常见盐渍食品中嗜盐微生物分布及其胞外酶活.pdf

38JOURNALVol.42lssue82023H研究论文常见盐渍食品中嗜盐微生物分布及其胞外酶活张申奥，陈陈飞龙，陈陈博，苏亦鸣，陈绍兴（安徽师范大学生命科学学院，安徽芜湖2 410 0 0）摘要：嗜盐微生物多生活在高盐环境中，在盐腌制品、盐渍食品、海产品等高盐食品中含量丰富，是一种重要的极端环境微生物资源。作者对采自安徽芜湖超市的7 种常见高盐食品进行嗜盐微生物的纯培养分离，根据菌落形态特征差异，选取43株进行基于16 SrRNA基因序列相似性的物种鉴定。确定分类地位后，分别挑取不同种代表菌株进行产胞外酶活测定。最终作者确定该43株嗜盐微生物中包含13属2 1种嗜盐微生物，其中嗜盐古菌4属7 种，嗜盐细菌9 属14种。分离到产胞外淀粉酶菌株3株，产酯酶7 株，产明胶酶1株，产触酶8 株，说明市售高盐食品中普遍存在嗜盐微生物；这些嗜盐微生物所产的具有强耐高盐活性的胞外酶具有较高的生物开发利用价值。关键词：高盐食品；盐微生物；淀粉酶：酯酶：明胶酶；触酶中图分类号：Q93文章编号：16 7 3-16 8 9（2 0 2 3）0 8-0 0 38-0 8DOl:10.3969/j.issn.1673-1689.2023.08.005Distribution of Halophilic Microorganisms in Commercial Salted-Foods andProduction of Extracellular EnzymesZHANG Shenao,CHEN Feilong,CHENBo,SUYiming,CHEN Shaoxing(College of Life Sciences,Anhui Normal University,Wuhu 241000,China)Abstract:Halophilic microorganisms live in hypersaline environments,i.e.salted products,seafoodand other high-salt foods.Salted-food is an important hypersaline environment rich in extremophiles.the authors collected 7 kinds of salted-foods collected from supermarkets in Wuhu,Anhui Provincewere used to isolate the halophilic microorganisms.According to the difference incolonymorphology,43 strains were selected for further identification based on the similarity of 16S rRNAgene sequence.After determination their classification status,representative strains from differentspecies were selected for the detection of extracellular enzyme activities.Finally,it was determinedthat the 43 halophilic microorganisms contained 21 species in 13 genera in domains bacteria andarchaea.There are 7 species in 4 genera belonging to halophilic archaea,while 14 species in 9 generabelonging to halophilic bacteria.This study isolated 3 strains produce extracellular amylase,7 strainsproduce esterase,1 strain produces gelatinase,and 8 strains produce catalase,which indicates thathalophilic microorganisms are prevalent in the salted-food in the market.Extracellular enzymesproduced by these halophilic microorganisms with strong salt-tolerance activity have potential收稿日期：2 0 2 1-0 8-16基金项目：国家自然科学基金项目（3146 0 0 0 3）；安徽师范大学大学生创新创业训练计划项目（2 0 2 110 37 0 0 7 5）。