层析柱洗脱条件对保健品中总皂苷含量测定的影响.pdf

第10 期（总第58 5期）2023年10 月文章编号：16 7 1-9 6 46（2 0 2 3）10 a-0065-03层析柱洗脱条件对保健品中总皂苷含量测定的影响杜晶，陈昭，杨子忠，李亚军，吴媛媛，甘琴，*冯雪萍（湖北省宜昌市安琪纽特股份有限公司，湖北宜昌4430 0 3)摘要：为建立紫外分光光度法测定保健食品苦瓜硒铬酵母胶囊中总皂苷含量的方法。以Amberlite-XAD-2型大孔树脂和中性氧化铝作为层析柱，采用水乙醇溶剂系统对样品的皂苷成分进行提取、纯化、富集和洗脱，人参皂苷Re作为对照品，以高氯酸显色后利用紫外分光光度法于波长56 0 nm处测定其总皂苷含量，并进行方法学考查。通过对前处理进行优化，以7 0%乙醇提取、吸附30 min并采用2 0 mL水进行洗脱，总皂苷提取含量为1.59 6%，可达最高。通过线性、回收率和精密度进行方法学考查，人参皂苷Re在0 0.16 7 mg/mL的质量浓度范围内呈良好线性关系，相关系数R?为0.9 9 9 5；总皂苷加标回收率为10 0.8%10 4.6%，平均回收率为10 2.6%，RSD为1.5%；精密度试验平均含量为1.0 9%，RSD为2.8%，表明保健品总皂苷的提取方法优化使得提取率高且稳定可行。此方法操作简单，准确性好、重复性好，适用于保健食品中总皂苷的含量测定。关键词：人参皂苷Re；紫外分光光度计法；保健食品；检测中图分类号：R151.3Influence of Chromatography Column Elution Conditions on the Determination ofTotal Saponins in Health Products on Coefficient of Variation MethodDU Jing,CHEN Zhao,YANG Zizhong,LI Yajun,WU Yuanyuan,GAN Qin,FENG Xueping(Hubei Provincial Yichang Angel Nutritech Co.,Ltd.,Yichang,Hubei 443003,China)Abstract:To establish a method for the determination of total saponins in dietary supplement momordica charantiaselenium-chromium yeast capsules by UV Spectrophotometer.Using Amberlite-XAD-2 macroporous resin and neutral aluminaas chromatographic column,the saponins were extracted,purified,enriched and eluted by water-ethanol solvent system.Ginsenoside Re was used as control,the content of total saponins was determined by UV Spectrophotometer at 560 nm afterdeveloping with perchloric acid.The results showed that the extraction content of total saponins was 1.596%,which was thehighest by optimizing the pretreatment,extracting with 70%ethanol,adsorbing for 30 min and eluting with 20 ml water.Thelinearity,recovery and precision of ginsenoside Re showed a good linear relationship in the range of 00.167 mg/mL,and thecorrelation coefficient R2 was 0.999 5;the average recoveries of total saponins were 100.8%104.6%,the average recoverieswere 102.6%and RSD were 1.5%,the average contents of total saponins were 1.09%and RSD were 2.8%,the resultsshowed that the optimization of the extraction method of total saponins made the extraction rate high,stable and feasible.Themethod was simple,accurate and reproducible,and was suitable for the determination of total saponins in dietary supplement.Key words:ginsenoside(Re);ultraviolet spectrophotometer method;health food;detection人参为五加科（Araliaceae）植物人参PanaxginsengC.A.Mey的干燥根和根茎，常见于我国东北和东南亚地区，是一种药食两用的养生珍品。