ANCA荧光判读与讲解教学文案.ppt

Klicken Sie,um das Titelformat zu bearbeiten,Klicken Sie,um die Formate des Vorlagentextes zu bearbeiten,Zweite Ebene,Dritte Ebene,Vierte Ebene,Fnfte Ebene,EUROIMMUN,抗中性粒细胞胞浆抗体（,ANCA,）,相关疾病,IIF,染色型 特异性靶抗原抗体,韦格纳氏肉芽肿(,WG)c,p(,少见),PR3(85%),MPO(10%),显微型多动脉炎(,MPA)c,p PR3(30%),MPO(70%),坏死性新月体肾小球肾炎,p,c(,少见),PR3(25%),MPO(65%),（NCGN）,过敏性肉芽肿性血管炎(,CSS)p,c(,少见),PR3(10%),MPO(60%),结节性多动脉炎(,PAN),低阳性率,PR3(5%),MPO(15%),抗肾小球基底膜疾病,p MPO(30%),（,抗,GBM,病）,ANCA,临床意义(1)：原发性系统性小血管炎,相关疾病,IIF,染色型 特异性靶抗原抗体,炎症性肠病,溃疡性结肠炎(,UC,60-80%)p,a BPI,lamina？,其它,克罗恩病(,Crohns,病,10-20%),p,a BPI,lamina？,其它,自身免疫性肝病,原发性硬化性胆管炎(,PSC,70-88%)p,a actin?BPI,其它,原发性胆汁性肝硬化(,PBC,3-18%)p,a actin?BPI,其它,自身免疫性肝炎(,AIH)p,a actin?BPI,其它,结缔组织病,系统性红斑狼疮(,SLE)p,a LF,CG,MPO(,少见),类风湿性关节炎(,RA)p,a LF,CG,MPO(,少见),Felty,综合征,p,a LF,CG,MPO(,少见),ANCA,临床意义(2)：,IBD/ALD/CTD,相关疾病,IIF,染色型 特异性靶抗原抗体,药物性,ANCA,阳性血管炎,药物性狼疮(,DIL)p MPO（,常见）,LF,HEL,甲状腺功能亢进(,PTU,治疗),p,a MPO,LF,HEL,BPI,其它,呼吸系统炎性疾病,囊性纤维化(,CF)a,p BPI（91%）,原发性支气管扩张症,a,p BPI，,其它,原发性支气管扩张,a,p BPI，,其它,感染性疾病,细菌(心内膜炎、呼吸道感染),a,p BPI，CG，,其它,病毒(,HIV,感染),a,p,不明,真菌(着色真菌病),a,p,不明,原虫(急性疟疾、侵袭性阿米巴感染),a,p CG，PR3,ANCA,临床意义(3)：药物性/感染性疾病,ANCA,检测方法及检测指标,ANCA(,抗中性粒细胞胞浆抗体,),ANCA,=,A,nti-,N,eutrophil,C,ytoplasm,A,utoantibodies,中性粒细胞结构：,细胞直径,10-12um,，核呈深染的弯曲杆状（马蹄铁形）或分叶状，分叶核一般为,25,叶，叶间有前戏的缩窄部相连。,ANCA(,抗中性粒细胞胞浆抗体,),欧蒙公司产品基质是从,O,型血的人血中提取出来的中心粒细胞。,ANCA,的靶抗原位于中心粒细胞胞浆中，,ANCA,是从间接免疫荧光法中发现的。,ANCA,分两种：,cANCA,及,pANCA,。,ANCA,检测方法及指标,间接免疫荧光法,ELISA,方法,/,欧蒙印迹法,ANCA,检测和报告的国际公识,(Savige,van der Woude,Wiik et