食品安全事故调查中标本采集、保存与注意事项.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,近十年来国内外食品安全事件回顾（生物性）,2004年阜阳奶粉事件导致200多名大头娃娃，数十人死亡。其中抽检奶粉有87份检出阪崎杆菌，,检出率为12.16%；,2006年美国发生的“毒菠菜事件”，26个州200余人感染O,157,：H,7,大肠杆菌；,2006,年北京福寿螺事件，,北京共接到临床诊断报告病例138例，临床住院病例91例；,2007年，美国40多个州数百人因吃了受污染花生酱先后感染,田纳西型沙门氏菌,；经溯源后确定召回产品。,2011年德国豆芽菜引起的O,104,H,4,大肠杆菌爆发,35人死于肠出血性大肠杆菌感染。,感染患者中约有100人肾脏严重受损，需要接受肾脏移植或长期接受透析治疗,蔬菜销售危机给德国农民带来约6500万欧元的损失，在全欧洲的损失约为5亿至6亿欧元。,发现O,104,H,4,型大肠杆菌是这次疫情的罪魁祸首，他包含了肠出血性大肠杆菌的多种基因，还包含了鼠疫病菌的一种基因，这使得它更容易致病。,2011年美国“毒香瓜”李斯特菌蔓延19州 致死17人,香港食物安全中心,（2012年3月）,进食未经煮熟猪肝可感染戊型肝炎,由2004年的38宗增至2011年的119宗。,戊型肝炎已取代甲型肝炎成为香港最常見的急性病毒性肝炎。,通过猪的肝脏检测和病毒基因序列比对等研究，得出的结论是：,未煮熟的猪肝,可能是其中一个感染源,介貝类水產,亦可能存在。,美国罕见寄生虫病疫情扩大至19个州 近600人感染,2013年6月份爆发罕见的,环孢子虫病,疫情以来，已迅速扩散至19个州和纽约市，造成596人感染，至少36人住院。,环孢子虫病,是由一种罕见的单细胞寄生虫引发的肠胃疾病。食用污染的食物或水而感染，其症状包括腹泻、呕吐、高烧等，如不及时治疗，病症会持续数天甚至一个月，对婴幼儿可能危及生命。,疫情与受污染的,袋装什锦沙拉,有关，包括,卷心生菜、叶生菜、紫甘蓝及胡萝卜,。可追查到同一个供应商“泰勒农场”在墨西哥的分公司。,疾控中心向国会提出4000万美元的资金支持。,内 容,一、标本的影响因素,二、采样原则,三、标本的采集,四、标本采集保存和送检注意事项,五、生物安全,（,二）外源性物质,标本溶血,标本受细菌污染,标本保存不当,标本凝集不全,标本管中添加物质的影响,规范采样是获得可靠检测结果的重要保证,正确的采样方法,合理的采样时机,足够的,样品,采样量,多种样品同时采集,样品妥善保存运输,准确的检测结果包括,正确采集样品,正确选择检测方法,多种检测方法并用,综合分析判断,二.采样原则,采样应本着及时性、针对性、适量性和不污染的原则进行，以尽可能采集到,含有致病因子或其特异性检验指标,的样本。,及时性原则：考虑到事故发生后现场有意义的样本有可能不被保留或被人为处理，应,尽早采样,，提高实验室检出致病因子的机会。,针对性原则：根据病人的临床表现和现场流行病学初步调查结果，,采集最可能检出致病因子的样本,。,适量性原则：样本采集的份数应尽可能满足事故调查的需要；采样量应尽可能满足实验室检验和留样需求。当可疑食品及致病因子范围无法判断时，应,尽可能多地采集样本。,不污染原则：样本的采集和保存过程,应避免微生物、化学毒物或其他干扰检验物质的污染，防止样本之间的交叉污染,。