蛋白质沉淀反应.ppt

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,题目：蛋白质沉淀反应,一、实验目的,掌握几种使蛋白质沉淀的方法；,掌握蛋白质可逆沉淀与不可逆沉淀的区别；,理解蛋白质变性和沉淀的关系。,二、原理,蛋白质是亲水胶体，正常状态下，蛋白质分子表面具有,水化膜,和,电荷层,，能保持其胶体溶液的稳定性，在一定因素 的影响下，蛋白质会失去电荷和脱水沉淀。,蛋白质的变性与沉淀之间没有必然联系,蛋白质沉淀反应,（一）蛋白质的盐析作用,（二）乙醇沉淀蛋白质,（三）重金属盐类沉淀蛋白质,（四）生物碱试剂沉淀蛋白质,（一）蛋白质的盐析作用,加盐类如硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等可以破坏蛋白 质胶体周围的水膜，同时又中和了蛋白质分子的电 荷，因此使蛋白质产生沉淀，这种加盐使蛋白质沉 淀析出的现象称盐析。,盐溶现象为低盐浓度可使蛋白质的溶解度增加，实 验时要加足够量的盐。,蛋白质的盐析作用是可逆过程，用盐析方法沉淀蛋 白质时，较少引起蛋白质变性，经透析或用水稀释 时又可溶解。,（二）乙醇沉淀蛋白质,有机溶剂如酒精、丙酮等可使蛋白质产生沉淀，这 是由于这些有机溶剂和水有较强的作用，破坏了蛋 白质分子周围的水膜，因此发生沉淀作用。若及时 将蛋白质沉淀与丙酮或乙醇分离，蛋白质沉淀则可 重新溶解于水中。,（三）重金属盐类沉淀蛋白质,溶液,pH,在蛋白质等电点以上时，重金属盐类,(,如,Pb2+,、,Cu2+,、,Hg2+,及,Ag+,等,),易与蛋白质结合成不 溶性盐而沉淀。,重金属盐类沉淀蛋白质通常比较完全，故常用重金 属盐除去液体中的蛋白质。但应注意，在使用某些 重金属盐,(,如硫酸铜或醋酸铅,),沉淀蛋白质时，不可 过量，否则将引起沉淀再溶解。此时的溶解为生成 憎水胶体的缘故。,（四）生物碱试剂沉淀蛋白质,生物碱是植物中具有显著生理作用的,类含氮的碱 性物质。凡能使生物碱沉淀，或能与生物碱作用产 生颜色反应的物质，称为生物碱试剂。如鞣酸、苦 味酸和磷钨酸等。,当蛋白质溶液,pH,值低于其等电点时，蛋白质为阳离 子，能与生物碱试剂的阴离子结合成性盐而沉淀。,溶液中的蛋白亦能被有机酸沉淀，其中以三氯醋酸 的作用最为灵敏而且特异。因此被用于蛋白质的首 选沉淀剂，只能沉淀蛋白质，不能沉淀其水解产物，加热可除去。,三、实验材料,实验材料：鸡卵清蛋白液，吸管（,1mlx4,，,2mlx4,，,0.5mlx1,，,5mlx2,），试管（,1.5x15cmx14,），水浴锅，滴管，电炉,实验试剂：苯酚（,0.5%,），硫酸铜（,1%,），硫酸铵固体，,95%,乙 醇，,NaCl,，醋酸铅，鞣酸，苦味酸，冰醋酸,四、操作步骤,五、问题与讨论,1,、本次实验结果如何？,2,、蛋白质可逆沉淀和不可逆沉淀有什么区别？,