EDTA依赖性血小板减少症血小板解聚方法在不同血细胞检测系统的效果评价.pdf

临床检验杂志2 0 2 3年6 月第41卷第6 期D0I:10.13602/ki.jcls.2023.06.02EDTA依赖性血小板减少症血小板解聚方法在不同血细胞检测系统的效果评价Chin J Clin Lab Sci,Jun.2023,Vol.41,No.6 407.临床检验技术研究钟阳，李颖能，张伟红（广州市第一人民医院检验科，广州510 18 0)摘要：目的通过比较不同方法对2 5例EDTA依赖性血小板减少症（EDTA-PTCP）标本中聚集血小板（platelets,PLT)的荧光染色法通道（PLT-0）解离效果，为实验室处理EDTA-PTCP标本提供参考。方法收集2 0 2 0 年1月至2 0 2 1年4月在广州第一人民医院符合诊断为EDTA-PTCP的2 5例患者的EDTA-K，抗凝静脉血。在血细胞分析仪旁采集静脉血于无抗凝剂管、构橡酸钠抗凝管、肝素抗凝管各1管,EDTA-K2抗凝管3管（A、B、C管）。无抗凝剂管即时检测所得值为患者PLT真值；肝素抗凝管、构橡酸钠抗凝管及A管在不同时间段（即时、0.5h、1.0 h、2.0 h、3.0 h)分别在2 台血细胞分析仪上测定PLT数值;B、C管分别放置0.5h、1.0 h 后，加入丁胺卡那霉素1.0、2.0、3.0 h后测定PLT数值，比较各管各时间段的PLT解聚情况。结果用XE-5000的PLT-O通道检测EDTA-PTCP组2 5例样本的肝素、枸橡酸钠和EDTA-K2抗凝剂管PLT数值均随着样本放置时间的延长而下降。BC-6800Plus的PLT-0对EDTA-K2抗凝剂管在各时间段的PLT解聚率均大于XE-5000。加入丁胺卡那霉素后,BC-6800Plus的PLT-0对各管在各时间段PLT检测结果均比XE-5000更加接近准确值（即时检测值）。结论对于EDTA-PTCP血小板准确计数优先选用机旁抽血即时检测,在抽血1h内用BC-6800Plus的PLT-O模式检测或1h内加入丁胺卡那霉素检测是EDTA-PTCP患者获得准确的PLT数值的最佳方案。关键词：假性血小板减少；血小板聚集；XE-5000;BC-6800Plus；丁胺卡那霉素；解离中图分类号：R446Evaluation for effectiveness of EDTA dependent pseudothrombocytopenia platelets depolymerization methods in differentblood cell analyzerZHONG Yang,LI Yingneng,ZHANG Weihong(Department of Laboratory Medicine,Guangzhou First Peoples Hospital,Guangzhou510180,Guangdong,China)Abstract:Objective To compare the effects of dissociation for the aggregated platelets(PLT)in 25 samples with EDTA-dependentpseudothrombocytopenia(EDTA-PTCP)by different methods of fluorometric channels of platelet optical count(PLT-O)in order toprovide a reference for clinical laboratories in processing such samples.Methods A total of 25 samples of EDTA-K,anticoagulated ve-nous blood were collected from the patients eligible for the diagnosis of EDTA-PTCP in Guangzhou First Peoples Hospital from January2020 to April 2021.The venous blood samples were collected close to the hematocrit analyzer and distributed into the tubes:non-anti-coagulant,sodium citrate anticoagulation and heparin anticoagulation for each,and three tubes with EDTA-K,anticoagulation tube(tubes A,B and C).The obtained values of PLT from the non-anticoagulant tubes were taken for the true values.The heparin anticoag-ulation tubes,sodium