水产饲料原料质量控制.docx

水产饲料原料质量控制探讨

刘天骥

提纲
一、 前言
二、 水产饲料原料标准体系制定
三、 水产饲料原料合格供应厂商评估与筛选
四、 水产饲料原料检化验控制
五、 水产饲料原料的接收
六、 水产饲料原料的贮存
七、 常用水产饲料原料的质量控制
一、前言
随着饲料工业的快速发展，规模饲料生产企业在饲料配方技术、加工设备与工艺上的差距越来越小，饲料产品同质化趋势越来越强，但企业经营与产品质量差异始终存在。据统计分析表明，饲料原料占饲料总成本的80%以上，饲料产品质量差异40%－70%来自原料质量的差异。因此，某种意义上来说，经营饲料就是经营饲料原料。
因水产动物对蛋白需求比畜禽高，蛋白原料为水产饲料主要原料，而在08年的“三聚氰胺”风波中，饲料原料的掺杂使假现象已有暴露。能量原料中的油脂质量也难控制，水产饲料主要使用不饱和脂肪酸高的油脂，如鱼油和植物油，高不饱和脂肪酸易氧化。动物蛋白原料高蛋白、高脂肪（如鱼粉、蚕蛹等）质量也难以控制，水产饲料原料质量控制克不容缓。
水产饲料原料质量保证重在标准体系的建立与制度的落实上。包括水产饲料原料标准体系建立、合格供应厂商评估与筛选、原料接收、检化验方案、原料储存与合理使用等一系列质量控制措施。
二、水产饲料原料标准体系制定
水产饲料原料标准体系包括：采样标准、原料标准、检化验标准、贮存标准等。标准是企业技术性法规，标准制定应参照国家标准或行业标准，结合企业实际与标准制定工作流程认真对待，标准一旦制定必须严格执行。
1原料的采购、验收标准
标准的制定必须具有科学性且符合本企业要求，它需要很强的技巧，太严买不到所需的原料，无谓地增加质量成本，太松又会失去品控的意义，控制不了原料质量。具体可参照每年农业部颁发的饲料原料营养价值成分表或国家标准、行业标准、企业标准，因地制宜。采购员必须掌握和了解水产饲料原料的质量性能和质量标准，必要时到原料产地或生产厂家了解原料特性、加工工艺等行情。而标准的制定者必须通晓饲料原料及水产动物营养学知识。从三个方面来考虑：感观指标、卫生指标和营养指标。卫生指标必须执行国家或行业强制标准，而营养指标中哪些项目具有弹性可以让步接收，让步接收的标准是什么？谁有权力决定让步接收？哪些无任何余地；哪些成分必须检测，每一关都至关重要，标准制定应明确（合格、不合格、让步接收、拒收）。标准制定后还必须保持标准的严肃性，不能随意更改。标准的修订根据企业实际采购执行情况（检测数据统计）、行业新标准或生产要求进行。
2采样标准
必须学习国际国内的先进采样方法，而且还要因材取法。应注意五点：一是明确规定是品管工作人员采样。二是固体饲料原料采用对角线法采样，颗粒状饲料应采用随机采样法，抽样时按每个堆积立面“X”或“W”形抽样，抽样总袋数不少于20袋。液体原料经搅拌混匀后采上中下综合样，采样量一般为1000g，每一样品和检测结果代表的单批数量不超过120吨。三是感观性质相差较大的原料不允许混合采样，应分档次进行；不同厂家，不同批号，不同等级产品不可以混合采样。四是所采样要四分法分为两份（一份检化验，一份备存），贮存于干燥、避光条件下的贮存室内，贮存期为保质期后两个月。五是所有样品都要有标签标示：原料名称、供应厂商、产地、进货日期、数量等。
3必要的制度及相关表格
检化验制度、岗位责任制度、产品留样观察制度及原料贮存、使用情况检查表、检化验操作规程等等，都是很有效的控制质量办法。参与质量管理的各个部门及生产线，应具备所需检验器具、记录簿、样签等采样工具等。
三、水产饲料原料合格供应厂商评估与筛选
