20种卵菌杀菌剂对海南万宁胡椒瘟病菌的室内抑菌活性.pdf

研究论文doi:10.16801/j.issn.1008-7303.2023.006720 种卵菌杀菌剂对海南万宁胡椒瘟病菌的室内抑菌活性高圣风*,1,2,付华菲3,海龙3,苟亚峰1,2,孙世伟1,2,刘世超1,2,薛超1,2,田甜1,2,温思为1,2(1.中国热带农业科学院香料饮料研究所海南万宁571533；2.海南省热带香辛饮料作物遗传改良与品质调控重点实验室海南万宁571533；3.云南农业大学热带作物学院云南普洱665000)摘 要：胡椒 Piper nigrumL.是我国重要的热带经济作物，胡椒瘟病是危害其生产的第一大病害。为了明确胡椒主产区海南万宁瘟病病原菌种类，筛选具有防控潜力的杀菌剂，本研究采用形态特征和 ITS 序列特异性相结合的方法，对采自海南万宁的 7 株胡椒瘟病样品进行病菌的分离鉴定，并采用生长速率法检测我国当前登记的 20 种杀卵菌剂对其菌丝生长的室内毒力。结果发现，3 株从海南万宁地区分离的胡椒瘟病菌均为辣椒疫霉 Phytophthora capsici；20 种卵菌杀菌剂中抑制胡椒瘟病菌菌丝生长活性最高的是吡唑醚菌酯、氟啶胺、福美双、烯酰吗啉、氰霜唑、甲霜灵等药剂，EC501g/mL；其次是喹啉铜、百菌清、代森锰锌、代森锌、氢氧化铜等药剂，1g/mLEC5010g/mL；然后是氧化亚铜、王铜、嘧菌酯、香芹酚、霜脲氰、小檗碱等药剂，10g/mLEC50300g/mL。该结果可为热带辣椒疫霉机理研究和防控技术开发奠定基础。关键词:胡椒瘟病；辣椒疫霉；病原鉴定；杀卵菌剂；毒力；敏感性中图分类号：S482.2文献标志码：AInhibitory activity of 20 oomycetes fungicides against Phytophthora capsiciin Wanning City of Hainnan ProvinceGAOShengfeng*,1,2,FUHuafei3,HAILong3,GOUYafeng1,2,SUNShiwei1,2,LIUShichao1,2,XUEChao1,2,TIANTian1,2,WENSiwei1,2(1.Spice and Beverage Research Institute,CATAS,Wanning 571533,Hainan Province,China;2.Hainan Key Laboratory of GeneticImprovement and Quality Regulation for Tropical Spice and Beverage Crops,Wanning 571533,Hainan Province,China;3.College ofTropical Crops,Yunnan Agricultural University,Puer 665000,Yunnan Province,China)Abstract:Blackpepper(Piper nigrumL.)isanimportanttropicalcashcropinChinaandsuffershugeeconomiclosseseveryyearduetofootrotdisease.Inordertoclarifythepathogeninblackpeppermain收稿日期：2023-05-30；录用日期：2023-07-23；网络首发日期：2023-08-01.Received:May30,2023;Accepted:July23,2023;Published online:August1,2023.URL:https:/doi.org/10.16801/j.issn.1008-7303.2023.0067http:/ Journal of Pesticide ScienceE-mail:producingareaandscreenpotentialfungicidesfordiseasecontrol.SevenstrainswereisolatedfromWanningCityofHainanProvinceandidentifiedbymorphologicalcharacteristicsandITSsequencespecificity.Thelaboratorytoxicitiesof20fungicides,registeredforthecontrolofoomycetediseases,weredeterminedbythemycelialgrowthratemethod.Resultsshowedthatallthreestrainsisolatedfromblackpepperfootrotdiseasesamples,werePhytophthora