第五章水的卫生细菌学PPT课件.ppt

第五章第五章 水的水的卫生生细菌学菌学与与饮用水的健康用水的健康卫生生有关有关 的的细菌学菌学知知识 1-主要内容主要内容n5-1水中水中细细菌及其分布菌及其分布n5-2水中的病原水中的病原细细菌菌n5-3大大肠肠杆菌和生活杆菌和生活饮饮用水的用水的细细菌菌标标准准n5-4水的水的卫卫生生细细菌学菌学检验检验n5-5水中微生物的控制方法水中微生物的控制方法n5-6水中的病毒及其水中的病毒及其检验检验饮用水中可能存在哪些病原菌？用水中可能存在哪些病原菌？如何从如何从细菌学的角度判断菌学的角度判断饮用水是用水是卫生的？生的？细菌学菌学标准准如何如何进行行试验？采取什么措施可以保采取什么措施可以保证饮用水是用水是卫生生健康的？健康的？2-第一第一节 天然天然饮水中的水中的细菌及其分布菌及其分布包括雨雪水、河流湖泊水、地下水、海水包括雨雪水、河流湖泊水、地下水、海水3-n提问：雨雪中的细菌数量种类与什么有关？直接与空气的直接与空气的洁净程度程度间接由地面的接由地面的洁净程度程度4-提提问：河流、河流、湖泊湖泊中的中的细菌菌数量种数量种类与什与什么有关？么有关？受受纳污水的种水的种类及数量及数量环境影响因子境影响因子例如，受到医院污水、垃圾污染的，病原菌数量将会很大，受到农业土壤污染的藻类数量将会猛增。由于细菌不喜欢阳光、好附着在固体上，因而水底和岸边的细菌数量高于水面和河、湖中央的细菌。5-n提提问：地下水地下水饮用用时的的卫生生程度与什么有关？程度与什么有关？n深度及地表水深度及地表水污染程度染程度n由于土壤由于土壤层层过滤，一般，一般细菌很少菌很少6-n提提问：海水海水中中有能引起人体有能引起人体疾病的疾病的细菌菌（病原菌）（病原菌）吗？为什么？什么？n没有；没有；海水中含海水中含盐量很高（一般量很高（一般3.24%）目前大多数城市集中供水水源目前大多数城市集中供水水源为江河湖泊，江河湖泊，难免免受到各种受到各种污染包括病原染包括病原污染，染，病原菌的病原菌的监测与控与控制制责任重大。任重大。7-第二第二节 水中的病原水中的病原细菌菌n n水中的水中的细菌只有菌只有很少的一部分是病原菌很少的一部分是病原菌（或称致病菌）（或称致病菌）n其中只有更少的病原菌能其中只有更少的病原菌能经食道食道进入入肠道引起疾病，道引起疾病，为什么？什么？n口中口中溶菌溶菌酶；正常胃酸；正常胃酸pH3.2。n此此类水中病原菌若水中病原菌若经水水传播播，在消化道在消化道滋生滋生导致疾病致疾病肠道道传染病染病8-9-一、一、伤寒沙寒沙门氏菌氏菌n病症：病症：伤寒或副寒或副伤寒。寒。n乙乙级传染病染病（不用隔离）（不用隔离）n表表现：持持续发烧，牵涉到涉到淋巴淋巴组织，脾，脾脏肿大，躯大，躯干上出干上出现红斑，胃斑，胃肠壁壁溃疡产生腹泻生腹泻。n14世世纪、15世世纪、16世世纪，每一次每一次伤寒都随寒都随战争而爆争而爆发，病死率达病死率达40到到50，20世世纪初，英国医生初，英国医生赖特研制出特研制出伤寒疫苗，寒疫苗，伤寒从此寒从此销声匿迹声匿迹。伤寒沙寒沙门氏菌氏菌10-（1）生理生）生理生态n种种类：伤寒寒沙沙门氏氏菌菌、副副伤寒寒沙沙门氏氏菌菌和和乙乙型型副副伤寒寒沙沙门氏氏菌。菌。n大小：大小：n 0508135umn特特征征：周周生生鞭鞭毛毛，革革兰氏氏阴阴性性，无芽无芽孢和和荚膜膜在地面普通水中可生存在地面普通水中可生存1 13 3周周，井水中可生存，井水中可生存约周周，在，在粪坑及坑及污水中可生存水中可生存1 12 2个月个月。