citrate anticoagulation tubes and EDTA-A tubes were determined to obtain the values of PLT counts on two bloodcell analyzers at different time points(immediate,0.5,1.0,2.0 and 3.0 hours).The PLT counts in EDTA-B and C tubes were re-de-termined following placing for 0.5 and 1.0 hours,and subsequent addition of amikacin for 1.0,2.0 and 3.0 hours respectively.ResultsThe PLT values of the 25 samples of EDTA-PTCP group in the heparin,sodium citrate and EDTA anticoagulant tubes were all de-creased with the extension of placement time as determined by electrical impedance analysis in PLT-O channel of XE-5000.The PLTdepolymerization rates of the samples with EDTA-PTCP in EDTA anticoagulant tubes determined by PLT-O in BC-6800 Plus were supe-rior to those in XE-5000 at all time points.After the addition of amikacin,the PLT assay results determined in BC-6800 Plus for anyanticoagulant tube at each time period were all closer to the accurate values compared to the assay values in XE-5000.ConclusionFor accurate platelet count of EDTA-PTCP,immediate detection by machina sampling is preferred.In the face of EDTA-PTCP pa-tients,the best method to obtain accurate PLT values in EDTA-PTCP patients,the determination by PLT-O mode in BC-6800 Plus orby adding amikacin within 1 hour of blood drawing should be the best solution mode for obtaining accurate PLT values in EDTA-PTCPpatients.Key words:pseudothrombocytopenia;platelet aggregation;XE-5000;BC-6800 Plus;Amikacin;dissociation作者简介：钟阳，198 9年生，男，技师，大学本科，主要研究方向是血细胞准确计数。通信作者：张伟红，主任技师，E-mail：137 2 54948 46 16 3.c o m。文献标志码：A.408EDTA 依赖性假性血小板减少症（EDTA-de-pendent pseudo-thrombocytopenia,EDTA-PTCP）是由于在EDTA抗凝血中EDTA诱导血小板（platelets，PLT)中的特殊蛋白使PLT发生凝集导致PLT发生假性减少的现象。虽然这种现象发生的几率很低（0.0 7%1%)2 ,但却给临床诊治工作带来很大困扰，既容易造成误诊又延误时效，继而增加患者的经济负担3。目前临床多应用电阻抗法（PLT-I法)对存在EDTA-PTCP现象的患者血液标本进行检测,但考虑到存在不同程度的PLT聚集反应，PLT-I法的PLT数值常低于实际值,最终无法提供数据参考4-5。针对这种现象,临床上提出使用枸橡酸钠、肝素钠等其他抗凝剂替代EDTA-K,进行抗凝以解决EDTA-PTCP的PLT聚集现象6 ,也有人提出在血中加入一定浓度的丁胺卡那霉素进行解聚7-8 。近几年,随着血细胞分析仪的快速发展，有文献报道迈瑞BC-6800Plus（具有解聚功能）的荧光染色法（PLT-O法）对EDTA-PTCP患者的全血进行检测时,能够纠正PLT聚集9-10 。本研究通过不同方法对2 5例EDTA-PTCP患者样本中聚集PLT的PLT-O法解离效果进行比较,为实验室处理EDTA-PTCP样本提供参考。