capsici.Amongthe20testedoomycetefungicides,pyraclostrobin,fluazinam,thiram,dimethomorph,cyazofamid,andmetalaxylshowedthehighestactivityinsuppressingthemycelialgrowthofthreeP.capsiciisolates(EC501g/mL),followedbyoxine-copper,chlorothalonil,mancozeb,zineb,copperhydroxide(1g/mLEC5010g/mL),andthencuprousoxide,copperoxychloride,azoxystrobin,carvacrol,cymoxanil,berberine(10g/mLEC50300g/mL).ThisstudywouldhelpfurthertheunderstandingandmanagementoftropicalP.capsicidiseases.Keywords:blackpepperfootrotdisease;Phytophthora capsici;pathogenidentification;oomycetesfungicide;toxicity;sensitivity 1 材料与方法胡椒 Piper nigrumL.属胡椒科 Piperaceae 胡椒属 Piper 多年生常绿藤本植物，是世界上使用最广泛的香料之一，被誉为“香料之王”1。胡椒瘟病具有极强的毁灭性和传播性，于 20 世纪 70 年代曾在海南省爆发流行，导致种植面积缩减 20%1，是危害胡椒生产的首要病害。但是胡椒瘟病的病原菌物种分类尚存争议，这不利于其机理研究和防控工作的开展。胡椒瘟病是世界性病害。在国外，胡椒瘟病菌最初因为其玫瑰花瓣状菌落形态被认为是棕榈疫霉 Phytophthora palmivora2，后来发现，马来西亚胡椒瘟病菌游动孢子囊形态更接近于当地的辣椒疫霉 P.capsici3。在国内，张开明等4根据孢子囊特征认为中国华南地区胡椒瘟病的病原菌有2 种，辣椒疫霉和寄生疫霉 P.parasitica；桑利伟等5调研海南省胡椒病害时发现，胡椒瘟病菌孢子囊形态特征与辣椒疫霉一致，且内转录间隔区(internaltranscribedspacer，ITS)序列与辣椒疫霉菌株同源性最高。辣椒疫霉寄主范围非常广泛，已知寄主多达50 余种作物，包括：辣椒、番茄、茄子等茄科植物，黄瓜、南瓜、西瓜等葫芦科植物，白菜、菜花、胡萝卜等十字花科植物，菜豆、豇豆等豆科植物，以及胡椒、橡胶树、木瓜、可可等热带经济作物，等等6-8。目前关于辣椒疫霉致病研究主要集中在辣椒、南瓜等温带瓜菜类作物上，在热带香料作物胡椒上报道极少。而且有研究表明，分离自胡椒上的辣椒疫霉菌在遗传学系统发育树上与温带茄科、葫芦科等作物上的辣椒疫霉菌分属不同的分类亚群9。海南岛地处独特的热带岛屿环境，其病原菌普遍存在地域特异性。分析卵菌杀菌剂对胡椒瘟病菌的室内毒力，对认识和针对性地防控海南岛辣椒疫霉病害具有指导意义。本研究采用生物形态鉴定和分子鉴定相结合方法，对我国胡椒主产区海南省万宁市兴隆镇和南桥镇的胡椒瘟病样本进行分离鉴定，并分析我国当前在农作物疫病上登记使用的 20 种卵菌杀菌剂原药对胡椒瘟病菌的室内毒力，以期明确当前主产区胡椒瘟病病原菌种类及其药剂敏感性，为胡椒生产上杀菌剂针对性使用奠定基础。1.1 供试材料1.1.1病原菌培养基马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基10：马铃薯 200g 洗净切成边长约 1cm 的方块，放入 1000mL 去离子水中煮沸 15min，双层纱布过滤，滤液中加入葡萄糖和琼脂粉各 20g，溶解后用去离子水定容至 1000mL，分装至三角瓶中，50mL/瓶，封口后用 121 高压蒸汽灭菌20min，于 4 保存。