食品微生物鉴技术和方法培训课件.ppt

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,食品微生物鉴技术和方法,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,食品微生物鉴技术和方法,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,食品微生物鉴技术和方法,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,食品微生物鉴技术和方法,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,食品微生物鉴技术和方法,食品微生物鉴技术和方法,微生物纯培养的获得的方法,稀释涂布法,划线分离法,利用平皿的生化反应分离法：透明圈法、变色圈法、生长圈法、抑菌圈法,“病灶”分离法,单细胞或单孢子分离法,特殊菌类,环保降解菌的分离,第二章 食品微生物鉴定技术和方法,第一节 食品微生物纯培养的获得和传统的鉴定方法,2,食品微生物鉴技术和方法,微生物的分离、纯化与接种技术,接种和分离工具,1,接种针,2.,接种环,3.,接种钩,4.5.,玻璃涂棒,6.,接种圈,7.,接种锄,8.,小解剖刀,3,食品微生物鉴技术和方法,微生物的分离、纯化与接种技术,4,食品微生物鉴技术和方法,划线接种，分离纯化,5,食品微生物鉴技术和方法,灼烧,6,食品微生物鉴技术和方法,7,食品微生物鉴技术和方法,微生物纯培养的获得的方法,无氮培养基,筛出固氮菌；,无有机碳源的培养基,筛出硝化细菌；,无有机碳源的培养基且无氧有光环境,筛出光合细菌；,高浓度,NaCl,的培养基,筛出耐盐菌株,伊红,美蓝的培养基,筛出大肠杆菌；,青霉素的培养基,筛出酵母菌、霉菌；,第二章 食品微生物鉴定技术和方法,第一节 食品微生物纯培养的获得和传统的鉴定方法,8,食品微生物鉴技术和方法,微生物纯培养的获得的方法,传统发酵食品的,starter,的确定,or,优势菌株的确定,例如：金华火腿的主要发酵菌；,优势细菌：乳酸菌、葡萄球菌,优势酵母菌：欧诺比假丝酵母、红酵母,微生物生态学方面的菌株确定？,非原位检测鉴定、原位检测鉴定,第一节 食品微生物纯培养的获得和传统的鉴定方法,9,食品微生物鉴技术和方法,检测食品中微生物总数的方法,4,种基本方法：,（,1,）标准平板计数或好氧平板计数，适用于活细胞或菌落形成单位。,（,2,）最大可能值法。作为一种统计学的方法来测定活性细胞。,（,3,）染色还原技术。估计拥有还原能力的活性细胞数目。,（,4,）直接显微镜计数法。活性和非活性细胞。,10,食品微生物鉴技术和方法,常规的标准平板计数（,SPC,）,将一部分食品样品混合或者均质化，在适当的稀释液中进行梯度稀释，然后涂布或者倾注到适宜的琼脂培养基上，在适当的温度下培养一段时间后，使用电子计数器对可见的菌落进行计数。,SPC,法是目前测定活细胞数和食品产品中菌落形成单位数最广泛的方法。,检测食品中微生物总数的方法,11,食品微生物鉴技术和方法,常规的标准平板计数（,SPC,）,记录产品中全部活细胞时，要考虑以下因素：,1,）采用的取样方法,2,）食品样品中有机体的分类,3,）食品生物区系的种类,4,）食品原料的种类,5,）食品产品的预检历史记录,6,）所用培养基的营养程度,7,）所用的培养温度和时间,8,）,pH,值、,aw,和培养基的氧化还原电位,9,）所用的稀释液类型,10,）食品样品中有机体的相对数量,11,）竞争或拮抗有机体的存在,检测食品中微生物总数的方法,12,食品微生物鉴技术和方法,显微镜菌落计数法,是通过显微镜对载玻片琼脂层上生长的微小菌落计数。首先进行涂布，将,0.1ml,的牛乳琼脂混合物涂布到,4cm,2,的载玻片上，经培养，干燥和染色，借助显微镜对微小菌落进行计数。