LINC01296调控Wnt_β-catenin通路对卵巢癌顺铂耐药的影响.pdf

():.:.():.():.:.():./.():./:.():./(/).:./.():.:.:.():.(编校:蔺玥)调控/通路对卵巢癌顺铂耐药的影响林芳婷吴清瑜王 茹李 波海南省妇女儿童医学中心妇科海南 海口【摘要】目的:探究长链非编码 调控/连环蛋白()通路对卵巢癌顺铂耐药的影响 方法:培养人卵巢癌 细胞及 顺铂耐药/细胞 检测 在二者中的表达情况将/细胞分为 组:组(正常培养)、组(转染 )、组(转染 )、组(转染 /通路激动剂 /处理)、组(转染 /处理)验证转染效果 法检测各组/细胞顺铂半数抑制浓度()(、/顺铂处理)及增殖活力流式细胞术检测各组/细胞凋亡划痕愈合实验检测各组/细胞迁移能力 检测各组/细胞中/通路及增殖、凋亡、迁移、侵袭相关蛋白 细胞淋巴瘤/白血病基因 相关 蛋白基因()基质金属蛋白酶()神经型钙黏附蛋白()表达情况 结果:在/细胞中的表达水平明显高于 细胞(.)/细胞转染 后 表达水平较 组、组明显下降(.)表明转染成功与 组比较 组/细胞顺铂、增殖活力、细胞划痕愈合率、侵袭数均下降凋亡率增高 、蛋白表达均减少 蛋白表达增加(.)与 组比较 组/细胞顺铂、增殖活力、细胞划痕愈合率、侵袭数均增高凋亡率下降 、蛋白表达均增高 蛋白表达下降(.)结论:敲低 表达可降低/细胞对顺铂的耐药性可能通过抑制/通路实现【关键词】长链非编码 /通路卵巢癌顺铂耐药【中图分类号】.【文献标识码】:./.【文章编号】()【收稿日期】【修回日期】【基金项目】海南省卫生计生行业科研项目(编号:)【作者简介】林芳婷()女海南海口人主治医师研究方向:卵巢癌 :.林芳婷等 调控/通路对卵巢癌顺铂耐药的影响 /.【】:/.:/./:()()()(/)(/).()/(/)././././()()/.:/(.)./(.)./(.)./(.).:/.【】/():卵巢癌是一种妇科常见的恶性肿瘤具有高发病率、高复发率、高死亡率的特点 目前顺铂耐药已成为卵巢癌患者成功治疗的最重要障碍之一 因此揭示卵巢癌化疗耐药的病理机制具有重要的临床价值 长链非编码()在癌症发生发展中的作用越来越被人们所重视 研究已表明 可通过直接或间接多种途径调控癌症相关基因的表达而影响其恶性生物学行为且一些 已被证明是许多癌症诊断和预后的潜在标志 为 家族新发现的成员位于.染色体上其已被证实在许多癌症中过表达如胃癌、食管鳞癌、膀胱癌、非小细胞肺癌、口腔癌、神经母细胞瘤等可加速肿瘤的恶性进展 此外有报道称 在卵巢癌中亦过表达且可作为卵巢癌患者诊断及预后的有前景的指标 但到目前为止尚无研究报道 在卵巢癌化疗耐药中的作用及可能机制/连环蛋白()通路调控包括卵巢癌在内的多种癌症的生存、转移及化疗耐药 此外大量研究表明一些 在癌症中的作用与调控/通路有关如 、等 基于上述内容本研究通过体外培养人卵巢癌 顺铂耐药细胞(/)观察 对/细胞顺铂耐药的影响并探究其潜在的分子机制以期为化疗耐药卵巢癌的治疗提供参考 材料与方法.材料 细胞、/细胞(货号分别为 、均上海烜雅生物科技有限公司)顺铂、/通路激动剂(货号分别为、上海联硕生物科技有限公司)小干扰()及其阴性对照()由武汉淼灵生物科技有限公司构建 胎牛血清()(货 号西安中团生物科技有限公司)、(货号分别为 、均上海北诺生物科技有限公司)、引物序列购自赛百慷(上海)生物技术股份有限公司反转录试剂盒、试剂盒(货号分别为、均 公司)试剂盒、/试剂盒(货号 、均杭州联科生物技术股份有限公现代肿瘤医学 年 月 第 卷第 期 .司)(基底胶)、小室购自美国 公司(货号分别为、)裂解液、试剂盒(货号分别为、均 公司)兔源一抗 、细胞淋巴瘤/白血病基因 相关 蛋白基因(/)、基质金属蛋白酶 ()、神经型钙黏附蛋白()(货号分别为、均 公司)兔源一抗、标记的 山羊抗兔二抗、发光液(货号分别为、均 生物科技公司).细胞的培养及分组、/细胞均采用 培养基(含 青 链霉素双抗、)于、含培养箱中常规培养待细胞密度约 时收集 将/细胞以 个/接种至 孔板中待密度达 时利用 进行转染实验设计分组如下:组(不进行任何转染)、组(将 转染至/细胞)、组(将 转染至/细胞)、组(转染 /处理)、组(转染 /处理)继续培养 而后进行后续实验.