10%V8 蔬菜汁(V8)培养基11：离心去渣的V8蔬菜汁 100mL、CaCO31g、琼脂粉 20g，用去离子水定容至 1000mL，121 灭菌 20min，于 4 保存。1.1.2卵菌杀菌剂原药在中国农药信息网(http:/)查询当前农作物卵菌病害上登记使用的农药种类并统计其有效成1086农药学学报Vol.25分，购置分析纯或更高纯度的原药 20 种，药剂名称及 CAS 号见表 1。按说明书进行保藏和使用。1.2 研究方法1.2.1胡椒瘟病菌的分离纯化分离纯化：胡椒瘟病感病叶片样本采集自海南省万宁市兴隆镇(18440N；1101140E)和南桥镇(184143N；1101026E)。在超净工作台中剪取病斑病健交界处放入 75%酒精中浸泡 30s，用无菌水清洗3 次，晾干后剪成边长约 0.5cm 的小块，放置在PDA 平板上，26 恒温培养 24h；从长出的菌落边缘挑取菌丝块转接至新 PDA 平板上并继续培养24h，重复转接纯化 3 次。回接验证：用无菌打孔器将纯化好的菌落打成直径约 0.5cm 的菌丝块。在离体胡椒叶片中央用无菌大头针刺 3 个小孔，并将菌丝块覆盖在针孔上，菌丝面与叶片接触，26 恒温培养 72h 后观察发病情况。菌种保存：将通过验证的病原菌转接至PDA 试管斜面，14 恒温保存。1.2.2病原菌形态学观察将活化好的胡椒瘟病菌接种至 V8 培养基上，用锡纸包裹避光，26黑暗培养 5d。于超净工作台中用无菌玻璃棒轻轻抹压，使气生菌丝贴附在培养基表面，在 26、5000lx 恒温光照条件下培养 36h，诱导孢子囊形成。向平板中加入 10mL 无菌水，先于 4 冷藏1h，再于 30 恒温放置 30min，促使游动孢子释放。吸取孢子悬浮液，制作临时装片，用光学显微镜观察游动孢子10-11。1.2.3病原菌系统发育分析提取病原菌 DNA并采用核糖体 DNA 的 ITS扩增通用引物(ITS1 和ITS4)进行 PCR 扩增。扩增产物委托上海生工生物工程有限公司测序。以 GenBank下载的已鉴定菌株序列为参考，通过 CLUSTALX2.1软件进行序列两两多重比较分析，通过 MEGA7软件采用Neighbor-joining计算方法构建系统发育树，并用Bootstrap(1000 次重复)检验聚类分支自举支持率12。1.2.4供试卵菌杀菌剂对胡椒瘟病菌的室内活性分析采用菌丝生长速率法13测定供试 20 种卵菌杀菌剂原药对胡椒瘟病菌的室内毒力。在无菌条件下，用二甲基亚砜将供试药剂溶解，稀释成系列质量浓度的药液供试。药液的每一步操作均须在涡旋 20s 后立即用移液枪吸取添加。将 50mL表 1 供试卵菌杀菌剂及系列稀释质量浓度Table 1 Series dilution concentrations of the fungicides tested in this study杀菌剂FungicideCASNo.系列稀释质量浓度Seriesdilutionconcentrations/(g/mL)烯酰吗啉dimethomorph110488-70-50.8,0.6,0.4,0.2,0.1霜脲氰cymoxanil57966-95-7200,100,40,8,1.6氰霜唑cyazofamid120116-88-3100,10,1,0.1,0.01氟啶胺fluazinam79622-59-6100,10,1,0.1,0.01百菌清chlorothalonil1897-45-6100,10,1,0.1,0.01甲霜灵metalaxyl57837-19-150,2.5,0.125,0.0625,0.003125嘧菌酯azoxystrobin131860-33-8200,60,18,5.4,1.62,0.486,0.1458吡唑醚菌酯pyraclostrobin175013-18-01,0.1,0.01,0.001福美双thiram137-26-810,1,0.1,0.01,0.001代森锰锌mancozeb223456230,9,2.7,0.81,0.243代森锌zineb12122-67-720,15,10,5,2.5,1.25,0.625氧化亚铜cuprousoxide1317-39-1330,9,2.7,0.81,0.243王铜copperoxychloride1332-65-640,30,20,10,5,2.5氢氧化铜copperhydroxide20427-59-240,30,20,10,5,2.5喹啉铜oxine-copper10380-28-610,5,2.5,1.25,0.625三乙膦酸铝fosetyl-aluminium39148-24-81000,500,400,300,200香芹酚carvacrol499-75-2100,80,60,40,20,10小檗碱berberine131-10-2200,100,40,8,1.6,0.32几丁聚糖chltosan9012-76-41000,500,250,125,62.5,31.25多抗霉素polyoxin19396-06-61000,100,10,1,0.1,0.01No.5高圣风等:20 