GA∕T 1790-2021 法庭科学 生物检材中α-硫丹等20种有机氯类杀虫剂检验 气相色谱-质谱法(公共安全).pdf

HHP ICS 13.310 CCS A 92 中华人民共和国公共安全行业标准 GA GA/T 法庭科学 生物检材中-硫丹等 20 种 有机氯类杀虫剂检验 气相色谱-质谱法 Forensic sciencesExamination methods for 20 organochloride insecticides including -endosulfan in biological samples GC-MS -发布 -实施 中华人民共和国公安部 发 布 GA/T I 前 言 本文件按照 GB/T 1.12020标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会 （SAC/TC 179/SC 1） 提出并归口。 本文件起草单位： 南京市公安局刑事科学技术研究所、 公安部物证鉴定中心、 青岛市公安局技术处、泰安市公安局刑事科学技术研究所。 本文件主要起草人：王勇、章志成、李黎明、刘俊宁、张云峰、王磊、王伟、周欣、孙鑫、王爱华、王瑞花、任昕昕、杨虹贤、郭杰、吕惊晗、李文海。 GA/T 1 法庭科学 生物检材中-硫丹等 20 种有机氯类杀虫剂检验 气相色谱-质谱法 1 范围 本文件规定了生物检材血液、尿液中 20 种有机氯杀虫剂的气相色谱-质谱（GC-MS）检验方法。 本文件适用于法庭科学领域生物检材血液、 尿液中20种有机氯杀虫剂的定性分析和定量分析。 其他检材可参照使用。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。 4 原理 以空白样品和添加样品作对照， 按平行操作的要求， 对检材样品中20种有机氯杀虫剂 （详见附录A）进行提取、净化及浓缩，采用气相色谱-质谱法检测，以保留时间、质谱特征离子碎片峰和相对丰度或峰面积作为定性判断依据，用外标法或内标法进行定量分析。 5 试剂和材料 5.1 试剂 实验用水应符合GB/T 6682中规定的三级水。除非另有说明，在分析中使用的试剂均为分析纯，试剂包括： a) 无水硫酸镁； b) 无水硫酸钠； c) 氯化钠； d) 浓硫酸； e) 甲醇； f) 乙酸乙酯； g) 乙腈； h) 环已烷； i) 正已烷； j) N-丙基乙二胺（primary secondary amine, PSA） ； k) 石墨碳黑（graphitized carbon black, GCB） ； GA/T 2 l) 标准溶液： 1) 1.0mg/mL单一标准物质储备溶液： 根据20 种有机氯杀虫剂标准物质的纯度和盐型换算后，各称取适量，用甲醇分别配制 1.0mg/mL 20 种有机氯标准物质溶液，混匀，密封，-18以下保存，有效期 6 个月。或采用市售单一标准溶液； 2) 1.0mg/mL混合标准物质储备溶液： 根据20 种有机氯杀虫剂标准物质的纯度和盐型换算后，各称取适量，用甲醇配制成 1.0mg/mL 的混合标准物质储备溶液，密封，-18以下保存，有效期 6 个月。或采用市售混合标准溶液； 3) 单一标准物质工作溶液：移取 1.0mg/mL 的 20 种有机氯标准物质储备液各 1.0mL，用甲醇分别配制成浓度为 0.1mg/mL 的单一标准物质工作溶液，现用现配；实验中所用其他浓度的单一标准工作溶液均由 1.0mg/mL 单一标准物质储备液用甲醇稀释得到； 4) 混合标准物质工作溶液：移取 1.0mg/mL 的 20 种有机氯混合标准物质储备液 1.0mL，用甲醇配制成浓度为 0.1mg/mL 的混合标准物质工作溶液，现用现配；实验中所用其他浓度的混合标准工作溶液均由 1.0mg/mL 混合标准物质储备液用甲醇稀释得到； 5) 1.0mg/mL 内标储备溶液：以环氧七氯作为内标，根据其纯度和盐型换算后，用甲醇配制1.0mg/mL 内标溶液，混匀，密封，-18以下保存，有效期 6 个月； 6) 0.1mg/mL 内标工作溶液：移取 1.0mg/mL 的内标储备溶液，用甲醇配制成浓度为 0.1mg/mL的内标工作溶液，现用现配。