,另一种方法是将,2ml,融化的琼脂与,2ml,热牛乳混合，随后取,0.1ml,已经接种的琼脂涂抹到,4 4cm,2,的载玻片上，最后用硫堇蓝染色，用,16mm,物镜的宽视野显微镜观察载玻片。,检测食品中微生物总数的方法,13,食品微生物鉴技术和方法,最大可能数法,在这种方法中，食品样品的稀释液的准备类似于,SPC,法。将三个连续等分量样品或稀释梯度的稀释液转移到,9,个或,15,个有适宜培养基的试管中，分别称为,3,试管或,5,试管法。,最初样品中微生物的数量通过查阅标准,MPN,表来获得。通常,MPN,法的结果高于,SPC,的结果。,检测食品中微生物总数的方法,14,食品微生物鉴技术和方法,MPN,法的优点：,（,1,）这种方法相对比较简单,（,2,）与,SPC,法相比，不同实验室得到的结果更加可靠，相似率较高。,（,3,）特殊微生物群体可以通过适当的选择性培养基进行测定。,（,4,）这是一种测定粪大肠杆菌群含量的方法。,缺点：精确度低。,检测食品中微生物总数的方法,15,食品微生物鉴技术和方法,染色还原试验,在估测相关产品中活菌数量时，通常使用两种染色剂：,亚甲基蓝和刃天青,。,进行染色还原实验时，食品上清液加入任何一种染色剂标准溶液，亚甲蓝会从蓝色还原为白色，而刃天青则从暗蓝色还原为粉红色或白色，染色剂还原的时间与样品中微生物的数量成正比。,检测食品中微生物总数的方法,16,食品微生物鉴技术和方法,染色还原试验,刃天青还原反应快速检测牛肉腐败，被还原为无色、有味、而且结果与,SPC,法显著相关。,乳品中用来估测鲜牛乳的微生物学质量，简单，快捷，经济，而且只有活细胞才对显色剂有明显的还原能力。,缺点：微生物对染色剂的还原程度不同，不适用于含还原酶的食品。,17,食品微生物鉴技术和方法,食品表面微生物的检测,1.,棉拭,/,棉拭漂洗法,是表面微生物检验中最古老、应用最广泛的方法，它不仅应用于食品及乳制品，而且还用于医院、饭店。,方法：将,1.5ml,液体加到平整的表面上，在,3cm,2,区域内擦拭,15s,，然后用微升移液管取,0.1ml,和,0.5ml,液体，将液体在平板计数琼脂或选择性培养基上涂布或倒平板计数。,18,食品微生物鉴技术和方法,2.,接触平板法,平板直接接触复制微生物法（,RODAC,）使用一种特殊的皮氏培养皿，平板中倾倒,15.5,16.5ml,培养基，形成琼脂平面；当把平皿倒置时，凝固的琼脂就会与待测表面直接接触，接触后盖上平皿盖、培养，然后进行菌落计数。,缺点：,仅适用于菌落较分散的表面，对于污染较严重的表面无效。,食品表面微生物的检测,19,食品微生物鉴技术和方法,3.,琼脂注射,/,琼脂肠法,琼脂注射法：将,1,个,100ml,的注射器去掉针头，改造成中空的柱体，并在中空的部分注入琼脂，通过推动活塞将琼脂从柱体底部挤压到待测表面上，将露在外面的那层切下，置于皮氏平皿中，经过培养后进行菌落计数。,琼脂肠法：与注射法类似，只不过用的是塑料试管而不是改造的注射器。,广泛用于肉制品或食品加工设备表面微生物的检测。,缺点同,RODAC,法，适合菌落分散和表面污染程度较轻的样品。,食品表面微生物的检测,20,食品微生物鉴技术和方法,其他检测方法：,1,）直接表面检测法,2,）粘性薄膜法,3,）棉拭,/,琼脂斜面,4,）超声波装置,5,）喷雾枪法,食品表面微生物的检测,21,食品微生物鉴技术和方法,第二章 食品微生物鉴定技术和方法,第一节 食品微生物纯培养的获得和传统的鉴定方法,微生物传统的鉴定方法,细菌,：,伯杰氏鉴定细菌学手册（第八版,1974,、第九版,1994,）、伯杰氏系统细菌学手册（第一版）,19841989,，,2000,年分五卷出版。