同时也要防止样本污染环境。,三、样品的采集,样本的采集、登记和管理应符合有关采样程序的规定，采样时,应填写采样记录，记录采样时间、地点、数量等，由采样人和被采样单位或被采样人签字。,送检临床标本时应写明姓名、地址、联系方式、,住院号、发病时间、采集时间、临床诊断,等。使用抗生素治疗者，应注明所用,抗生素名称、使用时间。,标本管/袋或瓶上标记样品编号。,所有样本必须有牢固的标签，标明样本的名称和编号。,每批样本应按批次,制作目录，,详细,注明该批样本的清单、状态和注意事项等,将标本送检单和调查表放在塑料袋中，随样品一起送达实验室,样本的包装、保存和运输，必须符合生物安全管理的相关规定,安排运送时间，时间确定后，通知接收实验室，并告之标本运送的时间和储存及运输方法。,食品安全事故流行病学调查,采样记录表,见技术指南（附表3-7）。,采样、保存和运送要求,见技术指南附录4。,食品安全事故常见致病因子的临床表现、潜伏期及生物标本采集要求见技术指南附录5。,常见的食品安全事故标本和样品采集类型,样本来源,可采集的标本和样品类型,病人,粪便、血液、尿液、呕吐物、洗胃液、肛拭子、咽拭子,从业人员,粪便、肛拭子、咽拭子、皮肤化脓性病灶标本,可疑食品,可疑食品剩余部分及同批次产品、半成品、原料,加工单位剩余的同批次食品，使用相同加工工具、同期制作的其他食品,使用相同原料制作的其他食品,常见的食品安全事故标本和样品采集类型,样本来源,可采集的标本和样品类型,食品制作环境,加工设备、加工用具、容器、餐饮具上的残留物或物体表面涂抹样品或冲洗液样品；食品加工用水,其他,刚被稀便污染,的尿布、衣服、床单等,宿主动物粪便、昆虫等媒介生物,由毒蕈、河豚等有毒动植物造成的中毒，要搜索废弃食品进行形态鉴别,食品和环境样品：,事故调查时应尽量采集,可疑剩余食品,。还应尽量采集可疑食品的,同批次未开封的食品,。如无剩余食品可用灭菌,生理盐水洗涤盛装过可疑食品的容器,，取其洗液送检。,需严格无菌采样，将标本放入无菌广口瓶或塑料袋中，避免交叉污染。,（一）食品标本的采集方法,食品样品采集量一般在200g或200ml以上。,用于微生物检验的食品样品一般应置4冷藏待检，若怀疑是,副溶血性弧菌,感染，样品应常温运送，不可冷藏。,用于理化检验的食品样品置4冷藏保存运送，如长时间运输需冷冻。,固体食品样品：,尽可能采集可能受到污染的部分,。一般用无菌刀具或其他器具切取固体食品，多取几个部分。,采集标本需无菌操作,，将采集的样品,放入无菌塑料袋或广口瓶中,。,冷冻食品应保持冷冻状态,运送至实验室。,有毒,动、植物,中毒时，除采集剩余的可疑食物外，还,应尽量采集未经烹调的原材料,（如干鲜蘑菇，贝类、河豚鱼、断肠草等）并尽可能保持形态完整。,液体食品样品：,采集液体食品前应搅动或振动,，用无菌器具，将,大约200ml液体食品转移至塑料袋或广口瓶中,，或用无菌移液管将液体食品转移至无菌容器中。,食品用具等样品：,盆、桶、碗、刀、筷子、砧板、抹布等样品的采集，可用,生理盐水或磷酸盐缓冲液浸湿拭子，然后擦拭器具的接触面，,再将拭子置于生理盐水或磷酸盐缓冲液中。抹布也可剪下一段置于生理盐水或磷酸盐缓冲液中。如砧板已洗过，也可用刀刮取表面木屑放入生理盐水或磷酸盐缓冲液中。,1.