716例痰涂片抗酸染色阳性患者非结核分枝杆菌菌种鉴定及其宿主风险因素分析.pdf

例痰涂片抗酸染色阳性患者非结核分枝杆菌菌种鉴定及其宿主风险因素分析高雯琬 王鹏森 杨伏萍 廖传玉 黄正谷 陈玉 李晓旭 韩梅 李同心 【摘要】目的 探讨 例痰涂片抗酸染色阳性患者非结核分枝杆菌()菌种鉴定情况及其宿主风险因素 方法 收集 年 月到 年 月重庆市公共卫生医疗救治中心收治的 例痰涂片抗酸染色阳性具有呼吸道症状患者的临床资料和痰液标本采用荧光 溶解曲线法进行分子菌种鉴定并应用 回归分析筛选出非结核分枝杆菌的相关风险因素 结果在 例痰标本中结核分枝杆菌复合群()占 (/)和 双重感染占 (/)以患者的临床诊断为标准 例戈登分枝杆菌考虑为定植菌(/)另外 例非结核分枝杆菌为致病菌(/)其中胞内分枝杆菌占 (/)脓肿分枝杆菌占 (/)鸟分枝杆菌占 (/)的风险因素分析显示慢性阻塞性肺疾病()(:)、艾滋病()(:)、肿瘤(:)和糖尿病(:)具有统计学差异()结论在重庆及周边地区非结核分枝杆菌感染占比约为 其中主要流行的菌种是脓肿分枝杆菌、胞内分枝杆菌和鸟分枝杆菌、肿瘤和 是非结核分枝杆菌感染的风险因素【关键词】非结核分枝杆菌结核风险因素 【】().(/)()(/).(/)(/)(/)(/)(/).()(:)()(:)(:)(:)().【】:./.基金项目:重庆市沙坪坝区决策咨询与管理创新项目(.)重庆市科卫联合医学科研项目(.)作者单位:重庆重庆市公共卫生医疗救治中心通信作者:李同心:.临床肺科杂志 年 月 第 卷第 期 非结核分枝杆菌()是机会致病病原体 最近几年 感染导致的非结核分枝杆菌肺病()在结核病高负担国家和低负担国家的患病率都急剧升高正在成为一种具有全球威胁性的疾病 由于多种因素的影响在临床上完全区分 与肺结核是具有挑战性的这将导致不适当的抗结核治疗 因此准确鉴别分枝杆菌的种类对患者的诊断和治疗至关重要 此外 分布具有地理多样性在中国南方地区流行率高北方地区流行率低 虽然已有研究分析了 的流行情况和风险因素 但每个国家和地区由于自然环境以及人群生活习惯等不同可能还是会产生差异 因此本研究将探索重庆及周边地区的 例痰涂片抗酸染色阳性患者中非结核分枝杆菌菌种鉴定情况及其宿主风险因素资料与方法一、临床资料收集 年 月到 年 月在重庆市公共卫生医疗救治中心收治的 例痰涂片抗酸染色阳性患者的临床资料包括住址、性别、年龄、结核病史和是否具有其他病症(、肝炎、糖尿病和肿瘤)纳入标准:()不设年龄限制()患者的痰涂片抗酸染色阳性并均具有呼吸道不适症状()影像学表现:肺部有阴影和(或)钙化、渗出、增殖、结节、空洞、淋巴结肿大等()的诊断参考非结核分枝杆菌病诊断与治疗指南(年版)和 病治疗指南即从同一患者的两份痰液标本中是否分离出相同的菌种来判断 为定植菌还是致病菌 肺结核()诊断参照国家卫生和计划生育委员会发布的现行肺结核诊断标准()排除标准:菌种鉴定为/双重感染的患者和 为定植菌的患者 本研究获得医院伦理委员会批准()二、研究方法采用厦门致善生物科技公司生产的 菌株分型试剂盒(荧光 溶解曲线法)对 例患者连续两次间隔 小时的晨痰标本进行菌种鉴定按试剂说明书进行操作 采用厂家配套的提取试剂盒对患者痰液进行核酸提取取 