动物细胞融合与单克隆抗体PPT课件.ppt

<p>1.动物细胞与植物细胞的差别：无细胞壁全能性受限制，不能发育成杂种动物动物细胞杂交与植物细胞杂交的不同：不需去除细胞壁不能发育成新的动物个体2.一、一、动物物细胞融合（胞融合（细胞胞杂交）交）P P52521 1、概念、概念：指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。2 2、结果果：形成单核的杂交细胞3 3、原理、原理：细胞膜的流动性4 4、诱导方式方式物理法：离心、振动、电激化学法：聚乙二醇（PEG)生物法：灭活的病毒5 5、动物物细胞融合胞融合过程程(利用利用灭活仙台病毒活仙台病毒是是动物物细胞融合所胞融合所特有的。特有的。病毒外壳病毒外壳上的某些糖蛋白可上的某些糖蛋白可能有促能有促进细胞融合胞融合的功能。的功能。)思考思考思考思考讨论讨论：为为什么什么什么什么细细胞融合胞融合胞融合胞融合过过程中使用的病程中使用的病程中使用的病程中使用的病毒需要毒需要毒需要毒需要灭灭活？不活？不活？不活？不灭灭活行活行活行活行吗吗？不不灭活的活的话会感染胞，而不能会感染胞，而不能诱导细胞融合胞融合3.4.不同不同DNADNA的两个的两个细胞胞灭活病毒活病毒诱导细胞融合胞融合融合后的融合后的细胞胞进行有行有丝分裂分裂5 5、动物物细胞融合胞融合过程程5.6 6、意、意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。7 7、应用用：成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段 特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗体阅读课本53页6.总结：比：比较植物体植物体细胞胞杂交和交和动物物细胞融合胞融合比比比比较项较项目目目目植物体植物体植物体植物体细细胞胞胞胞杂杂交交交交动动物物物物细细胞融合胞融合胞融合胞融合原原原原 理理理理融合前融合前融合前融合前处处理理理理诱诱 导导 方方方方 法法法法用用用用 途途途途细细胞膜的流胞膜的流胞膜的流胞膜的流动动性、性、性、性、植物植物植物植物细细胞的全能性胞的全能性胞的全能性胞的全能性细细胞膜的流胞膜的流胞膜的流胞膜的流动动性性性性用用用用纤维纤维素素素素酶酶、果胶果胶果胶果胶酶酶去壁去壁去壁去壁用胰蛋白用胰蛋白用胰蛋白用胰蛋白酶酶使使使使细细胞分散胞分散胞分散胞分散物理、化学方法物理、化学方法物理、化学方法物理、化学方法物理、化学、物理、化学、物理、化学、物理、化学、生物方法生物方法生物方法生物方法获获得部分得部分得部分得部分或完整植株或完整植株或完整植株或完整植株主要用于制主要用于制主要用于制主要用于制备备单单克隆抗体克隆抗体克隆抗体克隆抗体7.提问？1.1.抗体是由何种抗体是由何种细胞胞产生的？生的？效效应B B细胞（胞（浆细胞）。胞）。2.2.一个淋巴一个淋巴细胞胞(浆细胞胞)能分泌多种抗体能分泌多种抗体吗？每一个淋巴每一个淋巴细胞只分泌胞只分泌一种一种特异性抗体。特异性抗体。3.3.简述述获得抗体的得抗体的传统途径？途径？抗原抗原 动物体物体 抗体抗体 抗原不抗原不纯 抗体不抗体不纯二、二、单克隆抗体克隆抗体刺激浆细胞8.体外培养淋巴体外培养淋巴细胞能无限增殖胞能无限增殖吗?怎怎样解解决决这个个问题？4.4.这种方法种方法获得的抗体有什么缺陷？得的抗体有什么缺陷？产量低，量低，纯度低，特异性差度低，特异性差9.