,放线菌,：中国科学院微生物研究所编著的放线菌目分科、分属检索表,真菌：,Smith,、,Alexopoulos(,阿历克索鲍罗斯）、,Ainsworth,（安斯沃思）的分类系统,22,食品微生物鉴技术和方法,第二章 食品微生物鉴定技术和方法,第一节 食品微生物纯培养的获得和传统的鉴定方法,伯杰氏手册沿革：,伯杰氏手册自从,1923,年出版第,1,版，直至,1974,年第,8,版，均使用,伯杰氏鉴定细菌学手册,(Bergeys Manual of Determinative Bacteriology),。,1984,年开始至,1989,年分四卷出版，并改名为,伯杰氏系统细菌学手册,(Bergeys Manual of Systematic Bacteriology)(,第一版,),1994,年又将,系统手册,1-4,卷中有关属以上分类单元的分类鉴定资料进行少量的修改补充后汇集成一册仍用原来书名出版，故称之为,伯杰氏鉴定细菌学手册,第九版,23,食品微生物鉴技术和方法,第二章 食品微生物鉴定技术和方法,第一节 食品微生物纯培养的获得和传统的鉴定方法,第九版,伯杰氏细菌学手册,简介：,内容分四卷：,第,1,卷：一般医学和工业方面重要的革兰氏阴性细菌。,第,2,卷,：放线菌以外的革兰氏阳性细菌。,第,3,卷：古细菌、蓝细菌及其他革兰氏阴性细菌。,第,4,卷,:,放线菌。,24,食品微生物鉴技术和方法,第一节 食品微生物纯培养的获得和传统的鉴定方法,新的分类方法,:,数值分类、核酸在细菌分类中的应用、遗传学方法、血清学和化学分类等。,鉴定方法的革新。新版在表型特征基础上，以,DNA,资料对属、种的分类地位给予决定性的判断。将,DNA,中,G+C mol,含量的测定、,DNA,杂交、,RNA,寡核苷酸的顺序分析、细胞化学分析、数值分类等方法应用到细菌的分类学上,。,25,食品微生物鉴技术和方法,第二章 食品微生物鉴定技术和方法,第一节 食品微生物纯培养的获得和传统的鉴定方法,应用原则,查阅相关尽可能的资料,每一步利用常识、结果判定,最少的试验，最好的结果,26,食品微生物鉴技术和方法,第二章 食品微生物鉴定技术和方法,第一节 食品微生物纯培养的获得和传统的鉴定方法,鉴定步骤,菌株的纯化,化能自养菌、光合菌,or,化能异养菌的确定,根据分离的过程确定,形态、,Gram,、,Spore,的确定,色素等专一特性,碳源的类型、氧化性、发酵性,归属；由属的特征选择试验；进一步确定,27,食品微生物鉴技术和方法,第二章 食品微生物鉴定技术和方法,第一节 食品微生物纯培养的获得和传统的鉴定方法,应用实例（,a-,淀粉酶抑制剂产生菌的分离、鉴定、保存）,第一步：菌落纯菌株的获得,第二步：设计一系列的检测反应,第三步：对照结果定名,第四步：保存,生化反应平板筛选：“抑制圈和显色圈法”。,28,食品微生物鉴技术和方法,第二章 食品微生物鉴定技术和方法,1.DNA,同源性和,DNA,中（,G+C,）摩尔分数,（,G+C)%=,（,G+C)/(A+T+C+G)%,T,m,法（热变温度法）测定,菌株间相差,2.5,4.0,；种间相差,5,10,以上；属间相差,10,以上,第二节 食品微生物学的现代鉴定方法,29,食品微生物鉴技术和方法,每个生物种都有特定的,GC%,范围，因此 可以作为分类鉴定的指标。细菌的,GC%,范围为,25-75%,，变化范围最大，因此更适合于细菌的分类鉴定。,30,食品微生物鉴技术和方法,GC%,测定主要用于对表型特征难区分的细菌,作出鉴定，并可检验表型特征分类的合理性，,从分子水平上判断物种的亲缘关系。,G+C,含量的比较主要用于分类鉴定中的,否定,但具有相似,G+C,含量的生物并不一定表明,它们之间具有近的亲缘关系。,31,食品微生物鉴技术和方法,同一个种内的不同菌株,G+C,含量差别应在,4,5%,以下；同属不同种的差别应低于,10,15%,；,G+C,含量已经作为建立新的微生物分类单元的一项基本特征，它对于种、属甚至科的分类鉴定有重要意义。,若二个在形态及生理生化特性方面及其相似的菌株，如果其,G+C,含量的差别大于,5%,，则肯定不是同一个种，大于,15%,则肯定不是同一个属。