NY∕T 3273-2018 难处理农药水生生物毒性试验指南(农业).pdf

ICS 65.020 B 17 NY 中华人民共和国农业行业标准NY/ T 3273一2018难处理农药水生生物毒性试验指南Guidance document on aquatic toxicity testing of difficult pesticides 2018-07 -27发布2018-12一01实施中华人民共和国农业农村部发布NY/T 3273-2018 目。吕本标准按照GB/T1. 1-2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由农业农村部种植业管理司提出并归口。本标准起草单位:农业农村部农药检定所、浙江省农业科学院农产品质量标准研究所。本标准主要起草人:俞瑞鲜、袁善奎、胡秀卿、吴声敢、陈朗、于毅、赵秀振、门兴元。I NY/ T 3273-2018 难处理农药水生生物毒性试验指南1 范围本标准规定了供试物稳定性的初步评估、试验药液制备和暴露体系选择、样品采集及试验结果的计算与表达等的基本要求。本标准适用于难溶(或略溶)于I监甸、易被吸附、有颜色、疏水性、离子型和多组分等供试物2 规范性引用文件下列文件对于本件。凡是不注日期3 3. 1 3.2 NY/ T NY/ T 下列术难处理农药试验过程中难化学农药chemical 利用化学物质人工合成创新而成，为仿生合成农药。3.3 3.4 3.5 同义词:有机合成农药synthetic NY/ T 1667.1-2008，定义2.3. 1J 农药制1fIJfonnulation pr叫uct由农药原药(或母药)和助剂制成使用状态稳定的产品。NY/ T 1667.2-2008，定义2.4J供试物test substance 试验中需要测试的物质。l NY/T 3273-2018 3.6 3.7 3. 8 难溶(或略溶)于水的物质prly (or sparingly) water-soluble substance 在水中的溶解度小于100mg/L的物质。直接添加法direct addition 把供试物直接加入到水中，加以混合保证它完全分散和溶解在水中。多组分供试物multi-component substances 由不同溶解性、不同理化性质的物质所组成的混合物。疏714的供试物或生物富集系数CBCF)500的供试物。3. 9 水融合部分water-accommodated fraction (W AF) 一种多组分供试物或混合物在水中的分散总和，包括溶解的部分和/或悬浮的部分和/或乳化的部分。4 供试物稳定性的初步评估供试物的稳定性评估方法参见附录A。5 试验药液制备和暴露体系选择5. 1 难溶(或略溶)于水的供试物5. 1. 1 试验药液的制备5. 1. 1. 1 直接添加法直接添加法适用于供试物的暴露浓度小于其水中溶解度50%的试验。根据强度递增的顺序，直接添加法包括低能量搅拌、剧烈振荡、搅拌、匀浆/高速搅拌、超声波助溶。根据供试物的性质，低能量搅拌通常持续24h48 h;超声波助溶时间以30min为宜，并须注意水中溶解氧是否减少及超声加热对农药稳定性的影响。5. 1. 1.2 水溶性溶剂助溶法水溶性溶剂助溶法适用于易水解和高薪性的供试物，不适用于混合物的试验药液制备。可使用丙酣、乙醇、甲醇、二甲基甲酷胶或三甘醇作为溶剂。静态或半静态试验时，须注意丙嗣、乙醇、甲醇等溶剂使用后微生物生长而造成溶解氧下降的情况。试验溶液中溶剂的浓度不超过对应试验条件下溶剂的毒性阔值。溶剂的浓度应符合相关试验准则的要求，通常至少比供试物的无观察效应浓度低一个数量级或低于100mg/LC或0.1mL/L)。5. 1.2 不溶物的去除可采用以下方法分离不溶于水的供试物，宜优先采用离心法。