11-（2）致病机理）致病机理n通通过内毒素内毒素致病致病n(内内毒毒素素是是其其细胞胞壁壁的的成成分分，化化学学成成分分为脂脂多多糖糖，当当细菌菌死亡分裂死亡分裂时会会释放到放到环境中。境中。)昔日治疗伤寒特效药氯霉素，如今几乎对伤寒无效，预防为主12-二、痢疾杆菌n细菌菌性性痢痢疾疾(与与阿阿米米巴巴痢痢疾疾不不同同)（乙乙类传染染病病），症症状状为急性腹泻，通常大便中有血及粘液，某些病例中有急性腹泻，通常大便中有血及粘液，某些病例中有发烧。n n（1 1）生理生）生理生）生理生）生理生态态n 种种类：痢疾杆菌痢疾杆菌(痢疾志痢疾志贺氏菌氏菌)、副痢疾杆菌、副痢疾杆菌37 能耐能耐20天天，加加热到到6060能耐能耐1010minmin，对1 1的石炭酸，可抵抗半小的石炭酸，可抵抗半小时。传播方式：播方式：食物和食物和饮用水用水13-n内毒素内毒素n损害害了了人人体体肠道道细胞胞，引引起起肠道道痉挛、腹泻等症状。、腹泻等症状。n“极易耐极易耐药，预防防为主主”（2）致病机理）致病机理14-病症：霍乱病症：霍乱（“最可怕的最可怕的瘟疫瘟疫”）甲甲级传染病（法定隔离）染病（法定隔离）重重呕吐、呕吐、“米米汤样”大便、大便、腹疼和昏迷等，腹疼和昏迷等，严重的常重的常常在症状出常在症状出现后后12h内死亡，内死亡，死亡率极高死亡率极高。轻只造成只造成腹泻腹泻。三、霍乱弧菌三、霍乱弧菌Vibrio cholerae bacteria infect between 100,000 and 300,000 people each year.15-（1）生理生态n形形态：微弯曲杆状微弯曲杆状n大小：大小：0.30.61.05.0umn特征：一根特征：一根较粗的鞭毛粗的鞭毛n传播播方方式式：水水及及食食物物，与与病人或病人或带菌菌动物接触物接触n革革兰氏染色氏染色则为阴性阴性红色色16-（2）致病机理n n外毒素外毒素外毒素外毒素 霍乱弧菌霍乱弧菌小小肠中大量繁殖中大量繁殖破坏破坏肠细胞膜胞膜肠细胞大量脱水、胞大量脱水、电解解质失衡失衡腹泻或休克、死亡腹泻或休克、死亡由口由口进入人体入人体释放出放出外外外外毒素毒素霍乱霍乱18世世纪传入，流行百次，入，流行百次，1952年年绝迹。迹。17-731部部队鼠疫杆菌、鼠疫杆菌、霍乱弧菌霍乱弧菌、伤寒杆菌、寒杆菌、炭疽杆菌等等炭疽杆菌等等生化武器生化武器18-19-伤寒沙寒沙门氏菌、痢疾杆菌、霍乱弧菌氏菌、痢疾杆菌、霍乱弧菌 这三三种种致致病病菌菌是是水水中中最最为常常见的的致致病病菌菌，都都属属于于肠道道传染染病病菌菌，其其它它病病原原菌菌如如变形形杆杆菌菌、肠炎炎耶耶尔氏氏菌菌、沙沙雷雷氏氏菌菌引引起起的的症症状状较轻通通常常为肠炎。炎。肠道道细菌菌传染病主要由病人染病主要由病人带菌菌的的粪便便污染水体而染水体而传播。播。真菌一般通真菌一般通过接触或食物接触或食物传播，不通播，不通过水水传播播20-四、寄生虫（四、寄生虫（了解了解）n寄寄生生虫虫引引起起疾疾病病的的原原生生动物物(原原虫虫）和和后后生生动物物（蠕蠕虫）虫）n寄生虫寄生虫种种类繁多繁多传播方式：播方式：虫卵通虫卵通虫卵通虫卵通过过病人病人病人病人粪粪便便便便污污染水体染水体染水体染水体21-（一）原虫（一）原虫n引引起起人人体体疾疾病病的的原原生生动物物又又叫叫原原虫虫，通通过饮水水引引起起疾疾病的原虫病的原虫见下表。下表。22-兰兰氏氏贾贾第鞭毛虫第鞭毛虫l兰氏氏贾第鞭毛虫第鞭毛虫(Giardia lamblia)是一种常寄生于人体是一种常寄生于人体十二指十二指肠和腔和腔肠的多鞭毛虫，属六鞭虫科的多鞭毛虫，属六鞭虫科(Hexamitiade)、贾第鞭毛虫属第鞭毛虫属(Giardia)。