2022年辽宁省兽医系统实验室检测能力比对.pdf

452023年第40卷第8期兽 医 管 理2022 年辽宁省兽医系统实验室检测能力比对杨洺扬，兰德松，顾贵波，赵培，周维，孙世宇（辽宁省农业发展服务中心，辽宁沈阳110164）摘要：为检验并进一步提升辽宁省兽医系统实验室检测水平，提高动物疫病监测预警能力，辽宁省农业发展服务中心动物疫病预防控制中心组织开展了 2022 年全省兽医系统实验室检测能力比对，全省 13 个市级和 57 个县级兽医系统实验室参加了本次能力验证比对。本次比对共设置 6 个检测项目，每个实验室依据检测参数参加其中 4 个项目，每个项目设置盲样 6 份。结果显示：全省兽医系统实验室的实验室正确率和样品正确率分别为75.71%（53/70）和 98.63%（1 657/1 680），13 个市级实验室正确率达 100%，17 个县级实验室对 5 个检测项目 23 份样品的检测结果出现较大偏差。结果表明，辽宁省大部分兽医系统实验室具备过硬的检测能力，但部分县级兽医实验室检测能力偏弱。结果提示，辽宁省亟需采取针对性措施进一步提升基层兽医实验室检测能力和管理水平，促进各级兽医系统实验室加强规范管理，确保实验室检测结果准确可靠。关键词：兽医系统实验室；检测能力；比对试验中图分类号：S851.7文献标识码：A文章编号：1005-944X（2023）08-0045-05DOI：10.3969/j.issn.1005-944X.2023.08.009Proficiency Test of Veterinary System Laboratories in Liaoning Province in 2022Yang Mingyang，Lan Desong，Gu Guibo，Zhao Pei，Zhou Wei，Sun Shiyu（Liaoning Agricultural Development Service Center，Shenyang，Liaoning110164，China）Abstract：In order to further improve the proficiency of veterinary system laboratories in Liaoning Province as well as their capacity for animal disease monitoring and early warning，a proficiency test was organized by Animal Disease Prevention and Control Center under Liaoning Agricultural Development Service Center in 2022，covering 13 veterinary system laboratories at municipal level and 57 at county level.6 items were included，4 of which were selected by each laboratory according to testing parameters，and 6 blind samples were contained under each item.The results showed that the gross accuracy rates of laboratories and samples were 75.71%（53/70）and 98.63%（1 657/1 680），respectively，the accuracy rate of 13 laboratories at municipal level reached 100%，but for 17 laboratories at county level，large deviations were found in the test results of 23 samples under 5 items.In conclusion，most laboratories were with strong capacity，but some at county level were poorer.Therefore，targeted measures should be taken to further improve the proficiency and management level of laboratories at grassroots level，laboratories at all levels were recommended to improve their standardized management and to ensure accurate and reliable test results.Key words：veterinary system laboratory；detection capability；proficiency test收稿日期：2023-03-31修回日期：2023-05-28基金项目：辽宁省 2022 年动物疫病防控及畜产品质量安全补助资金项目通信作者：兰德松。