FOXO1在宫颈癌组织中的表达及临床意义.pdf

中国科技期刊数据库 医药 82 FOXO1 在宫颈癌组织中的表达及临床意义 张海敏 张 佩 郑丽霞 郭 静 徐俊利 邯郸市第二医院，河北 邯郸 056001 摘要：摘要：目的 研究叉头框转录因子 O1（Forkhead box transcription factor O1，FOXO1）在宫颈癌组织中的表达变化趋势并进一步探索其表达变化与宫颈癌进程的关系，为临床救治宫颈癌探索新的作用靶点。方法 筛选近两年在我院妇科就诊且初次诊断为宫颈癌的 30 例患者进入本研究，详细收集并整理入选患者的临床资料和实验室检测结果，取患者部分宫颈癌组织和癌旁组织，经过相关步骤处理后，采用 RT-PCR 方法检测 FOXO1 mRNA 表达，采用免疫组化（IHC）法检测 FOXO1 蛋白表达；通过 Kaplan-Meier 法探讨在宫颈癌中 FOXO1 表达变化趋势与患者病理特征是否具有关联性，采用 Logic 回归分析方法研究宫颈癌中 FOXO1 表达变化趋势对患者治疗效果及预后的预测价值。结果 宫颈癌患者癌组织中 FOXO1 mRNA 和蛋白表达具有相同的变化趋势，比较发现，宫颈癌组织 FOXO1 mRNA 和蛋白相对表达量均明显高于宫颈癌癌旁组织中的相对表达量，差异有统计学意义（P0.05）。此外，病理分级 I、II、III、IV 期患者人群宫颈癌组织中 FOXO1 mRNA 相对表达量和蛋白相对表达量逐级升高，差异有统计学意义（P0.05），提示 FOXO1 mRNA 和蛋白表达量越高则宫颈癌分化程度越高。并且分析结果显示，FOXO1 低表达患者的 5 年生存率明显高于 FOXO1 高表达患者，FOXO1 高表达为宫颈癌患者独立危险因素。结论 宫颈癌 FOXO1表达升高与宫颈癌病理分化程度正相关，FOXO1 表达量升高可作为判断宫颈癌预后较差的判断指标，并且 FOXO1可作为宫颈癌治疗及新药研究的靶点。关键词关键词：叉头框转录因子 O1；宫颈癌；病理特征；预后；危险因素 中图分类号：中图分类号：R737 Expression and clinical significance of FOXO1 in cervical cancer tissue ZHANG Haimin ZHANG Pei ZHENG Lixia GUO Jing XU Junli The Second Hospital of Handan,Hebei Handan 056001 Abstract:Objective To investigate the expression trend of Forkhead box transcription factor O1(FOXO1)in cervical cancer tissues and further explore the relationship between its expression and the process of cervical cancer,in order to explore new targets for clinical treatment of cervical cancer.Methods Thirty patients who received gynecological treatment in our hospital and were initially diagnosed with cervical cancer in the past two years were selected for this study.The clinical data and laboratory test results of the enrolled patients were collected and sorted out in detail.Part of cervical cancer tissues and adjacent tissues were taken from the patients.The expression of FOXO1 protein was detected by immunohistochemistry(IHC).Kaplan-Meier method was used to explore whether the change trend of FOXO1 expression in cervical cancer was correlated with the pathological