重金属盐检查标准操作规程.doc

XXXX制药股份有限公司
标准操作规程
标 题：重金属盐检查标准操作规程
生效日期 年 月 日 页次：1/6
编号：SOP－QC－055－01
颁发部门：质量管理部
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分发部门： QC。

目的：建立一个重金属盐检查标准操作规程，正确配制。
范围：适用于QC重金属盐检查。
责任者：QC主任、化验员。
规程：
1. 本标准引自《中国药典》2000年版附录。
2. 程序
2.1. 简述：
重金属是指在规定实验条件下能与显色剂作用的金属盐类杂质。中国药典2000年版采用硫代乙酰胺试液或硫化钠试液作显色剂，以铅的限量表示。 由于实验条件不同，分为四种检查方法：第一法适用于供试品不经有机破坏，在酸性溶液中显色的重金属限量检查；第二法适用于供试品需灼烧破坏，取炽灼残渣项下遗留的残渣，经处理后在酸性溶液中显色的重金属限量检查；第三法用来检查能溶于碱而不溶于稀酸（或在稀酸中即生成沉淀）的药品中的重金属；第四法用微孔滤膜过滤，使重金属硫化物沉淀富集成色斑，用于有色溶液或重金属限量低的品种。四种方法显示的结果均为重金属硫化物微粒均匀混悬在溶液中所呈现的颜色，采用滤膜法可获得“色斑”；如果重金属高、浓度大，加入显色剂后放置时间长，就会有硫化物聚集下沉。
重金属硫化物生成的最佳PH值是3.0—3.5，选用醋酸盐缓冲液（PH3.5）2ml调节PH值较好，显色剂硫代乙酸胺试液用量经实验也以2ml为佳，显色时间一般为2分钟。以10—20µgPb与显色剂所产生的颜色为最佳目视比色范围。在规定实验条件下，与硫代乙酰胺试液在弱酸条件下产生的硫化氢呈色的金属离子有银、铅、汞、铜、镉、铋、锑、锡、砷、锌、钻与镍等。由于在药品生产过程中遇到铅的机会较多，且铅易积蓄中毒，故以铅作为重金属的代表，用硝酸铅配制标准铅溶液。
2.2. 仪器与用具
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2.2.1. 纳氏比色管: 应注意选择各管之间的平行性、玻璃色泽一致，内径、刻度标线高度一致。比色管洗涤时避免划伤内壁。过滤器见中国药典2000年版二部附录重金属检查法第四法附图，由具有螺纹丝扣并能密封的上、下二部分以及垫圈、滤膜和辅助滤板组成。
2.2.2. 过滤器上盖部分A的入口处应能与50ml注射器紧密联接，过滤器下部F的出口处能套上一合适橡皮管。A与F能通过螺纹密封。垫圈应内径光滑，大小相同，以使斑点边缘圆整、清楚、大小一致。在滤器上加上橡皮垫圈，既可使滤膜与滤板紧密结合，又可避免在旋紧滤器接头时扭曲或损坏滤膜。滤膜的直径为l0mm，孔径为3.0µm，使用前在水中浸泡24小时以上，可使色斑均匀。50ml注射器，应能与滤器上盖入口处紧密联接。
2.3. 试药和试液：标准铅溶液 精密称取在105℃干燥至恒重的硝酸铅0.1598g，置l00ml量瓶中，加硝酸5ml与水50ml溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液10ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得（每lml相当于10ug的Pb）。硫代乙酰胺试液、硫化钠试液、醋酸盐缓冲液（PH3.5）与抗坏血酸等均按药典规定。稀焦糖溶液取蔗糖或葡萄糖约5g，置磁坩埚中，在玻璃棒不断搅拌下，加热至呈现棕色糊状，放冷，用水溶解成约25ml，滤过，贮于液瓶中备用。临用时，根据供试液色泽深浅，取适当量调节使用。
2.4 操作方法 第一法
2.4.1. 取25ml纳氏比色管两支，编号为甲、乙。
甲管中加标准铅溶液一定量与醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml，加水或该药品项下规定的溶剂稀释成25ml。乙管中加入该药品项下规定的方法制成的供试液25ml。如供试液带颜色，可在甲管中滴加少量稀焦糖溶液或其它无干扰的有色溶液，使其色泽与乙管一致。在甲、乙两管中分别加硫代乙酰胺试液各2ml，摇匀，放置2分钟，同置白色衬板上，自上向下透视，乙管中显出的颜色与甲管比较，不得更深。