l人感染人感染贾第鞭毛虫后第鞭毛虫后以腹泻以腹泻为主要症状主要症状，也有部分患，也有部分患者排包囊而无症状。包囊在者排包囊而无症状。包囊在环境可存活境可存活较长时间，水中，水中可存活两个月以上。本可存活两个月以上。本病主要通病主要通过粪便排出的包囊便排出的包囊污染染饮水、食物及食具而水、食物及食具而经口感染，也可口感染，也可经粪-手手-口途径感口途径感染。染。l近近20年来年来此病在欧美此病在欧美许多国家曾多国家曾多次暴多次暴发流行流行，兰氏氏贾第鞭毛虫在我国分布广泛，所致疾病也不断有第鞭毛虫在我国分布广泛，所致疾病也不断有报道。道。23-隐孢隐孢子虫子虫l隐孢子虫子虫是一种是一种肠道原虫。道原虫。l患患隐孢子虫病的子虫病的动物或人的物或人的粪便便如果如果污染了染了饮水或水或饮水水水源，水源，则可可导致致隐孢子虫病的子虫病的暴暴发流行流行。l1993年美国年美国威斯康星州威斯康星州Milwaukee城因自来水厂城因自来水厂处理不理不当而暴当而暴发403 000余余人感染的人感染的隐孢子虫病，其中子虫病，其中4000余人住余人住院，院，112人人死亡，是美国有史以来最大的一次水死亡，是美国有史以来最大的一次水传疾病。疾病。l隐孢子虫卵囊能子虫卵囊能抵抗多种消毒抵抗多种消毒剂，1 mgL臭氧臭氧处理理5 min或或13 mgL二氧化二氧化氯处理理lh后，可使后，可使90以上的卵以上的卵囊囊丧失活性，而失活性，而80 mgL的的氯和和80 mgL的一的一氯胺要作胺要作用近用近90 min，才能使，才能使90的卵囊失活。的卵囊失活。24-（二）蠕虫（二）蠕虫n 引起人体疾病的后生引起人体疾病的后生动物又叫物又叫蠕虫蠕虫，通，通过饮水引起疾水引起疾病的蠕虫病的蠕虫见下表下表25-26-27-水中病原微生物的危害水中病原微生物的危害l发展中国家每年有展中国家每年有1220万五万五岁以下的儿童因儿童以下的儿童因儿童病死亡，超病死亡，超过300万人死于腹泻万人死于腹泻，其中多数是由于，其中多数是由于饮用了受微生物用了受微生物污染的水引起的。染的水引起的。l世界世界卫生生组织(WHO)资料料显示，水生性疾病的示，水生性疾病的威威胁在第三世界在第三世界发展中国家仍然存在，每天可展中国家仍然存在，每天可断断送送25000人的生命人的生命，这种微生物种微生物污染源包括多种有染源包括多种有害的害的细菌、病毒、寄生虫，可造成菌、病毒、寄生虫，可造成伤寒、霍乱、寒、霍乱、肝炎、小儿麻痹症、痢疾、感冒等疾病。肝炎、小儿麻痹症、痢疾、感冒等疾病。28-饮饮用水生物用水生物稳稳定性的研究定性的研究n出厂水是出厂水是安全的安全的，到达用，到达用户的水可能的水可能不不安全了安全了n细菌在管网中菌在管网中再生再生长n如何如何控制控制细菌再生菌再生长？n加加氯消毒消毒消毒副消毒副产物物（致癌）（致癌）n控制有机物控制有机物（碳源）、（碳源）、营养物养物（磷）、（磷）、使用新型管材等使用新型管材等n新型消毒方法新型消毒方法（紫外（紫外线、二氧化、二氧化氯）29-n n防治饮用水传染病的关键是严防水源被粪便污染。n如何知道饮用水是否受到粪便污染呢？n检测肠道病原菌数量30-第三第三节 大大肠菌群和生活菌群和生活饮用水用水标准准n通常不直接通常不直接检测n水水中中存存在在病病原原菌菌的的可可能能性性很很小小，其其他他各各种种细菌菌的的种种类却却很很多多，要要排排除除一一切切细菌菌而而单独独直直接接检出出某某种种病病原原菌菌来来，在在培培养养分分离离技技术上上较为复复杂，需，需较多的人力和多的人力和较长的的时间。