a) 离心法:在100000m/ S2 400 000 m/ S2 (10 197 X g40 789 X g)的转速下离心30min。b) 滤膜过滤法:使用孔径为0.22mO.45m的惰性材料滤膜过滤，滤膜在使用前先用高纯水润洗，然后再用试验药液润洗。5. 1.3 流水式暴露系统如供试物浓度在试验过程中不能保持理论浓度的80%120%，可使用流水式暴露系统。使用流水式暴露系统时，常配制某一浓度的母液，经过稀释将不同暴露浓度泵人不同处理组。如试验过程中无法达到处理组的目标浓度，则需预先配制系列浓度母液，且配制量应满足24h或者更长试验时间所需。5. 1.4 饱和状态下未表现急性毒性的供试物评估饱和状态下的供试物毒性效应时，应提供以下材料:a) 饱和试验药液制备方法报告;b) 试验药液制备过程的详细描述;c) 供试物的水溶解度;d) 饱和溶液的评估。当使用饱和溶液未观察到供试物元毒性效应。5. 2 低浓度时表现毒性对于低浓度时表现5. 3 a) 试验溶液b) 当缺少可c) 试验期效应;d) e) 对于易浓度不同试验a) 鱼类c) 藻类试验(GB/T密度，并在试验培缩短试验周期。藻类生长要求。5. 4 易降解的供试物5.4. 1 母体与分解产物的毒性测定对于静态和半静态试验C24h更换试验药液): a) 半衰期二三3d，测定母体的毒性。NY/T 3273-2018 评估毒性了供试物积。不同与更换培养基，降低藻类细胞接种COz的循环装置，或适当系统可满足试验中对照组的b) 1 h半衰期3d，根据实际情况，还可包括降解产物毒性的测定。c) 半衰期1h，测定降解产物的毒性。d) 当预试验或定量构效关系CQSAR)分析表明，任何降解产物的毒性与母体相似或高于母体时，测定降解产物的毒性。降解产物的毒性试验应单独进行，并建立降解产物的分析方法。e) 样品的采集和分析过程应保证母体不再进一步分解。3 NY/T 3273-2018 5. 4. 2 易光解的供试物对于易光解的供试物，短期的鱼类急性毒性试验和渥类毒性试验可在黑暗环境下或者采用红光光源进行试验，也可选择性地剔除造成光解的特定波长的光线。对长期进行的慢性试验，不应在完全黑暗的条件下进行试验。藻类试验可从下列方法中选择一种来测定供试物母体的毒性:a) 剔除造成供试物光解的波长的光线，同时保留光合作用波长的光线;b) 采用黑暗暴露和光照暴露交替进行试验。5. 4. 3 易水解的供试物宜采用直接添加法，并采取措施使其快速溶解，以尽可能缩短供试物试验药液的配制过程。若配制储备液时，宜采用非反应性、与水混溶的搭剂。可水解形成聚合物的供试物(如烧氧基硅氧烧和异氨酸醋或盐)不适于流水式暴露系统。试验时，将此类供试物直接加到试验容器中并剧烈搅拌，然后尽可能快速而安全地加入试验生物，如10min。若因供试物不溶而难以形成均匀相时，需在搅拌前使用非反应性溶剂进行稀释，再进行添加和搅拌。为了保持供试物母体在试验药液中的浓度，可在试验允许的范围内对温度和pH等进行调整。必要时，测定pH对水解速率的影响，用以确定试验用水解产物的生产条件。水解产物的毒性试验应在标准要求的pH范围内进行。5. 4. 4 易氧化分解的供试物对于易氧化分解的供试物，开展鱼类和无脊椎动物试验时，关键是要保证水中溶解氧符合试验要求。可采取以下方式保持水中溶解氧浓度:对试验药液曝气、增加试验药液体积、减少试验生物承载量、增加试验药液更换频率等。5. 4. 5 易生物降解的供试物对于易生物降解的供试物，可采用半静态试验或流水式试验方法。半静态试验中，在试验开始时和试验期间应对试验容器进行灭菌。流水式试验中，高浓度储备溶液宜在氮气中保存。试验过程中，应避免使用抗生素。必须使用抗生素时，需经委托方同意，并增加抗生素对照组。5. 