如在甲管中滴加稀焦糖溶液仍不能使颜色一致时，可取该药品项下规定的2倍量的供试品和试液，加水或该药品项下规定的溶剂使成30ml，将溶液分成甲乙2等分，乙管中加水或该药品项下规定的溶剂稀释成25ml；甲管中加入硫代乙酰胺试液2ml，摇匀，放置2分钟，经滤膜（孔径3µm）滤过，
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然后甲管中加入标准铅溶液一定量，加水或该药品项下规定的溶剂使成25ml，再在乙管中加硫代乙酰胺试液2ml，甲管中加水2ml，照上述方法比较，即得。
供试品如含高铁盐影响重金属检查时，可取该药品项下规定方法制成的供试液，加抗坏血酸0.5—1.0g，并在对照液中加入相同量的抗坏血酸，再照上述方法检查。
配制供试品溶液时，如使用的盐酸超过1.0ml（或与盐酸1.0ml相当的稀盐酸），氨试液超过2ml，或加入其他试剂进行处理者，除另有规定外，对照液中应取同样同量的试剂量在瓷皿中蒸干后，加醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml与水15ml溶解后，移置甲管中，加标准铅溶液一定量，再加水稀释成25ml。
2.4.2. 第二法
2.4.2.1. 除另有规定外，取在500—600℃灼烧的炽灼残渣项下遗留的残渣，加硝酸0.5ml蒸干，至氧化氮蒸气除尽后，放冷，加盐酸2ml，置水浴上蒸干后加水15ml，滴加氨试液至对酚酞指示液显中性，再加醋酸盐缓冲液（PH3.5）2ml，微热溶解后，移至乙管中，加水稀释成25ml。
2.4.2.2. 如不取炽灼残渣项下遗留的残渣，则可取供试品一定量，缓缓炽灼至完全炭化，放冷，加硫酸0.5－1.0ml，使恰湿润，用低温加热至硫酸除尽后，加硝酸0.5ml，蒸干，至氧化氮蒸气除尽后，放冷，在500—600℃炽灼使完全灰化，再按2.4.2.1.，“…放冷，加盐酸2ml．……”起，至加水稀释成25ml。
取配制供试溶液的试剂，置瓷皿中蒸干后，加醋酸盐缓冲液（PH3.5）2ml与水15ml。微热溶解后，移至甲管中，加标准铅溶液一定量，加水稀释成25ml。
2.4.3. 第三法
取25ml纳氏比色管两支，编号为甲、乙。除另有规定外，取供试品适量，加氢氧化钠试液5ml与水20ml溶解后，置乙比色管中。取一定量的标准铅溶液，用同样处理，置甲管中。于甲、乙两管中各加硫化钠试液5滴，摇匀。甲、乙管同置白色衬板上，自上向下透视，乙管中所显的颜色与甲管比较，不得更深。
2.4.4. 第四法
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2.4.4.1. 标准铅斑的制备：精密量取标准铅溶液一定量，置小烧杯中，用水或该药品项下的溶剂稀释成10ml，加入醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml与硫代乙酰胺试液1.0ml，摇匀，放置10分钟，用50ml注射器转移至上述滤器中进行压滤（滤速约为每分钟lml），滤毕取下滤膜，放在滤纸上干燥，即得。
2.4.4.2. 检查法 ：照该药品项下规定制成的供试液10ml，照2.4.4.1.标准铅斑的制备，自“加入醋酸盐缓冲液（pH3.5) 2ml”起，依法操作，将生成的色斑与标准铅斑比较，不得更深。
若供试溶液有颜色或浑浊，应对换辅助滤板与滤膜的位置，进行预滤，如滤膜上有污染，应换滤膜再滤，直至滤膜不再染色；反转辅助滤板与滤膜的位置，然后取滤液10ml，照2.4.4.1.标准铅斑制备，自“加入醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml”起，依法操作，所得供试液铅斑与标准铅斑比较，不得更深。
2.5. 注意事项：标准铅溶液应在临用前精密量取标准铅贮备液新鲜稀释配制，以防止硝酸铅水解而造成误差，配制标准铅溶液使用的玻璃仪器，均不得含有铅。硫代乙酰胺试液与重金属反应的最佳pH值是3.5，故配制醋酸盐缓冲液（pH3.5)时，要用pH计调节，硫代乙酰胺试液加入量以2ml时呈色最深；第四法中检测限度为2—5µg的Pb，因体积小，所以用量为1.0ml。硫代乙酰胺试液显色剂的最佳显色时间为2分钟，除第四法由于检测限量低，且为了方便过滤，显色时间为10分钟外，第一、二法均为放置2min。