种卵菌杀菌剂对海南万宁胡椒瘟病菌的室内杀菌活性1087PDA 培养基融化后冷却至 50 左右，加入药液混匀后等量倒入 3 个直径 9cm 的平板中，制成系列质量浓度的 PDA 含药平板，浓度梯度见表 1。用无菌打孔器将培养 5d 的菌落打成直径约 0.5cm的菌丝块，菌丝面朝下接种至 PDA 平板中央，于26 下培养 5d，用十字交叉法测量菌落直径。以不含药 PDA 平板为对照，每处理 3 个重复。按公式(1)计算各浓度杀菌剂对胡椒瘟病菌菌丝生长的抑制率。I/%=D0DtD00.5100(1)式中：I为菌丝生长抑制率，%；D0为对照菌落直径，cm；Dt为处理菌落直径，cm。1.3 数据处理通过 IBMSPSSstatistics22软件采用 Probit 回归模型分析抑菌率与药剂浓度(以 10 为底的对数)的线性关系，计算毒力回归方程并进行皮尔逊拟合优度卡方检验，同时计算出 EC50值及其 95%置信区间(confidenceinterval,CI)14。2 结果与分析 2.1 病原菌形态学观察将从田间样本分离的 7 个菌株回接至胡椒叶片，发现 3 株可引起胡椒瘟病典型症状，叶斑黑色，近圆形，直径约 1.53.5cm，边缘不光滑、有布料线头状毛边(图 1A、1B)。3 个菌株的菌落形态十分相似，均在 PDA 培养基上产生带有放射状纹理的圆形菌落，气生菌丝较短、白色(图 1C)。在光学显微镜下，3 株病原菌的形态也无明显差异，均能在 V8 培养基上诱导产生洋梨形孢子囊，并释放出圆形游动孢子；但是不同培养批次的孢子囊的长宽比存在差异(图 1D、1E)。其菌落和微观形态与前人报道的中国温带地区的辣椒疫霉 P.capsici 一致1,5；但是不同于印度尼西亚的胡椒瘟病菌2。2.2 病原菌系统发育分析对 3 株病原菌的 ITS 测序结果比对分析，发现 3 个菌株的 ITS 片段序列片完全一致，择一上传至 GenBank，登录号为 OQ608808。通过BLAST 比对分析，发现其 ITS 基因序列与辣椒疫霉的同源性为 100%。从 GenBank 下载 3 株辣椒疫霉和 9 种其他疫霉菌的 ITS 序列：P.capsica(MH842159.1、KY575676.1、MT678677.1)、P.citrophthora(KU934210.1)、P.meadii(JX155793.1)、P.megasperma(KJ405942.1)、P.sojae(AY590272.1)、P.palmivora(JX155791.1)、P.cactorum(KM085441.1)、P.parasitica(GU111674.1)、P.infestans(GU258151.1)、P.heveae(EU045747.1)。以烟草霜霉菌(PeronosporaABCED10 m50 mA：田间胡椒瘟病症状；B：人工接种 3d 后的发病症状；C：菌落；D：孢子囊；E：游动孢子。A:Diseasedleavesoffieldblackpepper;B:Leafsymptom3daysafterinoculation;C:Colony;D:Sporangium;E:Zoospore.图 1 胡椒瘟病症状及其病原菌形态Fig.1 Disease symptom and pathogen morphology of black pepper foot rot disease1088农药学学报Vol.25tabacina，DQ067899.1)为外群构建系统发育树，发现本研究菌株与分离自国内外的 3 株辣椒疫霉菌聚类在同一分支，自举支持率为 100%。结合形态学观察结果，判定本研究从胡椒上分离的菌株为辣椒疫霉(图 2)。2.3 供试卵菌杀菌剂对胡椒瘟病菌的室内杀菌活性分析通过菌丝生长速率法计算出 20 种供试卵菌杀菌剂对胡椒瘟病菌的毒力回归方程和 EC50值(表 2)，其中多抗霉素因抑菌很差未进行毒力分析。