人参中含有多种活性物质，包括人参皂苷、多糖、脂肪酸、挥发油、氨基酸和蛋白质等，其主要活性物质为人参皂苷，药理作用十分广泛叫。人参皂苷是一种固醇类化合物，又被称之为三皂苷，可分为极性皂苷和非极性皂苷。近年来，国内外研究者对人参皂苷的主要化学成分、药理作用等方面进行了大量研究，包括人参皂苷与炎症反应2、氧化应激3、细收稿日期：2 0 2 2-0 9-2 2作者简介：杜晶（19 8 6 一），男，专科，工程师，研究方向为营养健康食品的质量。通讯作者：冯雪萍（19 8 6 一），女，硕士，工程师，研究方向为药品与营养健康食品的质量。农产品加工Farm Products Processing文献标志码：Adoi:10.16693/ki.1671-9646(X).2023.10.015胞调亡、细胞自噬、线粒体损伤5之间的关系，以及在抗动脉粥样硬化回、抗心律失常、抗心肌缺血图等方面具有重要功效。随着社会经济快速发展和人们保健意识逐渐提升，市场对人参系列产品的需求进一步增加，利用现代科学技术开发具有抗氧化、抗炎、抗衰老等作用的人参系列保健功能食品至关重要，人参皂苷作为人参的主要活性物质，其含量测定是检验保健食品的重要质量标准之一。目前，总皂苷含量检测方法较多，主要包括紫外分光光度法、高效液相色谱法10-12 和液质联用法No.10Oct.66等，根据检测要求、分析成本、适用范围及样品所含皂苷类型等因素综合考虑，采用的检测方法不尽相同。高效液相色谱法虽然检测灵敏度高，准确性好，但是操作繁琐、杂质干扰较多，液质联用法对实验室设备要求较高，分光光度法相对其检测手段操作简单，同样检测灵敏度高、准确度好、重现性好，因此成为当前保健食品中总皂苷常用的检测方法。通过利用水乙醇溶剂系统对样品的皂苷成分进行提取、纯化、富集和洗脱过程进行优化，使得保健食品苦瓜硒铬酵母胶囊中总皂苷的提取率大大提高，并采用紫外分光光度计测定苦瓜硒铬酵母胶囊中总皂苷含量，其方法简便准确、重复性好且稳定可行，以期为含有人参皂苷成分的保健食品含量测定提供思路与方法。1材料与方法1.1仪器与试剂TU-1901型紫外可见光分光光度计，北京普析产品；XSR205DU型分析天平，瑞士MettlerToledo公司产品；ME204型分析天平，瑞士Mettler公司产品；KQ-400DE型数控超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司产品。保健食品样品（苦瓜硒铬酵母胶囊），安琪纽特股份有限公司提供；人参皂Re对照品（纯度：96.0%），中国食品药品检定研究院提供；Amberlite-XAD-2型大孔树脂，美国Sigma公司提供；乙醇（分析纯），西陇科学提供；香兰素（9 9.5%），源叶生物公司提供；高氯酸（分析纯），天津市鑫源化工提供；中性氧化铝（分析纯），麦克林提供；冰乙酸（分析纯），西陇科学公司提供。1.2试验方法1.2.1溶液配制稀释剂/空白溶液：7 0%乙醇。对照品储备液：精密称取人参皂苷Re标准品4.35mg，置于2 5mL的棕色容量瓶中，加甲醇溶解，定容，混匀。对照品工作液：分别精密量取一定体积的对照品储备液，配制成人参皂苷Re质量浓度为0.0 17，0.033，0.0 6 7，0.10 0，0.134，0.16 7 m g/m L的系列标准工作液。供试品溶液：取苦瓜硒铬酵母胶囊10 粒，剪开胶囊，倒出内容物，搅拌混合均匀，备用。称取混合均匀的内容物1于10 0 mL容量瓶中，加人适量稀释剂，超声30 min，冷却后定容至10 0 mL容量瓶中，摇匀，放置待用。1.2.2试验方法称取1g样品于10 0 mL容量瓶中，以体积分数70%的乙醇为溶剂进行超声提取，稀释定容后，滤农产品加工过。以Amberlite-XAD-2型大孔树脂和中性氧化铝作为层析柱，加入1mL试样，用水清洗，再用7 0%乙醇洗脱，收集洗脱液于蒸发皿中蒸干，加入质量分数为5%的香草醛冰乙酸溶液0.8 mL和3.2 mL高氯酸，在6 0 水浴上加热15min，取出，冰浴冷却后准确加入10 mL冰乙酸，以1cm比色皿于波长560nm处进行比色。1.2.3计算样中总皂苷含量X(%)=式中：X一试样中总皂苷量（以人参皂苷Re计），g/100 g;C一-通过回归方程计算出的供试品质量，8；M证试样的质量，8。2结果与分析2.1提取溶剂和吸附时间的选择2.1.1提取溶剂的选择不同溶剂对比试验结果见表1。表1不同溶剂对比试验结果提取溶剂样品量/：水1.056 270%乙醇1.0557选取水和7 0%乙醇2 种溶剂，对样品中总皂苷的提取分离情况进行研究。由表1可知，选用体积分数为7 0%的乙醇溶剂提取时，样品中总皂苷的含量达到0.6 2 0 mg/g，是利用水溶剂提取的总皂苷含量的2.0 5倍，说明样品中总皂苷分离效果最佳，提取更彻底。因此，最终选择体积分数为7 0%的乙醇溶剂中进行总皂苷的提取。2.1.2吸附时间的选择不同吸附时间结果见图1。0.800.750.700.650.600图1不同吸附时间结果选取经7 0%乙醇溶剂提取的供试液，经过0，30，6 0，9 0 m in 的吸附。由图1可知，随着吸附时间的延长，样品中总皂苷含量先升高（0 30 min），之后呈下降趋势（30 9 0 min)。