水产饲料原料质量及供应要稳定，合格供应厂商应稳定。饲料企业应建立合格供应厂商制度。先了解原料供应厂商的规模、信誉、质量管理、加工工艺等，通过对供应厂商既往供货质量记录、价格、供货及时性、实力等因素进行评审，由采购部和品管部共同提出合格供应厂商名单，与产品线经理及总经理共同评审。
合格供应厂商名单每年都要评审，质量每次都合格且供货及时、信誉好的可建立长期战略合作伙伴，而对于供货多次不合格或规模小、质量不稳定的供应厂商应淘汰，集团化企业也可建立黑名单制度，即对恶意掺假的供应商列入黑名单，本公司及集团所有公司永不与其发生供应关系。
四、水产饲料原料检化验控制
1．强化品控意识：强化化验人员的品控意识，建立相关的检化验制度，学习国际国内最新的快速、准确的检化验方法。
2．常用的鉴定方法
(1)感官鉴定法
色形纯正程度、均匀度、味道（非化学物质的口感）、气味、触感等。感官指标严重不合格没必要进行化学分析，直接拒收。
(2)物理学鉴定方法
筛选法、容重测定法、比重测定法、水淘汰法。
(3)化学鉴定法
定性分析、定量分析。
(4)物理化学分析鉴定法
近红外分析法。
(5)微生物学鉴定法
(6)动物实验法
饲养试验、生长试验、消化、代谢试验、适口性试验等。
3.检化验应注意的事项：
检化验工作不仅是提供判断原料合格与否的理化指标，同时也为原料采购中合格供应商评估提供依据，更为重要的是为配方设计提供实际营养数据库。对重要营养指标提供动态分析图表，以便原料的合理使用。
五、水产饲料原料的接收
1、强化采购员素质
采购员应掌握原料质量判断标准及感官检验方法，同时掌握原料信息渠道，确保稳定的货源，在保证质量的前提下，尽量选用成本低、运输和储存费用相对较少的原料，且要了解原料的库存，仓储和用量情况，防止造成积压和产、供、销脱节或停产，杜绝假冒伪劣原料。
2、控制采购渠道
采购渠道不宜多变，一旦确定合格供应厂商，不宜经常更换厂商，以便使原料质量稳定，筛选信誉好、质量优的大型企业，建立长期业务往来，可通过合同的方式约束双方行为，以确保饲料原料的质量。
3、原料的接收程序
感官指标合格，进行理化指标检测，达到标准的接收，未能达到标准的虽判定为不合格，但有两种处理：让步接收与拒收。
让步接收的原则：
A 检测指标在拒收标准范围内，对产品质量影响不明显，且生产又急需。
B 不超过库存量的1/3。
C 价格合理，有价值采购优势，且有搭配使用方案。
感观不合格的产品不需经过检测拒收，卫生指标达不到标准的一律拒收，掺杂使假的一律拒收并列入采购黑名单，理化指标为拒收标准的拒收。
4、签定质量保证协议
包括原料名称、产地、规格、等级、运输方式、运输过程中的质量保证手段、原料质量的检测方式及检测结果的认可标准、质量事故的处理规定等。必要时签订质量承诺书。
六、水产饲料原料的贮存
原料应贮存在干燥、阴凉、通风的地方，保持良好的温、湿度。原料库要专职管理，专人负责。做好卫生消毒工作。勤打扫、勤翻料，防鼠、昆虫、鸟害。禁止与腐蚀性易潮湿的物品放在一起，避光防止脂肪酸的氧化及对脂溶性维生素的破坏、变性。
1．油脂贮存器一定要密闭并及早加入抗氧化剂。
2．严格执行先进先出的原则，米糠、蚕蛹、鱼粉等高脂类原料库存时间不宜太长。
3．定期消毒。
定期打扫饲料加工设备、储存仓，严格执行消毒计划。
4．原料入库要分类垛放，下有垫板，各垛间应留有间隙。并做好原料标签，包括品名、时间、进货数量、来源、并按顺序垛放。    5．霉菌的检测与控制
原料中的霉菌毒素主要有黄曲霉毒素、赭曲霉毒素、镰刀霉毒素。霉菌毒素可通过高压液相色谱和薄层层析法进行定量分析。但多数饲料厂作不了这种分析，一种较为适用的方法是利用紫外线法测定原料是否被黄曲霉毒素等毒素污染（定性），该方法简单易操作、不用投入大量的资金。