*通信作者：陈绍兴（19 7 9 一），男，博士，教授，博士研究生导师，主要从事极端微生物资源的开发与利用研究。E-mail：c h e n s x a h n u.e d u.c n39会品与生物技术学报2023年第42 卷第8 期张申奥，等品中啫盐微生物分布及其胞外酶活研究论文applications in thebiological industry.Keywords:salted-food,hypersaline environments,halophilic microorganisms,amylase,esterase,gelatinase嗜盐微生物生活于高盐环境中，如盐湖、盐矿、海洋晒盐地、盐碱土壤以及海产品和一些盐渍食品，属于极端环境微生物的一种!。它们中有些类群能合成生物可降解塑料，在生物医学和环境治理等领域具有广泛应用前景2-5 。盐渍食品是由新鲜蔬菜、瓜果、肉制品等经腌制、发酵制成的风味食品。嗜盐菌在发酵过程中起到促进作用。目前，已在多种腌制、盐渍食品或海产品等高盐食品中分离鉴定出嗜盐菌。2 0 10 年，陈学云等在盐干带鱼中鉴定了多种耐盐的葡萄球菌（Staphylococcus）0；同年，王宇等在腌制咸鱼中分离到了一株中度嗜盐菌，鉴定结果表明该菌隶属于Halobacillus属7；2 0 11年，孙业盈等在子虾酱中分离纯化鉴定了一株中度嗜盐菌，定为盐脱氮枝芽孢杆菌（Virgibacillushalodenitrificans）8；2 0 12 年，吕彦等从蟹酱中分离出了一株中度嗜盐菌，系统发育分析将3株嗜盐菌鉴定为葡萄球菌属（Staphylococcus）中的3个不同的种，分别为琥珀葡萄球菌（Staphylococcus succinus）、科氏葡萄球菌（Staphylococcuscohni）和马胃葡萄球菌（Staphylococcusequorum)9高盐食品中存在着大量的嗜盐菌，嗜盐菌的大量繁殖，可能会引发食品安全问题。2 0 世纪9 0 年代，曾发生过嗜盐菌污染食物导致中毒的事件。因此对盐渍食品中的嗜盐菌的分离鉴定研究，是评价食品的安全性和防止嗜盐菌污染食品的前期基础。另外，嗜盐古菌是一类生活于极端高盐环境的化能异养型原核微生物，其所分泌的胞外酶（外泌酶）具有在高盐条件下仍能保持活性的特点，在制革工业、高盐有机废水处理和泡菜加工等腌制食品方面有重要用途。嗜盐微生物分泌的蛋白酶、肽酶、碱性磷酸酶等不仅能够促进原料底物进行分解及生物转化，显著缩短发酵周期，还能将肽和寡肽转化为前体氨基酸从而形成海鲜调味品特有的风味物质，有利于海鲜调味品鲜美醇香气味的形成2例如，目前高盐腌制食品生产的一个主要问题是发酵时间长。有研究发现Halobacteriumsp.SP1的添加能加速鱼露的发酵过程113，研究表明其分泌的胞外蛋白酶发挥了关键的作用，经蛋白酶作用产生的多肽和氨基酸不仅赋予了鱼露丰富的营养价值，同时对鱼露的风味和香气也有着重要的提升13。另外，嗜盐古菌胞外蛋白酶、淀粉酶和酯酶分别在肽合成、调味剂和食品腌制、多不饱和脂肪酸生产等方面具有较广泛的应用价值14作者从市场中常见的高盐食品中分离鉴定嗜盐菌，并对其多样性及相关胞外酶活性进行研究，以期为高盐食品中嗜盐菌的群落结构以及高盐食品安全评价提供帮助。挖掘高盐食品中的嗜盐微生物资源，以期找到高产胞外酶的嗜盐菌株，为极端环境微生物资源的开发和利用奠定基础材料与方法1.1样品的采集7种高盐食品：海蜓、虾皮、海带、什锦菜、酱油蜜瓜、宝塔菜和辣酱（图1），均购于安徽省芜湖市大润发超市。其中海蜓产自浙江宁波，虾皮产自江苏扬州，海带产自山东威海，什锦菜产自江苏南京，酱油蜜瓜产自江苏南京，宝塔菜产自江苏南京，辣酱产自安徽芜湖1.2嗜盐微生物的分离与纯化1.2.1培养基制备分离高盐食品中嗜盐微生物的培养基为AS-168培养基和NOM培养基。AS-168培养基（组分g/L）：酸水解酪蛋白氨基酸5.0,酵母粉5.0，谷氨酸单钠1.8，柠檬酸钠3.0,MgS047H0 20.0,KCl 2.0,NaCl 200.0,FeClz4H,0 0.036,MnCl24H,00.0036；NO M 培养基（组分g/L）：酵母粉0.0 5，鱼蛋白陈0.2 5，丙酮酸钠1.0,KCl5.4，CaCl 0.29,NH.Cl 0.27,MgSO4 7H20 26.8,MgCl2 6H,0 23,NaCl 184。