微生物检测技术--金黄色葡萄球菌检测.ppt

食品的微生物学检验食品的微生物学检验致病菌致病菌主要内容主要内容金黄色葡萄球菌（金黄色葡萄球菌（GB4789.10-2010GB4789.10-2010）大肠杆菌（大肠杆菌（GB 4789.38-2012GB 4789.38-2012）沙门氏菌（沙门氏菌（GB 4789.4GB 4789.420102010）副溶血性弧菌（副溶血性弧菌（GB 4789.7GB 4789.72013 2013）金黄色葡萄球菌检验金黄色葡萄球菌检验 p153p153n1 1、生物学特性、生物学特性 （重点）（重点）n2 2、致病性、致病性n3 3、流行病学、流行病学n4 4、国标检验方法、国标检验方法 （重点）（重点）n5 5、快速检测方法、快速检测方法1 1、生物学特性、生物学特性1.11.1形态与染色形态与染色金黄色葡萄球菌无芽孢，无鞭毛，大金黄色葡萄球菌无芽孢，无鞭毛，大多数无荚膜多数无荚膜革兰氏染色阳性；革兰氏染色阳性；典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8m0.8m左右，显微镜下排列成葡萄串左右，显微镜下排列成葡萄串状。状。1.2 1.2 培养特征培养特征易培养，对营养要求不高，在普通培养基中生长良好。易培养，对营养要求不高，在普通培养基中生长良好。需氧或兼性厌氧，在好氧条件下生长最好；需氧或兼性厌氧，在好氧条件下生长最好；大多数菌株能生长在大多数菌株能生长在6.5-466.5-46之间（最适温度之间（最适温度30-3730-37）能在）能在pH4.2-9.3pH4.2-9.3之间生长（最适之间生长（最适pHpH为为6-76-7）；）；耐盐性强，在含耐盐性强，在含7 715%15%的氯化钠培养基中仍能生长，可用于的氯化钠培养基中仍能生长，可用于筛选菌种。筛选菌种。在普通营养琼脂平板上培养在普通营养琼脂平板上培养18182424，可形成圆形、表面光，可形成圆形、表面光滑、不透明的菌落。可产生金黄色色素，色素为脂溶性，不滑、不透明的菌落。可产生金黄色色素，色素为脂溶性，不溶于水，故色素只局限于菌落内，不渗至培养中。溶于水，故色素只局限于菌落内，不渗至培养中。溶血：红细胞破裂，血红蛋白逸出称红细胞溶解，简称溶血。溶血：红细胞破裂，血红蛋白逸出称红细胞溶解，简称溶血。溶血素是细菌分泌的一种毒性因子溶血素是细菌分泌的一种毒性因子血平板：可形成完全透明溶血环（血平板：可形成完全透明溶血环（溶血）溶血）细菌的溶血现象细菌的溶血现象根据细菌对红细胞的溶解能力可分为以下三种溶血类型及现象：根据细菌对红细胞的溶解能力可分为以下三种溶血类型及现象：溶血溶血:产生溶血素，不完全性溶血，在血琼脂平皿上菌落周围产生溶血素，不完全性溶血，在血琼脂平皿上菌落周围有有1 12mm2mm，较窄半透明的草绿色溶血环。，较窄半透明的草绿色溶血环。溶血溶血:呈完全性溶血，在血平皿上菌落周围有呈完全性溶血，在血平皿上菌落周围有2 24mm4mm宽、界宽、界限分明、无色透明的溶血环。限分明、无色透明的溶血环。溶血溶血:不产生溶血素，在血琼脂平皿上的菌落周围无溶血环。不产生溶血素，在血琼脂平皿上的菌落周围无溶血环。可产生卵磷脂酶，在卵黄高盐培养基上形成周围有白色沉淀可产生卵磷脂酶，在卵黄高盐培养基上形成周围有白色沉淀环的菌落。环的菌落。1.3 1.3 生化反应生化反应大多数菌株分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。大多数菌株分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。分解甘露醇，产酸。分解甘露醇，产酸。2 2、致病性、致病性金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，为条件致病金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，为条件致病菌。可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、心包炎等，甚至败血菌。可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。症、脓毒症等全身感染。葡萄球菌皮肤感染葡萄球菌皮肤感染菌株致病力的强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶：菌株致病力的强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶：a.a.溶血素：外毒素，分溶血素：外毒素，分、多种，能损伤血小板，破多种，能损伤血小板，破坏溶酶体，引起肌体局部缺血和坏死；坏溶酶体，引起肌体局部缺血和坏死；b.b.杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞；杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞；c.c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血液血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬细胞的或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬细胞的吞噬作用。葡萄球菌形成的感染易局部化与此酶有关；吞噬作用。葡萄球菌形成的感染易局部化与此酶有关；d.d.脱氧核糖核酸酶：金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖核酸酶脱氧核糖核酸酶：金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖核酸酶能耐受高温，可用来作为依据鉴定金黄色葡萄球菌；能耐受高温，可用来作为依据鉴定金黄色葡萄球菌；e.e.肠毒素：金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃肠炎的蛋肠毒素：金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃肠炎的蛋白质性肠毒素，分为白质性肠毒素，分为A A、B B、C C、D D、E E五种。五种。2 2、致病性、致病性+当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多的食品，如当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多的食品，如牛奶和奶制品、肉、蛋等，在温度条件适宜时，经牛奶和奶制品、肉、蛋等，在温度条件适宜时，经8-108-10小时小时即可相当数量的肠毒素。肠毒素可耐受即可相当数量的肠毒素。肠毒素可耐受100100度煮沸度煮沸30min30min而不而不被破坏。人摄食该污染产品后被破坏。人摄食该污染产品后2-3h2-3h便可出现中毒症状。其引便可出现中毒症状。其引起的食物中毒典型症状为呕吐和腹泻。起的食物中毒典型症状为呕吐和腹泻。3 3、流行病学、流行病学在自然界中广泛存在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物在自然界中广泛存在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。中都可找到。作为人和动物的常见病原菌，其主要存在于人和动物的鼻腔、作为人和动物的常见病原菌，其主要存在于人和动物的鼻腔、咽喉、头发上，咽喉、头发上，50%50%以上健康人的皮肤上都有金黄色葡萄球菌以上健康人的皮肤上都有金黄色葡萄球菌存在。因而，食品受其污染的机会很多。存在。因而，食品受其污染的机会很多。一般说，金黄色葡萄球菌可通过以下途径污染食品一般说，金黄色葡萄球菌可通过以下途径污染食品食品加工人员、炊事员或销售人员带菌，造成食品污染食品加工人员、炊事员或销售人员带菌，造成食品污染食品在加工前本身带菌，或在加工过程中受到了污染，产生了肠食品在加工前本身带菌，或在加工过程中受到了污染，产生了肠毒素，引起食物中毒；毒素，引起食物中毒；熟食制品包装不严，运输过程受到污染；熟食制品包装不严，运输过程受到污染；奶牛患化脓性乳腺炎或禽畜局部化脓时，对肉体其他部位的污染。奶牛患化脓性乳腺炎或禽畜局部化脓时，对肉体其他部位的污染。金黄色葡萄球菌的流行病学金黄色葡萄球菌的流行病学 近年来，美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感近年来，美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。染占第二位，仅次于大肠杆菌。+金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生问题，在美国由金金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生问题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒占整个细菌性食物中毒的黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒占整个细菌性食物中毒的33%33%，加拿大则更多，占加拿大则更多，占45%45%，我国每年发生的此类中毒事件也非常多。，我国每年发生的此类中毒事件也非常多。