2020-2021年山西省规模化牛场牛传染性鼻气管炎血清学调查.pdf

2620238DAIRY HEALTH奶牛保健2020-2021年山西省规模化牛场牛传染性 鼻气管炎血清学调查韩文儒1，刘文俊1，杨丽华1，董春光1，韩一超1，武守艳1，付国兵2，李永忠3，邱建东4（1.山西农业大学动物医学学院，太原030032；2.晋中市农业农村局，榆次030600，3.代县峪口镇人民政府，忻州034000，4.太原市农业综合行政执法队，太原030027）中图分类号：S858.23 文献标识码：A 文章编号：1004-4264（2023）08-0026-04DOI:10.19305/ki.11-3009/s.2023.08.005 开放科学(资源服务)标识码(OSID)微信扫描二维码听独家语音介绍与作者在线交流摘 要：为了解牛传染性鼻气管炎近期在山西省规模化牛场的流行情况，试验采用ELISA方法对牛血清中牛传染性鼻气管炎的抗体水平进行了研究。结果表明：山西省从北到南不同区域的规模化牛场群体阳性率达到92.31%，个体阳性率达到66.65%。其中2020年晋北区域、晋中区域、晋南区域牛场的牛传染性鼻气管炎抗体个体阳性率均大于 70%，晋南区域的阳性率最高，为 89.67%；乳用牛高达90.84%，肉用牛为47.56%。2021年晋中区域、晋南区域牛场的牛传染性鼻气管炎抗体个体阳性率分别由2020年的71.95%、89.67%降为31.25%、52.35%；乳用牛为52.80%，肉用牛为27.27%。说明山西省从北到南各个区域的规模化牛场已普遍存在牛传染性鼻气管炎病毒感染，不同区域规模化养殖场的感染率不相同，乳用牛的感染率高于肉用牛。关键词：规模化牛场；牛传染性鼻气管炎；不同区域；抗体群体阳性率；抗体个体阳性率牛 传 染 性 鼻 气 管 炎（I n f e c t i o u s.b o v i n e.rhinotracheitis，IBR）是由牛疱疹病毒I型（Bovine.herpesvirus-1，BHV-1）引起的一种牛的急性接触性传染病，主要以发热、结膜炎、鼻炎、鼻窦炎、生殖道炎、脑膜炎、乳房炎等为特征14。犊牛感染BHV-1常因并发细菌性肺炎或肠炎而死亡，死亡率为85%100%5。BHV-1对成年牛的致死率较低，但可使病畜长期携带病毒，并在免疫力下降或受到应激时通过呼吸道排毒，感染牛群中的其他牛，给该病的防控造成极大困难。另外，公牛的精液也可携带BHV-1，使得该病可以垂直传播6,7。颜邦芬等8的调研报告显示，全国29个省（市、自治区）的IBR的阳性率为12.1%77.8%，表明IBR在我国牛群中广泛流行9,10。为了解IBR在山西省规模化牛场的流行情况，笔者团队于2020年1月-2021年12月在山西省从北到南三个区域的规模化牛场采集1.595份牛血清样品，应用ELISA方法开展了IBR抗体检测，以期为山西省规模化牛场疫病综合防控措施的制定提供依据。1材料和方法 1.1被检血清 收稿日期：2022-12-21基金项目：山西省重点研发计划项目（201903D211012-03）；山西省农业科学院农业科技创新研究课题（YCX2020104）；山西省农业科学院农业科技创新工程（YGC2019TD01）；山西省农业科学院畜牧兽医研究所科研项目（Xms202006）。作者简介：韩文儒（1983-），男，汉族，助理研究员，本科，研究方向为兽医临床医学。通讯作者：武守艳（1967-），女，汉族，副研究员，本科，主要从事兽医临床医学科研工作。2720238DAIRY HEALTH奶牛保健采集的血样来自山西省三个区域未免疫过IBR病毒疫苗的8个规模化奶牛场、5个规模化肉牛场，共计.1.595份，其中奶牛血清1.321份，肉牛血清274份。所采血样经无菌分离血清后于-20保存待检，检测前置于室温条件下自然解冻。1.2主要试剂牛传染性鼻气管炎病毒gB抗体检测试剂盒，购自北京爱德士元亨生物科技有限公司。1.3主要仪器酶标仪（BioTek.ELx800），购自美国伯腾仪器有限公司。1.4方法 1.4.1抗体检测按照牛传染性鼻气管炎病毒gB抗体检测试剂盒说明书进行操作。1.4.2结果判定与标准BHV-1血清抗体结果判定与标准：当阴性对照平均值0.500及阳性对照平均值的阻断率80%时，说明实验结果有效，计算阻断率。