p H 调至7.5,110 5 Pa灭菌2 0min。配制固体培养基时，在灭菌前每升加人琼脂粉15.08。1.2.2菌株的分离与纯化于超净台中收集海带表面白色盐霜于无菌试管中，加人5 mL质量分数40JOURNALOFFOOD SCIENCEAND BIOTEVol.42lssue82023OLOGSalted-FoodsandFProauctlonofExtracellularEnzymesZHANG Shenao,et al:Distribution of Halophilic Microorganisms in CommercialAEARCH海蜓虾皮海带什锦菜酱油蜜瓜宝塔菜辣酱高盐食品嗜盐菌菌落图1不同高盐食品和嗜盐微生物的分离Fig.1Salted-foods and culture-dependent isolation20%的NaCl溶液悬浮，在漩涡振荡仪中混合5 min。吸取1mL混合液于1.5 mLEP管中，并以此为原液，按照10-1、10-2 和10-3进行多梯度稀释。分别吸取2 0 0 L液体涂布于NOM（或者AS-168)培养基，随后放人培养箱，37 倒置培养。对于海蜓和虾皮，超净台中取1g样品于无菌研钵中碾成粉末，加人5mL灭过菌的质量分数2 0%NaCl溶液悬浮。后续操作同海带。对于辣酱、宝塔菜、什锦菜、酱油蜜瓜，直接吸取其盐腌水（辣酱为油液）作为原液，其余操作同海带。培养10 d后，挑取每个培养基上长出的不同类型的单菌落至新的固体培养基上划线，继续培养。7 d后，再次进行平板划线分离进行菌株的进一步纯化。1.3基于16 SrRNA基因的初步分子鉴定1.3.1菌株PCR扩增模板DNA的提取水裂解法（适用于纯水裂解型嗜盐古菌）：挑取适量的菌体，悬人含有5 0 L灭菌的蒸馏水的离心管中。使用漩涡振荡仪充分振荡混匀，12 0 0 0 r/min离心3min。收集上清液作为嗜盐古菌PCR扩增所需的模板DNA。酚-氯仿抽提法15)（适用于嗜盐细菌和纯水不裂解型嗜盐古菌）：采用相同的方法制备菌悬液，再用酚氯仿溶液（苯酚：氯仿体积比1:1，）抽提，12 0 0 0 r/min离心3min；收集上清液，再用等体积的氯仿抽提，12000r/min离心3min；收集上清液作为嗜盐细菌及纯水不裂解型嗜盐古菌PCR扩增所需的模板DNA。1.3.2PCR扩增16 SrRNA基因分分别利用嗜盐古菌和嗜盐细菌的16 SrRNA通用引物进行PCR扩增。分别以F8/R1462和2 7 F/1492R为嗜盐古菌和细菌的16 SrRNA基因PCR扩增的引物5 。将电泳检测成功的PCR产物送生物公司测序。1.3.3测序结果分析获得各菌株16 SrRNA基因的测序峰图，利用BioEdit软件14检查测序峰图的质量，去除两侧峰型较差的序列，选取中间可信度高的序列进行后续分析。将已选中的序列利用工具EZbioCloud(https：/w w w.e z b i o c l o u d.n e t/）进行同源性搜索，得到与菌株亲缘关系最近的物种信息及其相似度，确定各个菌株的分类地位。将本研究所分离到的43株嗜盐菌的16 SrRNA基因序列提交GenBank，获得序列登录号：MZ768566-MZ768608。1.4胞外酶活鉴定根据文献对嗜盐菌的胞外淀粉酶、酯酶、明胶酶、触酶、蛋白酶、氧化酶进行酶活鉴定5 2结果与分析2.17种高盐食品中可培养嗜盐微生物的分布情况统计2.1.17种高盐食品中可培养嗜盐微生物物种分布情况对经过纯培养分离并根据菌落的形态和颜色挑取43株进行16 SrRNA基因测序和序列相似性分析。结果显示，从市售常见高盐食品中共分离出2 1种嗜盐微生物，分属13个属。如表1所示，其中嗜盐古菌分别来自Halorubrum、H a l o a r c u l a、Halobacterium、H a l a r c h a e u m 这4个属的7 个种；嗜盐细菌分别来自Halobacillus、St a p h y l o c o c c u s、Chromohalobacter,Gracilibacillus,Lentibacillus,Sali-nicoccus,SalimicrobiumNesterenkoniaAlkalibacillus这9 个属的14个种。嗜盐古菌4个属分别隶属于Halobacteria纲，Haloferacales 和 Halobacteriales 目,Halorubraceae、Haloarculaceae和Halobacteriaceae科。