,32,食品微生物鉴技术和方法,第二章 食品微生物鉴定技术和方法,第二节 食品微生物学的现代鉴定方法,1.DNA,同源性,Southern blotting,（,DNA-DNA),Northern blotting (DNA-RNA),Western,blotting(Pro-Anti),Eastern blotting,33,食品微生物鉴技术和方法,第二章 食品微生物鉴定技术和方法,第二节 食品微生物学的现代鉴定方法,2.23S,、,16S,、,5S rRNA,序列相似性,核糖体,70S,30S 50S,16S 21 34 23S+5S,蛋白质,34,食品微生物鉴技术和方法,第二章 食品微生物鉴定技术和方法,第二节 食品微生物学的现代鉴定方法,16S,亚基保守性高，是细菌进化的计时器,普遍存在,细胞,RNA,含量较高,rRNA,稳定,16sRNA,序列保守,16sRNA,分子量适中,16S rRNA,基因约含有,1540,个核苷酸，分可变区和保守区，不同微生物可变区核苷酸序列不同，从而可以利用这些特异性序列进行微生物的鉴定；,35,食品微生物鉴技术和方法,2025/1/29 周三,36,细,菌,域,Domain bacteria,古（生）菌,域,Domain archaea,真,核,生,物,域,Domain eukary,ot,a,紫色细菌,线粒体,甲烷球菌属,甲烷杆菌属,真菌,植物,叶绿体,革兰氏阳性细菌,甲烷八叠球菌属,极端嗜盐菌,动物,蓝细菌,无硫绿细菌,热球菌属,伪变形虫,纤毛虫,黄杆菌,栖热胞菌属,热网菌属,热变形细菌,粘菌,鞭毛虫,产液菌属,微孢子,毛滴虫,双滴虫（假滴虫属）,-,生物总系统发育树,（根据,16S rRNA,序列比较绘制，引自,布氏微生物学,2000,）,36,食品微生物鉴技术和方法,第二章 食品微生物鉴定技术和方法,第二节 食品微生物学的现代鉴定方法,具体测定方法：,采用,RNase T1,酶可以将,16S rRNA,酶解,在,G,位点上切割，得到,6,20,个碱基大小的序列,对这些,6,20,碱基片段进行分离、测序,比较不同微生物之间,S,AB,（,Dice,型相关系数）的相似性。,37,食品微生物鉴技术和方法,第二章 食品微生物鉴定技术和方法,第二节 食品微生物学的现代鉴定方法,S,AB,=2,N,AB,/,（,N,A,+,N,B,）,N,AB,代表两菌所含相同寡核苷酸的碱基总数，,N,A,和,N,B,分别代表两菌寡核苷酸所含碱基总数,S,AB,等于,1,，说明所比较的两菌株,rRNA,序列相同，是同一进化时间的微生物，若,S,AB,值小于,0.1,，,两菌亲缘关系很远,38,食品微生物鉴技术和方法,第二章 食品微生物鉴定技术和方法,第二节 食品微生物学的现代鉴定方法,分子生物学技术在细菌鉴定中的应用,核酸探针技术,核酸扩增技术（,PCR,技术）,基因芯片技术,39,食品微生物鉴技术和方法,2025/1/29 周三,40,核酸探针技术,原理：两条不同来源的核酸链如果具有互补的碱基序列，就能够特异性的结合而成为分子杂交链。据此，将己知核苷酸序列,DNA,片段用同位素或其他方法标记，加入己变性的被检,DNA,样品中，在一定条件下即可与该样品中有同源序列的,DNA,区段形成杂交双链，从而达到鉴定样品中,DNA,的目的。,这种能认识到特异性核苷酸序列有标记的单链叫,DNA,分子核酸探针或基因探针。,40,食品微生物鉴技术和方法,制备核酸探针要注意,两个关键性的问题,：,1.,要选择特异性强而又无交叉反应的核酸,(DNA,或,RNA),片段，可通过核酸重组和克隆以及人工合成、,PCR,扩增等技术获得,2.,标记物，当前常用同位素,(,32,P,、,35,S,等）、光生物素及地高辛,(digoxigenin),标记。,核酸探针技术,已被用于检验食品中一些常见的病原菌。如产肠毒素性大肠杆菌、沙门氏菌。