肉及肉制品,生肉及脏器：刚宰杀的猪、牛、羊，可用无菌刀割取两腿内侧肌肉各50g，或劈半后割取两侧背最长肌各50g；冻肉和市售生肉，可割取腿肉或其它部位的肌肉100g。内脏每样取100g。放入灭菌容器内立即送检，路远应冷藏送检，3小时内送到。送检样品不得加入任何防腐剂。收到样品应及时检验，或暂时存放冰箱。,家禽,：用灭菌棉拭子体表取样，胸腹部各10cm,2,，背部20cm,2,，,头肛各5cm,2,，共50cm,2,。,烧烤肉,：用灭菌棉拭子体表取样，,正面20cm,2,，里面10cm,2,，四边各5cm,2,，共50cm,2,。,其它肉制品：酱肉、卤肉、肴肉和肉松，一般采取200g。,2.乳及乳制品,最好采取密闭原装的样品1瓶或1包。大包装的或散装的样品每件不少于200g或200mL，放入灭菌容器内，及时送检。路途较远时应注意冷藏，在3小时内送到。不得腐剂。,3.鲜蛋,用无菌手续采取完整的鲜蛋，放入灭菌容器内送检。,4.水产品,水产品应采取完整的个体，成批的水产品应多采几个。小鱼、小虾可采200500g。,大型鱼类和海兽可以取局部样品送检，如鱼腮、鱼肠、肌肉及其体表涂抹拭子。水产品容易变质，应注意冷藏，,在3小时内送到。,5.饮料,瓶（盒、袋）装饮料，按原包装采取2瓶或2盒（袋）。,散装饮料采取500mL,，放入灭菌瓶中。,冰淇淋按原包装采取4杯（盒），散装者采取200g。冰棍或雪糕每批采取3支。,食用冰块采取500g，放于灭菌容器中。,样品采取后应立即送检，最多不得超过3小时，冷冻食品放在冷藏瓶中送检。,6.调味品：,瓶装者采取原包装1瓶，散装者用灭菌勺子采取500mL（g），装入灭菌瓶内送检。,7.冷菜和豆制品：,瓶装或盒装的按原包装采取1瓶或1盒；散装的采取500 g，放入灭菌容器中送检。,8.糖果、糕点、果脯,有包装的采取原包装1盒或1包，散装的糕点和果脯采取200g，糖果采取100g。,9.酒类,瓶装酒按原包装采取2瓶，散装啤酒采取500mL，放入灭菌瓶中送检。,10.残余食物,用灭菌工具采取残余食物，置于灭菌容器中。,如无残余食物，可用灭菌棉拭子在可疑食物的容器内涂抹，置于装有少量生理盐水的试管内。,可疑的罐头可直接送检，如仅剩空盒，可将空盒送检。,（二）水源标本的采集方法,1.盐水瓶法：,以灭菌的500ml盐水瓶采取水样至少450ml，但不能让水样充满整个瓶子，,应留有一定的空气。,一般在可疑污染的河流、池塘岸边的,30cm深度以内,的表层水采取水样。,连续采取多份水样时，注意防止水样间相互污染。,采取的水样应立即放入冷藏箱中尽快送到实验室。不能在3小时内送检者，应在采水点即将水样加入培养基中，摇匀，室温下运送至实验室。,2.滤膜浓缩法：,膜浓缩法适用于澄清的水样。,一般情况下，水中志贺菌数量不多，不容易分离出来，必须先通过富集、增菌培养阶段，而后再进行分离。取一定量水样，以,硝酸纤维素滤膜（孔径为0.45,m），,经超滤装置进行过滤后，打开滤器。以无菌镊子轻取下滤膜，放于培养基平板上，放时须使过滤面朝上紧贴平板面放置培养。或者将滤膜全部放入GN增菌液中，在37,下培养。,培养时间不得超过24小时。因为培养时间长会使铜绿假单胞菌、变形杆菌等非致病性细菌过度生长，影响志贺菌的分离。,（三）临床标本的采集方法,1.粪便标本,粪便标本,是检测细菌、病毒、寄生虫、毒素等的,常用标本,。