n间接接病病原原菌菌测定定：测定定水水中中是是否否有有肠道道正正常常细菌菌的的存存在在若若检出出，则表表明明水水被被粪便便所所污染染，则有有肠道道病病原原菌的菌的可能可能。通常通常检测大大肠菌群菌群（作（作为肠道正常菌的代表）道正常菌的代表）的的存在及数量存在及数量。31-一、大一、大肠菌群作菌群作为卫生指生指标的意的意义n选择代表代表肠道病原菌道病原菌卫生指生指标的原的原则有有:n该种种细菌菌生理特性生理特性与与肠道病原菌道病原菌类似，因而似，因而它它们在外界在外界生存生存时间一致一致；n该种种细菌在菌在粪便中便中数量数量较多，容易多，容易检出出；n检验技技术简单。32-n肠道正常道正常细菌有三菌有三类：大大肠菌群、菌群、肠球菌、球菌、产气气荚膜菌。膜菌。n大大肠菌群与菌群与伤寒杆菌、副寒杆菌、副伤寒杆菌、痢疾杆寒杆菌、痢疾杆菌等菌等病原菌生理特性相似病原菌生理特性相似，基本符合以上三，基本符合以上三个原个原则，所以大，所以大肠菌群可以作菌群可以作为水的水的卫生生细菌学指菌学指标。大大肠肠菌群菌群33-二、大二、大肠菌群的菌群的形形态和生理特性和生理特性生存生存环境境碳源特征碳源特征培养温度特征培养温度特征菌落特征菌落特征大肠杆菌大大肠埃希氏杆菌埃希氏杆菌产气杆菌气杆菌枸椽酸枸椽酸盐杆菌杆菌副大副大肠杆菌杆菌大大肠菌群菌群34-大大肠埃希氏杆菌埃希氏杆菌其他大其他大肠杆菌相似杆菌相似n好氧或兼性菌好氧或兼性菌nG-，无芽，无芽孢n大小大小0.50.8m23m，两端，两端钝圆的杆的杆菌菌n生生长温度温度1046，适宜温度适宜温度37，适宜适宜pHpH值为7 7n能分解葡萄糖、甘露醇、乳糖等多种碳水化合能分解葡萄糖、甘露醇、乳糖等多种碳水化合物能物能产酸酸产气，气，所所产生的二氧化碳和生的二氧化碳和氢气比之气比之为1 1：1 1。35-在品在品红亚硫酸硫酸钠培养基上所形培养基上所形成的成的菌落特征菌落特征n大大肠埃希氏杆菌：埃希氏杆菌：紫紫红色，金属光色，金属光泽，直径直径2 23mmn枸椽酸枸椽酸盐杆菌：杆菌：紫紫红色色或深或深红色色n产气杆菌：气杆菌：淡淡红色中色中间较深，深，直径直径46mmn副大副大肠杆菌：杆菌：无色透明无色透明36-三、生活三、生活饮饮用水用水细细菌菌卫卫生生标标准准n国家国家标准准生活生活饮用水用水卫生生标准准GB5479-85n卫生部生部生活生活饮用水用水卫生生规范范-2001n建建设部部城市供水水城市供水水质标准准-2005n国家国家标准准生活生活饮用水用水卫生生标准准GB5479-200637-38-国家国家标标准准生活生活饮饮用水用水卫卫生生标标准准GB5479-2006 组组成成n标准中准中对生活生活饮用水的水用水的水质要求共要求共106项（85年年标准准仅35项），包括），包括:水水质常常规指指标38项、消毒、消毒剂常常规指指标4项及水及水质非常非常规指指标64项。n微生物指微生物指标：总大大肠菌群、菌落菌群、菌落总数等数等n毒理指毒理指标：砷、：砷、镉、铬、铅、三、三氯甲甲烷等等n感官性状与一般化学指感官性状与一般化学指标：浊度、度、pH、铝等等n放射性指放射性指标39-国家国家标准准生活生活饮用水用水卫生生标准准GB5479-2006 适用范适用范围n常常规规指指标标与非常与非常对对指指标标40-国家国家标准准生活生活饮用水用水卫生生标准准GB5479-2006 适用范适用范围41-国家国家标标准准生活生活饮饮用水用水卫卫生生标标准准GB5479-2006菌落形成菌落形成单位位Colony forming unit最可能数最可能数 Maximum possible