实验中所用其他浓度的内标工作溶液均由 1.0mg/mL 内标储备溶液配制得到。 5.2 材料 材料包括： a) 具塞离心管； b) 具塞玻璃试管。 6 仪器和设备 仪器和设备包括： a) 气相色谱-质谱仪（GC-MS）：配有电子轰击源（EI）； b) 振荡器； c) 电子天平：实际分度值 d0.01mg； d) 离心机； e) 移液器； f) 浓缩器。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品前处理 7.1.1.1 分散固相萃取 移取血液等液体检材样品 2.0mL 于具塞离心管中。 加入乙腈 4.0mL， 振荡 5min， 加入氯化钠 1.0g，振荡 1min，离心 5min，分离上层有机相，重复提取一次，合并两次提取的上层有机相，加入无水硫酸镁 100mg，PSA 100mg，GCB 10mg，振荡 1min，不低于 6000r/min 离心 5min，取上层有机相置于尖底GA/T 3 玻璃试管中，于浓缩器上 50浓缩至干，残留物用甲醇 0.1mL 溶解，作为检材样品提取液，供仪器检测。 注：检材样品取样量、乙腈体积及定容体积可根据实际情况调整。 7.1.1.2 液液萃取 移取血液等液体检材样品 1.0mL 于具塞离心管中。加入乙腈 2.0mL，震荡 1min，加入乙酸乙酯/环已烷（体积比 3：1）混合溶剂 2.0mL，振荡 5min，不低于 6000r/min 离心 10min，分离有机相；重复提取一次，合并两次提取的有机相，用无水硫酸钠脱水后，转入尖底玻璃试管中，置于浓缩器上 50浓缩至干，残留物用甲醇 0.1mL 溶解，作为检材样品提取液，供仪器检测。 注：检材样品取样量、混合溶剂体积及定容体积可根据实际情况调整。 7.1.1.3 质控样品 取等量相似基质的空白样品（若无相似基质空白样品可用血液替代）两份于具盖离心管中，一份作为空白样品，一份添加标准物质工作溶液，使其浓度为 0.5g/mL，作为添加样品，与检材样品平行操作，得到空白样品提取液和添加样品提取液，供仪器检测。 7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 气相色谱-质谱仪条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整： a) 色谱柱：DB-5MS 毛细色谱柱(30m 0.25mm 0.25m)或其他等效柱； 注：DB-5MS 毛细色谱柱是 Agilent 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 色谱柱温程：180保持 1min，以 15/min 速率升温至 225，保持 1min，再以 10/min 速 率升温至 280，保持 10min； c) 进样口温度：280； d) 传输线温度：260； e) 载气：氦气； f) 电子轰击能量：70eV； g) 离子源温度：230； h) 扫描方式：全扫描（SCAN）； i) 溶剂延迟：3min； j) 柱流量：1.0mL/min； k) 进样方式：分流进样； l) 分流比：10:1； m) 质量范围：40amu450amu； n) 定性定量离子：参见附录A。 7.1.2.2 进样 分别吸取空白溶剂、添加样品提取液、空白样品提取液、检材样品提取液、标准物质工作溶液，按7.1.2.1仪器条件进样检测。进样顺序和进样次数应确保结果有效。 7.2 定量分析 7.2.1 样品前处理 GA/T 4 移取血液等液体检材样品2.0mL （液液萃取1.0mL）2份（采用内标法时，则加入内标，使其浓度为1.0g/mL，混匀），按7.1.1进行操作，得到检材样品提取液，供仪器检测。 取与检材样品等量的相似基质空白样品， 与检材样品平行操作， 得到空白样品提取液， 供仪器检测。 用单点校正法定量时， 取与检材样品等量的相似基质空白样品2份， 添加标准物质 （采用内标法时，还需添加内标，使其浓度为1.0g/mL），作为添加样品，与检材样品平行操作，得到添加样品提取液。添加样品中目标物含量应在检材样品中目标物含量的（100 50）%范围内。 