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褚实子活性成分提取计划书
通过大量文献调查，笔者发现褚实子中含量较多的成分为褚实子油及氨基酸成分，为了有效集中的研究褚实子中的活性成分，本实验主要选择提取褚实子油及褚实子中氨基酸两类物质，其提取计划如下：
一、 褚实子油的提取工艺
本实验中提取褚实子油采用索氏提取法，以石油醚为主要溶剂，影响褚实子出油率的主要因素为：提取温度、提取时间、提取次数和料液比，因此，实验可以分别以提取温（每10℃为一个梯度）、提取时间（每1小时为一个梯度）、提取次数（每一次为一个梯度）、
料液比等来设置梯度，测定最终产率，确定最佳实验条件，以便进行以后的实验。
（1）提取温度的影响
提取温度（℃）
提取时间（h）
提取次数（次）
料液比（g／ml）
40
4
1
1：4
50
4
1
1：4
60
4
1
1：4
70
4
1
1：4
80
4
1
1：4

1.称取等质量的干燥褚实子五份，碾碎过筛，用纸包好，编号①、②、③、④、⑤，按料液比1：4加入溶剂，用索氏提取器分别在温度为40℃、50℃、60℃、70℃、80℃的水浴中进行提取，连续提取4小时，趁热抽滤，收集滤液.减压蒸馏，回收石油醚。105℃干燥一段时间后，称量，分别计算出油率，作出温度—出油率曲线，比较得出适宜温度。
（2）提取时间的影响
提取温度（℃）
提取时间（h）
提取次数（次）
料液比（g／ml）
60
4
1
1：4
60
5
1
1：4
60
6
1
1：4
60
7
1
1：4
60
8
1
1：4
2.称取等质量的干燥褚实子五份，碾细过筛，用滤纸包好，编号①、②、③、④、⑤，按料液比1：4加入溶剂，在恒温水浴60℃下用索氏提取器分别提取4h、5h、6h、7h、8h，趁热抽滤，收集滤液，减压蒸馏，回收石油醚。105℃干燥适宜时间，取出分别称重，计算出油率，作出提取时间—出油率曲线，比较得出适宜提取时间。

（3）料液比的影响
提取温度（℃）
提取时间（h）
提取次数（次）
料液比（g／ml）
60
4
1
1：2
60
4
1
1：4
60
4
1
1：6
60
4
1
1：8
60
4
1
1：10

3.称取等质量的干燥褚实子五份，碾细过筛，用滤纸包好，编号①、②、③、④、⑤，在60℃℃恒温水浴下，置于索氏提取器中，分别以料液比1：2、1：4、1：6、1：8、1：10，连续提取4h，趁热抽滤，滤液置于旋转蒸发仪上减压蒸馏，回收石油醚，然后将粗品置于105℃烘箱中干燥，一段时间后取出，称量，计算出油率，作出料液比—出油率曲线，分析料液比影响，得出适宜料液比。

（4）提取次数的影响
提取温度（℃）
提取时间（h）
提取次数（次）
料液比（g／ml）
60
4
1
1：4
60
4
2
1：4
60
4
3
1：4

4.称取等量干燥褚实子五份，碾细过筛，用滤纸包好，编号①、②、③、④、⑤，在60℃恒温水浴下，置于索氏提取器中，分别提取1、2、3次，每次提取4h。分别将所得混合物趁热抽滤，收集滤液，减压回收石油醚。然后将粗品置于105℃下干燥一段时间，取出称重，计算出油率，作出提取次数—出油率曲线，综合分析，比较得出最佳提取次数。
综合以上各项试验的结果，用spss软件系统处理实验数据，得出最佳提取参数，以便进行其后的工作。在得出的提取参数条件下提取褚实子油，滤过,收集滤液，减压回收石油醚后，干燥，得褚实子油粗品。