阻断率（%）=（阴性对照平均值-样品A450）/阴性对照平均值100%。阻断率45%为阴性，45%阻断率55%为可疑，阻断率55%为阳性。2结果与分析 2.12020-2021年山西省IBR血清抗体监测情况表1山西省不同年份规模化牛场传染性鼻气管炎血清阳性率检测结果年份牛场数（个）阳性数（个）群体阳性率（%）血清样品数（份）阳性数（份）血清阳性率（%）202077100.0084169382.4020216583.3375437049.07合计131292.311595106366.65阳性率（%）图1不同年份山西省规模化牛场传染性鼻气管炎抗体检测结果由表1和图1可以看出，本次共调查牛血清样品.1.595份，检出IBR抗体阳性样品共1.063份，个体平均阳性率为66.65%，2021年比2020年个体阳性率呈现下降趋势，从82.40%降为49.07%。群体阳性率总体趋势同个体阳性率，每年的群体阳性率均达到80%以上。检测结果表明，山西省全区被调查牛群中均有不同程度的BHV-1感染，IBR在山西省普遍流行。2.2不同区域IBR血清抗体监测情况由表2和图2可以看出，从区域分布看，2020年晋北区域、晋中区域、晋南区域牛场的牛传染性鼻气管炎病毒抗体个体阳性率均大于70%，晋南区域最高，达89.67%；全省三个区域的群体阳性率均为100%。2021年晋北区域、晋中区域、晋南区域牛场的牛传染性鼻气管炎病毒抗体个体阳性率均下降，晋中区域和晋南区域的个体阳性率分别由2020年的71.95%、89.67%降为31.25%、52.35%；晋中区域牛场的群体阳性率由100%下降为66.67%。检测结果表明，山西省不同区域规模化牛场中BHV-1感染情况差异在扩大，但都在不同程度地下降，这与山西省各个区域的气候状况、气候环境和饲养管理水平以及牛的抗病能力差异有关；并且跟近年来IBR病毒疫苗的使用推广有一定关系。表2山西省不同区域规模化牛场传染性鼻气管炎血清阳性率检测结果年份地区牛场数（个）阳性数（个）群体阳性率（%）血清样品数（份）阳性数（份）血清阳性率（%）2020晋北区域33100.0025119376.89晋中区域33100.0016411871.95晋南区域11100.0042638289.672021晋北区域11100.00403075.00晋中区域3266.671605031.25晋南区域22100.0055429052.35阳性率（%）2021年图2山西省不同地区规模化牛场传染性鼻气管炎抗体检测结果2.3不同生产用途牛群IBR血清抗体监测情况2820238DAIRY HEALTH奶牛保健由表3和图3可以看出，不同生产用途牛群的IBR感染情况有差异。发现不同年度乳用牛的抗体个体阳性率均高于肉用牛，2020年乳用牛高达90.84%，肉用牛为47.56%；2021年乳用牛降为52.80%，肉用牛降为27.27%。乳用牛和肉用牛的抗体群体阳性率在2020年都为100.00%；2021年乳用牛高于肉用牛，分别为100.00%、50.00%。检测结果表明，乳用牛抗体阳性率普遍高于肉用牛。究其原因，可能与肉用牛饲喂周期相对较短、乳用牛饲喂周期较长有关。较长的饲喂周期可导致牛群感染的几率显著增加。表3山西省不同生产用途牛群的传染性鼻气管炎血清阳性率检测结果年份生产用途牛场数（个）阳性数（个）群体阳性率（%）血清样品数（份）阳性数（份）血清阳性率（%）2020肉用牛33100.001647847.56乳用牛44100.0067761590.842021肉用牛2150.001103027.27乳用牛44100.0064434052.80阳性率（%）肉用牛乳用牛肉用牛乳用牛图3山西省不同生产用途牛群的传染性鼻气管炎抗体检测结果2.4不同年度山西省IBR血清抗体阳性率与抗原阳性率对比结果表4山西省规模化牛场传染性鼻气管炎抗体阳性率与抗原阳性率检测结果检测方法2020年2021年总体血清阳性率（%）82.4047.1769.65抗原阳性率（%）76.0050.0057.64由表4和图4可以看出，通过牛场牛血清样品进行IBR抗原检测发现，不同年度血清抗体阳性率与抗原阳性率变化趋势相同。血清阳性率高的2020年，抗原阳性率也相对较高。反之，血清阳性率低的2021年，抗原阳性率也低。