al.,1999),IIFT,单特异性,ELISA,检测,结果,最低检测,最优检测,阴性,阳性,间接免疫荧光法是检测,ANCA,的经典方法,特点：敏感性高，半定量，是区分,cANCA,和,pANCA,的基础,局限性：间接免疫荧光法测定的是总,ANCA,，不能区分靶抗原，需要确认实验作为补充,间接免疫荧光法检测,ANCA,核周型,ANCA（pANCA）,胞浆型,ANCA（cANCA）,间接免疫荧光法检测,ANCA,细胞核周围呈现平滑的带状荧光，细胞核阴性,细胞浆呈现不均匀的颗粒样荧光，有时形成小团块或粗大颗粒，核分叶处有荧光增强,两种,ANCA,荧光染色成因,甲醛的强固定作用细胞浆中,ANCA,抗原如,MPO,不能从嗜天青颗粒中释放，表现为胞浆内均一的荧光染色即,c-ANCA,无水乙醇固定时，,MPO,等抗原物质可以从嗜天青颗粒中释放出来，由于电荷作用吸附在细胞核周围形成,p-ANCA,ANCA,筛查,:,免疫荧光,粒细胞,(,乙醇固定,),粒细胞,(,甲醛固定,),猴肝,HEp-2,cANCA,ANCA,判读,建议,读片顺序：,粒细胞,(,乙醇固定,),粒细胞,(,甲醛固定,),HEP-2,猴肝,判读,基质,提示,注意,粒细胞,(,乙醇固定,),GRANULOC.,EOH,1,）,ANCA,阴阳性,2,）,cANCA,或,pANCA,ANA,阳性,粒细胞,(,甲醛固定,),GRANULOC.,HCHO,1,）,cANCA,：进一步提示是否,2,）,pANCA,：甲醛敏感型或抗性,ANA,阳性,HEP-2,ANA,阴阳性,辅助判读,猴肝,HEPAR PRIM,1,）,ANA,阴阳性,2,）,ANCA,：粒细胞是否荧光增强,辅助判读,cANCA,pANCA,HEp-2 cells,cANCA,粒细胞,(,乙醇固定,),粒细胞,(,甲醛固定,),猴肝,1,3,4,2,cANCA:,靶抗原,蛋白酶,3,(PR3),杀菌性,/,通透性增强蛋白,(BPI;CAP57),其它未知抗原,cANCA:,相关疾病,韦格纳肉芽肿（,WG,）,-,典型的,WG,：可逐渐发展成为肾小球肾炎,90%,-,局限性的,WG,：可不累及肾小球,70%,显微镜下多动脉炎（,MPA,）,up to 30%,变应性肉芽肿性血管炎（,Churg-Strauss,综合征）,10-20%,结节性多动脉炎(,PAN),5-10%,注意区分,ANA,对荧光模型的干扰,ANA homogen,Nuclear dots,Centromere,ANA nucleolar,Scl-70,Sm/RNP,SS-A/SS-B,Nuclear memb.,Ribosomes,Mitochondria,Golgi apparat.,Lysosomes,Actin,Vimentin,抗溶酶体抗体,粒细胞,(,乙醇固定,),猴肝,粒细胞,(,甲醛固定,),HEp-2 cells,1,3,4,2,pANCA,pANCA,（甲醛抗性）,粒细胞,(,乙醇固定,),猴肝,粒细胞,(,甲醛固定,),HEp-2 cells,HEp-2 cells,1,3,4,2,pANCA,（甲醛敏感）,粒细胞,(,乙醇固定,),猴肝,粒细胞,(,甲醛固定,),HEp-2 cells,1,3,4,2,pANCA:,靶抗原,髓过氧化物酶,(MPO;,甲醛固定,;,甲醛抗性,),乳铁蛋白,弹性蛋白酶,组织蛋白酶,G,（甲醛敏感）,杀菌性,/,通透性增强蛋白,(BPI;CAP57),-,烯醇化酶,-,葡萄糖醛酸酶,溶菌酶,Azurocidine (CAP37),.,请参考上文,2-4,页相关疾病与其靶抗原,pANCA:,相关疾病,原发性血管炎（,MPO,）,显微镜下多动脉炎,42-70%,变应性肉芽肿性血管炎,18-60%,结缔组织病,SLE 9-25%,类风湿性关节炎,3-20%,慢性炎症性肠病 溃疡性结肠炎,76%,克隆恩氏病,7%,自身免疫性肝病 原发性硬化性胆管炎,87%,AIH type 1 /PBC?,注意区分,ANA,对荧光模型的干扰,ANA homogen,Nuclear dots,Centromere,ANA nucleolar,Scl-70,Sm/RNP,SS-A/SS-B,Nuclear memb.,Ribosomes,Mitochondria,Golgi apparat.,Lysosomes,Actin,Vimentin,ANA+pANCA,与,ANA,猴肝,猴肝,ANA+pANCA,ANA,HEp-2 