嗜盐细菌9个属分别隶属于Bacillales、O c e a n o s p i r i l l a l e 和Micrococcales目;BacillaceaeStaphylococcaceae、415生物技术学报2023年第42 卷第8 期Halomonadaceae和Micrococcaceae科常见盐渍食品品中嗜盐微生物分布及其胞外酶活张申奥，等：研究论文表12 1种代表嗜盐微生物分类地位Table 1 Taxonomic status of 21 representatives of halophilic microorganisms菌株编号分离源所属物种序列相似度/%序列登录号168-1辣酱Staphylococcus nepalensis99.4MZ768569168-8海带Chromohalobactercanadensis99.9MZ768571168-9宝塔菜Gracilibacilluskimchii100.0MZ768572168-11什锦菜Lentibacillusjuripiscarius97.3MZ768573168-13海蜓Salinicoccussalsiraiae99.8MZ768575168-20什锦菜Gracilibacillusbigeumensis99.4MZ768578N-2辣酱Nesterenkoniahalophila99.4MZ768593N-6辣酱HaloarculaHispanica97.6MZ768580N-8辣酱Halorubrumhalophilum99.4MZ768581N-9辣酱Halobacteriumjilantaiense100MZ768582N-11辣酱Haloarculaquadrata99.4MZ768583N-13辣酱Halobacteriumhubeiense99.9MZ768584N-14辣酱Halarchaeumsalinum99.8MZ768585N-16辣酱Salinicoccusamylolyticus99.1MZ768594N-18虾皮Nesterenkoniahalobia98.3MZ768595N-23虾皮Halobacteriumsalinarum100.0MZ768587N-28酱油蜜瓜Lentibacillussalicampi99.6.MZ768600N-29海蜓Salimicrobiumsalexigens98.5MZ768601N-30海蜓Halobacillusyeomjeoni98.7MZ768602N-34海蜓Alkalibacillusalmallahensis99.8MZ768604N-37宝塔菜Gracilibacillussaliphilus100.0MZ7686062.1.27种高盐食品中可培养嗜盐微生物优势物种分析在AS-168培养基培养条件下，海蜓样品中的优势物种为Nesterenkonia属物种，占比8 7.5%；虾皮样品中的优势物种为Salinicoccus属物种，占比8 3.3%；海带样品中的优势物种为Haloarcula属物种，占比8 8.2%；什锦菜样品中的优势物种为Lentibacillus属物种，占比7 4.4%；辣酱样品中的优势物种为Staphylococcus属物种，占比10 0.0%；宝塔菜样品中的优势物种为Gracilibacillus属物种，占比40.0%，见图2100Chromohalobacter90Salimicrobium80HalobacillusHalarchaeum70%/豆Alkalibacillus60Halorubrum50Halobacterium40Nesterenkonia30LentibacillusGracilibacillus20Haloarcula10Staphylococcus0891-SV串891-Salinicoccus-168虾皮NOM海带NOM宝塔菜NOM酱油蜜瓜NOM样品图2 7 种高盐食品在AS-168和NOM培养基中可培养嗜盐微生物物种组成（属级水平）Fig.2 Species composition of halophilic microorganisms in AS-168 and NOM mediumsin in 7 different salted-foods(genuslevel)42JOURNALOFVol.42lssue82023Salted-Foods andProduction of Extracellular EnzymesZHANG Shenao,et al:Distribution of Halophilic