为了便于目视比较，第一、二和三法中的标准铅溶液用量以 2ml（相当于 20 µg的Pb ）为宜，小于1m1或大于3ml，呈色太浅或太深均不利于目视比较。如需将炽灼残渣项下遗留的残渣作重金属检查时，则炽灼温度必须控制在500—600℃。实验证明、炽灼温度在700℃以上时，多数重金属盐都有不同程度的损失；以铅为例，在700℃经6小时炽灼，损失达68%。某些供试品（如安乃近，诺氟沙星等）在炽灼时能腐蚀瓷坩埚而带入较多的重金属，应改用石英坩埚或铂坩埚操作。
炽灼残渣加硝酸处理，必须蒸干，将亚硝酸除尽，否则亚硝酸会使硫代乙酰胺水解生成的硫化氢因氧化析出乳硫，影响检查。蒸干后残渣加盐酸处理，使重金属转化为氯化物，在水浴上蒸干赶除多余盐酸，加水溶解，加入酚酞指示液1滴，再逐滴加入氨试液，边加边搅拌，直到溶液刚显浅红色为止，再加醋酸盐缓冲液（PH3.5），使供试液的PH调节至3.5。供试品中如含
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有高铁盐，在弱酸性溶液中会使硫代乙酰胺水解生成的硫化氢进一步氧化析出乳硫，影响检查，可加入抗坏血酸将高铁离子还原为亚铁离子而消除干扰。
如供试品自身为重金属的盐，在检查这些药品中其他重金属时，必须先将供试品本身的金属离子除去再进行检查。如枸檬酸铁铵中检查铅盐时，利用Fe3在一定浓度的盐酸中形成HFeCI26，用乙醚提取除去，再调节供试液至碱性，用氰化钾试液掩蔽微量的铁后进行检查；右旋糖酐铁注射液中重金属检查，也是在一定浓度的盐酸中，用醋酸异丁酯提取除去铁盐后进行检查。
药品本身生成的不溶性硫化物，影响重金属检查，可加入掩蔽剂以避免干扰。如硫酸锌和葡萄糖酸锑钠中铅盐检查，是在碱性溶液中加入氰化钾试液，或在中性溶液中加入酒石酸，使锌离子或锑离子生成稳定的络合物，再依法检查。
为了消除盐酸或其他试剂可能夹杂的重金属，故在配制供试品溶液时，如使用盐酸超过1.0ml（或与盐酸1.0ml相当的稀盐酸）或使用氨试液超过2ml，以及用硫酸或硝酸进行有机加入其他试剂进行处理者，除另有规定外，对照溶液应取同样量试液蒸干后，依法检查。当采用第四法时，将注射器套于滤器上后，让注射器内管自然下降，产生的压力比较均匀，而且对于大多数样品溶液过滤速度达到每分钟1ml左右；对于较粘稠的样品溶液，可施加一均匀压力使达到该速度，以保证色斑上色调的均匀性。滤过时如滤器中存在气泡则会影响色斑质量，故在装置辅助滤板、滤膜和垫圈时应以水排除气泡。滤器上端与注射器联接处的尺寸大小应以两者能严密嵌合为宜，以免滤过的溶液溢漏；必要时可改用乳管联接。
2.6. 记录与计算
2.6.1. 记录 必须记录采用的方法，样品取样量，标准铅溶液取用量，操作过程中使用的特殊试剂、试液名称和用量或对检查结果有影响的试剂用量，实验过程中出现的现象及实验结果等。
2.6.2. 计算
2.6.2.1. 标准铅溶液浓度的计算 1mol的硝酸铅［Pb（NO3）2］的质量为 331.2g，含铅（Pb）207.2g；称取硝酸铅0.1598g配成1000ml贮备液，含Pb量为：0.1mg/ml 贮备液依法稀释十倍后所得标准铅溶液的浓度为每1ml含10µg的Pb。
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2.6.2.2. 重金属限量计算 进行检查时，如取供试品1.0g与标准铅溶液 2.0ml制成的对照液比较，计算重金属限量为20ppm。
2.6.2.3. 标准铅溶液取样量计算 根据取供试品量及限量计算 如取供试品2.0g，依法检查，规定含重金属不得过百万分之五，应取标准铅溶液（10µgPb/ml）多少毫升？1.0ml
例如葡萄糖注射液中重金属检查，取本品适量（约相当于葡萄糖3g），必要时，蒸发至约 20ml，放冷，加醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml与水适量使成25ml，依法检查，按葡萄糖含量计算，含重金属不得过百万分之五，计算标准铅溶液取用量。1.5ml。
2.7. 结果判定
2.7.1. 第一、二、三法，甲管与乙管比较，乙管所呈颜色浅于甲管，判为符合规定。
2.7.2. 第四法，供试液所得斑点浅于标准铅斑的颜色，判为符合规定。