常用的脱毒方法有物理分离、热处理、微生物降解、辐射、生物酶技术等。
应注意水产饲料原料在贮存过程质量的变化：营养指标的变化，如水分、脂肪氧化、新鲜度（VBN、组胺等）。卫生指标的变化，主要是毒素的累积变化。
七、常用水产饲料原料的质量控制
（一） 鱼粉
鱼粉因原料的来源、加工方法的不同而在质量上存在很大的差异。市场上掺假物的存在、以劣充好也影响了鱼粉的质量。因此，除常规成份分析外，选用适宜指标判定鱼粉质量具有重要的意义。
1. 蛋白质新鲜度指标——组胺和挥发性盐基氮
组胺是鱼粉中组氨酸经微生物脱羧反应转变而成的一种胺类物质。鱼粉中组胺含量越高，表明受微生物污染越严重。挥发性盐基氮VBN是指鱼粉由于细菌的作用，在腐败的过程中，使蛋白质分解产生氨及胺类含氮物质。鱼粉中组胺与挥发性盐基氮含量之间有相应的对应关系：即组胺含量越高，则挥发性盐基氮的含量就越高；反之组胺含量越低，挥发性盐基氮的含量就越低。我国GB/T19164－2003鱼粉国家标准规定特级鱼粉组胺含量≤300mg/kg，挥发性盐基氮含量≤110mg/100g；一级鱼粉组胺含量≤500mg/kg；挥发性盐基氮含量≤130mg/100g。鱼粉在加热过程中，游离组胺酸或组胺和酪蛋白结合形成组胺酸的酪蛋白混合物（肌胃糜烂素），造成鸡的肌胃糜烂或溃疡。对有胃鱼也易造成胃糜烂及体色变化。
2. 脂肪新鲜度指标——酸价
酸价是评价鱼粉脂肪新鲜度的重要指标之一。鱼粉的水分、脂肪含量高及保存条件差等因素都将加快脂肪氧化酸败，导致产生不良气味，酸价升高，影响鱼粉质量。酸价越高，表明鱼粉脂肪水解程度越严重。我国GB/T19164－2003鱼粉国家标准规定特级鱼粉酸价≤3mg/g，一级鱼粉酸价≤5mg/g。
3. 胃蛋白酶消化率
胃蛋白酶消化率是评价鱼粉质量的重要指标，它表示可被胃蛋白酶分解的蛋白质与粗蛋白的比例。测定这项指标能鉴别鱼粉中是否掺入其他高蛋白而不容易被动物吸收的原料如羽毛粉、皮革粉等。掺入这些原料的鱼粉，其粗蛋白质、真蛋白质含量比较高，但胃蛋白酶的消化率往往较低。我国GB/T19164－2003鱼粉国家标准规定特级鱼粉胃蛋白酶消化率88%～90%，一级鱼粉为86%～88%；秘鲁鱼粉标准中规定优质鱼粉的胃蛋白酶消化率应为94%～95%。
4. 氨基酸含量
在实际生产中，由于掺假物的存在，粗蛋白质含量高的鱼粉品质不一定好。使用氨基酸分析仪可以准确分析鱼粉各种氨基酸含量，从而判定其质量。优质鱼粉氨基酸总量在60%～68%，所含的11种必需氨基酸占总氨基酸(17种)的51%～55%，且氨基酸组成相对稳定。掺入水解羽毛粉，丝氨酸含量明显提高，可由正常的1.6%提高到3%，而蛋氨酸和赖氨酸的含量明显降低；掺入皮革粉，甘氨酸、精氨酸、脯氨酸含量明显增加；掺入血粉后，变化最明显的是亮氨酸，其次为组氨酸。
（二） 豆粕
大豆中的抗营养因子较多，有热敏性的胰蛋白酶抑制因子、尿酶及大豆凝集素，也有热稳定性的抗原蛋白、植酸、寡糖等。豆粕经高温（膨化）、溶剂浸提能消除部份抗营养因子。因此，豆粕不仅要检测蛋白质、氨基酸、水分等指标，其他如尿酶的活性、蛋白质溶解度等也需检测。
1．尿酶活性
通常以尿酶活性来表示豆粕中胰蛋白酶抑制因子等抗营养因子的破坏程度。尿酶活性高，说明豆粕中的抗营养因子没有得到有效的破坏；尿酶活性太低，说明豆粕受热过度，豆粕中的赖氨酸、精氨酸、胱氨酸等因受热过度而遭到破坏，营养价值降低。尿酶活性定义为在30℃和pH为7的条件下，每分钟每克豆粕制品分解尿素后，所释放的氨态氮的毫升数。美国饲料工业协会建议豆粕尿酶值为0.05～0.2，巴西为0.01～0.3；我国GB/T19541－2004饲用大豆粕标准规定，尿素酶活性≤0.3。内控标准为0.05-0.3。