金黄色葡萄球菌的流行病学金黄色葡萄球菌的流行病学4 4、GB 4789.10GB 4789.1020102010食品安全国家标准食品安全国家标准食品微生物学检验食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验金黄色葡萄球菌检验1 1 范围范围本标准规定了食品中金黄色葡萄球菌（本标准规定了食品中金黄色葡萄球菌（Staphylococcus Staphylococcus aureusaureus）的检验方法。）的检验方法。本标准第一法适用于食品中金黄色葡萄球菌的定性检验；本标准第一法适用于食品中金黄色葡萄球菌的定性检验；第二法适用于金黄色葡萄球菌含量较高的食品中金黄色葡萄球第二法适用于金黄色葡萄球菌含量较高的食品中金黄色葡萄球菌的计数；菌的计数；第三法适用于金黄色葡萄球菌含量较低而杂菌含量较高的食品第三法适用于金黄色葡萄球菌含量较低而杂菌含量较高的食品中金黄色葡萄球菌的计数。中金黄色葡萄球菌的计数。检验前准备工作检验前准备工作采集与送检采集与送检预处理预处理菌落总数菌落总数大肠菌群大肠菌群致病菌致病菌纯化纯化分离培养分离培养前增菌前增菌多项鉴定及检测实验多项鉴定及检测实验分析、报告分析、报告食品微生物检验的一般程序食品微生物检验的一般程序检测步骤检测步骤-增菌增菌利用金黄色葡萄球菌耐盐的特性（可耐受利用金黄色葡萄球菌耐盐的特性（可耐受15%15%的氯化钠），用含的氯化钠），用含7.5%7.5%氯化钠肉汤氯化钠肉汤蛋白胨蛋白胨 10.0 10.0 g g牛肉膏牛肉膏 5.0 5.0 g g氯化钠氯化钠 75 75 g g蒸馏水蒸馏水 1 000 1 000 mLmL检测步骤检测步骤-增菌增菌或或10%10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤（污染严重时）氯化钠胰酪胨大豆肉汤（污染严重时）胰酪胨（或胰蛋白胨）胰酪胨（或胰蛋白胨）17.0 g17.0 g植物蛋白胨（或大豆蛋白胨）植物蛋白胨（或大豆蛋白胨）3.0 g 3.0 g氯化钠氯化钠 100.0 g100.0 g磷酸氢二钾磷酸氢二钾 2.5 g2.5 g丙酮酸钠丙酮酸钠 10.0 g10.0 g葡萄糖葡萄糖 2.5 g2.5 g蒸馏水蒸馏水 1 000 mL1 000 mL检测步骤检测步骤 -分离分离血平板：金黄色葡萄球菌可以产生溶血素，因此在血平板上产血平板：金黄色葡萄球菌可以产生溶血素，因此在血平板上产生明显的溶血环。生明显的溶血环。血平板上其典型菌落呈金黄色，有时也为白色，大而突起，圆血平板上其典型菌落呈金黄色，有时也为白色，大而突起，圆形，不透明，表面光滑，有溶血圈。形，不透明，表面光滑，有溶血圈。血平板血平板BairdBairdParkerParker琼脂平板琼脂平板(BP(BP平板平板)胰蛋白胨胰蛋白胨 10.0 g10.0 g牛肉膏牛肉膏 5.0 g5.0 g酵母膏酵母膏 1.0 g1.0 g丙酮酸钠丙酮酸钠 10.0 g10.0 g甘氨酸甘氨酸 12.0 g12.0 g氯化锂氯化锂 5.0 g5.0 g琼脂琼脂 20.0 g20.0 g蒸馏水蒸馏水 950 mL950 mL卵黄亚碲酸钾增菌剂卵黄亚碲酸钾增菌剂 50 mL 50 mL 检测步骤检测步骤 -分离分离检测步骤检测步骤-分离分离BPBP平板：平板：胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、维生素和痕量胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、维生素和痕量矿物元素矿物元素丙酮酸钠、甘氨酸和氯化锂是一种生长促进剂丙酮酸钠、甘氨酸和氯化锂是一种生长促进剂亚碲酸盐对除金黄色葡萄球外的其他能分解卵黄的菌株有毒性，亚碲酸盐对除金黄色葡萄球外的其他能分解卵黄的菌株有毒性，并使菌落产生黑色并使菌落产生黑色卵黄提供营养和有利于观察卵磷脂环卵黄提供营养和有利于观察卵磷脂环检测步骤检测步骤-分离分离在在BPBP平板上其典型菌落为：圆形，光滑突起，湿润，直径平板上其典型菌落为：圆形，光滑突起，湿润，直径2-3mm2-3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘常为淡色（米黄色或灰白色略带灰色或颜色呈灰色到黑色，边缘常为淡色（米黄色或灰白色略带灰色或黄色的白色），周围为一混浊带黄色的白色），周围为一混浊带(沉淀环沉淀环)，在其外缘常有一透明，在其外缘常有一透明圈。用接种针接触菌落似有黄油树胶的粘稠感。圈。用接种针接触菌落似有黄油树胶的粘稠感。B-PB-P平板平板检测步骤检测步骤-鉴定鉴定染色镜检染色镜检金黄色葡萄球菌可以产生凝固酶，使血浆中纤维蛋白原转变为纤维金黄色葡萄球菌可以产生凝固酶，使血浆中纤维蛋白原转变为纤维蛋白，附着于细菌表面蛋白，附着于细菌表面 ，产生凝固。因此对其鉴别的主要实验是测，产生凝固。