因此，说明在30 min的吸附时间下，目标成分吸附效果更佳，为了保证总皂苷在树脂中吸附的充分性，选择吸附时间为30 min。2023年第10 期C 100M 1 000:检出含量/mg0.3030.6202040吸附时间t/min60801002023年第10 期2.1.3水洗脱体积的选择不同洗脱体积对比试验结果见表2。表2不同洗脱体积对比试验结果水洗脱体积/mL吸光度A100.994150.981201.209251.186300.797考查水洗脱体积对总皂苷检测结果的影响情况。由表2 可知，样品中总皂苷含量经过水洗脱后存在一定损失，随着洗脱体积的增大，样品中总皂苷含量先升高再下降，当水洗脱体积在2 0 mL时，样品中总皂苷含量为1.59 6%，达到最大值。因此，最终选择水洗脱体积为2 0 mL。2.2方法学考查2.2.1线性范围试验线性范围按照对照品储备溶液的10%，2 0%，40%，6 0%，8 0%，10 0%进行配制，分别量取对照品储备液，加入稀释剂，配制成含人参皂苷质量浓度分别为0.0 17，0.0 33,0.0 6 7，0.10 0,0.134，0.16 7 mg/mL的线性系列溶液，以对照品实际质量浓度为横坐标（X），以吸光度值为纵坐标（Y）。人参皂苷（Re）的标准曲线见图2。1.00.850.60.40.200图2 人参皂苷（Re）的标准曲线人参皂苷线性方程为：Y=3.6502X-0.0209，R2=0.9995，结果表明人参皂苷在质量浓度0 0.16 7 mg/mL范围内线性关系良好。2.2.2加标回收率试验精密称取同一批次的苦瓜硒铬酵母胶囊中内容物6 份，置于棕色容量瓶中，并按照1：1加人一定量的对照品于10 0 mL容量瓶中，稀释剂处理后于紫外可见光分光光度计上于波长56 0 nm处测定吸光度，记录相关数据。加标回收率试验结果见表3。由表3可知，6 份样品加标回收率在10 0.8%104.6%，说明该方法测定保健食品中总皂苷含量偏倚度小、准确度较高，且满足GB/T274042008实验室质量控制规范食品理化检测3要求。2.2.3精密度试验杜晶，等：层析柱洗脱条件对保健品中总皂苷含量测定的影响量/mg1%收率/%/%0.527 110.70供试品含量/mg含量/%0.2781.3170.2741.2980.3371.5960.3311.5680.2241.0610.050.10质量浓度/mgmL-l67:表3加标回收率试验结果称样量人参皂苷Re本底值实际加标回收率1g总含量/mg/mg5.750.538 610.400.521910.200.523 710.600.533 910.700.541 210.50称取6 份供试品，按照1.2.1项下，配制成6 份供试品溶液，于紫外可见光分光光度计上于波长56 0 nm处测定吸光度，并记录数据。精密度试验结果见表4。表4精密度试验结果进行柱层析样样品测定液中人称样量品溶液的体积参皂苷Re含量/gVi/mL1.011 31.001.055 71.001.078 31.001.048 61.001.064 21.001.039.71.00由表4可知，6 份供试品溶液含量的RSD为2.8%，说明该方法测定保健食品中总皂苷含量重复性良好，且满足GB/T274042008实验室质量控制规范食品理化检测13要求。3结论采用紫外可见光分光光度法测定保健食品中总皂苷的含量，通过研究提取溶剂、吸附时间和水洗脱体积等方面的因素，得到保健食品总皂苷的最佳提取方法，即选用体积分数为7 0%的乙醇超声提取0.150.20平均回RSD5.54101.85.875.545.695.545.715.545.825.545.905.54/mg0.1140.1130.1120.1150.1170.118样品，提取液经Amberlite-XAD-2型大孔树脂吸附30min并依次用2 0 mL水和体积分数为7 0%的乙醇进行洗脱，总皂苷平均提取含量可达1.59 6%，该方法不仅简单快捷，且大大提高了保健食品中总皂苷的提取率。利用经优化后的方法进行方法学考查，在标准曲线绘制中，人参皂苷Re吸光度与其质量浓度值呈良好的线性关系，线性回归方程Y=3.6502X-0.0209，R2=0.9 9 9 5，线性范围0 0.16 7 mg/mL。其加标回收率为10 2.6%，RSD为1.5%，精密度试验总皂苷平均含量为1.0 9%，RSD为2.8%，由此说明，经前处理优化后的总皂苷检测方法的准确性高和重复性好，该方法简单快捷，总皂苷提取含量较高，可更加快速准确地对保健品进行测定。参考文献：1】徐文武，谢涛，吕东峰，等。一测多评法同时测定红参（下转第7 2 页）104.1100.8101.1103.1104.6含量平均含量1RSD1%/%1%1.131.071.071.071.101.13102.61.091.52.872现代食品科技，2 0 12，2 8（6）：6 6 7-6 6 9.6Manel M,Souhail B,Moncef C,et al.Optimization ofpectin extraction from lemon by-product with acidified datejuice using response surface methodology 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