2．蛋白质溶解度
蛋白质溶解度是指大豆粕样品在规定的条件下，可溶于0.2%氢氧化钾溶液中的粗蛋白质含量占样品中总粗蛋白质量的质量百分数，这是评估大豆加工过度或不足的有效方法。高温能使豆粕中的氨基酸与还原性化合物发生美拉德发应，从而降低了蛋白质的溶解度。我国GB/T19541－2004饲用大豆粕的国家标准规定0.2%氢氧化钾蛋白质溶解度≥70%。内控标准为70%-85%。
另外，粗纤维也是质量控制指标，如果不控制粗纤维指标，豆粕加工厂就会加入豆皮。卫生指标中控制霉菌＜5×104。
（三） 蚕蛹
蚕蛹(silkworm chrysalis)系桑蚕从幼虫向成虫过渡阶段的虫体。蚕蛹中含有一半以上的粗蛋白质和1／4以上的粗脂肪(表1)，既可用作蛋白质补充料，又可补充畜禽饲料能量之不足。但蚕蛹中含不饱和脂肪酸较多，蚕蛹油属半干性油，含亚油酸(1inoleic acid)36％～49％、亚麻酸(1inolenic acid)21％～35％，碱价190～194，碘价130～132，酸价8.1～7.2，过夏陈旧后呈白色或褐色，不便贮存。蚕蛹中含有几丁质(chitin，又名甲壳质)，是构成成虫及甲壳类动物外壳的主要成分，不易消化，在化验时作为“粗纤维”测值表现出来，但纯净的蚕蛹不应含有大量粗纤维，凡粗纤维含量过多者多系混杂有异物。蚕蛹中富含各种限制性氨基酸，可与鱼粉媲美，不仅富含赖氨酸，而含硫氨基酸，色氨酸含量也比鱼粉约高出1倍。必需氨基酸总量占总氨基酸的42.2%，必需氨基酸与非必需氨基酸的比例为0.73，不脱脂蚕蛹的有效能值与鱼粉的有效能值近似，是一种高能量、高蛋白质饲料。
表1.蚕蛹（全脂）营养成分：
粗蛋白%
粗脂肪%
水分%
钙%
总磷%
53.9
22.3
6.3
0.25
0.58
粗灰分%
赖氨酸%
蛋氨酸%
胱氨酸%
色氨酸%
2.9
3.06
1.30
1.44
1.25
碳水化合物
苏氨酸%
组氨酸%
亮氨酸%
异亮氨酸%
7.8%
1.65
0.96
3.0
2，23
蚕蛹因品种、加工或储存的差异，因此，质量差异也较大，粗蛋白从50%到60%，氨基酸含量也有差异。采购时应以新鲜、水分低、蛹完全且无僵蚕的优质蚕蛹。感观指标：呈黄褐色蛹粒状，有少量碎片，色泽一致，无发酵霉变、结块、哈味。理化指标：CP≥50%，水分≤10%，粗纤维≤4%，粗灰分≤4%。卫生指标：细菌总数＜2×106个/克，霉菌＜2×104个/克。
（四） 棉粕
棉粕粗蛋白质高，CP在40%左右甚至更高，但氨基酸组成不平衡，精氨酸含量高而赖氨酸及蛋氨酸含量均较低。棉绒及棉壳多则粗纤维高而蛋白低。主要质量控制指标：粗蛋白、粗纤维、水分等营养指标；游离棉酚、黄曲霉毒素、霉菌总数为卫生指标。根据GB/T21264-2007饲料用棉籽粕标准粗蛋白分为五级，而游离棉酚分为三级：低棉酚＜300mg/kg，中棉酚300-750mg/kg，高棉酚750-1200mg/kg。同时关注加工质量指标：蛋白溶解度，45%≤PS≤70%卫生指标中黄曲霉B1≤50ppb，霉菌≤5×104。
新加工工艺的脱酚棉籽蛋白：经过分步萃取脱酚浸提技术处理的脱酚棉籽蛋白粗蛋白及氨基酸均较高。
表2.棉籽蛋白、棉籽粕及大豆粕的氨基酸组成%
氨基酸组成
棉籽蛋白a
棉籽粕b
大豆粕c
赖氨酸
2.33
1.59
2.45
蛋氨酸
0.76 
0.45
0.64
胱氨酸
1.08
0.82 
0.66
苏氨酸
1.68
1.31
1.88
亮氨酸
3.10
2.35
3.20
异亮氨酸
1.82
1.30
1.76
苯丙氨酸
2.86

