Circ_0058063通过miR-338-3p靶向SOX4调控膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究.pdf

现代肿瘤医学2 0 2 3年11月第31卷第2 1期MODERN ONCOLOGY,Nov.2023,VOL.31,No.213939.Circ_0058063通过miR-338-3p靶向SOX4调控膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究王乾,沈伟,孙宾,李殷南，沈杰,夏志忠,张运伟上海健康医学院附属崇明医院泌尿外科，上海2 0 2 150【摘要】目的：探讨Circ_0058063通过miR-338-3p靶向SOX4调控膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭。方法:qRT-PCR、W e s t e r n Bl o t 分别检测正常人尿路上皮细胞系SV-HUC-1细胞、T24膀胱癌细胞Circ_0058063、mi R-338-3p、S0 X4表达;将 si-NC、s i -Ci r c _0 0 58 0 6 3、s i -Ci r c _0 0 58 0 6 3+i n h i b i t o r NC、s i-Ci r c _0058063+miR-338-3pinhibitor分别转染至T24细胞并命名为si-NC组、si-Circ_0058063组、si-Circ_0058063+inhibitorNC组、si-Circ_0058063+miR-338-3pinhibitor组，未做任何处理的T24细胞记为NC组。双荧光素酶报告基因实验检测Circ_0058063、mi R-338-3p、SO X4关系；qRT-PCR检测T24细胞中Circ_0058063、m i R-338-3p 表达;CCK-8法检测T24细胞增殖情况；流式细胞术检测T24细胞凋亡率；Transwell检测T24细胞侵袭、迁移数量；WesternBlot检测T24细胞SOX4、E-c a d h e r in、V im e n t in、N-c a d-herin的蛋白水平。结果：与SV-HUC-1细胞相比,T24细胞中Circ_0058063、SO X4水平显著上调（P0.05）,m iR-338-3p 表达显著下调（P0.05）。与NC组、si-NC组相比,si-Circ_0058063组T24细胞OD45o值、迁移、侵袭细胞数量、Circ_0058063表达量、SOX4、N-c a d h e r i n、Vi me n t i n 蛋白水平显著下降（P0.05）,T 2 4细胞调亡率、miR-338-3p表达、E-cadherin蛋白水平显著升高（P0.05）;而miR-338-3p表达下调逆转了沉默Circ_0058063抑制T24细胞增殖、迁移和侵袭的效果;Circ_0058063靶向调节miR-338-3p/SOX4轴。结论：沉默Circ_0058063可能通过上调miR-338-3p来抑制SOX4表达，进而对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭产生影响。【关键词】Circ_0058063;miR-338-3p；膀胱癌；增殖；调亡；迁移；侵袭【中图分类号】R737.14【文章编号】16 7 2-4992-（2 0 2 3)2 1-3939-0 7Research on the mechanism of Circ_0058063 in regulating the proliferation,migrationand invasion of bladder cancer cells by targeting SOX4 through miR-338-3pWANG Qian,SHEN Wei,SUN Bin,LI Yinnan,SHEN Jie,XIA Zhizhong,ZHANG YunweiDepartment of Urology,Chongming Hospital Afiliated to Shanghai University of Medicine&Health Sciences,Shanghai 202150,China.Abstract Objective:To investigate the effects of Circ_0058063 on the proliferation,migration and invasion ofbladder cancer cells by targeting SOX4 through miR-338-3p.Methods:qRT-PCR and Western Blot were appliedto detect the expression of normal human urothelium cell line SV-HUC-1 cells,T24 bladder cancer cells Circ_0058063,miR-338-3p and