Number42-国家国家标标准准生活生活饮饮用水用水卫卫生生标标准准GB5749-2006n细菌菌总数数 100(CFU/mL)n总大大肠菌群菌群 每每100mL水水样中不得中不得检出出 n耐耐热（粪）大）大肠菌群菌群 每每100mL水水样中不得中不得检出出 n大大肠埃希氏菌埃希氏菌每每100mL水水样中不得中不得检出出 n游离余游离余氯 在与水接触在与水接触30分分钟后后应不低于不低于0.3mgL，管网末梢水不，管网末梢水不应低于低于0.05mgL(适用于加适用于加氯消毒消毒)43-四个四个标准的准的比比较项目目TBC（CFU/mL）总大大肠菌群菌群粪大大肠菌菌群群GB5749-2006100每每100mL水水样中不得中不得检出出每每100mL水水样中不中不得得检出出城、城、乡供生活供生活饮用用的集中式的集中式给水和分水和分散式散式给水水 GB5749-851003个个/L无无城、城、乡供生活供生活饮用用的集中式的集中式给水和分水和分散式散式给水水 卫-2001100每每100mL水水样中不得中不得检出出每每100mL水水样中不中不得得检出出城市集中式城市集中式给水水 建建-20058044-第四第四节 水的水的卫生生细菌学菌学检验n细菌菌总数（数（TBC）的）的测定定n总大大肠菌群菌群n粪大大肠菌群菌群45-n细菌菌总数是指数是指1mL水水样在在营养养琼脂培养脂培养基中，于基中，于37经24小小时培养后，所生培养后，所生长的的细菌菌落的菌菌落的总数。它是判断数。它是判断饮用水、用水、水源水、地表水等水源水、地表水等污染程度的染程度的标志。志。一、一、细菌菌总数（数（TBC）的）的测定定制作培养基平板制作培养基平板定量接定量接种水种水样37下培养下培养24h计数菌落数菌落46-测测定定过过程程n水水样的采集的采集n采集采集细菌学菌学检验水水样，必，必须按照无菌操作按照无菌操作进行；从行；从采采样到到检验不超不超过2h；10 以下冷藏不超以下冷藏不超过6h。n采采样器皿必器皿必须经过灭菌；菌；n自来水采自来水采样应该用酒精灼用酒精灼烧水水龙头/酒精消毒，放酒精消毒，放水水3min后取后取样；n江河湖江河湖库水水样沉入水下沉入水下10-15cm，瓶口向水流上游瓶口向水流上游取取样。47-n用作用作细菌菌检验的器皿、培养基等均需按方法的器皿、培养基等均需按方法要求要求进行行灭菌菌，以保，以保证所所检出的出的细菌皆属被菌皆属被测水水样所有。所有。n制制备营养养琼脂培养基。脂培养基。n营养养琼脂培养基成分脂培养基成分为：蛋白：蛋白胨10g，牛肉，牛肉浸膏浸膏3g，氯化化钠5g，琼脂脂15g，蒸，蒸馏水水1000mL。测测定定过过程程48-n以无菌操作方法用以无菌操作方法用1ml灭菌吸管菌吸管吸取混合均匀的吸取混合均匀的水水样(或稀或稀释水水样)注入注入灭菌平皿中，菌平皿中，倾注注约15ml已融化并冷却到已融化并冷却到45左右的左右的营养养琼脂培养基，并脂培养基，并旋旋摇平皿使其混合均匀。每个水平皿使其混合均匀。每个水样应做两份（平做两份（平行行样），），还应另用一个平皿只另用一个平皿只倾注注营养养琼脂培养脂培养基作空白基作空白对照。待照。待琼脂培养基冷却凝固后，脂培养基冷却凝固后，翻翻转平皿平皿，置于，置于37恒温箱内培养恒温箱内培养24小小时，然后然后进行菌落行菌落计数。数。n用肉眼或借助放大用肉眼或借助放大镜观察，察，对平皿中的菌落平皿中的菌落进行行计数，求出数，求出1mL水水样中的平均菌落数。中的平均菌落数。测测定定过过程程49-n异养菌平板异养菌平板计数（数（Heterotrophic Plate Counting，HPC）是采用）是采用R2A培养基，培养基，2028培养培养7d，计数能数能够生生长的异养菌。