核酸提取物或阴阳性质控对照品至预干粉 反应管中盖紧 八连管管盖 瞬时离心数秒进行 扩增和熔解曲线分析 反应体系为 具体扩增反应程序为:酶处理 预变性 变性 退火 延伸 共 个循环保温 溶解分析程序为 采集、通道荧光信号连续采光升温速率为 /三、统计学处理本研究采用 软件进行分析 采用非条件逻辑回归分析与 感染相关的因素相关因素包括性别年龄结核病史和并发症(糖尿病肝炎肿瘤和)以 感染作为因变量()建立单因素二元 模型 在该模型中将 的因素再进行多因素二元 分析计算优势比()及其 置信区间()具有统计学意义结 果一、分枝杆菌菌种鉴定情况 例患者中有 例患者的痰液经鉴定为()例为 ()例()为 和 双重感染 例为定植菌()例 患者中包含 例胞内分枝杆菌 例脓肿分枝杆菌 例鸟分枝杆菌 例堪萨斯分枝杆菌 例其他分枝杆菌 例偶发/猪分枝杆菌和 例苏加分枝杆菌 胞内分枝杆 菌(/)、脓肿分枝杆菌(/)和鸟分枝杆菌(/)是本地 主要流行菌种(见图)图 菌种流行情况临床肺科杂志 年 月 第 卷第 期 二、宿主风险因素的单因素分析对所有变量进行单因素分析结果显示地区(:)、(:)、糖尿病(:)、(:)和肿瘤(:)具有统计学差异()(见表)表 非结核分枝杆菌患者基本特征的单因素 回归分析结果()特征()值地区 重庆(.)(.).(.).非重庆(.)(.).性别 男(.)(.).女(.)(.).(.).年龄(岁)(.)(.).(.).结核病史(年)(.)(.).(.).合并症(.)(.).(.).糖尿病(.)(.).(.).肝炎(.)(.).(.).(.)(.).(.).肿瘤(.)(.).(.).三、宿主风险因素的多因素分析由于重庆地区病人比例较大(/)所以本研究中将不对“地区”这一变量进行多因素分析 对筛选出来的变量(、糖尿病、和肿瘤)进行多因素分析赋值变量表(见表)结果显示与非糖尿病患者相比糖尿病患者(:)可能感染 的风险较低()(:)、(:)和肿瘤(:)是 感染的高风险因素()(见表)讨 论近年来 感染的发病率正在不断增加 大约 的 感染者错误地接受结核病治疗而且大多数 菌株对常规一线抗结核药物具有天表 感染风险因素的赋值情况因素赋值说明否 是 无 有 糖尿病无 有 无 有 肿瘤无 有 表 非结核分枝杆菌患者基本特征的多因素 回归分析结果危险因素 值 值 值()值合并症.(.).糖尿病.(.).(.).肿瘤.(.).然耐药性导致治疗失败 因此 的流行是全球公共卫生面临的一个新挑战 感染其临床和影像学表现与结核分枝杆菌有相似之处尚未有明确的诊断办法此外 菌种的分类正在迅速更新和变化 所以准确和及时的诊断 并鉴定其亚种对临床治疗和防止误诊具有重要作用 基因测序法是基于核酸序列的 菌种鉴定方法中最直接可靠的方法 有研究表明本研究中所采用的荧光 溶解曲线法试剂与 基因测序法的一致率能达到 荧光 溶解曲线的检测步骤较基因芯片法和 反向点杂交法更简单人工耗时更少不需要特殊的仪器 因此本研究中所采用的荧光 溶解曲线法 分型试剂盒适合配备荧光定量 仪器的各级实验室使用由于戈登分枝杆菌一般不具有致病性或致病性弱分离到该菌株可能为污染或短暂的定植 在本研究中 例患者的两份痰液中仅一份分离鉴定为戈登分枝杆菌以非结核分枝杆菌病诊断与治疗指南(年版)病治疗指南和患者的临床诊断为依据故 