检测 细胞及各组/细胞中 表达情况采用 法从.细胞及各组/细胞中提取 并进行反转录合成 而后以 为模板进行扩增以 为内参经 法分析 表达情况 引物序列:()():()().法检测各组/细胞顺铂半数抑制浓度()和增殖活力收集.各组/细胞以 个/孔接种至 孔板中 后分别加入、/顺铂处理 而后加入 试剂孵育 借助 酶标仪测定 波长处的吸光度(值)经 .软件计算顺铂 收集.各组/细胞以 个/孔接种至 孔板中 后加入 试剂孵育 借助酶标仪测定 值细胞增殖活力与 值成正比.流式细胞术检测各组/细胞凋亡将.各组/细胞继续培养 而后以 个/管转移至流式管中分别加入 ()和()孵育 上流式细胞仪()检测细胞凋亡率.划痕愈合实验检测各组/细胞迁移能力弃去.各组/细胞的培养基用 枪头在孔中间竖着划一条直线 清洗后加入新培养基继续培养 而后于 显微镜下拍照 软件对图像进行分析计算划痕愈合率.实验检测各组/细胞侵袭能力收集.各组/细胞分别用不含 的培养基制备细胞悬液(个/)取 接种至 小室(已预先包被)中 孔板中加入 含有 的培养基 后甲醛将侵入膜下表面的细胞固定 随后用棉签拭去上表面的细胞 清洗后结晶紫染液(.)染色 于显微镜下计数细胞数量即为侵袭数量.检测各组/细胞中 、蛋白表达 裂解液提取各组/细胞总蛋白测定蛋白浓度后利用凝胶电泳分离蛋白随后转模、封闭在 下将膜与兔源一抗 ()、()、()、()、()、()孵育过夜次日在室温下将膜与 山羊抗兔二抗()孵育 显影 软件分析蛋白条带灰度计算目的蛋白表达量(内参).统计学分析用 .统计软件进行分析 计量资料表示为()检验用于 组间比较 分析和 检验用于 组及 组以上的组间比较 .为差异有统计学意义 结果.在/细胞中的表达情况及转染效果 检测结果显示 在/细胞中的表达水平明显高于 细胞(.)见图 /细胞转染 后 表达水平较 组、组明显降低(.)表明转染成功见图 图 各组/细胞中 表达情况:在 和/细胞中的表达水平与 细胞比较 .:转染后各组/细胞中 的表达水平与 组比较 .与 组比较.与 组比较./():/.:/.林芳婷等 调控/通路对卵巢癌顺铂耐药的影响.各组/细胞顺铂 和增殖活力与 组比较 组/细胞顺铂、增殖活力均下降(.)与 组比较 组/细胞顺铂、增殖活力均增高(.)见图 图 各组/细胞顺铂 和增殖活力():各组/细胞顺铂 值的比较:各组/细胞增殖活力与 组比较.与 组比较.与 组比较.与 组比较./():/.:/.各组/细胞凋亡情况与 组比较 组/细胞凋亡率增高(.)与 组比较 组 /细胞凋亡率下降(.)见图 图 各组/细胞凋亡情况./图 各组/细胞凋亡情况()与 组比较.与 组比较.与 组比较 .与 组比较./().各组/细胞迁移、侵袭能力与 组比较 组/细胞划痕面 积 愈 合 率、侵 袭 数 均 下 降(.)与 组比较 组/细胞划痕面积愈合率、侵袭数均增高(.)见图 .各组/细胞中 、蛋白表达情况与 组比较 组/细胞中 、蛋白表达均下降 蛋白表达增高(.)与 组比较 组/细胞中 、蛋白表达均增高 蛋白表达下降(.)见图 讨论卵巢癌是妇科恶性肿瘤的主要类型早期诊断困难大多患者被发现时已为晚期 尽管大多数患者最初对紫杉现代肿瘤医学 年 月 第 卷第 期 .醇和铂类药物(卡铂或顺铂)的化疗治疗有反应但由于这些治疗发生化疗耐药几乎 的女性会复发 因此迫切需要揭示卵巢癌的病理机制寻找有效的分子靶点进行诊断和治疗图 各组/细胞迁移()、侵袭(结晶紫染色)能力./()()图 各组/细胞迁移、侵袭能力()与 组比较.与 组比较.与 组比较 .与 组比较./().