一个一个B B淋巴淋巴细胞只分泌一种特异性抗体胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤骨髓瘤细胞能无限增殖胞能无限增殖杂交瘤交瘤细胞胞动物物细胞培养技胞培养技术设计方案：方案：动物物细胞融合技胞融合技术单克隆克隆抗体抗体 既能既能产生特异性抗体，生特异性抗体，又能大量繁殖的又能大量繁殖的细胞胞10.THANK YOUSUCCESS2024/3/9 周六11.(1)(1)、原理、原理：杂交瘤细胞具有两个亲本的特性，即能迅速大量增殖，又能足够数量的单一抗体。(2)(2)、过程程12.效效应B B淋巴淋巴细胞胞注射特定注射特定抗原蛋白抗原蛋白骨髓瘤骨髓瘤细胞胞培养骨髓瘤培养骨髓瘤细胞胞融合融合（只考（只考虑两两融合）两两融合）培养液中培养液中细胞有几胞有几种种类型？融合型？融合细胞胞几种几种类型型？骨髓瘤骨髓瘤细胞胞-骨髓瘤骨髓瘤细胞胞B B淋巴淋巴细胞胞-B-B淋巴淋巴细胞胞B B淋巴淋巴细胞胞-骨髓瘤骨髓瘤细胞胞多种多种杂交交细胞胞在具有在具有筛选作用的培养基上培养作用的培养基上培养专一抗体一抗体检验阳性阳性克隆上述克隆上述杂交交细胞胞分开不同分开不同杂交交细胞，克隆胞，克隆专一抗体，一抗体，检验阳性阳性细胞胞单克隆抗体克隆抗体注射到小鼠体内注射到小鼠体内体外培养体外培养1 1、单克隆抗体的制克隆抗体的制备过程程第第第第1 1 1 1次次次次筛选筛选目的：得到目的：得到目的：得到目的：得到杂杂交瘤交瘤交瘤交瘤细细胞（多种）。胞（多种）。胞（多种）。胞（多种）。第第第第2 2 2 2次次次次筛选筛选目的：在目的：在目的：在目的：在杂杂交瘤交瘤交瘤交瘤细细胞中胞中胞中胞中筛选筛选出能出能出能出能产产生生生生单单一抗体的一抗体的一抗体的一抗体的杂杂交瘤交瘤交瘤交瘤细细胞。胞。胞。胞。该细胞胞继承承双双亲细胞胞的的遗传特性，既能特性，既能产生生专一抗体一抗体又能又能无限增殖无限增殖。杂交瘤交瘤细胞有何特点？胞有何特点？特异性特异性强，灵敏度高，灵敏度高产产生相生相生相生相应应的的的的B B B B淋巴淋巴淋巴淋巴细细胞胞胞胞13.2.2.诱导其融合的方法有哪些？其融合的方法有哪些？3.3.融合后培养液中有几种融合后培养液中有几种细胞胞?4.4.怎怎样筛选出出杂交瘤交瘤细胞，胞，杂交瘤交瘤细胞有何胞有何优点点?原因？原因？1.1.注射抗原的目的是什么注射抗原的目的是什么?5.5.为何要何要进行克隆化培养和行克隆化培养和专一抗体一抗体检测，多次，多次筛选?6.6.大量增殖大量增殖杂交瘤交瘤细胞和胞和获得得单抗的方法抗的方法?产产生相生相生相生相应应的的的的B B B B淋巴淋巴淋巴淋巴细细胞胞胞胞选择选择培养基培养基培养基培养基既能在体外无限增殖，也能既能在体外无限增殖，也能既能在体外无限增殖，也能既能在体外无限增殖，也能产产生特定生特定生特定生特定的抗体的抗体的抗体的抗体具有双具有双具有双具有双亲细亲细胞的胞的胞的胞的遗传遗传物物物物质质培养液中或小鼠腹腔中培养培养液中或小鼠腹腔中培养培养液中或小鼠腹腔中培养培养液中或小鼠腹腔中培养从培养液或小鼠腹水中提取从培养液或小鼠腹水中提取从培养液或小鼠腹水中提取从培养液或小鼠腹水中提取14.如何如何进行行杂交瘤交瘤细胞的胞的抗体抗体检测及及克隆化培养克隆化培养？融合后的融合后的细胞胞经选择性培养基培养后，能存活的性培养基培养后，能存活的细胞就是胞就是杂交瘤交瘤细胞。胞。