5 易被破附的供试物对于易被吸附的供试物，当暴露浓度1mg/L时，可采用以下方法减少供试物在暴露系统表面和有机物上的吸附:a) 减小试验药液表面积与体积的比值;b) 开展半静态试验和流水式试验时，增加试验药液更换频率;c) 采用由非吸附性材料如聚四氟乙烯制作的暴露容器，避免使用橡胶和聚乙烯等高吸附材料;d) 对试验容器进行预饱和，预饱和试验药液浓度不能超过正式试验浓度;e) 使试验药液中溶解的有机碳浓度不超过2mg/ L; f) 若有饲喂，在饲喂结束后及时清除多余饲料;g) 鱼类半静态试验中，在试验药液更换前几个小时进行饲喂;h) 以半静态试验或流水式试验替代静态试验;i) 硅炕化实验器皿，但要保证使用前硅烧化剂已经清洗干净。5. 6 有颜色的供试物5.6. 1 有色物质对藻类的毒性试验可采用以下方法区分毒性和光吸收所产生的影响，优先选择缩短光路和增加光强的方法。a) 在不同光强度下进行试验;b) 减少培养基的深度或体积以缩短光路;c) 当光预先通过液体滤光器时，测量对照组中细胞增殖的减少量;4 NY/T 3273-2018 d) 使用滤光片。5. 6. 2 有色物质对无脊椎动物的毒性试验将试验容器置于光束中或将试验药液转人较浅的培养容器中对受试生物如大型渣进行观察。5. 7 疏水性供试物试验过程中可采取以下措施保持暴露浓度:a) 降低试验生物量与试验药液体积的比例，如使用鱼试验中300 g/ molb 农药是否可离子化?如果可以，Ka值是多少?正辛醇/水分配系数ClogKo四)4 试验条件下试验培养基中农药的水溶解度 100 mg/ L 纯水中农药的水溶解度C2SC)0.1 C Pa m3)/ mol 沸点熔点有机溶剂中的溶解度表面活性剂/洗涤剂在水中的分散性络合常数最终好氧生物降解时间 lOd 初级好氧生物降解时间Sd 土壤吸附系数ClogKoc) 水解半左主期C2SC,pH=7) SOO 农药在水面的挥发性:以河流和湖泊为模型农药在污水(废水)处理厂的去除率光降解吸收波长290nm600 nm 7j(生生物毒性 1 mg/ L 金属化合物的溶解速率和程度a 参考值仅表明难处理农药在试验中可能出现技术难题，并不是判断难处理农药的标准。b 经验值。c 非常规试验，试验结果取决于试验周期。d 该值取决于试验周期。A.2 供试物的稳定性试验供试物稳定性试验设置2个浓度，设计方案见图A.l。供试物的试验药液在与正式试验相同的试验条件下进行配制，但不加入供试生物。在oh,24 h、试验结束时(对于不稳定和易吸附物质在更短时间内)分析试验药液中供试物的浓度，且试验药液中供试物的浓度必须在最低检测限以上。7 NY / T 3273-2018 ，得一可一否一是一否白日一信丁学一化一理一物一物一试一供一是选择合适的试验体系A 制备供试物的真溶液或悬浊液开放的容器密闭的容器8 , NY/T 3273-2018 参考文献1OECD,2000. OECD series on testing and assessment Number 23 Guidance document on aquatic toxicity testing of diffi-cult substances and mixtures. 9 、电ONl的hN凹同MZ中华人民共和国农业行业标准难处理农药水生生物毒性试验指南NY/ T 3273- 2018 9导中国农业出版社出版(北京市朝阳区麦子店街18号楼)(邮政编码:100125网址:.ccap. COll1. cn) 北京印刷一厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经销* * * 印张1字数20千字2018年11月北京第1次印刷* 开本880rnrnX1230rnrn 1/16 2018年11月第1版书号16109 4628 定价24.00元争等版权专有侵权必究举报电话[phone] NY /T 3273-2018