检测结果表明，通过ELISA方法和病原学检测方法都能够反映出IBR的流行感染情况。阳性率（%）图4山西省规模化牛场传染性鼻气管炎抗体阳性率与抗原阳性率对比3讨论 ELISA诊断方法是近年来血清学检测实验室中常用的方法，具有敏感性高、特异性强、操作简便等优点，在疾病监测中被广泛应用1113。根据此次血清学调查的结果显示，2020-2021年山西省被检的13个牛场中，12个牛场存在IBR抗体阳性牛，群体阳性率达到92.31%，个体阳性率达到66.65%，这表明山西省从北到南不同区域都存在BHV-1感染的牛场。其中2020年晋北区域、晋中区域、晋南区域牛场的IBR抗体个体阳性率均大于70%，晋南区域的阳性率最高，为89.67%；2021年晋中区域、晋南区域牛场的IBR抗体个体阳性率分别由71.95%、89.67%降为31.25%、52.35%。李颖14等采用ELISA方法对牛血清抗体进行检测，2014、2015和2016年山西省11个市养殖场（户）的BHV-1抗体平均阳性率分别为42.67%、31.67%和46.67%。造成山西省不同地区养殖场BHV-1感染率差异的主要原因可能有3个方面：第一，山西省养牛业规模化养殖正在不断地扩大，而BHV-1多呈隐性感染，如果有1头牛被感染，BHV-1会不断向外排毒，持续感染其他牛15，就可能波及整个牛群。这是造成牛群内BHV-1难以根除的重要原因。第二，山西省从北到南各区域的气候状况存在差异。气候环境和饲养管理水平不同，牛的抗病能力就会有差异。第三，近年来IBR病毒疫苗的使用范围逐步扩大，对IBR病的传播起到了一定的控制作用。本次调查还对不同生产用途牛群的血清抗体阳性率进行了比较，结果显示不同年份乳用牛的个体阳性率均2920238DAIRY HEALTH奶牛保健高于肉用牛。究其原因，可能与肉用牛饲喂周期相对较短、乳用牛饲喂周期较长有关。较长的饲喂周期可导致牛群感染的几率显著增加，因此乳用牛抗体阳性率普遍较高。由于潜伏感染是IBR的特点之一，免疫力下降时通过呼吸系统大量排毒感染牛群16，因此应着重加强日常生物安全工作。鉴于本病严重的危害性和难以根除性，各个牛场在引种时应严格检疫，防止引进阳性牛和隐性感染牛，并及时淘汰本场阳性感染牛。4结论从血清学流行病学调查结果来看，山西省从北到南各个区域的规模化牛场已普遍存在BHV-1感染，且不同区域养殖场的感染率不相同。对于BHV-1抗体阳性率高的规模化牛场应该加强检疫，降低饲养密度，隔离病畜、犊牛，加强生物安全措施，适时进行疫苗免疫接种17；对于BHV-1抗体阳性率低的规模化牛场应加强生物安全措施，隔离、淘汰病畜，加强监测。所有牛场在引种或者引进精液前，需要进行BHV-1抗体或抗原检测，不从高风险地区牛场调入牛只。要保障养牛业的健康和持续发展，需要通过检疫来防止引进隐性感染牛，定期监测来清除持续感染牛，通过疫苗免疫接种降低牛的易感性，通过消毒防止疫病传播，最终达到根除BHV-1的目的。参考文献1 岳瑞超,程子龙,李宁,等.山东牛场常见传染病的血清流行病学调查 J.中国动物检疫,2014,31(6):58-61.2 朱海明,何伟勇.规模化牛场传染性鼻气管炎(IBR)的血清学调查、临床诊断及综合防治A.山东青岛:首届中国奶业大会讨论文集C.上册,2010:302.3 牛德料,孟日增,石建平,等.牛传染性鼻气管炎病毒 g B、g E 蛋白的研究概述J.畜牧与饲料科学,2008,29(3):61-62.4 吕建军,张兰清.青海牦牛牛病毒性腹泻和牛传染性鼻气管炎的流行病学调查J.家畜生态学报,2014,35(4):59-63.5 萧定汉,李兰华,张廷运,等.犊牛传染性鼻气管炎的临床诊断J.中国奶牛,1995,3:57-58.6 Fabis J J,Szkudlarek L,Risatti G R,er al.Herpetiformgenital lesions in a heifer with mucosal diseaseJ.Vet Pathol,2008,45:212-216.7 Woodbine K A,Medley G F,Moore S J,et a1.A four year longitudinal sero-epidemiologicalstudy of bovine herpesvirus type-1(BHV-1)in adult cattle in south west EnglandJ.BMC Vet Res,2009,5:5.8 颜邦芬.