SOX4.si-NC,si-Circ_0058063,si-Circ_0058063+inhibitor NC,si-Circ_0058063+miR-338-3p inhibitor were transfected into T24 cells,and they were named as si-NC group,si-Circ_0058063 group,si-Circ_0058063+inhibitor NC group,and si-Circ_0058063+miR-338-3p inhibitor group re-spectively.T24 cells without any treatment were recorded as NC group.The dual luciferase reporter gene experimentwas applied to detect the relationship between Circ_0058063,miR-338-3p and S0X4.qRT-PCR was applied todetect the expression of Circ_0058063 and miR-338-3p in T24 cells;CCK-8 method was applied to detect theproliferation of T24 cells.Flow cytometry was applied to detect the apoptosis rate of T24 cells.Transwell was appliedto detect the number of invasion and migration of T24 cells.Western Blot was applied to detect the protein levels ofSOX4,E-cadherin,Vimentin,and N-cadherin in T24 cells.Results:Compared with SV-HUC-1 cells,the levelsof Circ_0058063 and SOX4 in T24 cells were obviously up-regulated(P0.05),while the expression of miR-338-3p was obviously down-regulated(P0.05).Compared with the NC group and si-NC group,the OD45o value,【收稿日期】202305-24【修回日期】2023 06-30【基金项目】上海市崇明区“可持续发展科技创新行动计划 项目（编号：CKY202114）【作者简介】王乾（197 3一），男，安徽准北人，硕士研究生，主任医师，主要从事泌尿相关研究工作。E-mail：w a q i a n 0 911 12 6.c o m【文献标识码】AD0I:10.3969/j.issn.16724992.2023.21.007 3940:migration,invasion cell count,Circ_0058063 expression level,S0X4,N-cadherin,and Vimentin protein levels of T24cells in the si-Circ_0058063 group were obviously reduced(P0.05),the apoptosis rate of T24 cells,miR-338-3p expression,and E-cadherin protein level were obviously increased(P0.05).The down-regulation of miR-338-3pexpression reversed the inhibitory effect of silencing Circ_0058063 on T24 cell proliferation,migration and invasion.Circ_0058063 targeted the miR-338-3p/S0X4 axis.Conclusion:To silent Circ_0058063 may inhibit the expression ofSOX4 by up-regulating miR-338-3p,thereby affecting the proliferation,migration and invasion of bladder cancer cells.Key words Circ_0058063,miR-338-3p,bladder cancer,proliferation,apoptosis,migration,invasionModern Oncology 2023,31(21):3939-3945膀胱癌一直是世界范围内常见的恶性肿瘤。国际癌症37,湿度为5%CO02。每2 天更换一次培养基，当细胞达到研究中心显示，2 0 2 0 年全球膀胱癌新发病例数为57 32 7 880%汇合时进行传代培养。