精氨酸
6.12
4.30
3.12
组氨酸
1.62
1.06
1.07
缬氨酸
2.40
1.74
1.95
脯氨酸
1.87
2.18 
2.18
酪氨酸 
1.48
1.19
1.53
注：a.国家饲料质量监督体验中心检测的数据结果； b、c.参照中国饲料成分营养价值表（2000 年第11 版）
（五） 菜粕
菜粕依菜籽品种及加工工艺而营养价值差异较大，依品种分有双低与普通菜籽之分，依加工工艺分有压榨、浸提、预压浸提之分。根据NY/T417-2000饲料用低硫苷菜粕标准，粗蛋白分为三级，卫生指标中要求异硫氰酸酯（ITC）+恶唑烷硫酮（OZT）均小于4000mg/kg，霉菌总数小于5×104。在采购过程中控制的营养指标仍为粗蛋白、粗纤维（灰分）、水分，加工质量关注蛋白溶解度，200型：35%≤PS≤55%，混合型：17%≤PS≤35%.不同加工工艺对赖氨酸水平影响大。
（六） 花生粕
花生粕适口性好、粗蛋白高、精氨酸含量高，但赖氨酸较低。注意控制黄曲霉毒素B1，粗蛋白要求≥45%，黄曲霉B1小于50ppb。
（七） 玉米酒糟(DDGS)
DDGS是玉米等谷物生产酒精中的一种副产物。根据干燥浓缩蒸馏废液的不同可分为干酒精糟(DDG)、可溶干酒精糟(DDS)和干酒精糟液(DDGS)。DDGS质量受酒精的生产工艺流程、谷物的发酵方法及副产品干燥方法等因素的影响。DDGS的颜色有金黄色和暗褐色，金黄色最好，不应含黑色小颗粒，应有发酵的气味，尝之微酸。DDGS颜色和气味与其营养成分密切相关，深颜色的DDGS营养价值低于浅颜色的DDGS，深颜色的DDGS通常伴有糊焦味或者烟熏味，会影响饲料的适口性。DDGS在烘干过程中往往会造成加热过度，加热过度容易发生美拉德发应，降低赖氨酸的利用率，吕明斌等研究表明，加热过度，赖氨酸含量由烘干前的0.82%降低到0.3%左右，发现中性洗涤纤维NDF与赖氨酸有很好的相关性。因此，NDF可以作为饲料厂日常检测DDGS热过度的指标。一般要求NDF≤32%为合格，NDF≤35%为最低质量要求。
DDGS应关注卫生指标（霉菌毒素），发酵过程并不能破坏霉菌毒素，因加工酒精过程中，一吨玉米等谷物产生30%左右的DDGS，因此霉菌毒素反而使其得到“浓缩”，DDGS中霉菌毒素的含量是谷物中的三倍左右。
表3.DDGS 霉菌毒素检测结果(郭福存)
种类
样品平均值(μg/kg)
样品最大值(μg/kg)
黄曲霉毒素
13
26.3
T2毒素
69
94.7
玉米赤霉烯酮
744.5
1423.1
赭曲霉毒素
82.5
162.8
烟曲霉毒素
1930
7380
呕吐毒素
3680
16750
卫生指标控制：黄曲霉毒素B1≤100ppb，呕吐毒素≤2.0mg/kg。
（八） 鱼油
鱼油中富含高不饱和脂肪酸，为水产饲料必需脂肪酸的主要来源，因海水鱼油资源紧缺，且高不饱和脂肪酸易氧化，鱼油的质量控制按行业标准SC/T3502-2000的要求为水分、酸价、过氧化值、不皂化物、碘价等。
水分：挥发物及杂质的存在，不利于鱼油贮存，鱼油易氧化变质。酸价（AV）与过氧化值（POV）的质量是评定鱼油质量的重要指标 ，酸价是评定鱼油酸败的程度，但如果在鱼油中掺入一定量的KOH溶液，酸价指标就会较低且稳定。过氧化值（POV），是反映鱼油氧化状况的一项重要指标，氢过氧化物（POV）是油脂氧化的第一个中间产物，称为初级氧化产物，是反映氧化初期状况的一项重要指标,其测定有多种方法，习惯上采用碘量法。碘量法易受样品颜色和空气中氧气干扰，测定时应注意。当氧化到一定程度，特别是过度氧化后（20meq/kg）此值反而下降。羰基化合物（TBARS）由初级氧化产物分解而来，称为次级氧化产物，其与硫代巴比妥酸(TBA)产生颜色反应，可在532nm测吸光值计算出羰基化合物含量。习惯上称之为硫代巴比妥酸反应物值(TBARS)，要求TBA值≤5ppm。以丙二醛为代表的醛类羰基化合物会继续氧化成酸，分析其影响时应注意。不皂化物指油脂皂化时，与碱不起作用，不溶于水的物质，包括甾醇、脂溶性维生素和色素等。碘价（I.V） 主要反映脂肪酸的不饱和状况。碘价越高，说明不饱程度越高,鱼油是高度不饱和的，检验它的碘值是衡量原料较为方便的，适宜的指标。鉴于单不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸碘价的差异不大。如果掺入大豆油（碘价120-140）或菜籽油（碘价110-126）等植物油，则碘价的参考值失去判定的方向。
表4.鱼油质量标准
指 标
精制鱼油（中国）
粗鱼油（中国）
日本标准
英国标准
台湾标准
一级
二级
一级
二级