E-mail：46兽 医 管 理自 2010 年我国实施兽医系统实验室（简称兽医实验室）考核制度以来，实验室检测能力比对已成为提升实验室管理水平的重要抓手和评估实验室检测能力的主要手段1-8。为全面了解辽宁省市级和县级兽医实验室的检测能力及其动物疫病监测预警水平，推进兽医实验室体系能力建设，2022 年7 月，辽宁省农业发展服务中心动物疫病预防控制中心（以下简称“辽宁省疫控中心”）组织开展了2022 年全省兽医实验室检测能力比对工作9。全省 13 个市级和 57 个县级兽医实验室参加并完成了比对工作。本次能力比对客观反映出现阶段辽宁省市级和县级兽医实验室的检测能力水平以及存在的不足，为各级兽医主管部门制定针对性政策措施，重视并加大兽医实验室软硬件建设投入，进一步完善兽医实验室管理体系，提高实验室检测能力水平，提升动物疫情监测预警能力提供了依据。1材料和方法1.1比对项目设置根据市级和县级兽医实验室检测能力和授权检测参数的不同，13 个市级和 26 个具备分子生物学检测室的县级兽医实验室参加非洲猪瘟病毒（ASFV）核酸检测、禽流感病毒（AIV）核酸检测（通用型）、猪 O 型口蹄疫病毒（FMDV）抗体检测和 H5 亚型 AIV 抗体检测等 4 个比对项目；其他 31 个仅具备血清学检测能力的县级兽医实验室参加猪 O 型 FMDV 抗体检测、H5 亚型 AIV 抗体检测、布鲁氏菌抗体检测和猪瘟病毒（CSFV）抗体检测等4个比对项目。所有项目均设置6份盲样。1.2检测试剂、试验方法和标准针对 6 个检测能力比对项目，采用相应国家标准中规定的检测方法。检测试剂由辽宁省疫控中心统一招标采购提供，核酸提取试剂由各市县实验室自行准备（表）。1.3比对样品各比对项目的比对样品由辽宁省疫控中心统一招标采购提供，并由辽宁省疫控中心实验室完成标定、分装、编号、保存和发放，将各项目比对样品随机组合成 1 组 6 份盲样。1.3.1ASFV 核酸荧光 PCR 比对样品参考 Ct值为 22.42、23.38、25.44、27.71、29.92 的标准样品以及阴性核酸标准样品，每组盲样至少包含 1 个强阳（22.42）、1 个弱阳（27.71）、1 个阴性样品。1.3.2AIV 核酸（通用型）荧光 RT-PCR 比对样品参考 Ct 值为 22.92、26.05、29.12、30.96 的标准品以及阴性核酸标准样品，各参考值样品数量不确定。1.3.3H5 亚型（Re-13）AIV 抗体 HA-HI 试验比对样品参考值为 0 log2、3 log2、4 log2、5 log2和7 log2的禽血清样品，各参考值样品数量不确定。1.3.4O 型 FMDV 抗体阻断 ELISA 比对样品参考值为1:720、1:360、1:180、1:45、1:22.5和1:8的猪血清样品，每组至少包含2个参考值同为1:360的双份重复样品。1.3.5布鲁氏菌抗体竞争 ELISA 比对样品参考值为阳性、弱阳性和阴性的羊血清样品，阳性、弱阳性、阴性样品数量不确定。1.3.6CSFV 抗体间接 ELISA 比对样品参考值为阳性、弱阳性和阴性的猪血清样品，阳性、弱阳性、阴性样品数量不确定。1.4样品传递为保证比对样品良好的生物学活性，样品须存放于-20 冰箱中，分发样品时各市级兽医实验表 1比对项目的检测方法、依据标准和主要试剂比对项目参加实验室数/个检测方法依据标准试剂来源ASFV 核酸检测39荧光 PCRGB/T 186482020世纪元亨AIV 核酸检测（通用型）39荧光 RT-PCRGB/T 189362020国生生物H5 亚型（Re-13）AIV 抗体检测70血凝和血凝抑制试验（HA-HI）GB/T 189362020国生生物O 型 FMDV 抗体检测70液相阻断 ELISAGB/T 189352018北京标驰布鲁氏菌抗体检测31竞争 ELISAGB/T 186462018兰威CSFV 抗体检测31间接 ELISAGB/T 165512020世纪元亨472023年第40卷第8期兽 医 管 理室派专人到辽宁省疫控中心领取市本级及其所辖县区兽医实验室的比对盲样及检测试剂，全过程冷藏运送，并于 12 h 内送达各参加比对的兽医实验室。各实验室必须在收到比对盲样后 48 h 内完成比对检测及结果上报。1.5结果判定标准ASFV 核酸检测、AIV 核酸检测（通用型）、布鲁氏菌抗体检测和 CSFV 抗体检测等 4 个比对项目检测结果与标定值一致，即参考值为阳性（含弱阳）的盲样检测结果为“阳性”，参考值为阴性的盲样检测结果为“阴性”，判为比对结果准确；检测结果与参考值不一致，判为比对结果不正确。H5 亚型 AIV 抗体检测和 O 型 FMDV 抗体检测等 2 个比对项目检测结果与标定值一致或存在 1个滴度以内的偏离，判为比对结果准确；比对项目检测结果与标定值存在 2 个及以上滴度的偏离，判为比对结果不正确。