例,死亡人数为2 12 536 例。膀胱癌的发病率在男性恶性肿待T24细胞生长至8 0%左右，根据转染试剂盒将si-瘤中排名第六，在死亡率中排名第九 。且手术对伴有远处NC、s i-C ir c _0 0 58 0 6 3、s i-C ir c _0 0 58 0 6 3+in h ib ito r NC、s i-转移的晚期膀胱癌几乎没有影响。因此开发针对转移性膀Circ_0058063+miR-338-3pinhibitor分别转染至T24细胱癌的新疗法势在必行2 。环状RNA（c i r c RNA)是一类共胞,并命名为si-NC 组、si-Circ_0058063组、si-Circ_价闭环非编码RNA。c ir c RNA 参与许多病理和生理过程,包0058063+inhibitor NC 组、si-Circ_0058063+miR-338-3p括肿瘤的发生和发展3。一些 circRNA已被证明会影响膀inhibitor组,另取未做任何处理的T24细胞记为NC 组。转胱癌的进展，例如沉默CircACVR2A抑制膀胱癌细胞增殖和染48 h后，用于后续实验。转移4。而 SUN等人5 近期发现 Circ_0058063 可以促进膀1.3双荧光素酶报告基因实验检测Circ_0058063、m iR-胱癌的发展。我们通过TargetScan网站以及双荧光素酶报告338-3p、SO X4之间的靶向关系实验发现Circ_0058063与miR-338-3p、m i R-338-3p 与构建Circ_0058063野生型质粒（0 0 58 0 6 3WT）和突变SOX4存在结合位点。且研究报道称,下调miR-338-3p(6)型质粒（0 0 58 0 6 3-MUT），将0 0 58 0 6 3-WT和0 0 58 0 6 3-或者上调SOX47可以影响膀胱癌细胞增殖和转移,CircRNAMUT分别与mimicNC或miR-338-3pmimic共转染于T24-miRNA-mRNA信号轴调节膀胱癌发展进程的研究已有细胞分别记为miR-NC+WT-0058063组、miR-338-3p报道，本研究旨在探究Circ_0058063是否可以通过调控miRmimic+WT-0058063 组、miR-NC+MUT-0058063-338-3p/SOX4轴对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭产生影组、miR-338-3p mimic+MUT-0058063组;构建S0X4野响。生型质粒（SOX4W T）和突变型质粒（SOX4M U T），将1材料与方法SOX4-WT和SOX4-MUT分别与mimicNC或miR-338-1.1主要材料3pmimic共转染于T24细胞，分别记为miR-NC+WT-正常人尿路上皮细胞系SV-HUC1细胞、T24膀胱癌SOX4组、miR-338-3pmimic+WT-SOX4组、miR-NC+细胞购自上海酶研生物科技有限公司；AnnexinV-FITC/PIMUT-SOX4组、miR-338-3pmimic+MUT-SOX4组,48 h双染细胞调亡检测试剂盒购自武汉普诺赛生命科技有限公后评估T24细胞的荧光素酶活性变化。司;CCK-8细胞增殖试剂盒购自安徽佰欧晶医学科技有限1.4qRT-PCR检测Circ_0058063、m i R-338-3p 表达公司；双荧光素酶报告基因检测试剂盒购自江苏凯基生物技使用TRIzol试剂从SV-HUC-1细胞和T24细胞中分术股份有限公司;si-NC、s i-C ir c _0 0 58 0 6 3、in h ib ito r NC、离出总RNA，然后使用反转录试剂盒进行逆转录。使用miR-338-3pinhibitor均购自上海生工;SOX4、E-c a d h e r in、SYBR Green PCR 试剂盒进行 qRT-PCR。G A PD H、U 6 作为N-cadherin、Vi me n t i n 抗体购自Abcamo内部对照。反应条件为：9 510 min，然后进行40 个循环1.2细胞培养及分组(9515s,5515s）和7 2 30 s。对每个样品的熔解曲SV-HUC-1 细胞在 F-12 培养基培育,T24 细胞在线进行分析。使用2-AACc方法计算Circ_0058063、mi R-338-RPMI-1640培养基培育,所有培养基加双抗（10 0 U/mL青3p的相对表达量，引物见表1。霉素和10 0 g/mL链霉素）和10%胎牛血清,培养箱温度为表 1qRT-PCR的引物序列Tab.1 Primer sequences of qRT PCRGeneFmiR-338-3p5-AACCGGTCCAGCATCAGTGATT-3Circ_00580635-TATGATCCTGTTTGGTGGTCGGCA-3U65-GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT-3*GAPDH5-GGAGAGTGTTTCCTCGTCCC-3王乾,等Circ_0058063通过miR-338-3p靶向SOX4调控膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究R5*-CAGTGCAGGGTCCGAGGT-3*5-TGGACCAAGATGGGTAGCTTGTGA-35-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-35-TTACTCCTTGGAGGCCATGTAG-31.5Western Blot 检测 SOX4、E-c a d h e r in,N-c a d h e r in、Vimentin表达用含有蛋白酶抑制剂的裂解缓冲液裂解 SV-HUC-1细胞和T24细胞。