人类基因组计划显示具备编码蛋白质功能的 只占整个基因组的 其余 为非编码 而 占总 的 以上 最初 被认为是基因组转录中的“噪声”无生物学功能但近来研究发现 可通过多种机制调控细胞生物过程 此外大量研究表明 能够影响癌细胞广泛的生物学行为如细胞增殖、凋亡、侵袭转移、自噬等被认为是癌细胞耐药的关键调控因子 是一个新发现的 已有报道称其在许多癌症中扮演致癌基因的作用可促进癌症进展及增强化疗耐药性 如 等报道 水平升高与膀胱癌患者预后较差显著相关且敲低其表达可抑制膀胱癌细胞的增殖及上皮 间质转化 等报道下调非小细胞肺癌中 的表达能够增强其对紫杉醇的敏感性此外有研究发现 在卵巢癌中高表达且被证明能够促进卵巢癌的恶性进展同时较高的 表达水平与患者较短的无进展生存期和总生存期显著相关 然而关于 是否参与调控卵巢癌化疗耐药过程目前仍未有研究报道图 各组/细胞中/通路及增殖、凋亡、迁移、侵袭相关蛋白表达情况./林芳婷等 调控/通路对卵巢癌顺铂耐药的影响在 本 研 究 中 我 们 观 察 到/细 胞 中 的 表达水平明显高于 细胞敲低 表达后/细胞顺铂 及增殖、迁移、侵袭能力均下降凋亡程度增高表明 参与了诱导/细胞顺铂耐药过程敲低其表达可降低/细胞对顺铂的耐药性图 各组/细胞中/通路及增殖、凋亡、迁移、侵袭相关蛋白表达情况()与 组比较.与 组比较.与 组比较 .与 组比较./().近年来越来越多的研究表明 可通过调控与癌症相关的关键信号通路而影响癌变及耐药过程/是一个众所周知的可促进多种癌症进展的经典通路包括卵巢癌当该通路激活后细胞内 表达水平升高并转移到核内调控、等可促进癌细胞生长、转移的基因异常表达 是该通路的核心其表达水平的升高是该通路激活的标志 诸多研究表明 通过调控/通路影响癌症的进展 如 通过抑制/通路而加速骨肉瘤细胞进展 通过激活/通路 促 进 胶 质 母 细 胞 瘤 细 胞 对 替 莫 唑 胺 耐 药 而 影响/细胞对顺铂的耐药性这一过程是否与调控/通路有关仍未可知 在本研究中我们观察到敲低 表达后/细胞中 蛋白表达明显下降即/通路被抑制然后我们在敲低 表达的同时增加/通路激动剂 处理结果发现/细胞对顺铂的耐药性增高表明敲低 表达可能通过抑制/通路而降低/细胞对顺铂的耐药性综上所述敲低 表达可降低/细胞对顺铂的耐药性可能通过抑制/通路实现 希望本研究能为卵巢癌的化疗耐药提供新思路和新方向【参考文献】.:.:.():.():./.:.():.:./.()():.():.():.:/.():.:./.():./.():./.():./.现代肿瘤医学 年 月 第 卷第 期 .():.():.王亚萍余军辉王凯.下调 通过抑制/通路激活水平降低卵巢癌 细胞恶性转移潜能.中国现代医生():./.():.张靖白惠娟.靶向 对卵巢癌细胞顺铂耐药性的影响.中华肿瘤杂志():.():.:.():.():.:.:.():.():./:.:.(编校:闫沛)头颈神经肿瘤【】在头颈部高分化鳞状细胞癌中的表达模式及临床病理学意义袁 杭王声燕倪亨吏邬慧倩李阳阳陈耿标曾 弘中山大学孙逸仙纪念医院病理科广东 广州【摘要】目的:研究高分化头颈部鳞状细胞癌()中程序性死亡受体配体()的表达情况、肿瘤浸润淋巴细胞()的分布及临床病理特征 方法:回顾性分析 例高分化 手术患者的临床病理资料采用 检测 在癌组织、不典型增生组织及癌旁正常组织中的表达 镜下评估 的分布情况 结果:在高分化鳞状细胞癌的癌细胞或 高表达(约占.)或低表达(约占.)在不典型增生组织中不表达(约占.)或低表达(约占.)个别病例高表达(约占.)在癌旁正常组织中不表达(约占)或散在隐窝上皮或极少数淋巴细胞低表达(约占 约占 约占)差异有统计学意义(.)在高分化鳞状细胞癌的癌组织中主要呈重度浸润(低度浸润约占 中度浸润约占.重度浸润约占.)在不典型增生组织中主要呈中度浸润(低度浸润约占.中度浸润约占.重度浸润约占.)在癌旁正常组织中主要呈低度浸润(低度浸润约占 中度浸润约占 重度浸润约占)差异有统计学意义(.)高分化鳞状细胞癌的癌组织中 的表达与肿瘤浸润淋巴细胞()呈正相关(.)在表达模式上 在癌旁正常组织中不表达或少数表达于隐窝上皮及周围淋巴细胞在不典型增生组织中不表达或低表达于上皮的基底部及周围淋巴细胞在极高分化鳞状细胞癌(例疣状癌)及早期浸润性癌主要表达于浸润前沿的癌细胞表达部位有明显的极向性在广泛浸润的鳞状细胞癌中 表达极向性不明显 癌组织中 多聚集围绕在浸润性癌巢周围 高表达 癌旁正常组织中淋巴细胞少其中仅见极少数 阳性的淋巴细胞 结论:和 在高分化鳞状细胞癌中高表达及其相关性反映了肿瘤浸润【收稿日期】【修回日期】【作者简介】袁杭()女湖北英山人硕士医师主要从事肿瘤病理学研究 :.【通信作者】曾弘()女广西人副主任医师主要从事临床病理诊断工作 :.袁 杭等 在头颈部高分化鳞状细胞癌中的表达模式及临床病理学意义