通过皮尔逊卡方检验零假设模型分析发现，显著性Sig 值均大于 0.150，说明毒力回归模型对数据的拟合度较好。按 EC50值升序排列，吡唑醚菌酯、氟啶胺、福美双、烯酰吗啉、氰霜唑、甲霜灵等6 种药剂的 EC50300g/mL，抑菌效果较差。3 结论与讨论本研究将海南万宁胡椒主产区的胡椒瘟病病原菌鉴定为辣椒疫霉 P.capsici，发现菌落及孢子囊等形态特征受菌株特异性和环境因素影响较大，仅能作为物种判定的参考15，ITS 序列等分子鉴定手段更容易区分形态相近的辣椒疫霉、棕榈疫霉及寄生疫霉1,5。同时评价了 20 种我国当前在农作物疫病上登记使用的卵菌杀菌剂原药对胡椒瘟病菌菌丝生长的抑制效果，发现吡唑醚菌酯、氟啶胺、福美双、烯酰吗啉、氰霜唑及甲霜灵的室内毒力最高，其中吡唑醚菌酯、甲霜灵和嘧菌酯等药剂的抑菌结果不同于其对温带辣椒疫霉上的报道13,16-18，推测与海南岛胡椒瘟病菌的地域特异性有关。本研究中，胡椒瘟病菌在 PDA 平板上的菌落纹理为放射状(图 1C)，与桑利伟等5报道的胡椒瘟病菌一致，但不同于 Muller2报道的印度尼西亚胡椒瘟病菌，有着与棕榈疫霉一致的玫瑰花瓣状纹理。Truong 等15将越南全境的 204 株胡椒瘟病菌鉴定为辣椒疫霉，但是发现其在 PDA 上的菌落纹理存在放射状、玫瑰花瓣状、棉绒状等众多形态，因此推测胡椒瘟病菌的菌落纹理可能存在地域性差异。此外，本研究还发现，同一株胡椒瘟病菌不同观察批次孢子囊的长宽比差别很大，孢子囊形状有时较为狭长、有时略显粗短(图 1D、1E)，推测显微视野中的孢子囊长宽比可能与其生长状态或观察角度有关。由此推测，张开明等4以孢子囊长宽比为主要参考依据，将胡椒瘟病菌鉴定分为辣椒疫霉和寄生疫霉两类，可能不够精准。通过 ITS 序列分析，本研究中的胡椒瘟病菌与国内外辣椒疫霉菌聚类到同一分支，自举支持OQ608808.1 This study0.02064%100%100%98%86%59%28%90%27%MH842159.1 Phytophthora capsiciKY575676.1 Phytophthora capsiciMT678677.1 Phytophthora capsiciKU934210.1 Phytophthora citrophthoraJX155793.1 Phytophthora meadiiKJ405942.1 Phytophthora megaspermaAY590272.1 Phytophthora sojaeJX155791.1 Phytophthora palmivoraKM085441.1 Phytophthora cactorumGU111674.1 Phytophthora parasiticaGU258151.1 Phytophthora infestansEU045747.1 Phytophthora heveaeDQ067899.1 Peronospora tabacina图 2 基于 rDNA-ITS 序列构建辣椒疫霉菌系统发育树Fig.2 Phylogenetic tree of Phytophthora capsica based on rDNA-ITS sequencesNo.5高圣风等:20 种卵菌杀菌剂对海南万宁胡椒瘟病菌的室内杀菌活性1089率达 100%，这与桑利伟等5和 Truong 等15的报道一致，说明形态学结合 ITS 序列，能够有效区分胡椒瘟病菌与棕榈疫霉、寄生疫霉等形态相近的病原菌。嘧菌酯在国际杀菌剂市场中占据巨大份额，何烈干等13发现，江西省 58 株番茄绵疫病菌 P.capsici 对嘧菌酯(96%纯度，先正达(苏州)作物保护有限公司)的 EC50值介于 0.18671.6239g/mL之间，抗药性风险中等；但在本研究中，嘧菌酯(98%纯度，上海源叶生物科技有限公司)对海南胡椒瘟病的 EC50值高达 28.23g/mL；而同属于甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂的吡唑醚菌酯的抑菌活性最高，EC50值仅为 0.02g/mL，甚至低于烯酰吗啉(0.12g/mL)。不同于孙平平等16、苗建强等17报道的烯酰吗啉对温带辣椒疫霉菌丝抑制活性比吡唑醚菌酯高 10 倍左右。而氟啶胺在本研究中的抑菌活性(EC50值为 0.07g/mL)高于氰霜唑(EC50值为 0.36g/mL)，与杨叔青等18报道的氟啶胺对温带辣椒疫霉的测定结果一致，并未表现出地域性差异。