通过十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE)分离蛋白质，并将其转移到PVDF膜上。用5%脱脂奶粉封闭后,与一抗SOX4（1:2 0 0 0）、E-c a d h e r i n现代肿瘤医学2 0 2 3年11月第31卷第2 1期(1:2 000)、N-c a d h e r in(1:2 0 0 0)、V im e n tin(1:2 0 0 0)和GAPDH抗体(1:2 0 0 0）,在4下孵育一夜洗涤后,将膜暴露于HRP标记的二抗，并用ECL显示蛋白质信号。使用Im-ageJ软件对蛋白质水平进行定量。1.6CCK-8法检测 T24 细胞增殖情况将转染的细胞以510 3个细胞/孔的密度接种在96 孔板上,随后每孔加入10 LCCK-8试剂在37 下继续孵育2 h,用酶标仪检测450 nm处的吸光度（OD4so)值。1.7流式细胞术检测 T24细胞凋亡转染48 h后收获细胞，然后消化、洗涤、重悬，然后用5L Annexin V-FITC 和10 L PI染色,并使用FACScan 流式细胞仪检测细胞凋亡率。1.8Transwell 试验测定 T24细胞迁移和侵袭使用带有基质胶的上室（8 m孔径）进行细胞侵袭测定,使用不含基质胶的上室用于细胞迁移测定。将约510 4个T24细胞悬浮在2 0 0 L无血清培养基中并添加到上室。将6 0 0 L含有10%FBS的RPMI-1640培养基作为化学引诱剂放人下室。孵育48 h后,用棉签轻轻除去上室中的细胞，并用甲醇固定下表面的细胞并用0.1%结晶紫染色，以进行拍照和计数。在显微镜下，随机选择五个区域计算细胞迁移、侵袭数量。1.9统计学分析所有数据均在2 5.0 版SPSS软件处理，数据经正态分布、方差齐性检验处理后以平均值标准差（xs）表示，t检验用于两组间的比较，多组间比较用单因素方差分析（one-way ANOVA）,进一步两组间的比较用SNK-q检验,P0.05表示差异显著。2结果2.1Circ_0058063靶向调控miR-338-3p/SOX4轴通过TargetScan网站发现Circ_0058063与miR-338-3p,miR-338-3p与SOX4存在结合位点。与miR-NC+WT-0058063组比较,miR-338-3p mimic+WT-0058063组 T24 细胞的荧光素酶活性显著降低（P0.05）;与miR-NC+WT-SOX4 组比较,miR-338-3p mimic+WT-SOX4组T24细胞的荧光素酶活性显著下降（P0.05）。见图1和表2-3。miR-338-3p3WT-00580635MUT-00580635miR-338-3p3CUUGU-UUUAGUWT-SOX45AAACGCAACUCAAAUCU-GUGCUGGA3MUT-SOX45AUCAACGCAACAAAUCU-CUGUGGGA3图1TargetScan 网站预测 Circ_0058063与miR-338-3pmiR-338-3p与SOX4的结合位点Fig.1 TargetScan website predicts the binding sites of Circle_0058063with miR-338-3p and miR-338-3p with SOX4MODERN ONCOLOGY,Nov.2023,VOL.31,No.21表2 双荧光素酶报告基因实验验证Circ_0058063与miR-338-3p的靶向关系（xs,n=6)Tab.2Experimental verification of dual luciferase reporter gene targetingrelationship between Circ_0058063 and miR-338-3p(x s,n=6)GroupmiR-NC+WT-0058063miR-338-3p mimic+WT-0058063miR-NC+MUT-0058063miR-338-3p mimic+MUT-0058063注:与 miR-NC+WT-0058063 组相比,aP0.05。Note:aP0.05,compared with miR-NC+WT-0058063 group.