二、 楮实子氨基酸成分的提取
本实验中采用溶剂提取法提取楮实子中的氨基酸，此方法中影响提取率的因素主要有：料液比、提取溶剂浓度、提取次数、提取时间和提取温度。
1． 测定波长的选择
（1） 配制0.1mg/mL的标准L—酪氨酸溶液。
（2） 样品的制备。称取褚实子10g，用70%乙醇，按料液比1：10，于70℃回流2h，提取1次，将溶剂蒸干后用蒸馏水定容于50mL容量瓶中备用。
分别取标准液和样品液各1mL，加入2%茚三酮溶液1mL和磷酸盐缓冲液2mL，摇匀后均于水浴中加热15分钟，取出，冷却，用蒸馏水定容至50mL。再取1mL样品溶液稀释至8mL，在紫外—可见分光光度计中进行波长扫描，每种液体平行做三次，取平均值，两相比较，确定最大吸收波长。
2.氨基酸提取实验
（1）提取溶剂浓度的影响
提取溶剂浓度（%）
料液比（mg/mL）
提取时间（h）
提取温度（℃）
提取次数（次）
50
1;10
2
70
1
60
1:10
2
70
1
70
1:10
2
70
1
80
1:10
2
70
1
95
1:10
2
70
1

a) 称取等量褚实子干燥品五份，分别用浓度为50%、60%、70%、80%、95%的乙醇按料液比1：10在70℃下回流提取2h，提取一次，减压蒸馏，蒸干溶剂，按上述步骤1中所示制备分析液，于最大吸收波长处测定吸光度，计算总氨基酸的提取率，比较得出最佳提取溶剂浓度。
(2)料液比的影响
提取溶剂浓度（%）
料液比（mg/mL）
提取时间（h）
提取温度（℃）
提取次数（次）
70
1:5
2
70
1
70
1:10
2
70
1
70
1:15
2
70
1
70
1:20
2
70
1
70
1:25
2
70
1

b) 称取等量干燥褚实子五份，编号，用70%乙醇分别以料液比1：5、1：10、1：15、1：20、1：25，在温度为70℃条件下，连续回流提取两小时，提取一次。过滤，收集滤液，将溶剂蒸干，按步骤1所示方法显色定容后，于最大吸收波长下测定吸光度，计算各总氨基酸的提取率，比较得出最佳料液比。

(3)提取时间的影响
提取溶剂浓度（%）
料液比（mg/mL）
提取时间（h）
提取温度（℃）
提取次数（次）
70
1：10
1
70
1
70
1：10
2
70
1
70
1：10
3
70
1
70
1：10
4
70
1
70
1：10
5
70
1

3.称取等量干燥褚实子五份，编号，用70%的乙醇，以料液比1：10，在70℃下进行连续回流提取，分别提取1、2、3、4、5h，均提取一次。过滤，收集滤液，减压蒸干溶剂，按所示方法显色定容后，在最大吸收波长下测定吸光度，并以此计算总氨基酸的提取率，相比较得出最佳提取时间。
（4）提取温度的影响
提取溶剂浓度（%）
料液比（mg/mL）
提取时间（h）
提取温度（℃）
提取次数（次）
70
1：10
2
50
1
70
1：10
2
60
1
70
1：10
2
70
1
70
1：10
2
80
1
70
1：10
2
90
1
4.称取等量干燥褚实子五份，编号，用70%的乙醇，以料液比1：10，分别在50、60、70、80、90℃下连续回流提取2h，提取一次，过滤，收集滤液，置于旋转蒸发仪上减压蒸馏。蒸干溶剂后，显色定容，在最大吸收波长下分别测定吸光度，并推算总氨基酸的提取率，比较得出最佳提取温度。
(5)提取次数的影响
提取溶剂浓度（%）
料液比（mg/mL）
提取时间（h）
提取温度（℃）
提取次数（次）
70
1：10
2
70
1
70
1：10
2
70
2
5. 称取等量干燥褚实子五份，编号，用70%的乙醇，以料液比1：10，在70℃下,提取2h，分别提取1次、2次。过滤，收集滤液，减压蒸馏，使溶剂蒸干，按步骤1中显色定容，然后置于紫外—可见分光光度计上，在最大吸收波长下测定其吸光度，并计算各次的总氨基酸提取率，比较分析得出最佳提取次数。
综合上述各实验的实验数据，用spss系统处理实验数据，得出最佳提取参数，并在此最佳提取参数的设定下对褚实子的氨基酸成分进行提取，收集提取液，将提取液以2mL/min流速通过强酸性阳离子交换树脂（1×7#733）。流出液对茚三酮试剂呈阴性反应，用水冲洗。然后用1mol/L氨水洗脱，收集洗脱液至无氨基酸反应为止。将洗脱液置于旋转蒸发仪上减压蒸馏至干，加适量水溶解，抽干，反复数次，除尽氨味，抽干，即得总氨基酸粗品。

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