Microorganisms in CommercialAEARCHRESE在NOM培养基培养条件下，海蜓样品中的优势物种为Halobacillus属和Halobacterium属物种，占比均为36.0%；虾皮样品中的优势物种为Salimicrobium属物种，占比31.2%；海带样品中的优势物种为Haloarcula属物种，占比7 8.4%；辣酱样品中优势物种为Nesterenkonia属物种，占比5 2.2%；宝塔菜样品中的优势物种为Gracilibacillus属物种，占比10 0.0%；酱油蜜瓜样品中的优势物种为Lentibacillus属物种，占比10 0.0%2.27种高盐食品中可培养嗜盐微生物比较2.2.1不同样品中可培养嗜盐微生物物种组成比较在AS-168培养基培养条件下，从海蜓样品中共分离出2 个属的2 种嗜盐微生物，均为嗜盐细菌；从虾皮样品中共分离出1个属的2 种嗜盐微生物，均为嗜盐细菌；从海带样品中共分离出2 个属的2 种嗜盐微生物，其中嗜盐古菌1个属的1种，嗜盐细菌1个属的1种；从什锦菜样品中共分离出2个属的2 种嗜盐微生物，均为嗜盐细菌；从辣酱样品中共分离出1个属的1种嗜盐微生物，均为嗜盐细菌；从宝塔菜样品中共分离出4个属的5 种嗜盐微生物，其中嗜盐古菌3个属的3种，嗜盐细菌1个属的2 种；从酱油蜜瓜样品中未分离出任何嗜盐微生物。在NOM培养基培养条件下，从海蜓样品中共分离出6 个属的6 种嗜盐微生物，其中嗜盐古菌4个属的4种，嗜盐细菌2 个属的2 种；从虾皮样品中共分离出嗜盐微生物5 个属的5 种，其中嗜盐古菌2 个属的2 种，嗜盐细菌2 个属的2 种；从海带样品中共分离出2 个属的2 种嗜盐微生物，均为嗜盐古菌；从什锦菜样品中未分离出任何嗜盐微生物；从辣酱样品中共分离出6 个属的8 种嗜盐微生物，其中嗜盐古菌4个属的6 种，嗜盐细菌2 个属的2 种；从宝塔菜样品中共分离出1个属的1种嗜盐微生物，均为嗜盐细菌；从酱油蜜瓜样品中共分离出1个属的1种嗜盐微生物，均为嗜盐细菌，见表2。可见在AS-168培养基培养条件下，易分离出嗜盐细菌；在NOM培养基培养条件下，易分离出嗜盐古菌表2 2 1个嗜盐微生物物种在7 种高盐食品中的分布Table 2 Distribution of 21species of halophilic microorganisms in 7 different salted-foods海蜓虾皮海带什锦菜辣酱宝塔菜酱油蜜瓜所属物种ANANAAAANANAlkalibacillusalmallahensis01000000000000Chromohalobactercanadensis000016000000000Gracilibacillusbigeumensis000000110000000Gracilibacilluskimchi00000000001000Gracilibacillussaliphilus00000000001200Halarchaeumsalinum02020000040000Haloarculahispanica010一12040000011000Haloarculaquadrata00000000010000Halobacllusyeomjeoni09000000000000Halobacteriumhubeiense09000000071000Halobacteriumjilantaiense00000000010000Halobacteriumsalinarum00030000000000Halorubrumhalophilum0000011000021000Lentibacilusjuripiscarius000000320000000Lentibacillussalicampi00000000000001Nesterenkoniahalobia00040000000000Nesterenkoniahalophila700000000240000Salimicrobiumsalexigens03060000000000Salinicoccusamylolyticus00500000060000Salinicoccussalsiraiae10100000000000Staphylococcus nepalensis00000000100000168培差其.N代表NOM培养其43会品5 生物技术学报2 0 2 3年第42 卷第8 期张申奥，等盐渍食品中嗜盐微生物分布及其胞外酶活研究论文2.2.2不同培养基分离可培养嗜盐微生物的比较用AS-168培养基共分离出嗜盐菌9 个属的12 种，其中嗜盐古菌3个属的3种，分属Halorubrum、Halobacterium和Haloarcula属；嗜盐细菌6 个属的9种，分属Chromohalobacter、G r a c i l i b a c i l l u s、Le n t i-bacillusNesterenkoniaSalinicoccus 和Staphylococcus属。