用校准曲线法定量时，取与检材样品等量的相似基质空白样品，添加标准物质工作溶液，配制成浓度在0.5g/mL10g/mL范围内的添加样品， 与检材样品平行操作， 得到添加样品提取液， 供仪器检测。 校准曲线应不少于6个浓度点（包括空白样品）。检材样品中目标物的含量应在校准曲线的线性范围内。 7.2.2 仪器检测 7.2.2.1 仪器条件 同 7.1.2.1。 7.2.2.2 进样 分别吸取检材样品提取液、空白样品提取液、添加样品提取液，按7.1.2.1仪器条件进样分析。若采用内标法，还应进样内标工作溶液。每份检材样品提取液和添加样品提取液各进样分析23次。 7.2.3 计算 7.2.3.1 计算含量 7.2.3. .1.1 内标-校准曲线法 记录检材样品提取液和添加样品提取液中目标物和内标的保留时间和峰面积值，以添加样品提取液中目标物与内标物的峰面积比的平均值为纵坐标、添加样品提取液中目标物的含量为横坐标进行线性回归，得到线性方程。根据检材样品提取液中目标物及内标的峰面积值，按公式（1）计算出检材样品中目标物的含量。 =y-ba. (1) 式中： 检材样品中目标物的含量； y 检材样品提取液中目标物与内标物的峰面积比的平均值； a 线性方程的斜率； b 线性方程的截距。 7.2.3. .1.2 内标-单点校正法 记录检材样品提取液和添加样品提取液中目标物和内标的保留时间和峰面积值，按公式（2）计算检材样品中目标物的含量。 =AAAA. (2) 式中： 检材样品中目标物的含量； A检材样品提取液中目标物的峰面积的平均值； A添加样品提取液中目标物的峰面积的平均值； GA/T 5 Ai检材样品提取液中内标物的峰面积的平均值； Ai添加样品提取液中内标物的峰面积的平均值； 添加样品中目标物的含量。 7.2.3. .1.3 外标-校准曲线法 记录检材样品提取液和添加样品提取液中目标物的保留时间和峰面积值，以添加样品提取液中目标物的峰面积的平均值为纵坐标、 添加样品提取液中目标物的含量为横坐标进行线性回归， 得到线性方程。根据检材样品提取液中目标物的峰面积值，按公式（3）计算出检材样品中目标物的含量。 =y-ba. (3) 式中： 检材样品中目标物的含量; y 检材样品提取液中目标物的峰面积的平均值； a 线性方程的斜率； b 线性方程的截距。 7.2.3. .1.4 外标-单点校正法 记录检材样品提取液和添加样品提取液中目标物的保留时间和峰面积值，按公式（4）计算检材样品中目标物的含量。 =AA . (4) 式中： 检材样品中目标物的含量； A检材样品提取液中目标物的峰面积的平均值； A添加样品提取液中目标物的峰面积的平均值； 添加样品中目标物的含量。 7.2.3.2 计算相对相差 记录 7.2.3.1 中计算得到的检材样品中目标物的含量，按公式（5）计算相对相差： 12100%-RD=. (5) 式中： RD相对相差，用百分比（%）表示； 1、 2两份检材样品中目标物的含量； 两份检材样品中目标物含量的平均值。 8 结果评价 8.1 定性结果评价 8.1.1 阳性结果评价 在相同条件下进行样品测定时， 检材样品中目标物的色谱峰保留时间与标准物质工作溶液一致 （相对误差在1%之内） ，且在扣除背景后的检材样品质谱图中，目标物质谱特征离子（不少于 3 个）质谱特征离子与标准物质工作溶液一致， 特征离子丰度比与浓度接近的标准物质工作溶液相比， 相对偏差不XGA/T 6 超过表 1 规定的范围，空白样品无干扰，则可判断检材样品中检出目标物。 表 1 特征离子丰度比的最大允许相对偏差范围 特征离子丰度比 50% 20%50% 10%20% 10% 最大允许相对偏差 10% 15% 20% 50% 8.1.2 阴性结果评价 检材样品未出现与目标物标准物质工作溶液一致的色谱峰，且添加样品中出现与目标物标准物质工作溶液一致的色谱峰，空白样品无干扰，则可判断检材样品中未检出目标物。 8.2 定量结果评价 检材样品中目标物含量的RD20%， 定量数据可靠， 其含量按两份检材的平均值计算。 检材样品中目标物含量的RD20%，定量数据不可靠。应按7.2重新提取检验。 