表3双荧光素酶报告基因实验验证miR-338-3p与SOX4的靶向关系(xs,n=6)Tab.3Targeting relationship between miR-338-3p and SOX4 verifiedby dual luciferase reporter gene experiment(x s,n=6)GroupmiR-NC+WT-SOX4miR-338-3p mimic+WT-SOX4miR-NC+MUT-SOX4miR-338-3p mimic+MUT-SOX4注:与 miR-NC+WT-SOX4 组相比,aP0.05。Note:aP0.05,compared with miR-NC+WT-SOX4 group.2.2Circ_0058063miR-338-3p、SO X4在细胞中的表达与 SV-HUC-1 细胞相比,T24细胞中 Circ_0058063、SOX4水平均显著上调（P0.05）,m i R-338-3p 显著下调(P0.05）,见图2 和表4。SOX4GAPDH图2 WestermnBlot检测细胞中SOX4蛋白水平Fig.2Western Blot detection of SOX4 protein levels in cellsGUUGUUUUAGUGACUACGACCU5表4Circ_0058063、mi R-338-3p、SO X4蛋白在SV-HUC-1细胞和T24细胞中的表达（xs,n=6)CAAAAGCUCUCAGGGAUGCUGGU3Tab.4 Expression of Circl_ 0058063,miR-338-3p,and S0X4 pro-CAAAACCUCUCACCGGUGAUGCU3teins in SV-HUC-1 and T24 cells(x s,n=6)GroupGACUACGACCU5SV-HUC-1T24tP2.3Circ_0058063、m i R-338-3p、SO X4蛋白在T24细胞中的表达与 NC 组、si-NC 组相比,si-Circ_0058063 组 Circ_:3941:Relative activityof luciferase1.02 0.160.31 0.03 41.05 0.151.04 0.13Relative activityof luciferase1.03 0.150.42 0.05a1.08 0.131.05 0.12SV-HUC-1T24Circ_0058063miR-338-3p1.00 0.001.00 0.001.57 0.170.33 0.058.21332.8230.0000.000SOX4/GAPDH0.45 0.051.23 0.15 12.0840.000si-NC group.cP0.05,compared with si-Circ_0058063 group.dP:39420058063、S0 X4水平显著下调（P0.05),miR-338-3p表达量显著上调(P0.05);与 si-Circ_0058063组、si-Circ_0058063+inhibitor NC 组相比较,Circ_0058063+miR-338-3p inhibitor组SOX4水平显著上升（P0.05）,m i R-338-3p表达量显著下降（P0.05），见图3和表5。SOX4GAPDH图3WesternBlot检测T24细胞SOX4蛋白表达A;NC 组;B:si-NC 组;C:si-Circ_0058063 组;D:si-Circ_0058063+inhibitor NC 组;E:si-Circ_0058063+miR-338-3p in-hibitor 组。Fig.3Western Blot detection of SOX4 protein expression in T24 cellsA:NC group.B:si-NC group.C:si-Circ_0058063 group.D:si-Circ_0058063+inhibitor NC group.E si-Circ_0058063+miR-338-3pinhibitor group.表5Circ_0058063、m i R-338-3p、S0 X4蛋白在T24细胞中的表达(xs,n=6)Tab.5Expression of Circle_0058063,miR-338-3p,and S0X4 pro-teins in T24 cells(xs,n=6)GroupCirc_0058063NC1.00 0.00si-NC1.04 0.12siCirc_00580630.32 0.04absi-Circ_0058063+inhibitor NC0.29 0.03si-Circ_0058063+0.26 0.03miR-338-3p inhibitor注:与 NC组比较,aP0.05;与 si-NC组比较,bP0.05;与 si-Circ_0058063 组比较,cP0.05;与 si-Circ_0058063+inhibitor NC组比较,dP0.05。