而用NOM培养基中共分离出嗜盐菌11个属的15种，其中嗜盐古菌4个属的7 种，分属Halorubrum Halobacterium,Haloarcula 和 Halarch-aeum属，完全覆盖了AS-168培养基中分离出的嗜盐古菌；嗜盐细菌7 个属的8 种，分属AlkalibacillusGracilibacillusHalobacillusLentiba-cillus,Nesterenkonia,Salinicoccus和Salimicrobium属（图3）。可见，NOM培养基培养出的嗜盐微生物丰富度明显高于AS-168培养基。其中，Halarchaeum属嗜盐古菌只在NOM培养基中分离到;Chromohalobacter和Staphylococcus属嗜盐细菌只在AS-168培养基中分离到；Alkalibacillus、H a lo b a c i llu s 和Salimicrobium属嗜盐细菌只在NOM培养基分离到。NOM培养基相对于AS-168培养基而言属于寡营养型培养基，嗜盐微生物可能更加适应在寡营养条件生存。2.321种代表嗜盐微生物胞外酶活测定在所分离到的2 1种嗜盐菌中，胞外产淀粉酶的有3株，占比14.3%；产酯酶7 株，占比33.3%；产明胶酶1株，占比4.8%；产触酶8 株，占比38.1%；未分离出产蛋白酶和氧化酶的嗜盐菌，见表3。表32 1种嗜盐微生物所产胞外酶的活性鉴定Table 3 Detection of extracellular enzyme activity of 21 halophilic microorganisms菌株酯酶所属物种淀粉酶明胶酶触酶蛋白酶氧化酶编号吐温-2 0吐温-40吐温-6 0吐温-8 0168-1Staphylococcus nepalensis+168-8Chromohalobactercanadensis一一一一+一168-9Gracilibacilluskimchii一十一一168-11Lentibacillusjuripiscarius+一一+一一168-13Salinicoccussalsiraiae一一一一一一+一一168-20Gracilibacillusbigeumensis一一一一一一一一N-2Nesterenkoniahalophila一+一N-6Haloarculahispanica一一一N-8Halorubrumhalophilum一一一一一N-9Halobacteriumjilantaiense一一一+一N-11Haloarculaquadrata+一一一一N-13Halobacteriumhubeiense一一一二一一一一N-14Halarchaeumsalinum一一+一一N-16Salinicoccusamylolyticus一+一+一一一N-18Nesterenkoniahalobia+一一一+一N-23Halobacteriumsalinarum一一一一一一N-28Lentibacillussalicampi一一一一一一一N-29Salimicrobiumsalexigens一一+一一一一N-30Halobacilusyeomjeoni一一一一一一N-34Alkalibacillusalmallahensis一一+一一N-37Gracilibacillussaliphilus一一一嗜盐古菌N-9具有胞外明胶酶活性（图3(a)）；嗜盐细菌16 8-11菌株具有胞外淀粉酶、酯酶、触酶活性；嗜盐古菌N-11菌株具有胞外淀粉酶（图3（b）、酯酶活性；嗜盐细菌N-18菌株具有胞外淀粉酶（图3(b)）、触酶活性；嗜盐细菌N-34菌株具有胞外酯酶、触酶活性；嗜盐细菌N-16菌株具有胞外酯酶活性（图3（c）。由表3得出，产胞外淀粉酶的16 8-11、N-11、44JOURNALOFFOODSCIENCEANDTVol.42lssue82023Salted-FoodsandProductionofExtracellularEnzymesZHANG Shenao,et al:Distribution of Halophilic Microorganisms in CommercialEARCHTICLN13N6N11N18N16N9N8N14（a）产胞外明胶酶菌株（b）产胞外淀粉酶菌株（c）产胞外酯酶菌株图3产胞外明胶酶、淀粉酶和酯酶菌株及酶活Fig.3Strains producing extracellular gelatinase,amylase and esterase and enzyme activitiesN-18菌株在各自生境中的占比分别为10 0%、2.2%25.0%。