因此对其鉴别的主要实验是测定其凝固酶。定其凝固酶。血浆凝固酶试验：血浆凝固酶试验：吸取吸取1:41:4新鲜兔血浆新鲜兔血浆0.5 mL0.5 mL，放入小试管中，再加入培养，放入小试管中，再加入培养24 h24 h的的金黄色葡萄球菌肉浸液肉汤培养物金黄色葡萄球菌肉浸液肉汤培养物0.5 mL0.5 mL，振荡摇匀，振荡摇匀，置置 363611温箱或水浴内，每半小时观察一次，观察温箱或水浴内，每半小时观察一次，观察6 h6 h，如呈，如呈现凝固现凝固,即将试管倒置或即将试管倒置或 倾斜时，呈现凝块者，被认为阳性结果。倾斜时，呈现凝块者，被认为阳性结果。同时以已知阳性和阴性葡萄球菌株及肉汤作为对照。同时以已知阳性和阴性葡萄球菌株及肉汤作为对照。结果报告结果报告如血浆凝固酶试验阳性，可判定为金黄色葡萄球菌如血浆凝固酶试验阳性，可判定为金黄色葡萄球菌 。报告在报告在25g25g（mLmL）样品中检出或未检出金黄色葡萄球菌。）样品中检出或未检出金黄色葡萄球菌。363611 18 h18 h24 h24 h GB 4789.10-2010GB 4789.10-2010第一法第一法BHI BHI 肉汤和营养琼肉汤和营养琼脂小斜面脂小斜面血浆凝固酶试验血浆凝固酶试验检样检样:25 g(mL):25 g(mL)样品样品+225 mL 7.5%+225 mL 7.5%氯化钠肉汤或氯化钠肉汤或10%10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤，均质氯化钠胰酪胨大豆肉汤，均质Baird-Parker Baird-Parker 平板平板,血平板血平板涂片染色涂片染色观察溶血观察溶血报告结果报告结果36 36 1 1 18 h18 h24 24 h h增菌增菌分离分离鉴定鉴定u1 1关于金黄色葡萄球菌关于金黄色葡萄球菌,下列哪种说法是错误的下列哪种说法是错误的uA.A.耐盐性强耐盐性强 B.B.革兰阳性菌革兰阳性菌uC.C.在血琼脂平板上形成完全透明的溶血环在血琼脂平板上形成完全透明的溶血环uD.D.分解葡萄糖产酸产气分解葡萄糖产酸产气u2 2以下属于以下属于金黄色葡萄球菌的特点金黄色葡萄球菌的特点有有uA.A.血浆凝固酶试验阳性血浆凝固酶试验阳性 B.B.产生溶血素产生溶血素uC.C.分解甘露醇分解甘露醇 D.D.产生耐热核酸产生耐热核酸酶酶u3 3金黄色葡萄球菌的培养特性是金黄色葡萄球菌的培养特性是uA.A.营养要求高营养要求高 ，必须在血平板上才能生长，必须在血平板上才能生长uB.B.均能产生金黄色色素均能产生金黄色色素uC.C.耐盐性强耐盐性强,可在含可在含7%7%15%NaCL15%NaCL的培养基中生长的培养基中生长uD.D.专性需氧专性需氧课堂练习课堂练习 u4 4金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌定性试验中所用的增菌液是定性试验中所用的增菌液是()()。u A 7.5%A 7.5%氯化钠肉汤氯化钠肉汤 B 10%B 10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤氯化钠胰酪胨大豆肉汤u C C蛋白胨水蛋白胨水 D.PDA D.PDA u5 5金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 在在BPBP平板中的典型菌落特征有平板中的典型菌落特征有uA.A.颜色呈灰色到黑玉色颜色呈灰色到黑玉色 B.B.有混浊带有混浊带uC.C.常有一透明圈常有一透明圈 D.D.较干燥较干燥课堂练习课堂练习 后面内容直接删除就行后面内容直接删除就行资料可以编辑修改使用资料可以编辑修改使用资料可以编辑修改使用资料可以编辑修改使用主要经营：网络软件设计、图文设计制作、主要经营：网络软件设计、图文设计制作、发布广告等发布广告等公司秉着以优质的服务对待每一位客户，做公司秉着以优质的服务对待每一位客户，做到让客户满意！到让客户满意！致力于数据挖掘，合同简历、论文写作、致力于数据挖掘，合同简历、论文写作、PPTPPT设计、计划书、策划案、学习课件、各设计、计划书、策划案、学习课件、各类模板等方方面面，打造全网一站式需求类模板等方方面面，打造全网一站式需求The user can demonstrate on a projector The user can demonstrate on a projector or computer,or print the presentation or computer,or print the presentation and make it into a film to be used in a and make it into a film to be used in a wider fieldwider field