,若有明确的检测方向，如怀疑是细菌感染或病毒感染，则优先采集,新鲜粪便5g,。,当致病原因不明时，每个病例的粪便应分为三份（每份5g）、肛拭子采集3个，分别按照细菌、病毒和寄生虫检验要求进行保存。,细菌检验的标本,用于细菌检测的粪便、肛拭子，需插入运送培养基底部，将顶端折断，并将螺塞盖旋紧。标本应4冷藏保存。若怀疑是,副溶血性弧菌感染，标本应常温运送，不可冷藏。,病毒检验的标本,用于病毒学检测的粪便、肛拭子需置于2ml病毒保存液中。标本应立即冷冻保存。,如采样现场无冷冻条件，标本应4冷藏，并尽快送至有冷冻条件的实验室。,标本保存和运送过程中，必须记录冷藏或冷冻的温度和时间。,寄生虫检验的标本,寄生虫检测需要新鲜粪便5g，按1份粪便对3份防腐剂的比例,加入防腐剂,溶液（10%福尔马林或 10%聚乙烯醇）在,室温条件下储存和运送。,如果暂,无防腐剂，,可将未处理粪便标本,置4冷藏（但不能冷冻）48小时。,一般采用,自然留便,，若采样时病人无便或婴幼儿则可采用,肛拭法,。,留便：用2个棉拭子分别在自然排出的,新鲜粪便,中,可疑部分多点挑取，,采集约5g标本。腹泻病人应取,脓、血、粘液等异常部分,。,液体粪便取絮状物,约5ml。,肛拭法：先用无菌甘油水或生理盐水湿润棉签，多余的液体紧靠管壁挤出；再用棉拭子由肛门插入直肠内约3cm5cm（幼儿约2cm3cm）处，轻轻旋转一圈，擦取直肠表面黏液后取出。避免采便量过少（,注意棉签上应沾有粪便,）。,2.血液标本,采血量成人5-10ml，婴幼儿1-5ml。,根据需要，,血标本分为抗凝和不抗凝两种,，于采集后无菌操作分别注入市售抗凝和不抗凝采集管中。抗凝血用于培养，不抗凝血用于抗体检测。将后者置于室温，待其凝固后送检，或直接离心分离血清送检。,若需采集第二份血，则与第一份血采集时间一般相隔约2周，最短不能少于10天。,3.尿液,尿液标本是化学中毒毒物检测的重要标本。,取病人中段尿液300ml500ml，最好是晨尿，冷藏。,一般尿道病原菌可能在温暖尿液中繁殖，因而排出,尿液应在1小时内接种培养或置4以防细菌生长,。,用导尿管收集尿液虽可减少污染，但多次重复导尿有可能引起逆行性感染,4.呕吐物和洗胃水,呕吐物是病原和毒物检测的重要标本。,患者如有呕吐，应尽量采集呕吐物。,用无菌压舌板或棉拭子挑取少量呕吐物作为检材，放入自封塑料袋中并封好袋口或置于灭菌带盖瓶中，然后盖紧瓶盖，,立即置于冷藏箱中。24小时内送至实验室，但不能冷冻。,洗胃水置于灭菌容器内冷藏送检,5.咽拭子,用植绒、涤纶、棉花或藻酸钙可弯曲的金属拭子，通过鼻子到鼻咽腔转动采取鼻咽标本，置运输培养基中送检。,因藻酸钙可使病毒灭活，因而,藻酸钙拭子不宜用于病毒采样。,用拭子在扁桃体区域、咽后壁以及口腔内炎症、溃疡或渗出部位采样时，可先用清水漱口，以压舌板将舌头压住，避免拭子接触口腔和舌粘膜。,6.脑脊液,以无菌操作进行腰椎穿刺，取脑脊液两份，每份3ml。一份作微生物学检验，另 一作细胞计数及化学分析。,胸水、腹水、心包液及滑囊液均用注射器吸取。这些标本内的微生物数量少而液体量大，应采大量标本送检。,对感染病人腹腔透析液标本，因其含菌量非常低，至少需采50ml。,7.皮肤损害（疖、破损、脓肿、分泌物）标本,食品从业人员的皮肤病灶，有可能是食品污染源,。