相关实验数据及谱图参见附录B和附录C。 GA/T 7 附录 A （资料性） 20 种有机氯杀虫剂的相关信息 20种有机氯杀虫剂及内标的相关信息见表A.1。 表A.1 20种有机氯杀虫剂及内标的相关信息 编号 中文名称 CAS 编号 英文缩写 分子式 1 六六六 319846 -BHC C6H6Cl6 2 六六六 319857 -BHC C6H6Cl6 3 六六六 58899 -BHC C6H6Cl6 4 六六六 319868 -BHC C6H6Cl6 5 七氯 76448 - C10H5Cl7 6 艾氏剂 309002 - C12H8Cl6 7 环氧七氯（内标） 1024573 - C10H5Cl7O 8 顺式氯丹 5103719 - C10H86Cl8 9 反式氯丹 5103742 - C10H86Cl8 10 硫丹 959988 - C9H6Cl6O3S 11 反式九氯 39765805 - C10H5Cl9 12 p，p滴滴伊 72559 p,p-DDE C14H8Cl4 13 狄氏剂 60571 - C12H8Cl6O 14 异狄氏剂 72208 - C12H8Cl6O 15 硫丹 33213659 - C9H6Cl6O3S 16 p，p滴滴滴 72548 p,p-DDD C14H10Cl4 17 顺式九氯 5103731 - C10H5Cl9 18 硫丹硫酸酯 1031078 - C9H6Cl6O4S 19 p，p滴滴涕 50293 p,p-DDT C14H9Cl5 20 异狄氏剂酮 53494705 - C12H9Cl5O 21 甲氧滴滴涕（甲氧氯） 72435 - C16H15Cl3O2 GA/T 8 附录 B （资料性） 20 种有机氯杀虫剂的相关数据 B.1 20种有机氯杀虫剂及内标的保留时间、特征离子碎片、定量离子见表B.1。 表B.1 20种有机氯杀虫剂及内标的保留时间、特征离子碎片、定量离子 编号 中文名称 保留时间 min 特征离子碎片 m/z 定量离子 m/z 1 六六六 3.94 181，219，109 181 2 六六六 4.19 181，219，109 181 3 六六六 4.32 181，219，109 181 4 六六六 4.64 181，219，111 181 5 七氯 5.34 100，272，237 100 6 艾氏剂 5.92 66，263，91 66 7 环氧七氯（内标） 6.54 353，81，237 353 8 顺式氯丹 6.94 373，237，272，263 373 9 反式氯丹 7.16 373，237，272，263 373 10 硫丹 7.19 195，237，207，265 195 11 反式九氯 7.21 409，237，263 409 12 p，p滴滴伊 7.48 246.318，176 246 13 狄氏剂 7.66 79，108，263，277 79 14 异狄氏剂 8.05 81，263，243，281 81 15 硫丹 8.23 195，237，207，265 195 16 p，p滴滴滴 8.24 235，165，176 235 17 顺式九氯 8.29 409，237，263 409 18 硫丹硫酸酯 8.91 272，237，229，387 272 19 p，p滴滴涕 8.93 235，165，176 235 20 异狄氏剂酮 9.79 67，317，250，281 67 21 甲氧滴滴涕（甲氧氯） 9.91 227，113，152 227 GA/T 9 B.2 血液、尿液中20种有机氯杀虫剂的方法检出限及定量限（QuEChERS法）见表B.2。 