牛传染性鼻气管炎病毒抗体间接ELISA的建立及其在流行病学研究中的应用D.武汉:华中农业大学,2007.9 邹世颖,何倩妮,刘蕾,等.中国北方六省市牛传染性鼻气管炎病流行病学分析J.中国兽医杂志,2012,02:132-135.10 曲萍,宋晓晖,董浩,等.我国部分地区牛传染性鼻气管炎血清学调查与分析J.动物医学进展,2018,39(3):47-48.11 张芳,刘瑞宁,陈颖钰,等.牛传染性鼻气管炎诊断方法研究进展J.动物医学进展,2017,38(4):93-97.12 岳瑞超,李宁,刘立涛,等.山东省某奶牛场布病与口蹄疫血清抗体检测及分析J.山东畜牧兽医,2014,3:7-8.13 世界动物卫生组织编著;农业部兽医局组译.OIE 陆生动物卫生法典M.第21版.北京:中国农业出版社:2015.11.14 李颖,顾盼盼,梁睿,等.山西省部分牛场牛病毒性腹泻和牛传染性鼻气管炎血清抗体检测与分析J.中国动物检疫:2017.34(12):15-19.15 黄凯,张俊杰,刘英霞,等.北京地区规模化牛场BVDV持续感染牛清除方案的初步实施J.中国动物检疫,2010,27(5):34-35.16 吴文浩.牛传染性鼻气管炎病毒全基因测序和 gE 基因缺失株的构建及鉴定D.南京:南京农业大学,2013.17 杨飞,宋志峰,刘丹,等.牛传染性鼻气管炎诊断方法研究进展J.中国兽药杂志,2020,2:65-72.Serological Investigation of Infectious Bovine Rhinotracheitis in Large-Scale Cattle Farms in Shanxi Province from 2020 to 2021HAN Wen-ru1,LIU Wen-jun1,YANG Li-hua1,DONG Chun-guang1,HAN Yi-chao1,WU Shou-yan1,FU Guo-bing2,LI Yong-zhong3,QIU Jian-dong4(1.College of Veterinary Medicine,Shanxi Agricultural University,Taiyuan 030032;2.Jinzhong Municipal Bureau of Agriculture and Rural Affairs,Yuci 030600;3.Dai County Yukou Town Peoples Government,Xinzhou 034000;4.Taiyuan Agricultural Comprehensive Administrative Law Enforcement Team,Taiyuan 030027)Abstract:In order to investgate the prevalence of infectious bovine rhinotracheitis in large-scale cattle farms in Shanxi province,the antibody level of infectious bovine rhinotracheitis in bovine serum was detected by ELISA method.The results showed that the positive rate of large-scale cattle farms in different areas of Shanxi province 3020238DAIRY HEALTH奶牛保健牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的原核表达及检测李菊1，毕冬琳2，何菊1（1.贵州六盘水市水城区动物疫病预防控制中心，六盘水553600；2.