水分及挥发物（%≤）
0.1
0.2
0.3
0.5

0.1

酸价/（mgKOH/g油）≤
1.0
2.0
8
15
2
8
2
过氧化值/（mmol/kg）≤
5.0
6.0
6
10
5
6
10
不皂化物%≤
1.0
3.0
-
-

杂质（%）≤
0.1
0.1
0.3
0.5

碘价/（克碘/100g油）≥
160
100

基于以上原因，鱼油检测还应分析其脂肪酸组成才能进一步鉴定是否掺假。利用GB/T17376-1998和GB/T17377-1998气相色谱法检测鱼油脂肪酸含量。鱼油的脂肪酸组成中高不饱和脂肪酸（HUFA）较高，判断是否为海水鱼油的三个标准：①二十碳五烯酸（EPA）+二十二碳六烯酸（DHA）的总量要求23-30%；②DHA/EPA=1/1-1.8，③DHA≥10%.
表5.秘鲁鱼油脂肪酸组成
脂肪酸名称
含量(%)
脂肪酸名称
含量(%)
肉豆蔻酸C14:0
7.46
亚麻酸C18：3
0.45
棕榈酸C16:0
15.12
Y-亚麻酸Y-C18:3
0.32
棕榈油酸C16:1
8.56
二十碳烯酸C20：1
1.05
硬脂酸C18:0
3.08
花生四烯酸C20：4
1.30
油酸C18:1
6.78
EPA C20:5
18.53
亚油酸C18:2
0.87
DHA C22:6
11.28
 仪器名称:Aglilent4890D气相色谱仪

表6.美国鱼油脂肪酸组成
脂肪酸名称
含量(%)
脂肪酸名称
含量(%)
肉豆蔻酸C14:0
9.47
亚麻酸C18：3
1.20
棕榈酸C16:0
17.40
Y-亚麻酸Y-C18:3
0.46
棕榈油酸C16:1
11.34
二十碳烯酸C20：1
0.70
硬脂酸C18:0
1.88
花生四烯酸C20：4
1.30
油酸C18:1
4.79
EPA C20:5
14.53
亚油酸C18:2
0.08
DHA C22:6
10.73
 仪器名称:Aglilent4890D气相色谱仪

引文：略

酵母培养物XP对团头鲂（Megalobrama amblycephala）肠道粘膜绒毛的影响

李高锋 收稿日期：
作者简介：李高锋（1983-），男，汉，河南省襄城县人，广州市澳洋实业有限公司，硕士，主要从事水产动物营养与饲料学方面的研究。E-mail:lgf1983@
作者简介：叶元土（1964-），男，汉，四川广安人，苏州大学基础医学与生物科学学院，教授，主要从事水产动物营养与饲料学方面的研究。E-mail：yeyuant@
*通讯作者：叶元土，E-mail：yeyuant@