产胞外酯酶的16 8-9、16 8-11、N-11、N-34菌株在各自生境中的占比分别为2 0.0%、100%、2.2%、4.0%，此外产胞外酯酶的N-14菌株在辣酱、虾皮、海蜓样品中均分离得到，占比分别为8.7%、12.5%、8.0%；产胞外酯酶的N-16菌株在辣酱、虾皮样品中均被分离得到，占比分别为13.0%、83.3%；产胞外酯酶的N-29菌株在虾皮、海蜓样品中均分离得到，占比分别为31.3%、12.0%。产胞外明胶酶的N-9菌株在其生境中占比为2.2%。可见，产胞外酶菌株相较于不产胞外酶菌株而言，前者在其生境中具有一定的优势度。其中，16 8-11、N-16菌株更是其生境中的优势物种2.4讨论高盐腌渍和发酵食品由于富含游离氨基酸、小分子糖、醇、酸类物质、维生素等，对嗜盐古菌有较好的筛选和富集作用，蕴藏丰富的新种资源和产酶菌株资源7。目前，对于盐湖、盐矿和晒盐场等高盐环境的嗜盐微生物的物种多样性组成方面的研究已经有了较多积累。虽然有关于高盐食品中分离并鉴定出了嗜盐古菌的新物种报道较多，而对于市售常见的高盐产品中的嗜盐古菌的多样性研究较少。由于高盐食品的制作原料、制作方法、添加剂的使用多种多样，由此造成的高盐食品中微生物生境的不同，形成了各自独特的微生物组成结构。作者对7种高盐食品中的嗜盐微生物进行了较为系统的研究，拓宽了对不同高盐生境中嗜盐菌的组成的认识。作者通过纯培养技术，共从7 种高盐食品生境中挑取了不同形态的菌株43株测序，经过基于16 SrRNA基因的序列相似性分析，初步确定了7 种高盐食品生境中共有2 1个种13个属的嗜盐微生物其中包括Halorubrum、H a l o a r c u l a H a l o b a c t e r i u m、Halarchaeum4个属的嗜盐古菌菌株，Halobacillus、Staphylococcus、Ch r o mo h a l o b a c t e r G r a c i l i b a c i l l u sLentibacillus,Salinicoccus,SalimicrobiumNesteren-konia、A l k a l i b a c i l l u s 9 个属的嗜盐细菌菌株。这些菌株之前也被一些学者从其相应生境中分离得到，且与作者在本研究中得到的结果具有一定相似性。如江苏大学韩冬在分析4种产地的盐渍海带中嗜盐古菌多样性中，其中山东荣成、福建霞浦2 种产地的盐渍海带的嗜盐古菌优势物种来自Haloarcula属7，与本研究得到结果一致。西华大学张琦在四川泡菜盐卤中分离出5 4株嗜盐细菌，分属3个属，Staphylococcus属为其中之一18 。在本研究中作者也分离出Staphylococcus属菌株，且为辣酱样品中的优势物种。大连工业大学李可心在盘锦地区虾酱中分离出6 2 株嗜盐菌，其中Salinicoccus属4株，Lentibacillus属3株，均为主要物种19 。本研究中，虾皮样品中优势物种来自Salinicoccus属；酱油蜜瓜样品中唯一分离出菌株来自Lentibacillus属，什锦菜样品中优势物种也来自Lentibacillus属3结语以嗜盐古菌作为产酶来源已经成为一个新的研究热点，主要应用于化工、制药、石油、水产、发酵等工业生产中2 0 。作者从2 1种嗜盐菌株中筛选出了胞外产淀粉酶3株，产酯酶7 株，产明胶酶1株，产触酶8 株。初步判断，产酶菌株在其生境中同时也具有一定的优势度，且有些菌株具有产多种胞外酶45品与生物技木学报2 0 2 3年第42 卷第8 期张申奥，等：见盐渍食品中嗜盐微生物分布及其胞外酶活研究论文的特征。高盐生境具有一定的复杂性，某些嗜盐菌为了适应复杂的生存环境进化出产多种胞外酶的特性。因此相较于不产酶菌株，产酶菌株更具有生存优势参考文献：【1 谢莹.盐井嗜盐菌多样性的初步研究D.昆明：昆明理工大学,2 0 0 7.【2 何敏艳，邹正中，蔡林，等.连云港台北和盐城三圩盐田土壤嗜盐菌多样性研究1.微生物学通报，2 0 0 8,35(5)：7 37-7 42.3 J XU Y,ZHOU P J,TIAN 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