1材料与方法1.1标本来源1.1.1非EDTA-PTCP组收集50 例 PLT高(PLT30010/L)、中(10 0 10/LPLT30010/L)、低（PLT10010/L）值分布，检测仪器无PLT报警且镜检无聚集，无白细胞、红细胞碎片干扰的住院患者EDTA-K抗凝静脉血,每份标本2 mL,检测时间不超过4h,其中男2 9 例,女2 1例,年龄1 9 1岁，平均年龄57 岁。1.1.2EDTA-PTCP组收集2 0 2 0 年1月至2 0 2 1年4月PLT10010/L或在7 天内百分比减少50%静脉血标本；观察标本状态,排除因凝块造成的假性PLT减低；推片染色，镜检发现有PLT聚集符合诊断为EDTA-PTCP的2 5例患者的EDTA-K,抗凝静脉血,其中男11例,女14例,年龄2 6 9 8岁,平均年龄58 岁。EDTA-PTCP组患者均进行确认实验，患者在血细胞分析仪旁重新抽血置于EDTA-K,抗凝管中,若PLT数值随标本放置时间延长而下降且血涂片有血小板聚集则可确认为EDTA-PTCP患者。参与本次研究的患者均签署患者知情同意书，并得到广州第一人民医院伦理委员会的批准（批准临床检验杂志2 0 2 3年6 月第41卷第6 期ChinJClin Lab Sci,Jun.2023,Vol.41,No.61.2试剂和仪器静脉血无抗凝、EDTA-K,抗凝、枸橡酸钠抗凝、肝素抗凝真空采血管由广州阳普医疗用品公司提供；丁胺卡那霉素由齐鲁制药公司生产；瑞氏-吉姆萨复合染液由BASO公司提供；Olympus双目显微镜;SysmexXE-5000血细胞分析仪(XE-5000)和 MindaryBC-6800 Plus(BC-6800 Plus)血细胞分析仪均使用原厂配套试剂和质控品。1.3实验方法1.3.1实验前准备严格按照仪器说明书操作，操作前用配套的质控物和校准品进行质控和校准，设置XE-5000检测模式为：CBC+DIFF+NRBC+RET,BC-6800Plus检测模式为:CDR。1.3.2实验操作将非EDTA-PTCP组的标本颠倒混匀后分别在XE-5000和BC-6800Plus上进行检测,记录 PLT结果。对于 EDTA-PTCP组的标本,联系患者血细胞分析仪旁抽血,无抗凝剂管、肝素钠抗凝管、枸橡酸钠抗凝管各1管,EDTA-K,抗凝管3管（A、B、C 管）,每管2 mL静脉血,采血过程严格依照操作规程进行。无抗凝剂管于XE-5000即时检测（尽快检测，避免血液发生凝固），用此检测所得PLT数值为患者的准确PLT数值;肝素抗凝管、枸橡酸钠抗凝管及EDTA-K抗凝A管在不同时间段（即时、0.5h、1.0 h、2.0 h、3.0 h），先后在XE-5000和BC-6800Plus上按照EDTA-K,抗凝A管、肝素抗凝管、枸橡酸钠抗凝管的顺序分别在XE-5000和BC-6800Plus的PLT-I和PLT-0模式下检测PLT数值并进行血片观察；患者EDTA-K2抗凝B、C 管分别放置不同时间段(0.5h、1.0 h）测定PLT数值后，两管均加入浓度为10 0 mg/mL丁胺卡那霉素10 0 L,加人丁胺卡那霉素后放置不同时间段（1.0 h、2.0 h、3.0 h）进行解离并先后在XE-5000和BC-6800Plus的PLT-I和PLT-O模式下测定各管PLT数值并进行血片观察。1.4数据处理及统计方法EDTA-Kz、肝素、枸橡酸钠3种抗凝管在不同时间段的检测结果以无抗凝剂管即时检测结果进行标准化处理，处理后的结果变成无抗凝管即时检测值的解聚率和聚集率，标准化处理公式如下（X：3种抗凝管在不同时间段的检测结果；X无抗凝剂：无抗凝剂管即时检测结果；y1:处理后聚集率的结果；y2:处理后解聚率的结果):yl=(X,-X无抗凝剂)/X无抗凝剂,y2=X,/X无抗凝剂。统计分析采用SPSS22.0和Analyse-it软件,结果用xs表示，采用Passing-Bablok回归分析和Bland-Altman偏差分析评价两组结果的相关性,配文号:K-2019-176-01)。临床检验杂志2 0 2 3年6 月第41卷第6 期对t检验评价组内差异,以P0.05），放置其他时间段(0.5h、1.0 h、2.0 h、3.0 h）检测结果均有显著差异(P0.05）,放置2.0 h、3.0 h 检测结果均有显著差异（P 0.0 5）,结果见表1。BC-6800Plus对A管在各时间段的PLT解聚率均大于XE-5000,见图2。