表B.2 血液、尿液中20种有机氯杀虫剂的方法检出限及定量限（QuEChERS法） 名称 检出限（g/mL） 定量限（g/mL） 血液 尿液 血液 尿液 六六六 0.15 0.15 0.5 0.5 六六六 0.10 0.10 0.5 0.5 六六六 0.15 0.15 0.5 0.5 六六六 0.10 0.10 0.5 0.5 七氯 0.15 0.15 0.5 0.5 艾氏剂 0.10 0.10 0.5 0.5 顺式氯丹 0.10 0.10 0.5 0.5 反式氯丹 0.10 0.10 0.5 0.5 硫丹 0.15 0.15 0.5 0.5 反式九氯 0.10 0.10 0.5 0.5 p，p滴滴伊 0.10 0.10 0.5 0.5 狄氏剂 0.10 0.10 0.5 0.5 异狄氏剂 0.10 0.10 0.5 0.5 硫丹 0.15 0.15 0.5 0.5 p，p滴滴滴 0.10 0.10 0.5 0.5 顺式九氯 0.10 0.10 0.5 0.5 硫丹硫酸酯 0.15 0.15 0.5 0.5 p，p滴滴涕 0.10 0.10 0.5 0.5 异狄氏剂酮 0.10 0.10 0.5 0.5 甲氧滴滴涕（甲氧氯） 0.10 0.10 0.5 0.5 B.3 血液、尿液中20种有机氯杀虫剂的方法检出限及定量限（液液萃取法）见表B.3。 GA/T 10 表B.3 血液、尿液中20种有机氯杀虫剂的方法检出限及定量限（液液萃取法） 名称 检出限（g/mL） 定量限（g/mL） 血液 尿液 血液 尿液 六六六 0.15 0.15 0.5 0.5 六六六 0.15 0.15 0.5 0.5 六六六 0.15 0.15 0.5 0.5 六六六 0.15 0.15 0.5 0.5 七氯 0.15 0.15 0.5 0.5 艾氏剂 0.15 0.15 0.5 0.5 顺式氯丹 0.15 0.10 0.5 0.5 反式氯丹 0.15 0.10 0.5 0.5 硫丹 0.15 0.15 0.5 0.5 反式九氯 0.15 0.15 0.5 0.5 p，p滴滴伊 0.10 0.10 0.5 0.5 狄氏剂 0.15 0.15 0.5 0.5 异狄氏剂 0.20 0.20 0.5 0.5 硫丹 0.10 0.15 0.5 0.5 p，p滴滴滴 0.10 0.10 0.5 0.5 顺式九氯 0.10 0.15 0.5 0.5 硫丹硫酸酯 0.15 0.15 0.5 0.5 p，p滴滴涕 0.10 0.10 0.5 0.5 异狄氏剂酮 0.20 0.20 0.5 0.5 甲氧滴滴涕（甲氧氯） 0.10 0.10 0.5 0.5 GA/T 11 附录 C （资料性） 20 种有机氯杀虫剂的相关谱图 C.1 20 种有机氯杀虫剂及内标的 GC-MS 总离子流图，见图 C.1。 说明： 1六六六（3.94min） ； 2六六六（4.19min） ； 3六六六（4.32min） ； 4六六六（4.64min） ； 5七氯（5.34min） ； 6艾氏剂（5.92min） ； 7环氧七氯（6.54mi，内标） ； 8顺式氯丹（6.94min） ； 9反式氯丹（7.16min） ； 10硫丹（7.19min） ； 11反式九氯（7.21min） ； 12p，p滴滴伊（7.48min） ； 13狄氏剂（7.66min） ； 14异狄氏剂（8.05min） ； 15硫丹（8.23min） ； 16p，p滴滴滴（8.24min） ； 17顺式九氯（8.29min） ； 18硫丹硫酸酯（8.91min） ； 19p，p滴滴涕（8.93min） ； 20异狄氏剂酮（9.79min） ； 21甲氧滴滴涕（甲氧氯） （9.91min） 。 图 C.1 20 种有机氯杀虫剂及内标的 GC-MS 总离子流图 GA/T 12 C.2 20 种有机氯杀虫剂及内标的质谱图，见图 C.2图 C.22。 图 C.2 -六六六质谱图 图 C.3 -六六六质谱图 图 C.4 -六六六质谱图 图 C.5 -六六六质谱图 GA/T 13 图 C.6 七氯质谱图 图 C.7 艾氏剂质谱图 图 C.8 环氧七氯质谱图 图 C.9 顺式氯丹质谱图 GA/T 14 图 C.10 反式氯丹质谱图 图 C.11 硫丹质谱图 图 C.12 反式九氯质谱图 图 C.13 p,p-滴滴伊质谱图 GA/T 15 图 C.14 狄氏剂质谱图 图 C.15 异狄氏剂质谱图 图 C.16 硫丹质谱图 图 C.17 p,p-滴滴滴质谱图 GA/T 16 图 C.18 顺式九氯质谱图 图 C.19 硫丹硫酸酯质谱图 图 C.20 p，p滴滴涕质谱图 图 C.21 异狄氏剂酮质谱图 GA/T 17 图 C.22 甲氧滴滴涕质谱图 _