1.6结果分析根据各比对项目的结果判定标准对各实验室检测结果进行判定，并进一步对 ASFV 核酸荧光 PCR 检测项目的定量值做偏离程度分析，按照CNAS-GL002能力验证结果的统计处理和能力评价指南10中方法进行能力统计量计算，以相对偏差（百分相对差 D）和 Z 比分数，分析各实验室荧光 Ct 检测值和参考值的差异。计算公式：D=（检测值-参考值）100/参考值；Z=（检测值-参考值）/，其中 表示能力评定标准差，根据经验值（预期值）设定为 0.2 参考值8，10。本次比对试验中，强阳性样品 Ct 参考值为 22.42，弱阳性样品Ct参考值为27.71。结果分析：|Z|2，表明“满意”；2|Z|3，表明“有问题”，产生警戒信号，提醒实验室应引起注意；|Z|3，表明“不满意”，实验室应分析原因，制定针对性整改措施8，10-11。对 O 型 FMDV 抗体阻断 ELISA 检测项目的双份重复样品检测结果做自身重复性分析。当实验室双份重复样品检测值一致，表明“满意”；当实验室双份重复样品检测值不一致，表明“不满意”，实验室应分析原因，制定针对性整改措施。2比对结果2.1总体情况2022 年辽宁省共 70 家兽医实验室参加全省兽医实验室比对，所有参比实验室均在限定时间内完成了检测比对及结果上报，其中 53 家（市级 13 家、县级 40 家）比对结果全部正确，占 75.71%，其余17 家出现错误的实验室中，1 家实验室出现 4 份样品检测错误，3 家出现 2 份样品检测错误，13 家出现 1 份样品检测错误；检测比对样品共计 1 680 份，其中 23 份样品检测结果错误，其他样品检测结果均正确，样品检测结果准确率为 98.63%（表 2）。2.2各比对项目情况ASFV核酸检测项目共39家实验室参加比对，其中 1 家实验室的 1 份样品检测结果出现错误；AIV 核酸检测（通用型）项目共 39 家实验室参加比对，其中 3 家实验室的 3 份样品检测结果出现错误；H5 亚型 AIV 抗体检测项目共 70 家实验室参加比对，其中 5 家实验室的 8 份样品检测结果出现错误；O 型 FMDV 抗体检测项目共 70 家实验室参加比对，其中 9 家实验室的 10 份样品检测结果出现错误；布鲁氏菌抗体检测项目共 31 家实验室参加比对，其中1家实验室的1份样品检测结果错误；CSFV 抗体检测项目共 31 家实验室参加比对，所有实验室检测结果全部正确（表 3）。2.3ASFV 核酸荧光 PCR 比对39 家参加 ASFV 核酸检测项目的实验室中，表 22022 年辽宁省兽医实验室检测能力比对总体情况实验室类别参加实验室/个 结果正确实验室/个 实验室正确率/%样品数量/份 检测正确样品/份 样品正确率/%市级1313100312312100县级具备分子生物学检测能力261973.0862461498.40其它312167.7474473198.25合计/平均705375.711 6801 65798.6348兽 医 管 理38 家实验室比对结果全部正确，只有 1 家实验室的 1 份样品结果出现错误。对所有实验室检测结果 Ct 值进行差异分析发现，实验室间 Ct 值差异较大，利用公式进行计算，各实验室比对结果 Ct 值的Z比分数和Z比分数分布情况见图1。结果显示：|Z|3 的实验室共 9 个，表明为“不满意”结果，占 23.08%；2|Z|3 的实验室共 7 个，表明为“有问题”结果，占 17.95%；|Z|2 的实验室共 23 个，表明为“满意”结果，占 58.97%。2.4O 型 FMDV 抗体阻断 ELISA 比对70 家参加 O 型 FMDV 抗体检测项目的实验室中，9 家实验室的 10 份样品结果出现错误。对所有实验室参考值同为 1:360 的双份重复样品检测值进行实验室自身重复性分析发现：全部重复样品定性检测结果均正确，51 家实验室双份重复样品检测值一致，表明为“满意”结果；19 家实验室双份重复样品检测结果不一致，表明为“不满意”结果（图 2）。结果表明，大部分实验室（51/70）检测结果自身重复性良好，实验室随机误差较小，但部分实验室在质控体系方面12存在问题。3讨论从 2022 年能力验证比对的总体结果来看，17个县级实验室在 5 个检测项目的 23 份样品中检测结果出现较大偏差，实验室总体正确率和样品正确率分别为 75.71%和 98.63%。从近 3 年的全省兽医实验室能力比对结果来看，2022 年检测结果准确率较前两年小幅上升，2022 年较 2020 年和 2021年出现检测结果错误的实验室分别减少了 7 个和18 个，样品检测结果准确率分别上升了 0.1 和 3.8百分点13，表明各地在机构改革后兽医实验室面临人员缩减、职能弱化等不利局面下，通过积极推进实验室资质认定，大力开展实验室技能培训，持续改进实验室管理体系等措施8，有效提升了实验室管理水平和检测能力。但 2022 年仍有 17 家实验室检测结果出现错误，4 家实验室有 2 份及以上样品检测结果出现错误，7 家实验室连续 2 年检测结果出现错误，表明部分县级兽医实验室检测能力有待提高，亟需采取针对性措施提升实验室检测能力和管理水平。