cells,粒细胞,(,乙醇固定,),粒细胞,(,甲醛固定,),粒细胞,(,甲醛固定,),均质型,ANA,的干扰,粒细胞,(,乙醇固定,),猴肝,粒细胞,(,甲醛固定,),HEp-2 cells,1,3,4,2,核膜型,ANA,的干扰,猴肝,粒细胞,(,甲醛固定,),HEp-2 cells,粒细胞,(,乙醇固定,),1,3,4,2,ANA+pANCA,（甲醛抗性）,粒细胞,(,乙醇固定,),猴肝,粒细胞,(,甲醛固定,),HEp-2 cells,1,3,4,2,ANA+pANCA,（甲醛敏感）,粒细胞,(,乙醇固定,),猴肝,HEp-2 cells,粒细胞,(,甲醛固定,),1,3,4,2,粒细胞,(,乙醇固定,),粒细胞,(,甲醛固定,),猴肝,HEp-2,细胞,1,3,4,2,ANA,干扰,ANCA,阴性,EUROIMMUN,猴肝,HEp-2,细胞,粒细胞,(,乙醇固定,),粒细胞,(,甲醛固定,),1,3,4,2,阴性,EUROIMMUN,猴肝,HEp-2,细胞,粒细胞,(,乙醇固定,),粒细胞,(,甲醛固定,),1,3,4,2,甲醛抗性,pANCA,EUROIMMUN,猴肝,HEp-2,细胞,粒细胞,(,乙醇固定,),粒细胞,(,甲醛固定,),1,3,4,2,甲醛抗性,pANCA,猴肝,HEp-2,细胞,粒细胞,(,甲醛固定,),粒细胞,(,乙醇固定,),1,3,4,2,ANCA,阴性,ANCA,常见问题答疑,关于,ANCA,：,理论知识：,一、,实验结果与理论知识不符,荧光模型,靶抗原,C-ANCA,PR3,P-ANCA,（甲醛抗性）,MPO,P-ANCA,（甲醛敏感）,Other(BPI,LF),IFT,为,C-ANCA,，靶抗原为,MPO,结果的解释,（,1,）,作者证明了抗,MPO,抗体成为,C-ANCA,的原因：抗,MPO,抗体为一组异质性抗体，其中某个亚群的靶抗原（即,MPO,蛋白）被与乙醇反应后不会向胞膜移动。,IFT,为,C-ANCA,，靶抗原为,MPO,样本稀释后实验结果：,IFT,为强,C-ANCA+,弱,pANCA,靶抗原结果为：弱,MPO+,强,BPI,结果的解释,（,2,）,提醒：,强,C-ANCA,有时会掩盖弱,pANCA;,ANCA,的靶抗原检测多数医院还是很有局限,ANCA,谱,ELISA-,可同时检测,6,种靶抗原,蛋白酶,3,乳铁蛋白,髓过氧化物酶,弹性蛋白酶,组织蛋白酶,G,BPI(CAP57),cANCA,pANCA,cANCApANCA,二、检测方法学选择上的问题,仅,RP3,和,MPO,仅定性，无定量,单基质,/,两基质片，,未排除,ANA,干扰,仅,IIF,临床应用范围受限,降低疾病特异性,假阳性,给临床信息少,国内,ANCA,临床常规检测存在的问题,两种方法联合使用,，可提高,ANCA,临床应用价值,原发性系统性小血管炎患者约5,%IIFT,阴性而,ELISA,阳性,ANCA,检测方法的合理选择,据国内外报道，采用,IIF,在,SLE,中检测,ANCA,，阳性率差异很大，,16%,-69%,，主要为,pANCA,仅采用乙醇片判断，,ANA,干扰大,据欧蒙检测数据，,SLE,中单独采用乙醇固定抗原片检测,ANCA，,由于,ANA,干扰可产生31,.,2%的假阳性结果，主要为均质型的,ANA（,占77,.8%）,推荐：,IIF,法检测,ANCA,提倡应用组合抗原片（甲醛固定片、乙醇固,定片、,Hep-2,细胞片等），综和判断结果，避免,ANA,干扰，提高,ANCA,临床应用价值,ANCA IIF,法检测的影响因素,-ANA,需求：,抗,PR3,及,MPO,抗体滴度与病情活动一致,疗效判断、复发指标,特异性：,低效价,MPO,抗体偶见于,CTD,患者等非血管炎患者，高滴度的,抗,MPO,抗体更多见于原发性小血管炎,结论：临床常规检测,ANCA,应报告定量或半定量检测结果。,IIF,法：将血清作倍比稀释后（1:10、1:,100,）检测,ELISA,法：应选择可定量或相对定量的检测试剂盒,三、,ANCA,的定量或半定量检测的选择,Thank you!,