甲霜灵是当前防控辣椒疫霉病害的主要农药之一，其抗药性问题一直是研究的热点之一。王艺烨19在辽宁、甘肃、内蒙古等地发现了 8 株辣椒疫霉抗药性菌株；戚仁德等20发现，安徽省16 个市(县)的 125 株辣椒疫霉中敏感菌株、中间菌株和抗性菌株分别占总体的 63.2%、30.4%和 6.4%，其中最高抗性倍数达 90 倍；但是本研究中的 3 株辣椒疫霉均是敏感菌株，推测与万宁地区甲霜灵农药使用较少有关。烯酰吗啉在辣椒疫霉病害防控上广受关注，在本研究中，其对胡椒瘟病菌的 EC50值为 0.12g/mL，该数值与国内外各地辣椒疫霉上的检测结果一致，比如：张世才等21检测了重庆地区的 102 株辣椒疫霉菌，崔晓岚等22检测了 125 株分别采自河北、内蒙古、陕西、安徽和北京等地区的辣椒疫霉病菌，马辉刚等23调研了江西各地区的辣椒疫霉菌对烯酰吗啉的敏感性，均未发现抗药性亚群体；Jackson 等24报道，美国乔治亚州的甜椒和表 2 供试 20 种卵菌杀菌剂对胡椒瘟病菌的杀菌活性Table 2 Inhibitory activity of 20 oomycete fungicides against P.capsici causing black pepper foot rot disease杀菌剂Fungicide毒力回归方程1)Toxicityregressionequation1)X2(Sig)2)EC50(95%CI)/(g/mL)吡唑醚菌酯pyraclostrobiny=0.42x+0.752.46(0.29)0.02(0.010.03)氟啶胺fluazinamy=0.35x+0.412.81(0.59)0.07(0.020.16)福美双thiramy=0.25x+0.256.12(0.29)0.11(0.040.26)烯酰吗啉dimethomorphy=2.55x+2.353.48(0.43)0.12(0.100.14)氰霜唑cyazofamidy=0.36x+0.164.43(0.35)0.36(0.160.75)甲霜灵metalaxyly=0.54x+0.084.43(0.22)0.71(0.421.24)喹啉铜oxine-coppery=1.63x0.600.77(0.86)2.33(1.962.76)百菌清chlorothalonily=0.39x0.150.77(0.94)2.51(1.294.81)代森锰锌mancozeby=0.93x0.473.52(0.32)3.24(2.404.41)代森锌zineby=0.80 x0.773.17(0.67)9.17(6.8613.23)氢氧化铜copperhydroxidey=2.47x2.474.33(0.36)9.95(8.8411.14)氧化亚铜cuprousoxidey=2.49x2.515.20(0.21)10.24(9.1111.46)王铜copperoxychloridey=1.80 x1.874.15(0.39)10.90(9.4012.57)香芹酚carvacroly=2.74x3.955.43(0.25)27.34(24.4030.32)嘧菌酯azoxystrobiny=0.69x1.001.01(0.91)28.23(15.4059.86)霜脲氰cymoxanily=0.92x1.463.68(0.30)38.83(28.7553.22)小檗碱berberiney=1.11x1.843.17(0.53)45.68(35.3859.94)几丁聚糖chltosany=1.34x3.341.29(0.87)312.29(232.15448.54)三乙膦酸铝fosetyl-aluminiumy=3.63x10.241.57(0.67)659.89(601.39738.18)注：1)，毒力回归方程计算采用 PROBIT模型：PROBIT(p)=BX(协变量 X 使用底数为 10 的对数转换。)+截距；2)，X2(Sig)值来自于 Probit 皮尔逊拟合优度卡方检验，其中 Sig0.150 表示在置信限度的计算中未使用异质因子。