用，手术方法我们也相对熟练。
(四）预期效果:
1、茶色素具有一定的降血脂作用。
2、为日常生活中一些食疗降血脂起到指导作用。
3、可以考虑作为临床上一种联合用药治疗高血压。
（五）实验设计工作时间安排:
1、共计0,5D 完成茶色素提取
2、共计0.5D 完成实验动物模型制备和取材
3、共计7D完成实验的进行和结果记录分析
4、总共实验在8D完成。

三、完成实验的条件
1、仪器设备情况：本实验采用机能实验室常用设备，具体如下：婴儿磅秤、灌胃针、快速血脂检测仪，注射器。
2、实验动物情况:健康的豚鼠30只。
3、药品试剂来源：本实验采用高脂饮食（胆固醇、猪胆盐。猪油蛋黄粉、奶粉普通饲料按照一定的比例配制而成）、生理盐水、戊巴比妥钠、蔗糖、从绿茶中提取的标准茶色素。