西北民族大学生物工程与 技术国家民委重点实验室，兰州730030）中图分类号：S858.23 文献标识码：A 文章编号：1004-4264（2023）08-0030-04DOI:10.19305/ki.11-3009/s.2023.08.006摘 要：试验旨在构建牛病毒性腹泻病毒（BVDV）E2基因原核表达载体pET-32a-E2，并在E.coli BL21（DE3）原核表达载体系统中进行表达，以获取E2蛋白，为后续BVDV诊断试剂的开发和疫苗的研制提供基础资料。本试验以一株牛病毒性腹泻病毒GSTZ为材料，利用PCR将目的基因BVDV E2基因扩增至载体pET-32a，构建重组质粒pET-32a-E2，将测序正确的阳性质粒pET-32a-E2转化表达菌E.coli BL21（DE3）诱导表达，利用Western blot对E2重组蛋白进行验证。结果表明，成功扩增出E2片段，大小约为1 122bp，构建了pET-32a-E2原核表达载体；E2片段大小经双酶切鉴定与目的片段相符；SDS-PAGE电泳结果显示重组蛋白分子大小约为60 kDa，与预期值一致；Western blot鉴定表明E2蛋白成功表达。本试验成功构建了BVDV-E2基因原核表达载体pET-32a-E2，并在E.coli BL21（DE3）中得以成功表达，为后续开发BVDV诊断试剂和疫苗研制提供了基础资料。关键词：BVDV；E2；原核表达；检测牛病毒性腹泻病毒（Bovine.viral.diarrhoea.virus，BVDV）是黄病毒科（Flaviviridae）瘟病毒属（Pestivirus）成员，可引起家养和野生反刍动物的牛病毒性腹泻黏膜病，主要感染618月龄犊牛，临床表现为黏膜发炎、糜烂和腹泻1,2。BVDV为单股正链RNA病毒，基因组长约12.5kb，病毒粒子呈球形，有囊膜，直径为4060nm3,4。BVDV感染宿主范围广泛，除了主要宿主牛之外，其他经济动物如猪、绵羊、山羊、鹿、骆驼以及某些野生反刍动物均可感染，BVDV还是急性和繁殖障碍型传染病的重要病原，严重影响养牛业的发收稿日期：2023-02-28作者简介：李菊，女，硕士研究生，主要从事动物疫病防控及兽医实验室诊断工作。通讯作者：何菊，女，高级兽医师，硕士研究生，主要从事动物疫病防控及兽医实验室诊断工作。reached 92.31%,and the positive rate of individuals reached 66.65%.In 2020,the individual positive rate of bovine rhinotracheitis virus antibody in cattle farms was more than 70%,and the highest positive rate was 89.67%in southern Shanxi.As high as 90.84%for dairy cattle and 47.56%for meat cattle.In 2021,the individual positive rate of bovine rhinotracheitis virus antibody decreased from 71.95%and 89.67%to 31.25%and 52.35%in middle area and south area of Shanxi province,respectively.52.80%for dairy cattle and 27.27%for meat cattle.The results indicated that BHV-1 infection was widespread in large-scale cattle farms in all of Shanxi Province,and the infection rate was different in different regions.Dairy cattle showed higher infection rate than meat cattle.Key words:Large-scale cattle farms;Infectious bovine rhinotracheitis;Different areas;Positive rate of antibody population;Antibody individual positive rate