Notes:1),Probitmodelwasusedtocalculatetoxicityregressionequations:Probit(p)=BX(CovariatesXaretransformedusingthebase10.000logarithm)+Intercept;2),PROBITPearsontestswereusedtoassessgoodness-of-fittotheprobitregressionmodels,andSig0.150meansnoheterogeneityfactorsareusedinthecalculationofconfidencelimits.1090农药学学报Vol.25葫芦上辣椒疫霉对烯酰吗啉均具有良好的敏感性，表明烯酰吗啉在辣椒疫霉防控具有地域普适的应用潜力。一百多年来，铜制剂一直是防控植物疫病的重要药剂，在本研究中喹啉铜、氢氧化铜、氧化亚铜、王铜等铜制剂的 EC50值在 2.3310.90g/mL之间，对胡椒瘟病菌具有较好的抑制活性。虽然，Torre 等25报道，大量使用铜制剂可能影响植物新陈代谢和营养吸收，但是通过与其他药剂复配或轮换使用，可以提高防治效果和大幅降低铜制剂使用量26，其应用前景依然十分广阔。植物源农药香芹酚和小檗碱被广泛应用于人类及动物医学上。在农业上，魏敏等27发现，使用 5%香芹酚水剂在 2250mL/hm2剂量下喷雾，其对马铃薯晚疫病的防效可达 83.13%；李宝燕等28发现，0.5%小檗碱水剂对葡萄霜霉病菌的 EC50值为 11.85g/mL，以有效成分 25g/mL 的质量浓度喷雾施用，其田间防效达 80%以上。在本研究中，两种药剂的 EC50值分别为 27.34 和 45.68g/mL，综合其绿色环保特点，依然具有较好的应用潜力。几丁聚糖通常作为诱抗剂被大众认知，但其直接抑菌效果也常见报道。贾瑞秀等29发现，壳聚糖能够诱导镰孢菌细胞壁中几丁质的酶活，增加细胞膜的通透性，达到抑制菌丝生长效果。本研究结果也表明，几丁聚糖具有一定的抑制辣椒疫霉菌丝生长作用(EC50值为 312.29g/mL)，其作用机制尚待进一步研究。但是，三乙膦酸铝当前我国唯一登记防控胡椒瘟病的药剂，其 EC50值高达 659.89g/mL。尹敬芳等30也发现，三乙膦酸铝对辣椒疫霉菌菌丝生长、孢子囊形成、休止孢萌发和孢子囊直接萌发等 4 个发育阶段的抑制效果均较弱。同样，多抗霉素是已被多次登记为防控黄瓜霜霉病Pseudopeonospora cubensis、马铃薯和番茄晚疫病P.infestans 的药剂，但是在本研究中未检测到其对胡椒瘟病菌有抑制效果。需要注意的是，本研究仅分析了供试药剂对胡椒瘟病菌菌丝生长的抑制活性，评价杀菌剂效果时还需综合考虑其他众多因素，比如对病原菌产孢、孢子萌发等方面的效果，以及药剂的内吸性、传导性等理化性质，等等。此外，还需考虑农药使用限制，比如，福美双、代森锰锌、百菌清等杀菌剂已经逐步在欧盟等国家和地区被限制使用。参考文献(References):刘爱勤.热带特色香料饮料作物主要病虫害防治图谱M.北京:中国农业出版社,2013:2-11.LIU A Q.Atlas of main pests and diseases control of tropicalspecialty spices in beverage cropsM.Beijing:China AgriculturePress,2013:2-11.1MULLER H R A,Het Phytophthora-voetrot van pepper(Pipernigrum L.)in Nederlandsch IndieM.Batavia:Plantenziekten,1936(88):1-73.2KUEHTK.MajordiseasesofblackpepperandtheirmanagementJ.Planter,1990,66(767):59-69.3张开明,郑服丛,黎乙东,等.中国胡椒疫霉种及交配型的研究J.热带作物学报,1991,12(2):69-76.ZHANGKM,ZHENGFC,LIYD,etal.PepperPhytophthoraandtheirmatingpatternsinChinaJ.ChinJTropCrops,1991,12(2):69-76.4桑利伟,刘爱勤,谭乐和,等.海南省胡椒瘟病病原鉴定及发生规律J.