但但这些些杂交瘤交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的胞并非都是能分泌所需抗体的细胞，胞，通常用通常用“有限稀有限稀释法法”来来选择。将将杂交瘤交瘤细胞稀胞稀释，用多孔用多孔细胞培养板培养，使每孔胞培养板培养，使每孔细胞不超胞不超过一个，一个，通通过培养培养让其增殖。然后其增殖。然后检测各孔上清液中各孔上清液中细胞分胞分泌的抗体泌的抗体。那些上清液可与。那些上清液可与特定抗原特定抗原结合的培养合的培养孔孔为阳性孔。阳性孔。阳性孔中的阳性孔中的细胞胞还不能保不能保证是来自是来自单个个细胞，挑胞，挑选阳性孔的阳性孔的细胞胞继续进行有限稀行有限稀释，一，一般需般需进行行3 34 4次，直至确信每个孔中增殖的次，直至确信每个孔中增殖的细胞胞为单克隆克隆细胞胞。该过程即程即为杂交瘤交瘤细胞的克隆化培养。胞的克隆化培养。15.(2)(2)、过程程B淋巴细胞骨髓瘤细胞诱导融合B-B细胞B-瘤细胞瘤-瘤细胞选择培养基第一次第一次筛选杂交瘤细胞（B-瘤细胞）克隆化培养专一抗体检测 第二次第二次筛选相应杂交瘤细胞体外培养小鼠腹腔内增殖单克隆抗体16.(3).(3).单克隆抗体的克隆抗体的应用：用：单克隆抗体的克隆抗体的优点：特异性点：特异性强、灵敏度高、灵敏度高、产量大量大 作作为诊断断试剂：准确：准确识别各种抗原物各种抗原物质，并与，并与特异性特异性结合合 优点：点：准确、高效、准确、高效、简易、快速易、快速用于用于运运载药物：制成物：制成“生物生物导弹”治治疗疾病：主要用于癌症治疾病：主要用于癌症治疗既不既不损伤正常正常细胞，又减少了用胞，又减少了用药剂量。量。17.一种一种诱导细胞融合的新方法胞融合的新方法一种新一种新细胞胞灭活病毒活病毒杂交瘤交瘤细胞胞一个一个优势单克隆抗体特异性克隆抗体特异性强、灵敏度高的灵敏度高的优势18.1 1、科学家用小鼠骨髓瘤、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种胞与某种细胞融合，得到胞融合，得到杂交交细胞，胞，经培养可培养可产生大量的生大量的单克隆抗体，与骨克隆抗体，与骨髓瘤髓瘤细胞融合的是（胞融合的是（）A.A.经过免疫的免疫的B B淋巴淋巴细胞胞 B.B.没没经过免疫的免疫的T T淋巴淋巴细胞胞C.C.经过免疫的免疫的T T淋巴淋巴细胞胞 D.D.没没经过免疫的淋巴免疫的淋巴细胞胞A A19.2.2.动物物细胞融合的目的中最重要的是胞融合的目的中最重要的是-（）A.A.克服克服远缘杂交不交不亲和和 B.B.制制备单克隆抗体克隆抗体 C.C.培育新品种培育新品种 D.D.生生产杂种种细胞胞3.3.动物物细胞融合与植物体胞融合与植物体细胞胞杂交的比交的比较中，正确的是（中，正确的是（）A.A.诱导融合的方法完全相同融合的方法完全相同 B.B.所用的技所用的技术手段基本相同手段基本相同 C.C.所采用的原理完全相同所采用的原理完全相同 D.D.都能形成都能形成杂种种细胞胞 B B D D20.4.4.单克隆抗体制克隆抗体制备过程中培育的程中培育的杂交交细胞是胞是-（）A.A.由小鼠能由小鼠能产生抗体的生抗体的B B淋巴淋巴细胞与肝胞与肝细胞融合胞融合 B.B.由小鼠一个由小鼠一个B B淋巴淋巴细胞胞诱导融合而成融合而成 C.C.由小鼠一个由小鼠一个B B淋巴淋巴细胞与肌瘤胞与肌瘤细胞胞诱导融合而成融合而成 D.D.由小鼠一个由小鼠一个B B淋巴淋巴细胞与骨髓瘤胞与骨髓瘤细胞胞诱导融合而成融合而成 D D21.THANK YOUSUCCESS2024/3/9 周六22.</p>