的异养菌。nR2A培养基成分培养基成分为：酵母浸膏（：酵母浸膏（Yeast extract）0.5g，聚合蛋白，聚合蛋白胨（Polypeptone or proteose peptone No.3）0.5g，酸水解酪素，酸水解酪素（Casamino acids）0.5g，葡萄糖，葡萄糖（Glucose）0.5g，可溶性淀粉（，可溶性淀粉（Soluble starch）0.5g，K2HPO4 0.3g，MgSO47H2O 0.05g，丙，丙酮酸酸钠（Sodium pyruvate）0.3g，琼脂脂15g，超，超纯水水1000mL。异养菌平板异养菌平板计数数HPC50-二、二、总大大肠菌群菌群n总大大肠菌群是指那些能在菌群是指那些能在37、24小小时之内使之内使乳糖乳糖发酵酵产酸、酸、产气、需氧及兼气、需氧及兼性性厌氧的、革氧的、革兰氏阴性的无芽抱杆菌氏阴性的无芽抱杆菌。n总大大肠菌群的菌群的检验方法有方法有发酵法和酵法和滤膜法膜法。n发酵法可用于各种水酵法可用于各种水样(包括底泥包括底泥)，但操作，但操作较繁繁琐，费时间。n滤膜法操作膜法操作简便、快速，但不适用于便、快速，但不适用于浑浊水水样。因。因为这种水种水样常会把常会把滤膜堵塞，异物也可能干膜堵塞，异物也可能干扰菌种生菌种生长。51-发酵法酵法初步初步发酵酵试验（产酸酸产气否？）气否？）平板分离（伊平板分离（伊红美美蓝鉴别培养基培养基-鉴别）复复发酵酵试验（可疑菌落是否（可疑菌落是否产气菌？）气菌？）52-发酵法酵法-初步初步发酵酵试验n配制培养基：乳糖蛋白配制培养基：乳糖蛋白胨培养液、三倍培养液、三倍浓缩乳糖蛋白乳糖蛋白胨培培养液、品养液、品红亚硫酸硫酸钠培养基、伊培养基、伊红美美蓝培养基。培养基。n初步初步发酵酵试验：在：在灭菌操作条件下，分菌操作条件下，分别取不同量水取不同量水样于于数支装有三倍数支装有三倍浓缩乳糖蛋白乳糖蛋白胨培养液或乳糖蛋白培养液或乳糖蛋白胨培养液培养液的的试管中管中(内有倒管内有倒管)，得到不同稀，得到不同稀释度的水度的水样培养液，于培养液，于37恒温培养恒温培养24小小时。n该试验基于大基于大肠菌群能分解乳糖生成二氧化碳等气体的特菌群能分解乳糖生成二氧化碳等气体的特征，而水体中某些征，而水体中某些细菌不具菌不具备此特点。此特点。但是，能但是，能产酸、酸、产气的气的绝非非仅属于大属于大肠菌群，菌群，还需需进行复行复发酵酵试验予以予以证实。53-如何判断如何判断产酸、酸、产气气n产酸酸培养基中有酸碱指示培养基中有酸碱指示剂（1.6%溴甲酚紫乙醇溶液溴甲酚紫乙醇溶液）n乳糖蛋白乳糖蛋白胨培养基：蛋白培养基：蛋白胨、牛肉膏、牛肉膏、乳糖、乳糖、氯化化钠、1.6%溴甲酚紫乙醇溶溴甲酚紫乙醇溶液、液、蒸蒸馏水水n产气气内有倒管（内有倒管（收集气体收集气体）54-发酵法酵法-鉴别n平板分离：初步平板分离：初步发酵酵试验后，将后，将产酸酸产气及只气及只产酸的酸的发酵管接种于品酵管接种于品红亚硫酸硫酸钠培养基或伊培养基或伊红美美蓝培养基上，培养基上，于于37 恒温培养恒温培养24小小时，挑挑选符合下列特征的菌落符合下列特征的菌落，取菌落的一小部分取菌落的一小部分进行涂片、革行涂片、革兰氏染色、氏染色、镜检。n品品红亚硫酸硫酸钠培养基上的菌落：培养基上的菌落：紫紫红色，具有金属色，具有金属光光泽的菌落；深的菌落；深红色，不色，不带或略或略带金属光金属光泽的的菌落；淡菌落；淡红色，中心色色，中心色较深的菌落。深的菌落。