characteristics of patients,and Logic regression analysis was used to study the prediction value of the change trend of FOXO1 expression in cervical cancer on the treatment effect and prognosis of patients.Results The mRNA and protein expression of FOXO1 in cancer tissues of patients with cervical cancer had the same trend of change,and the relative expression levels of FOXO1 mRNA and protein in cervical cancer tissues were significantly higher than those in adjacent tissues of cervical cancer,with 中国科技期刊数据库 医药 83 statistical significance(P0.05).In addition,the relative expression level of FOXO1 mRNA and protein in cervical cancer tissues of patients with pathological grades I,II,III and IV increased step by step,and the difference was statistically significant(P0.05),suggesting that the higher the expression level of FOXO1 mRNA and protein,the higher the degree of cervical cancer differentiation.Moreover,the analysis results showed that the 5-year survival rate of patients with low FOXO1 expression was significantly higher than that of patients with high FOXO1 expression,which was an independent risk factor for cervical cancer patients.Conclusion The increased FOXO1 expression in cervical cancer is positively correlated with the degree of pathological differentiation of cervical cancer.The increased FOXO1 expression can be used as an indicator to judge the poor prognosis of cervical cancer,and FOXO1 can be used as a target for cervical cancer treatment and new drug research.Keywords:Forkhead box transcription factor O1(FOXO1);Cervical cancer;Pathological features;Prognosis;Risk factors 宫颈癌是女性生殖道最常见的恶性肿瘤之一，是导致女性癌症死亡的主要病种。WHO 数据显示，全球宫颈癌人群数量在 2018 年度新增超过 50 万，全球因此致死人数超过 30 万。据我国癌症中心年度报告显示，我国女性生殖道肿瘤发病率呈逐年升高和年轻化趋势，由其以宫颈癌、卵巢癌、子宫内膜癌三大妇科肿瘤患者人群逐年增多，给我国女性身心健康造成巨大威胁，也给国家和家庭造成沉重经济负担。并且由于体检意识淡薄、检测技术相对落后，致使一定比例的宫颈癌患者在确诊时已经发展至中晚期，是影响患者预后的重要因素。近年来，随着肿瘤患病率升高及肿瘤患者人群的增多，成为导致人类死亡的最主要疾病之一，是医药工作者探索研究的热点。