,采集标本前用生理盐水清洁皮肤，用灭菌纱布按压破损处，用灭菌拭子刮取病灶破损部位的脓血液或渗出液。,如果破损处闭合，则消毒皮肤后用灭菌注射器抽吸标本。标本应冷藏，24小时内运送实验室。,8.手表面,用灭菌棉拭蘸以灭菌生理盐水，涂抹手表面，立即置于采样管中，盖紧管盖，立即置于冷藏箱中。,9.尸体标本,应于死后,尽可能早地无菌采取,，放于无菌容器内，不要使用防腐剂；,对于各种器官标本，解剖器材和盛装容器要分开,。,四、标本采集、保存和送检注意事项,标本应来自感染部位，避免,被其它微生物，特别是,正常微生物群的污染,。必须用无菌器材及无菌操作方法采集样品。,细菌标本,要在发病早期，尤其是要在,药物治疗前,采取。,沙门菌和志贺菌,只在腹泻疾病的,急性期(最初3天),才以可觉察出的数量存在于粪便中,因此，应尽可能在此期间收集到粪便样本,并应从刚排出的粪便中采集血黏液块和上皮细胞片。,细菌标本在采集后应尽快送检，不能在3小时内送达者，宜接种于适宜的培养基运送。对于霍乱样品若置于碱性蛋白胨水中运送，超过8小时者应在实验室接到标本时立即转种一支新的碱性蛋白胨水管，在37,增菌培养68小时后再转种到分离平板上。,病毒标本要注意避免反复冻融。,可在冻存之前将标本分成几小份，或在冻存时加入适当的保护剂如,甘油,或,二甲基亚砜,（DMSO）等。,病毒标本若需,长途运送,，需将标本置于装有,干冰,的可靠的密闭容器内。,在病人体温升高时采集血液标本进行血培养易获得阳性结果，因为这个时间血液循环中微生物的浓度最高。由于体温升高通常不能预知，一般推荐常规血培养至少应间隔1小时，从不同的静脉穿刺位置获得血标本。每一病例应至少采血两次，分别从左、右胳膊采取，间隔1h，以利于提高阳性率和区分感染菌与污染菌。,通常推荐血液加到培养肉汤中去的比例为,1：10，以防止人血清中的杀菌活性物对微生物的影响。,但是血液和肉汤1：5的比例对还未接受高效抗生素的病人也有效。,现在市场上有一种含有,抗生素去除剂,的血培养基，专用于接受过抗生素治疗的败血症病人的血液标本。,如临床表现很似败血症，而血培养多次阴性者，提示考虑厌氧菌和真菌等感染的可能。,当采集脑脊液、尿及分泌物等标本,用于基因扩增,时，采样者,必须戴一次性手套。使用的容器必须密闭、清洁、干燥，防止来自采样者皮屑或分泌物或空气中细菌的污染。,玻璃器皿在使用前应高压处理，因为玻璃器皿常含有不易失活的RNA酶。最好是热灭菌，250烘烤4小时以上可使RNA酶永久性失活。,病人标本含有大量病菌，标本装入试管或小瓶时，注意勿污染容器口外壁,必须妥善包装以防破碎、渗漏等，放在坚固的送检箱内由专人送往检验室，运送过程中注意安全。,对任何容易形成凝块的标本使用抗凝剂是重要的，因为微生物被已凝固的物质包绕，生长起来很困难。多聚茴香脑钠磺酸钠（SPS）是,微生物学标本常用的抗凝剂,，重要的是SPS的浓度不得超过0.025%（W/V）。,肝素是微生物学中常用的抗凝剂之一，但常用于病毒培养,，肝素能抑制革兰氏阳性菌和酵母菌的生长。枸橼酸盐和乙二胺四乙酸（EDTA）不用于微生物学标本。,五、生物安全,1.标本采集时要严格执行生物安全防护要求，防止污染、传播和自身感染。,2.标本采集完毕，首先消毒，然后脱掉防护装备。,3.所有使用过的采样相关物品要带离现场，高压灭菌消毒。,4.采样箱每次用完后要及时消毒处理。,谢谢大家！,