n伊伊红美美蓝培养基上的菌落：培养基上的菌落：深紫黑色，具有金属深紫黑色，具有金属光光泽的菌落；紫黑色，不的菌落；紫黑色，不带或略或略带金属光金属光泽的的菌落；淡紫菌落；淡紫红色，中心色色，中心色较深的菌落深的菌落。55-发发酵法酵法-复复发发酵酵n复复发酵酵试验：上述涂片：上述涂片镜检的菌落如的菌落如为革革兰氏氏阴性无芽阴性无芽孢杆菌，杆菌，则取取该菌落的另一部分再接菌落的另一部分再接种于装有乳糖蛋白种于装有乳糖蛋白陈培养液的培养液的试管管(内有倒管内有倒管)中，每管可接种分离自同一初中，每管可接种分离自同一初发酵管的最典型酵管的最典型菌落菌落13个，于个，于37恒温培养恒温培养24小小时，有，有产酸酸产气者，即气者，即证实有大有大肠菌群存在。菌群存在。n大大肠菌群菌群计数：根据数：根据证实有大有大肠菌群存在的阳菌群存在的阳性管数，性管数，查总大大肠菌群数菌群数检数表，数表，报告每升水告每升水样中的中的总大大肠菌群数。菌群数。56-滤滤膜法膜法57-滤滤膜法膜法n将水将水样注入已注入已灭菌、放有微孔菌、放有微孔滤膜膜(孔径孔径0.45m)的的滤器中，器中，经抽抽滤，细菌被截留在膜上，将菌被截留在膜上，将该滤膜膜贴于品于品红亚硫酸硫酸钠培养基上，培养基上，37恒温培养恒温培养24小小时，对符合符合发酵法所述特征的菌落酵法所述特征的菌落进行行涂片、革涂片、革兰氏染色和氏染色和镜检。n凡属革凡属革兰氏阴性无芽抱杆菌者，再接种于乳糖蛋白氏阴性无芽抱杆菌者，再接种于乳糖蛋白胨培养液或乳糖蛋白培养液或乳糖蛋白胨半固体培养基中，在半固体培养基中，在37恒温条恒温条件下，前者件下，前者经24小小时培养培养产酸酸产气者，或后者气者，或后者经68小小时培养培养产气者，气者，则判定判定为总大大肠菌群阳性。菌群阳性。58-三、三、粪粪大大肠肠菌群菌群测测定定n为区区别存在于自然存在于自然环境境中的大中的大肠菌群菌群细菌和存在于菌和存在于温血温血动物物肠道道内的大内的大肠菌群菌群细菌，可将培养温度提高到菌，可将培养温度提高到44.5，在在此条件下仍能此条件下仍能生生长并并发酵乳糖酵乳糖产酸酸产气气者，者，称称为粪大大肠菌群。菌群。n粪大大肠菌群也用多管菌群也用多管发酵法或酵法或滤膜法膜法测定。定。59-第五第五节 水中微生物的控制方法水中微生物的控制方法n病原微生物的去除病原微生物的去除水的消毒水的消毒加加氯法法(或或加加漂漂白白粉粉)臭氧法臭氧法重金属离子法重金属离子法物理方法物理方法化学方法化学方法加加热法法紫外紫外线法法超声波法超声波法n藻藻类的去除的去除60-氯氯在水中在水中发发生的反生的反应应n氯气的物理和化学特性气的物理和化学特性n 黄黄绿色、色、强烈刺激性有毒气体烈刺激性有毒气体 Ki =HH+OClOCl-HOClHOClCl2+H2OHOClClHOCl HCln 氯在水中的反在水中的反应（无氨氮（无氨氮时）61-水中水中HOCl的含量受到的含量受到pH的影响的影响n20 oC时，Ki=3.310-8，pH=7.0时，HOCl占75.2%62-加加氯消毒的机理消毒的机理n主要靠主要靠HOCl起作用，起作用，HOCl扩散到散到带负电的的细菌表面，通菌表面，通过细菌的菌的细胞壁穿透到胞壁穿透到细菌内部，菌内部，然后靠氧化作用破坏然后靠氧化作用破坏细菌的菌的酶系系统，使，使细菌死菌死亡。亡。nOCl-因因为带负电，难于接近于接近带负电的的细菌表面，菌表面，杀菌效果差。菌效果差。HOCl-OCl-细菌菌63-联系系pH值对HOCl在水中所占比例在水中所占比例的影响，你能得出什么的影响，你能得出什么结论？n控制水的控制水的pH值越低，越低，则消毒效果越好消毒效果越好n饮用水的消毒中，用水的消毒中，这一条一条不可取不可取n因因为？