越来越多的研究表明，叉头框转录因子（FOX）与多部位肿瘤的发生发展具有密切关系，分子生物学研究证实FOX具有多种生物学活性，目前已证实 FOX 参与肿瘤细胞的恶性进展行为，故 FOX可作为癌症诊治靶点开展相关研究。FOX 家族中最引人关注的亚型为 FOXO，其中 FOXO1 发现最早、研究最为深入，研究证实，FOXO1 参与细胞增殖、分化、凋亡、自噬等众多生物学过程，并且文献报道 FOXO1 在卵巢癌、口腔癌、子宫内膜癌、甲状腺癌、胰腺癌等等肿瘤组织高表达。但是 FOXO1 与宫颈癌进程及预后的相关性还需探索研究，本实验旨在研究 FOXO1 与宫颈癌患者病理特征及宫颈癌患者预后的相关性，以期为宫颈癌临床治疗提供参考。1 一般资料与方法 1.1 研究对象 筛选近两年在我院妇科就诊且初次诊断为宫颈癌的 30 例患者进入本研究。本研究筛选入组标准：初次经病理学确诊的宫颈癌患者；拟进行外科切除癌组织治疗方案；既往未采取其它方案进行治疗的历史；临床资料及实验室检查数据均齐全。排除标准：患有其它肿瘤；穿刺手术不耐受；精神或认知功能异常。1.2 主要试剂与仪器 FOXO3a 指标Western blot实验检测用蛋白提取及定量试剂、抗体、染色试剂、PVDF 膜等材料由武汉博士德生物技术公司提供；FOXO3a 指标 RT-PCR 实验检测用 RNA 提取试剂、反转录、扩增、RNA 上下游序列等材料由北京博奥森生物技术公司提供；过氧化氢、二甲基亚砜等试剂购自北京化学试剂厂。石蜡包埋机、轮式组织切片机购自德国 Lacar 公司；医学光学显微镜购自日本日立公司；RT-PCR 扩增仪购自美国 fishier公司；标本微量加样枪由北京六一仪器厂提供；凝胶成像仪有上海天能科学仪器有限公司提供；混匀器购自海门其林贝儿仪器厂。1.3 临床资料收集 详细收集并录入筛选入组患者性别、出生年月、婚史、病理分期、合并基础疾病、既往用药史等临床资料，并进行回顾性分析。1.4 取材 在手术过程中，经患者或家属同意后，留取部分宫颈癌组织和癌旁组织，癌旁组织取材部位为距癌组织边缘5 cm。1.5 qRT-PCR 法检测宫颈癌组织和癌旁组织 FOXO1 mRNA 表达 中国科技期刊数据库 医药 84 宫颈癌组织及癌旁组织在冰上剪碎后，采用TRIzol 分别提取癌组织及癌旁组织的总 RNA，行含量及纯度测定后，按照试剂盒说明逐步进行反转录和 PCR扩增反应，扩增反应条件依据既往文献表达的程度进行设定，扩增共进行 45 个循环。通过相应计算方法检测癌组织和癌旁组织 FOXO1 mRNA 相对表达量。1.6 免疫组织化学法检测宫颈癌组织和癌旁组织FOXO1 蛋白表达 取部分宫颈癌组织和癌旁组织置于 4%多聚甲醛溶液中固定 5 d，脱水后进行石蜡包埋，然后依次行脱蜡、二甲苯透明处理后，加入适量 pH 6.0 的柠檬酸溶液进行微波修复，3%H2O2灭活后滴加1:500稀释后的FOXO1抗体，4 摄氏度孵育过夜，冲洗后滴加辣根酶标记的IgG 二抗室温孵育 1.5 h，DAB 显色后通过显微镜观察宫颈癌组织和癌旁组织 FOXO1 蛋白表达。由两名实验人员分别对 FOXO1 阳性表达进行判断。1.7 统计学方法 将实验所得数据录入到 IBM 公司开发的 SPSS 统计学软件中，统计学方法选择独立样本 t 检验，P0.05为差异有统计学意义。2 结果 2.1 一般临床资料回顾性分析结果 入选的30例宫颈癌初诊患者中3039岁共1例、4049 岁共 14 例、5059 岁共 12 例、6069 岁共 2例、70 岁及以上共 1 例；常居农村患者 18 例、常居城市患者 12 例；1 次婚史 20 例、2 次婚史 7 例、3 次及以上婚史 3 例；所有患者宫颈癌分期均处于 IIIII期。2.2 FOXO1 mRNA 和蛋白表达检测结果 癌组织中 FOXO1 mRNA 和蛋白相对表达量均显著高于癌旁组织中 FOXO1 mRNA 和蛋白相对表达量，差异存在统计学意义（P0.05）。2.3 Kaplan-Meier 和 Logic 回归分析结果 经分析发现，宫颈癌组织中 FOXO1 mRNA 相对表达量和蛋白相对表达量较高的患者 5 年生存率明显低于FOXO1 mRNA 相对表达量和蛋白相对表达量较低的患者（P0.05）。提示 FOXO1 高表达为宫颈癌患者独立危险因素。3 讨论 在女性癌症疾病谱中，宫颈癌是仅次于乳腺癌居第二位，因其高发病率和高致死率使医药工作者持续关注。但宫颈癌是所有恶性肿瘤中唯一已经明确病因的恶性肿瘤，因此，也成为第一个可能被消除的肿瘤。宫颈癌从癌前病变发展为宫颈癌周期一般在 5 到 10 年的时间，所以进一步研究宫颈癌分子生物学和基因学转变具有重要意义。