Note:aP0.05,compared with NC group.bP0.05,compared with si-NC group.cP0.05,compared with si-Circ_0058063 group.dP0.05,compared with si-Circ_0058063+inhibitor NC group.2.4沉默Circ_0058063或下调miR-338-3p对T24细胞增殖的影响与NC组、si-NC组相比,si-Circ_0058063组T24细胞OD45o值显著减小（P0.05）;与si-Circ_0058063组、si-Circ_0058063+inhibitor NC组相比较,si-Circ_0058063+miR-338-3p inhibitor组OD45o值显著增加（P0.05),见表6。2.5沉默Circ_0058063或下调miR-338-3p对T24细胞凋亡的影响与NC组、si-NC组相比,si-Circ_0058063组 T24细胞凋亡率显著上升（P0.05）;与 si-Circ_0058063组、si-Circ_0058063+inhibitor NC 组相比较,si-Circ_0058063+miR338-3p inhibitor组T24细胞调亡率显著下降（P0.05）,见图4和表7。王乾,等Circ_0058063通过miR-338-3p靶向S0X4调控膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究表6 沉默Circ_0058063或下调miR-338-3p对T24细胞OD450值的影响(xs,n=6)Tab.6 The effect of silent Circ_0058063 or downregulation of miR-338-3p on the OD450 value of T24 cells(x s,n=6)GroupNCsi-NCsi-Circ_0058063si-Circ_0058063+inhibitor NCsi-Circ_0058063+miR-338-3p inhibitor注:与 NC 组比较,aP0.05;与 si-NC 组比较,bP0.05;与 si-Circ_0058063 组比较,cP0.05;与 si-Circ_0058063+inhibitor NC组比较,dP0.05。Note:aP 0.05,compared with NC group.bP 0.05,compared withABOD45o value0.96 0.110.93 0.100.31 0.04 ab0.34 0.030.86 0.11 dCDmiR-338-3pSOX4/GAPDH1.00 0.001.33 0.121.01 0.071.29 0.141.85 0.19ab0.42 0.05 ab1.86 0.220.43 0.031.09 0.11 d1.11 0.09dE0.05,compared with si-Cire_0058063+inhibitor NC group.表7 沉默Circ_0058063或下调miR-338-3p对T24细胞凋亡率的影响(xs,n=6)Tab.7The effect of silent Circ_0058063 or downregulation of miR-338-3p on the apoptosis rate of T24 cells(x s,n=6)GroupNCsi-NCsi-Circ_0058063si-Circ_0058063+inhibitor NCsi-Circ_0058063+miR-338-3p inhibitor注:与 NC 组比较,aP0.05;与 si-NC 组比较,bP0.05;与 si-Circ_0058063组比较,cP0.05;与 si-Circ_0058063+inhibitor NC组比较,dP0.05。Note:aP0.05,compared with NC group.bP0.05,compared withsi-NC group.cP0.05,compared with si-Circ_0058063 group,dP0.05,compared with si-Circ_0058063+inhibitor NC group.2.6沉默Circ_0058063或下调miR-338-3p对T24细胞侵袭、迁移以及EMT相关蛋白的影响si-Circ_0058063组较 NC 组、si-NC 组 T24 细胞迁移、侵袭细胞数量以及N-cadherin、V i m e n t i n 蛋白水平显著下降（P 0.0 5）,E-c a d h e r in 蛋白水平显著升高（P0.05）;s i-Circ_0058063+miR-338-3p inhibitor组较 si-Circ_0058063组、si-Circ_0058063+inhibitor NC 组 T24细胞迁移、侵袭细胞数量以及N-cadherin、V i m e n t i n 蛋白水平显著增加(P0.05）,E-c a d h e r i n 蛋白水平显著减少(P0.05），见图5-7 和表8-9。3讨论膀胱癌是全球第九大常见癌症,是最常见的尿路恶性肿瘤，发病率和死亡率较高 1。膀胱癌根据其独特的行为可分为低级别非肌肉浸润性膀胱癌（NMIBC）和高级别肌肉浸润性膀胱癌（MIBC）。虽然NMIBC通常可通过经尿道切除术和膀胱内治疗进行治疗,但极大可能复发并进展为 MIBC。