n饮用水的用水的pHpH值应该控制在控制在6.58.56.58.564-漂白粉的有效漂白粉的有效氯为氯为35%n有效有效氯：只有能：只有能够得到得到电子的子的Cl原子或更高价的离子原子或更高价的离子才能才能够起到氧化作用，而消毒。起到氧化作用，而消毒。n漂白粉中漂白粉中CaOCl2（Ca2+，O2-，Cl1+，Cl1-），只有），只有Cl1+能能够得到得到2个个电子，恰好相当于一个子，恰好相当于一个Cl2分子。分子。n1mol的的CaOCl2（分子量（分子量127）氧化能力相当于）氧化能力相当于1mol Cl2，则漂白粉中的有效漂白粉中的有效氯为235.5/127=56%，由于漂白粉中含有由于漂白粉中含有CaOCl2为62.5%n因此漂白粉中的有效因此漂白粉中的有效氯为56%62.5%=35%n次次氯酸酸钠的有效率的有效率为10-12%65-加加氯氯消毒消毒标标准准n游离余游离余氯 在与水接触在与水接触30分分钟后后应不低于不低于0.3mgL，管网末梢，管网末梢水不水不应低于低于0.05mgL(适用于加适用于加氯消毒消毒)66-二、藻二、藻类类的去除的去除n由于天然水体中有机物由于天然水体中有机物较少，无机物少，无机物较多（多（N、P）时，藻，藻类大量繁殖，提供大量繁殖，提供给异养型生物繁异养型生物繁殖的有机养料，同殖的有机养料，同时使得水体水使得水体水质变差，主要差，主要表表现在在n发生混生混浊，颜色气味不良色气味不良n水体富水体富营养化养化n溶解氧下降，溶解氧下降，鱼类死亡死亡n作作为饮用水水源，藻毒素用水水源，藻毒素问题、堵塞、堵塞滤池、色度池、色度问题n必必须控制藻控制藻类的的过渡繁殖渡繁殖67-藻藻类的去除的去除杀藻藻药剂：CuSO4、HClO（漂白粉）（漂白粉）0.30.5mg/L能能杀死大部分藻死大部分藻类，但不能分解臭味物但不能分解臭味物质，对鱼类也有毒性也有毒性0.51mg/L能除能除去臭味物去臭味物质，产生生消毒副消毒副产物物超声波：超声波：破坏破坏细胞，使之失去上浮能力而沉降，胞，使之失去上浮能力而沉降，在日本已得到在日本已得到实际应用。用。68-第六第六节节 水中病毒及其水中病毒及其检验检验n水水环境中的病毒境中的病毒n脊髓灰脊髓灰质炎病毒炎病毒n肝炎病毒肝炎病毒n其他其他肠道病毒道病毒柯柯萨奇病毒和埃可病毒奇病毒和埃可病毒69-水中病毒的水中病毒的检验蚀斑斑检验法法n将猴子的将猴子的肾脏用用pH7.48.0的胰蛋白的胰蛋白酶溶液溶液处理。理。胰胰蛋白蛋白酶的作用是使的作用是使肾脏组织的胞的胞间质发生解聚作生解聚作用，因而使用，因而使细胞彼此分离。胞彼此分离。用用营养培养基洗养培养基洗这些些悬浮的浮的细胞。将胞。将细胞沉胞沉积在在40110mm的的细胞瓶的胞瓶的平面上，并形成平面上，并形成一一层连续的膜的膜。n将水将水样接种到接种到这层膜上，再用膜上，再用营养养琼脂覆盖。脂覆盖。n水水样中如果有中如果有肠道病毒，就会破坏道病毒，就会破坏组织细胞，增殖的胞，增殖的病毒病毒紧接着破坏接着破坏临接的接的细胞。在胞。在2448h内，就可以内，就可以用肉眼看到。用肉眼看到。病毒群体形成的斑点称病毒群体形成的斑点称为蚀斑斑。n每升水每升水样没有没有1个病毒个病毒蚀斑，斑，饮用才安全。用才安全。70-重点内容回重点内容回顾顾n饮用水中可能存在哪些病原菌？用水中可能存在哪些病原菌？n如何从如何从细菌学的角度判断菌学的角度判断饮用水是用水是卫生生的？的？细菌学菌学标准准n如何如何进行行试验？n采取什么措施可以保采取什么措施可以保证饮用水是用水是卫生健生健康的？康的？71-