建议各级兽医主管部门持续加强兽医实验室体系建设，给予现阶段能力薄弱的县级实验室一定的政策支持，保证实验室的人员能力、设施图 1ASFV 核酸 PCR 比对结果 Z 比分数柱状图图 2O 型 FMDV 抗体阻断 ELISA 双份重复样品检测值分布表 32022 年辽宁省兽医实验室各项目检测能力比对结果比对项目参加实验室/个 结果正确实验室/个 实验室正确率/%样品数量/个 检测正确样品/份 样品正确率/%ASFV 核酸荧光 PCR393897.4423423399.57AIV 核酸荧光 PCR393692.3123423198.72H5 亚型 AIV 抗体 HA-HI 试验706592.8642041298.10O 型 FMDV 抗体阻断 ELISA706187.1442041097.62布鲁氏菌抗体竞争 ELISA313096.7718618599.46CSFV 抗体间接 ELISA3131100186186100492023年第40卷第8期兽 医 管 理设备和试剂耗材等均能够满足实验室疫病参数检测需求。本研究除对全部能力比对项目进行定性结果判定统计分析外，还对 ASFV 核酸荧光 PCR 项目和 O 型 FMDV 抗体阻断 ELISA 项目的结果值分别进行了离散度和自身重复性分析，经 Ct 值离散度分析发现 9 家实验室项目能力为“不满意”水平，经自身重复性分析发现19家实验室项目能力为“不满意”水平，表明以上实验室在实验室质控方面仍存在问题，建议出现问题的实验室从“人、机、料、法、环、测”等多角度查找问题，全面加强实验室内部质量控制。本次能力比对共设置 6 个检测项目，其中错误率占比较高的项目为 O 型 FMDV 抗体检测和H5 亚型 AIV 抗体检测项目，分析原因可能与液相阻断 ELISA 试验操作复杂，试验参数（环境和时间）控制不精确、HA-HI 试验 4 单位抗原配置和回滴不准确、结果判定经验欠缺等因素有关。部分实验室检测值离散度较大和自身重复性差，分析原因可能与其使用的检测试剂批次内重复性差、检测仪器设备性能不稳定、加样量控制不精确等因素有关。进一步调查发现，出现结果偏离的实验室普遍存在实验室专业人才不足、人员年龄偏大、仪器设备老化、能力提升渠道不畅等不利因素。建议各级兽医实验室加大实验室建设和改造方面的资金投入力度，及时补充年轻的实验室人才，强化人员能力培训，进一步提升实验室管理者的质量管理水平和检测人员检测能力。本次能力验证比对试验方案设计上存在一定的局限性：一是在病毒核酸荧光 PCR 检测项目上应指定使用同种类核酸提取方式及提取试剂盒，以保证病毒核酸提取效率的一致性8；二是当前可获取的标准物质仅有 ASFV 核酸标准物质，其他比对项目的比对样品均为标准样品，达不到标准物质的均一、稳定等特质，导致各实验室间分配的比对样品存在差异，从而影响检测结果的一致性。参考文献：1 邴国霞，金萍，刘伟，等.2018 年全国省级兽医系统实验室检测能力比对结果分析 J.中国兽医杂志，2019，55（2）：131-133.2 张君，郭永丽，钟映梅，等.2019 年黑龙江省兽医实验室检测能力比对 J.中国动物检疫，2020，37（2）：34-37.3 程果，赵美雪，朱前磊，等.2018 年河南省兽医系统实验室检测能力比对结果分析 J.中国动物检疫，2019，36（5）：29-33.4 吴贇竑，张红丽，吴雪军，等.2017 年浙江省兽医系统实验室检测能力比对结果分析 J.中国兽医杂志，2018（6）：128-131.5 吴星星，李建玲，杨小亮，等.新疆乌鲁木齐市基层兽医实验室检测能力比对 J.中国动物检疫，2018，35（2）：28-30.6 徐小艳，陈昌海，王相子，等.2019 年江苏省兽医系统实验室检测能力比对 J.中国动物检疫，2019，36（11）：25-28.7 农业部.农业部关于印发兽医系统实验室考核管理办法的通知：农医发200915 号 Z.北京：农业部，2009.8 兰德松，周维，赵培，等.2019 年辽宁省兽医系统实验室检测能力比对结果 J.中国动物检疫，2020，37（7）：57-61.9 辽宁省农业农村厅.辽宁省农业农村厅办公室关于开展 2022 年全省兽医实验室检测能力比对工作的通知：辽农办畜发2022278 号 Z.沈阳：辽宁省农业农村厅，2020-06-20.10 中国合格评定国家认可委员会.能力验证结果的统计处理和能力评价指南：CNAS-GL002S.北京：中国合格评定国家认可委员会，2018.11 兰德松，侯振中.兽医系统实验室如何有效开展内部审核 J.黑龙江畜牧兽医，2019（24）：28-31.12 董昕欣，刘伟，邴国霞，等.2015 年全国省级兽医系统实验室检测能力比对结果分析 J.中国兽医杂志，2015，51（11）：103-104.13 辽宁省农业农村厅.辽宁省农业农村厅办公室关于2022 年全省兽医实验室检测能力比对结果的通报（辽农办畜发 2022 359号）Z.沈阳：辽宁省农业农村厅，2020-08-10.（责任编辑：侯文婷）