近年来，随着医疗诊断技术及治疗方案方法的不断更新与改进，宫颈癌患者生存期也相对延长，但是宫颈癌疾病给患者身心造成的痛苦以及沉重的经济负担，仍然给罹患该疾病的患者生活质量带来很大的影响。随着病理生理学研究的深入，尤其是分子生物学和基因组学的发展，相关学者对宫颈癌的发病机制做了大量的研究，目前已证实多种基因突变以及蛋白异常表达与宫颈癌疾病的发生发展密切相关。FOXO1 是目前 FOX 转录因子家族中研究较多的一种亚型，具有广泛的生物学调控作用，并且在肿瘤疾病进展的调控机制中扮演着重要角色。已证实 FOXO1对癌细胞恶性生物学行为具有促进作用。本研究结果显示，宫颈癌组织中样本中 FOXO1 mRNA 相对表达量和蛋白相对表达量均明显高于同一患者癌旁组织中的相对表达量，宫颈癌组织中 FOXO1 mRNA 相对表达量和蛋白相对表达量较高的患者 5 年生存率明显低于 FOXO1 mRNA 相对表达量和蛋白相对表达量较低的患者。总之，宫颈癌 FOXO1 表达升高与宫颈癌病理分化程度正相关，FOXO1 表达量升高可作为判断宫颈癌预后较差的判断指标，并且 FOXO1 可作为宫颈癌治疗及新药研究的靶点。参考文献 1李道娟,师金,靳晶,杜耐一,贺宇彤.宫颈癌的流行病学趋势J.中华肿瘤杂志,2021,43(09):912-916.2覃彦珠,江锦芳,刘鑫,等.妇科肿瘤患者恐惧疾病进展现状调查及其影响因素分析J.广西医学,2019,41(09):1180-1183.3王宇,宋淑芳,刘凤.我国宫颈癌流行病学特征和发病高危因素的研究进展J.中国妇幼保健,2019,34(05):1207-1209.4Bray F,Ferlay J,Soerjomataram I,et al.Globalcancer statistics 2018:GLO BO CAN estimatesofincidence and mortality world-wide 中国科技期刊数据库 医药 85 for 36 cancersin 185 countries J.CA,2018,68(6):394-424.5高海宁,白瑞霞,赵鹏伟,宋婉莹,林萱.miR-581 调控 FOXO1 对卵巢癌 SKOV3 细胞自噬的影响J.肿瘤防治研究,2022,49(05):403-407.6 肖兰飞,高继萍,闫晓如,王晓堂,续国强,宋国华.槲皮素对口腔癌 Tca-8113 细胞增殖、迁移和侵袭的影响及PI3K/AKT信号通路的调控作用J.中国比较医学杂志,2021,31(06):30-34.7李峰,刘卓,仉红平.miR-96 在子宫内膜癌中表达的变化及其对癌细胞恶性生物学行为的影响J.中国肿瘤生物治疗杂志,2021,28(03):275-282.8陈志青,潘红梅.染料木黄酮对人甲状腺癌SW579细胞肿瘤相关基因表达谱的影响J.卫生研究,2021,50(05):849-851.9李琳,喻超,潘耀振,等.MMP28 在胰腺癌 PI3K-Akt信号通路中的作用及机制 J.贵州医科大学学报,2020,45(06):627-632.10王瑾瑶,张年萍,白志强,等.1993-2017 年中国宫颈癌发病率和死亡率长期趋势的年龄-时期-队列模型分析J.中国全科医学,2022,25(13):1564-1568.11 宫朝玲,顾慧霞,张彦丽,张超,华国栋.育龄女性生殖普查对降低生殖道感染和宫颈癌发病率的影响探讨J.中国卫生产业,2016,13(28):39-41.12蒋宇飞,袁蕙芸,赵文穗,等.1973-2013 年上海市长宁区宫颈癌发病率和死亡率时间趋势分析J.中国肿瘤,2020,29(04):266-271.13赵京阳,伍冀湘,张树荣.叉头框转录因子 M1 对人肝癌细胞增殖和凋亡及侵袭的影响J.中国医药,2022,17(04):554-558.14 梁 琴,王 江 芬,王 嘉 伟.LINC00662/微 小RNA-186-5p/叉头框转录因子 D1 调控乳腺癌 MCF-7 细胞 生 物 学 行 为 的 研 究 J.中 华 实 验 外 科 杂志,2022,39(04):625-628.15景建军,张云江,王银.血清肺腺癌转移相关转录因子-1、叉头框转录因子 M1 和神经生长因子表达水平与肺癌患者临床病理特征及肿瘤转移的关系J.实用医院临床杂志,2021,18(06):67-71.16田文秀,王晶,徐丹等.卵巢高级别浆液性癌组织中叉头框转录因子M1和胶质瘤相关癌基因同源蛋白-1的表达与患者临床病理特征和预后的关系J.中国医学前沿杂志(电子版),2020,12(06):66-69.