,41,食品微生物鉴技术和方法,2025/1/29 周三,42,PCR,（,Polymerase Chain Reaction,）,即聚合酶链式反应，又称为无细胞克隆系统，是,1985,年由,Mullis,创建的一项,DNA,体外扩增技术。,PCR,的全过程由变性（,denature,）、退火（,annealing,）和延伸（,extension,）三步组成的若干个循环，每步之间通过温度的改变来实现转换。,其基本原理是在体外对一特定的双链,DNA,片段（或称靶,DNA),进行高效扩增。首先将靶,DNA,双链加热变性为单链，然后加入两段人工合成的与靶,DNA,两端邻近序列互补的寡核苷酸片段作为引物,(primer),，即左端引物和右端引物，该对引物与互补的,DNA,单链碱基互补结合后，在有,DNA,多聚酶和四种,dNTPs,底物存在的情况下，引物沿模板,DNA,链（靶,DNA,单链）按,5 3,方向延伸，自动合成新的,DNA,双链。,42,食品微生物鉴技术和方法,2025/1/29 周三,44,基因芯片（,gene chip,）,又称,DNA,微阵列（,DNA microarray,），是指将许多特定的寡居核苷酸片断或基因片段作为探针，有规律的排列固定于支持物上形成的,DNA,分子阵列。芯片与待测的荧光标记样品的基因按碱基配对原理进行杂交后，在通过激光共聚焦荧光监测系统等对其表面进行扫描即可获取样品分子的数量和序列信息。,由于该技术同时将大量的探针固定于支持物上，所以可以一次性对大量序列进行检测和基因分析，解决了传统的核酸印迹杂交（,southern blot,和,northern blot,等）操作复杂，操作序列数量少等缺点。,基因芯片技术的突出特点在于其高度的并行性、多样化、微型化和自动化，以及灵敏、高效和低成本等优点。,44,食品微生物鉴技术和方法,第二章 食品微生物鉴定技术和方法,第二节 食品微生物学的现代鉴定方法,3.,寡核苷酸种类,4.,可溶性蛋白质总量或形态学、生理生化特征的数值分类法,5.,细胞壁分析,6.,血清反应法,7.,细胞脂肪酸组成分析,45,食品微生物鉴技术和方法,第二章 食品微生物鉴定技术和方法,1.,化学方法,热稳定性核酸酶法（金黄色葡萄球菌（,Staphylococcus aureus,）,鲎试剂法（,Limulus,amoebocyte lysate,（,LAL,）,assay,）（适用于,G,-,细菌）,ATP,测定法（适用于活细胞）,辐射线测定法,荧光或发色测定法,第三节 食品微生物快速检测技术,46,食品微生物鉴技术和方法,1.,化学方法,1,）热稳定性核酸酶法（金黄色葡萄球菌（,S.aureus,）,通过测定食物中的热稳定性核酸酶可以检测出食物中存在的大量的金黄色葡萄球菌。这是由于其产生热稳定性核酸酶以及凝固酶。,研究表明：有,0.34,单位的热稳定性核酸酶存在时，表明有某种金黄色葡萄球菌生长，而此时肠毒素的含量还不会导致食物中毒。,0.34,单位的热稳定性核酸酶 相当于金黄色葡萄球菌产生,9.510,3,ug,肠毒素。,热稳定性核酸酶检测法可以作为指示金黄色葡萄球菌生长的方法。,第三节 食品微生物快速检测技术,47,食品微生物鉴技术和方法,1.,化学方法,2,）鲎试剂法,鲎试剂法又称鲎变形细胞溶解物实验。革兰氏阴性菌可通过产生的内毒素进行鉴定，内毒素是由菌体外膜裸露的脂多糖和被外膜包围的脂,A,构成的。,鲎变形细胞溶解物实验采用来自马蹄蟹血液的血细胞溶菌蛋白。溶菌蛋白是已知的对内毒素最敏感的物质。,鲎实验是在少量的溶菌液中加入食物悬液或其他待测样品，并在,37,培养,1h,。内毒素的存在会导致胞溶物凝胶。,鲎试剂能检出,1.0pg,脂多糖。由于大肠杆菌含有,3.0fg,脂多糖，所以能检出,300,个革兰氏阴性菌。,48,食品微生物鉴技术和方法,鲎试剂法,鲎试剂法首次应用于食品检验是检测碎牛肉中的腐败菌。,内毒素的滴定度随着革兰氏阴性细菌数量的增加而增加。,由于冷藏鲜肉的变质通常是由革兰氏阴性菌引起的，所以鲎试剂法是快速检测革兰氏阴性菌总菌数的好方法。