MIBC常发生淋巴结转移和远处转移，导致预后不良，危及生命,5年生存率仅为8.1%9。然而，对于肿瘤复发或转移的膀胱癌患者,尚无有效的治疗方法。因此,研究膀胱癌进展的分子机制至关重要。Apoptosis(%)5.48 0.625.58 0.6416.48 1.59ab17.35 1.6810.48 0.93 cd现代肿瘤医学丝2 0 2 3年11月第31卷第2 1期10*10*1010101010-1010-1010 10 101010*1010101010Annexin-FITCAnnexinV-FITCNCsi-NCFig.4Flow cytometry detection of T24 cell apoptosisMODERN ONCOLOGY,Nov.2023,VOL.31,No.2110*-1010101010 1010 1010AnnexinV-FITCsi_Circ_005863图 4流式细胞仪检测T24细胞凋亡3943:10410101010101010101010 1010101010 10101010Annexin V-FITCAnnexin V-FITCsi_Circ_0058063+inhibitorNCsi_Circ_0058063+miR-338-3pinhibitorNumberofmigratingcellsNCFig.5 Transwell detects T24 cell migration(crystal violet staining 100)si-NC图5Transwell检测T24细胞迁移(结晶紫染色10 0)si-Circ_0058063si-Circ_0058063+inhibitorNCsi-Circ_0058063+miR-338-3pinhibitorInvasivecellcountNCE-cadherinN-cadherinVimentinGAPDH图 7 Western Blot 检测细胞中 E-cadherin、N-c a d h e r i n、Vi m e n t i n 蛋白表达A:NC 组;B:si-NC 组;C:si-Circ_0058063 组;D:si-Circ_0058063+inhibitor NC 组;E:si-Circ_0058063+miR-338-3p in-hibitor 组。Fig.7 Western Blot detection of E-cadherin,N-cadherin,and Vimen-tin protein expression in cellsA:NC group.B:si-NC group.C:si-Circ_0058063 group.D:si-Circ_0058063+inhibitor NC group.E:si-Circ_0058063+miR-338-3pinhibitor group.最新研究表明,circRNA参与基因转录和翻译的调节,以及蛋白质的细胞质和细胞核定位,这表明它们可能参与包括癌症在内的许多疾病的进展10 。Circ_0058063 已被证明是si-NC图6 Transwell检测T24细胞侵(结晶紫染色10 0)Fig.6Transwell detection of T24 cell invasion(crystal violet staining 100)ABCDEsi-Circ_0058063膀胱癌的癌基因,Circ_0058063下调抑制膀胱癌细胞的增殖和迁移能力，促进细胞凋亡能力5。SUN等人 还发现，Circ_0058063促进膀胱癌细胞的顺铂抵抗。LIANG等人12 也证实，敲低Circ_0058063显著降低了膀胱癌细胞增殖和侵袭,并促进了膀胱癌细胞的凋亡。以上研究均表明 Circ_0058063可能是膀胱癌的生物标志物,可能是膀胱癌的治疗靶点。本研究结果显示，Circ_0058063在膀胱癌细胞T24中高表达，沉默Circ_0058063后T24细胞OD450值显著下降，细胞调亡率显著升高，进一步证实沉默Circ_0058063抑制膀胱癌，下调Circ_0058063可能通过促进细胞凋亡,抑制细胞增殖,进而抑制膀胱癌的发生。EMT是一个重要的发育过程,与癌症的发生密切相关，,例如癌症的迁移、侵袭和转移13。EMT取决于细胞黏附分子表达的减少和紧密连接的丧失。先前的研究表明,抑制膀胱癌 EMT过程来抑制癌细胞迁移、侵袭和转移可能是膀胱癌的一种治疗手段14-15,上调N-cadherin、Vi m e n t i n，下调Ec a d h e r i n 蛋白水平可以促进膀胱瘤EMT进程的发生16 。在本研究中,Circ_0058063沉默使T24细胞迁移、侵袭细胞数量、N-cadherin、V i m e n t i n蛋白水平显著下降,Ec a d h e r in 蛋白水平显著升高，表明Circ_0058063下调可能通过抑制T24上皮细胞获得间质表型进而阻止EMT进程,以此抑制膀胱癌的进展。si-Circ_0058063+inhibitorNCsi-Circ_0058063+miR-338-3pinhibitor:3944 表8 沉默Circ_005