BC-6800 Plus解聚率(%)104.540.082 0 0.556 496.370.000 10.205586.290.000 163.530.000 10.000 165.090.000 10.000 1Mean(2.2)95%LOA(23.0 27.4)100200XE-5000的PLT-0检测模式PLT(10/L)300PP20.051 2400500.4101507100-(%）李事浙50-0oh图2 EDTA-K,抗凝管在各时间段的PLT解聚率检测结果2.2.3不同时间内加入丁胺卡那霉素后各模式下PLT聚集情况结果比对对于XE-5000和BC-6800表2 EDTA-K，抗凝管放置0.5h加人丁胺卡那霉素（B管）后检测PLT-0结果与无抗凝剂管即时检测PLT结果比对（xs)B管放无抗凝剂置时间(10%/L)0 h180.5267.501.5 h一2.5 h一3.5 h一表3EDTA-K，抗凝管放置1h加人丁胺卡那霉素（C管）后检测PLT-O结果与无抗凝剂管即时检测PLT结果比对（xs）C管放无抗凝剂置时间(10%/L)0h180.5267.502h一3h一4h1207PLT-O聚集率40oh0.5hTh2h3h图3XE-5000和BC-6800Plus的PLT-0模式对不同时间加入丁胺卡那霉素样本的PLT解聚率3讨论根据国际血液学标准化委员会（ICSH）推荐，全血细胞技术抗凝剂宜用EDTA,它与水相中的钙离子形成稳定的螯合物而阻止血液凝固，但随着EDTA在临床检验科的广泛应用,关于EDTA可诱导PLT发生体外异常聚集的报道也逐渐增多6 。这种现象的发生会造成误诊又延误时效,增加患者的经济负担,给临床诊治工作带来很大困扰6 。为此，寻找准确计数此类患者血液中的PLT的最佳方案尤为重要。面对EDTA-PTCP样本,临床上通常采用更换抗凝剂重新采血的方法2 。根据2.2.1的结果，本临床检验杂志2 0 2 3年6 月第41卷第6 期ChinJClin Lab Sci,Jun.2023,Vol.41,No.6XE-5000Plus的PLT-O检测模式,BC-6800Plus对不加丁胺-BC-6800Plus卡那霉素（A管）和分别放置0.5h和1h后加人丁胺卡那霉素（B管和C管）抗凝管的各时间段PLT检测结果相比于XE-5000更加接近准确值（即时检测值）；对于不同时间加入丁胺卡那霉素的结果,抽血后放置0.5h加人丁胺卡那霉素的解离效果稍微TT0.5 h1h优于抽血后放置1h加人丁胺卡那霉素的解离效2h3hPLT(10/L)角一154.68 59.93153.2460.72154.0065.63XE-5000PLT(10/L)解聚率(%)一140.80 50.44141.8052.45134.4854.49+EDTA(XE-5000)+0.5h后+丁胺卡那霉素(XE-5000)1h后+丁胺卡那霉素(XE-5000)+EDTA(BC-6800Plus)+0.5h后+丁胺卡那霉素(BC-6800Plus)-1h后+丁胺卡那霉素(BC-6800Plus)果,两者解离的PLT数值在2 h以后趋于稳定。结果见表2、表3和图3。XE-5000BC-6800 Plus解聚率(%)PLT(10/L)角一一87.44178.96 68.6586.42177.8869.8686.47176.16 70.58BC-6800 PlusPLT(10/L)解聚率(%)一一81.19169.8459.2881.35168.9260.9577.49166.96 62.20研究的2 5例标本更换为肝素或枸橡酸钠抗凝剂，其中的PLT数值依旧随放置时间延长而下降,放置各时间段后，血涂片上也可观察到PLT聚集现象。为进一步探索EDTA-PTCP标本的解聚方法,迈瑞BC-6800Plus中的PLT-O通道可以通过荧光试剂中的“解聚物质 和形成涡流破坏PLT聚集9-10 。本研究通过XE-5000和BC-6800Plus的PLT-0通道检测模式对非EDTA-PTCP组的50 例标本测试,其结果差异无统计学意义,表明两台仪器对非PLT聚集标本的PLT-O检测结果相关性好。对放置各时间的EDTA-K，抗凝管（A管）标本,BC-6800Plus的PLT-0法对PLT的检测结果均比XE-5000更接近真值,其解聚率也均大于XE-5000。为探索其他PLT解聚的效果，丁胺卡那霉素对聚集PLT具有解离作用,EDTA-K，抗凝管（B管）抽血后放置0.5h加人丁胺卡那霉素的解离效果略优于抽血后放置1 h加人丁胺卡那霉素（C管）的解离效果,两者解离的PLT数值在2 h以后趋于稳定;B、C 两管加入丁胺卡那霉素后于BC-6800Plus的PLT-O检测模式效果优于在XE-5000的PLT-0检测模式上,解聚（下转第416 页）PI解聚率(%)一99.8799.0098.04一96.240.000 10.08195.390.000 10.035 694.070.000 10.014 7P20.000 40.690.000 30.513.30.001 10.328 7PIP2.41610 Tang YM,Liao C,Xu XJ,et al.Th1/Th2 cytokine profiles inG*/G-bacteremia in pediatric hematology/oncology patients J.Pediatr Blood Cancer,2012,58(1):50-54.11Song Y,Zhang W,Zhang L,et al.Cerebrospinal fluid IL-10 andIL-10/IL-6 as 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