,这种方法适合于评价巴氏杀菌前后乳的大肠菌群卫生质量。,49,食品微生物鉴技术和方法,3,）,ATP,法,ATP,在细胞死亡,2h,后消失，并且每个细菌细胞中的,ATP,含量恒定，每个细胞约含有,10,18,10,17,mol,，相当于,10,5,cfu,的细菌含有,4,10,4,mol/L ATP,。,一种最简单的,ATP,测定法之一是利用萤火虫的虫荧光素荧光素酶系统测定。在,ATP,存在时，用荧光检测器检测荧光素酶发射的荧光强度。萤火虫荧光素的发光量与添加的,ATP,量成正比。,在,10,6,10,9,cfu/g,范围内，微生物的,ATP,含量和细菌数呈线性关系。,ATP,法已经用于鸡肉、猪肉和牛肉的检测。,（,cfu/mL,指的是每毫升样品中含有的细菌群落总数）,50,食品微生物鉴技术和方法,第二章 食品微生物鉴定技术和方法,第二节 食品微生物学的现代鉴定方法,4,）辐射测定法,利用培养基中,14,C,标记的代谢物为基础，当微生物利用这些物质时，释放,14,CO2,并用放射能计数器检测。,14,C,标记的葡萄糖。对那些不能利用葡萄糖的微生物，,14,C,标记的甲酸盐或,14,C,标记的谷氨酸盐。,51,食品微生物鉴技术和方法,4,）辐射测定法,整个程序如下：,向,15ml,带盖的血清瓶中加入,12,36ml,含标记代谢物的培养基，通过充入适当的气体保持需氧或厌氧条件并培养。培养时测定顶空中的,14,CO,2,量，检测到,CO,2,气体的时间与产品中微生物的数量成反比。,52,食品微生物鉴技术和方法,辐射测定法已经用于冷冻浓缩橘子汁的微生物检测。利用,14,CO,2,标记的葡萄糖。研究者在,6,10h,内检测出含有,4,种酵母菌和,4,种乳酸菌，并且菌体浓度为,10,4,的样品。,在检测的,600,份果汁样品中，,44,份菌数,10,4,/ml,的样品可在,12h,内检出，,41,份样品,8h,内检出。没有假阴性结果发生。,53,食品微生物鉴技术和方法,第二节 食品微生物学的现代鉴定方法,2.,免疫学方法,血清富集技术,（,Enrichment Serology,；,ES,）,免疫放射分析（,Radioimmunoassay,）,酶联免疫技术（,ELISA,）,胶体扩散技术（,Gel Diffusion,）,免疫磁性分离技术（,Immunomagnetic Separation,）,红血球凝集法（,Hemagglutination,）,54,食品微生物鉴技术和方法,血清富集技术（）,检测沙门氏菌,分为,4,步：,在非选择性培养基前富集,18h,在亚硒酸盐半胱氨酸和连四硫酸盐肉汤培养基选择性富集,24h,在,M,肉汤培养基,6,8h,或,24h,选择性富集,与多价,H,抗血清,50,摄氏度凝结,2h,。,55,食品微生物鉴技术和方法,第二节 食品微生物学的现代鉴定方法,3.,分子基因方法（,Molecular Genetic Method,）,核酸（,DNA,）探针,多聚酶链式反应（,PCR,）,LUX,基因发光,指纹识别方法,Phage typing,（噬菌体分类）、,AFLP,（扩增片段长度多态）、,MEE,（多位点酶电泳）、,REA,（限制性酶分析）、,RAPD,（随机扩增多态性,DNA,）、,PFGE,（脉冲场凝胶电泳）、,RFLP,（限制性片段长度多态）、,Ribotyping,（核糖体分类）、,Microarrays,（微阵列）。,56,食品微生物鉴技术和方法,第二节 食品微生物学的现代鉴定方法,4.,物理方法,生物传感器,压电晶体,(Piezoelectric Crystals,（,accoustical biosensors,）,),光纤,阻抗（,Impedance,）,显微量热法,流式细胞术（,Flow Cytometry,）,生物系统分析仪（,BioSys Instrument,）,57,食品微生物鉴技术和方法,