，2 叶元土1* 张俊1 蔡春芳1 李婧1 诸葛燕1 甑玉国3

1.苏州大学基础医学与生物科学学院，苏州 215123；
2.广州市澳洋实业有限公司，广州 5105453；
3.达农威生物发酵工程技术有限公司，深圳 518038
动物的肠道不仅仅是动物的营养器官，而是集内分泌、免疫、屏障和营养等为一体的功能复杂的重要器官。一旦肠功能衰竭，一方面，内环境平衡破坏，营养代谢障碍；另一方面，肠粘膜屏障受损，引起肠原性感染和内毒素血症。对于无胃的鲤科鱼类，肠粘膜不但在对食物的消化、吸收上至关重要，而且在免疫防御作用、代谢方面具有非常重要的作用，在鱼类生长和发育的过程中发挥着极其重要的作用。饲料营养物质、饲料中特定的成分如抗生素、多糖等对鱼类肠道粘膜的生长、发育产生重要的影响。马力等1989年和李玉和等1992年对淡水硬骨鱼类消化道进行了扫描电镜观察和报道，叶元土[106、107、108、109]等已经对草鱼、长吻鮠、南方大口鲶、黄鳝等鱼类的肠道进行了详细的扫描电镜观察和研究，但关于团头鲂肠道上皮组织的超微结构特征研究尚未见报道。本试验是在团头鲂摄食含有酵母培养物XP的饲料100天后，对其前肠、中肠粘膜表面形态结构进行扫描电镜观察，以探讨酵母培养物XP对团头鲂肠道粘膜生长、发育的影响。
1 材料与方法
1.1 试验鱼及分组
团头鲂（Megalobrama amblycephala）购于苏州市新时代特种养殖场，为池塘培育的当年鱼种。试验鱼初始体重为9.20±0.2g。按体重接近的原则随机分为8组，每组设3个平行，共24个养殖桶，每桶放鱼15尾。
1.2 试验饲料
使用实用饲料原料组成试验配方，粗蛋白质含量均为28%，见表1。主要原料为进口鱼粉、豆粕、棉粕、菜粕、麦麸、面粉、混合油（豆油菜油1：1）、预混料等。饲料原料经粉碎过40目筛，混合均匀后用小型颗粒饲料机加工成直径1.5㎜的颗粒饲料备用,饲料加工过程中温度保持在65℃～70℃,持续时间约40秒，饲料-4℃冰柜保存备用。
酵母培养物XP共设0mg/kg、500mg/kg、1000mg/kg、1500mg/kg、2000mg/kg、2500mg/kg的剂量梯度组，同时，设计含酵母培养物XP 1000mg/kg、2000mg/kg两个间断投喂组，共计8个试验组，每个试验组设3个平行，合计24个养殖桶。
酵母培养物在配方中增加时，相应减少面粉的用量，以保持配方总量的平衡。每个养殖桶与试验饲料的对应采用随机方法，以避免养殖桶位置不同带来的养殖效果的差异。
表1 基础饲料配方（风干基础,‰）和营养成分(风干基础,%)
Table 1 Formulation and composition of experimental diet (air-dry basis,‰，%)
原料
Ingredient
0mg/kggroup
500mg/kggroup
1000mg/kggroup
1500mg/kggroup
2000mg/kg
group
2500mg/kg
group
麸皮wheat bran
100
100
100
100
100
100
面粉wheat middling
135
134.5
134
133.5
133
132.5
细米糠rice bran
100
100
100
100
100
100
豆粕soybean meal46%
60
60
60
60
60
60
菜粕rapeseed meal
235
235
235
235
235
235
棉粕cottonseed meal
235
235
235
235
235
235
鱼粉fish meal
30
30
30
30
30
30
肉骨粉meat and bone meal
20
20
20
20
20
20
磷酸二氢钙Ca(H2PO4)2
20
20
20
20
20
20
沸石粉Zeolite flour
15
15
15
15
15
15
膨润土Bentonite
15
15
15
15
15
15
混合油mixed oil
25
25
25
25
25
25
预混料Premix
10
10
10
10
10
10
酵母培养物XPyeast culture XP
0
0.5
1
1.5
2
2.5
合计Total(kg)
1000
1000
1000
1000
1000
1000
成本cost(yuan/T,RMB)
1916
1915
1914
1914
1913
1912
粗蛋白crude protein
28.4
28.39
28.38
28.37
28.37
28.36
可消化能digestible energy(MJ/Kg)
2.63
2.63
2.63
2.63
2.63
2.63
磷phosphorus
1.45
1.45
1.45
1.45
1.45
1.45
粗灰份crude ash
11.27
11.27
11.27
11.27
11.27
11.27
粗纤维crude fiber
7.26
7.26
7.26
7.26
7.26
7.25
粗脂肪crude fat
5.37
5.37
5.37
5.37
5.36
5.36