例戈登分枝杆菌判定为非致病菌 因此在重庆及其周边地区肺部 感染者占 胞内分枝杆菌()、脓肿分枝杆菌()和鸟分枝杆菌()是主要流行菌种 在 年有文章指出在重庆地区 流行的主要菌种分别是脓肿分枝杆菌、胞内分枝杆菌和偶发/猪分枝杆菌 这与本研究所得结果有所不同可能有两种原因造成该结果一是由于本研究所收集的病人信息和样本时间段为新冠疫临床肺科杂志 年 月 第 卷第 期情初始阶段这必将导致许多病人因为疫情原因不能及时到院治疗 二是前者的研究中所用的方法学为 反向点杂交法两种方法的检测原理不同其敏感度也可能不同在不同地区与国家 菌种的流行分布情况是不同的 在欧洲和北美鸟分枝杆菌、蟾分枝杆菌和偶发分枝杆菌是主要流行菌种 而在南美流行的菌种主要是鸟分枝杆菌、戈登分枝杆菌和偶发分枝杆菌 这主要是因为 菌种流行具有地理多样性例如温度、湿度和人群生活习惯的不同本研究在 感染的相关风险因素分析中发现 是 感染的高风险因素 可通过引起黏膜损伤和局部免疫损伤而导致 易感性增加包括分泌物清除障碍、气道表面液体成分异常、痰液成分异常以及持续性炎症引起的气道损伤 也指出在免疫功能正常的成人中 肺病多继发于先前有呼吸道阻塞和/或呼吸道结构破坏的慢性基础肺病患者中 这些患者的粘液纤毛清除功能和气道分泌物排除功能明显受损因此为 的定植和发展提供了合适的微环境从而导致机会感染 同时 感染也可能导致 患者的疾病进展和肺功能恶化免疫系统受损导致无法清除体内的非结核分枝杆菌是 感染的关键因素 因此 细胞数量低下或功能缺陷的患者面临 感染的风险更大 感染者特别是 细胞计数低于/的患者更容易感染 在本研究中我们也证实了这一点 相较于非肿瘤患者肿瘤患者也可能因为体内免疫系统受到破坏而导致 感染 而与非糖尿病患者相比糖尿病患者的 感染风险可能较低与其他研究报道一致 目前对于糖尿病是否为 感染的低风险因素并未有详细的研究综上所述在本研究中 主要流行的菌种是胞内分枝杆菌、脓肿分枝杆菌和鸟分枝杆菌 此外、和肿瘤是 感染的高风险因素 在临床工作中临床医生应该多意识到这些相关因素与 的关联并使用所有可用的诊断工具来确认或排除 感染 但本研究仍然存在一定的局限性如患者纳入数量不够多、时间不够长等未来我们将继续收集 和 的相关信息进一步完善本研究参考文献 .:.():.:.():.:.():.:.():.:.():.().(/):.():.中华医学会结核病学分会.非结核分枝杆菌病诊断与治疗指南(年版).中华结核和呼吸杂志 ():.:/.():.:.():.李爱芳 谈小文 崔晓利 等.荧光 熔解曲线法在非结核分枝杆菌菌种鉴定中的应用价值.中国防痨杂志():.张汇征 陈耀凯 严晓峰 等.重庆市流行非结核分枝杆菌菌种鉴定及感染人群特征.中国热带医学 ():.(下转第 页)临床肺科杂志 年 月 第 卷第 期():.():.:/.:/./.():.():.:.():.:.():.():.:.():.():.:.:.:./:.():.:.():.:.():.:().():.():.():.:().():.收稿日期:(上接第 页).:.():.():.():.:.():.():.?.():.收稿日期:临床肺科杂志 年 月 第 卷第 期