植物保护,2011,37(6):168-171.SANGLW,LIUAQ,TANLH,etal.PathogenidentificationandoccurrenceofthepepperPhytophthorafootrotinHainanProvinceJ.PlantProt,2011,37(6):168-171.5WANG W J,JIAO F C.Effectors of Phytophthora pathogens arepowerfulweaponsformanipulatinghostimmunityJ.Planta,2019,250(2):413-425.6MUTHUSWAMYA,BALAKRISHNANVK,PALANIYANDIU,et al.Pathogenic variability in Phytophthora capsici from blackpepper(Piper nigrumL.)asrevealedbytranscriptomeanalysisJ.IndianPhytopathol,2018,71(4):495-503.7KAMOUNS,FURZERO,JONESJDG,etal.TheTop10oomycetepathogensinmolecularplantpathologyJ.MolPlantPathol,2015,16(4):413-434.8BOWERSJH,MARTINFN,TOOLEYPW,etal.Geneticandmorphological diversity of temperate and tropical isolates ofPhytophthora capsiciJ.Phytopathology,2007,97(4):492-503.9高圣风,杨开虎,陆大倩,等.胡椒瘟病菌(Phytophthora capsici)孢子囊诱导及发育过程观察J.热带作物学报,2020,41(9):1870-1875.GAOSF,YANGKH,LUDQ,etal.SporangiuminductionanddevelopmentprocessmicroscopyofblackpepperPhytophthorafootrot pathogen,Phytophthora capsiciJ.Chin J Trop Crops,2020,41(9):1870-1875.10高圣风,杨开虎,刘爱勤,等.环境因素对胡椒瘟病菌游动孢子产量的影响J.热带农业科学,2020,40(9):77-82.GAOSF,YANGKH,LIUAQ,etal.EffectsofenvironmentfactorsonthezoosporeproductionofPhytophthora capsici,thepathogenofblack pepper Phytophthora foot rot diseaseJ.Chin J Trop Agric,2020,40(9):77-82.11高圣风,苟亚峰,孟倩倩,等.菠萝蜜果柄枯萎病病原菌鉴定J/OL.植物病理学报:1-82023-05-30.DOI:10.13926/ki.apps.000853.GAOSF,GOUYF,MENGQQ,etal.Identificationofpathogencausing fruit stalk wilt on Artocarpus heteophyllusJ/OL.ActaPhytopathologicaSinica:1-82023-05-30.DOI:10.13926/ki.apps.000853.12何烈干,邹芬,李湘民,等.江西省番茄绵疫病菌对嘧菌酯的敏感性检测及抗性风险分析J.农药学学报,2021,23(1):117-123.HELG,ZOUF,LIXM,etal.Sensitivitydetectionandresistance13No.5高圣风等:20 种卵菌杀菌剂对海南万宁胡椒瘟病菌的室内杀菌活性1091riskanalysisofPhytophthora capsiciontomatotoazoxystrobininJiangxiProvinceJ.ChinJPesticSci,2021,23(1):117-123.CHENB,ZHENGY.VirulencedeterminationofthebiocontrolagentIsaria fumosorosea based on probit regression-methodJ.AnhuiAgricSciBull,2019,25(20):78-80.14TRUONGNV,LIEWECY,BURGESSLW.CharacterisationofPhytophthora capsici isolates from black peppe