The digestible energy is calculated value. Other nutrient levels are measured values;The premix provides following for per kg diet：Cu：5 mg·kg-1、Fe：180 mg·kg-1、Mn：35 mg·kg-1、Zn：120 mg·kg-1、I：0.65 mg·kg-1、Se：0.5 mg·kg-1、Co：0.07 mg·kg-1、Mg：300 mg·kg-1、K：80 mg·kg-1、VA：10 mg·kg-1、VB1：8 mg·kg-1、VB2：8 mg·kg-1、VB6：20 mg·kg-1、VB12：0.1 mg·kg-1、VC：250 mg·kg-1、VB3：20 mg·kg-1、VB5：25 mg·kg-1、VD3：4 mg·kg-1、VK3：6 mg·kg-1、叶酸(foloc acid)：5 mg·kg-1、肌醇(inositol)：100 mg·kg-1；
1.3 饲养管理
养殖试验在室内循环养殖系统进行，每桶水体0.33 m3圆形养殖桶中养殖。以曝气的自来水为水源，每天换水量为总水量的1/3，以减少残余饲料与粪便对水体的影响，养殖水经过滤、沉淀后流回蓄水池，经过增氧由水泵抽回各养殖桶。在试验的后期（10月以后到试验结束）由于气温下降，采用电加热的方法控制水温。具体方法是用潜水式加热棒在水处理池进行加热，加热后的水进行各养殖桶，各养殖桶流出的水再汇集到水处理池进行过滤、加氧和加热，如此反复循环。饲养期间的水质条件为：水温26.5±3.0℃，DO>6.0 mg·L-1，pH7.2±0.2，NH4+-N 0.25±0.05 mg·L-1，NO2—N 0.04±0.01 mg·L-1，硫化物<0.05 mg·L-1。试验鱼经过食盐水浴消毒，暂养一周后开始正式试验，正式试验时间为2007年8月13日至11月30日，共100天。
1.4 饲料投喂情况
试验期间饲料每天投喂量为鱼体重的2.0%~3.0%，分3次投喂（8:00、12:30、17:00），根据摄食情况适当调整。
间断组投喂具体操作方法为：投喂对照组饲料3周后，分别投喂含酵母培养物XP 1000 mg/kg、2000 mg/kg试验饲料3周；之后又投喂对照组饲料3周，再分别投喂含酵母培养物1000 mg/kg、2000 mg/kg试验饲料3周；如此反复，直到试验结束。
1.5小肠绒毛形态的观察
1.5.1 样品采集
活体常规解剖腹部，取出肠道，按前、中、后肠分段。前肠为肠道第一个折点之前的部分，中肠为第一个折点和最后一个折点之间的部分，后肠为最后一个折点之后的部分。取前肠、中肠，取材部位均在每段中央部位，取1～2cm左右的肠管1～2块，纵向剖开并暴露肠粘膜的部分，用0.1mol/l(pH7.3)的磷酸缓冲液冲洗3～4次，然后，立即将其投入4℃的3％戊二醛溶液（pH7.4）中固定24～48h。取出洗涤，经适当修剪后，放入1％的锇酸钟后固定1小时，取出后缓冲液洗三次。乙醇系列梯度脱水，醋酸异戊酯置换，临界点干燥，镀膜(用常规扫描电镜制备方法制备)，经扫描电镜观察并摄影。
2 试验结果
2.1常规解剖观察
前肠为第一个折点之前的部分，肠壁厚，肠管粗大，且硬度大，内容物多；中肠为第一个折点至第二个折点之间的部分，肠壁较前肠为薄，肠管变小，内容物较多；后肠为最后一个折点之后的部分，肠管较细，内容物少，偶有充气现象，冲气时肠管呈微白色，中肠的长度明显长于前肠和后肠，中肠是团头鲂消化、吸收食物的主要部位。解剖观察到试验用团头鲂肠道在腹腔中回旋盘转，排列复杂，从前肠到后肠，肠管直径逐渐变细，肠壁逐渐变薄。投喂酵母培养物XP的各试验组的常规解剖观察结果没有显著性的差异。
2.2肠粘膜扫描电镜观察
2.2.1肠粘膜褶皱
各试验组团头鲂前肠粘膜褶皱扫描电镜结果见图版Ⅰ，前肠褶皱呈S或Z型,排列较为紧密。由图Ⅰ可见，从XP 1500mg/kg组开始，随着酵母培养物XP添加量的增加, 前肠褶皱排列更加逐渐紧密；褶皱表面粘附的食糜颗粒在XP1000mg/kg组有明显的增加，在2000mg/kg和2500mg/kg组更为明显；相同XP使用的连续与间断组相比较，间断组褶皱表面食糜颗粒明显少于对应连续试验组。
各试验组团头鲂中肠粘膜褶皱扫描电镜结果见图版Ⅱ。对照组粘膜褶皱表面粘附的食糜颗粒较多，随着酵母培养物XP添加量的增加, 粘膜褶皱排列更加逐渐紧密，尤其是在XP 2000mg/kg组中肠褶皱排列更为紧密；各组表面附着颗粒也明显比前肠减少；相同XP使用的连续与间断组相比较，间断组褶皱形状逐渐变直，粘膜褶皱排列更加紧密。
上述结果表明，在饲料中添加酵母培养物XP后，前肠、中肠的粘膜褶皱排列有更为紧密的趋势，在XP 1500mg/kg组和2000mg/kg组最为明显，而在低剂量组（如500mg/kg组）和高剂量组（如2500mg/kg组）不明显；间断投喂组与连续投喂组相比较，在中肠的粘膜褶皱排列有更为紧密的趋势。
2.2.2肠道粘膜绒毛密度
各试验组的前肠粘膜扫描电镜结果见图版Ⅲ。根据各组电子显微镜照片，选取适宜的区域统计绒毛的数量，并计算绒毛的密度，结果见图表2。
表2 团头鲂肠道微绒毛密度（个／um2）
Tab.2 the density of intestinal villus of Megalobrama amblycephala
组别
group
前肠密度 个／um2
villus density of foregut
中肠密度 个／um2
villus density of mid-gut
前、中肠平均密度 个／um2
average villus density
0 mg/kg
the control group
78.2
79.0
78.6
500 mg/kg
the series group
66.4
92.9
79.6
1000 mg/kg
the series group
73.4
88.7
81.1
1500 mg/kg
the series group
123.3
139.8
131.5
2000 mg/kg
the series group
95.9
83.5
89.7
2500 mg/kg
the series group
80.7
93.5
87.1
1000 mg/kg间断组 the disconnected group
65.0
94.5
79.8
2000 mg/kg间断组
the disconnected group
103.0
100.5
101.8
结合图Ⅲ和表2结果，前肠对照组的绒毛密度较低少，其它各试验组粘膜绒毛的密度随酵母培养物XP的增加而有明显的变化，其中酵母培养物XP1500 mg/kg连续组粘膜绒毛密度比对照组提高57.61%，为最高；酵母培养物XP 2000 mg/kg连续组和2000 mg