革兰阴性需氧和兼性厌氧杆菌鉴定ppt课件.pptx

微生物学检验微生物学检验第八章 革兰阴性需氧和兼性厌氧杆菌鉴定返回总目录返回总目录本 章 内 容第一节 肠杆菌科1第二节 非发酵革兰阴性杆菌2第三节 弧菌科3第四节 其他革兰阴性苛养菌4学习目标及重点学习目标：1掌握：肠杆菌科的共性及常见细菌的微生物检验；非发酵菌革兰阴性杆菌的共同特性；铜绿假单胞菌生物学性状、微生物学检查及临床意义;霍乱弧菌主要生物学特性；临床常见革兰阴性苛养菌的微生物学检验方法2熟悉：肠杆菌科细菌的临床意义；不动杆菌属和产碱杆菌属生物学性状、微生物学检查及临床意义；霍乱弧菌微生物常规检验程序和方法3了解：莫拉菌属等其他非发酵革兰阴性杆菌生物学性状、微生物学检查及临床意义；副溶血性弧菌的主要生物学特性，微生物学常规检验方法；临床常见革兰阴性苛养菌的生物学特性1.肠杆菌科常见菌属的鉴定、血清学诊断，与非发酵菌、弧菌科的鉴别2.铜绿假单胞菌、霍乱弧菌鉴定要点本章重点：第一节 肠杆菌科概 述是栖居在人和动物的肠道内的一大群形态、生物学性状相似的革兰阴性杆菌通过粪口途径进行传播，引起肠道感染或肠外感染广泛分布在自然界中，包括植物、土壤、水以及人和动物的肠道中，多数是正常人肠道菌群的正常菌群，可引起医院感染。条件致病菌临床可查到四十种以上 肠杆菌科细菌包括：埃希菌属志贺菌属沙门菌属耶尔森菌属变形杆菌属克雷伯菌属摩根菌属枸橼酸菌属肠杆菌属沙雷菌属等致病菌肠道正常菌群条件致病菌医院感染 第一节 肠杆菌科肠杆菌科共同特点形态结构 G-小杆菌，无芽孢，多数有鞭毛及菌毛培养特性 需氧或兼性厌氧营养要求不高，普通培养基可生长，菌落相似，形成灰白色中等大小,S型菌落，常用肠道选择培养基培养氧化酶阴性，发酵葡萄糖，硝酸盐还原实验阳性 第一节 肠杆菌科生化反应:活跃，常用于鉴别肠道杆菌。发酵葡萄糖产酸或产酸产气，氧化酶（-），触媒（+），还原硝酸盐抵抗力：不强。耐受胆盐，抵抗多种染料的抑菌作用抗原结构:菌体（O）抗原鞭毛（H）抗原表面（K、Vi）抗原易出现各种变异：耐药性（重要）第一节 肠杆菌科初步鉴定到科的特征初步鉴定到科的特征葡萄糖发酵（+）硝酸盐还原（+）氧化酶（-）触酶（+）痢疾志贺菌除外结合血清学鉴定到属、种（型）硝酸盐还原试验硝酸盐还原试验阳性：红色阳性：红色 阴性：淡黄色阴性：淡黄色 氧化酶试验氧化酶试验阳性：紫红色阳性：紫红色 阴性：无色阴性：无色 第一节 肠杆菌科一、埃希菌属（Escherichia）大肠埃希菌镜下形态（上革兰染色、鞭毛染色，下电镜观察）(一）生物学特性形态染色：符合肠杆菌特点，周鞭毛菌，有菌毛培养特性：符合肠杆菌特点 EMB紫黑色有金属光泽 S-S桃红色生化反应：IMViC（+-）,见教材表格。抗原O 抗原（O1-O173）H 抗原（H1-H56）K 抗原（K1-K100）血清型表示法：O：K：H20大肠埃希菌菌落特征（MAC）EMB平板上的E.coli(一）生物学特性大肠埃希菌大肠埃希菌KIAKIA（AAAA）MIUMIU（）（）(一）生物学特性大肠埃希菌大肠埃希菌IMViCIMViC试验（）试验（）右侧为对照（）右侧为对照（）(一）生物学特性埃希菌属鉴定特征靛基质（+）甲基红（+）枸橼酸盐（-）尿素（-）发酵多种糖产酸产气氧化型发酵型产碱型肠杆菌科与其它革兰阴性杆菌区别 （二）临床意义1.致病物质除内毒素、荚膜肠杆菌科共有的毒力因子外，大肠埃希菌具有独特的毒力因子有：黏附素具有高度特异性 吸附、定植、致病外毒素（由ETEC产生的肠毒素）不耐热肠毒素（heat labile toxin，LT），加热 65、30分钟即被破坏；耐热肠毒素（heat stable toxin，ST），100、20分钟仍不被破坏，LT和ST均可使肠道细胞中cAMP的水平升高，引起肠液大量分泌而导致腹泻2.所致疾病：肠道外感染（内源性感染）1.化脓性感染定位转移腹膜炎、阑尾炎、创伤感染、手术刀口感染、肺炎、败血症、新生儿脑膜炎等2.泌尿道感染病原菌来自病人肠道（上行性）占泌尿道感染首位、女性多见（尿道炎、膀胱炎、肾盂肾炎等）（二）临床意义引起肠道感染的大肠埃希菌的主要致病特征菌株致病机制感染类型主要临床表现发病年龄危险因素ETECLT和ST腹泻，旅行者腹泻大量水样便，腹痛、恶心、脱水成人、儿童旅行EPEC黏附因子急性腹泻水样便、发热、呕吐、黏液便2岁婴儿、成人EIEC侵入结肠黏膜上皮志贺样脓血便脓血便，便中含红、白细胞和黏液，发热、腹痛成人旅行EHEC类志贺毒素腹泻、出血性肠炎腹泻（无WBC），腹痛、血便、发热、HUS儿童、老人未熟牛肉牛奶EAEC未明急、慢性腹泻水泻、呕吐所有年龄耐药性耐药性耐药性越来越严重：产超广谱-内酰胺酶（ESBL)比例增高，对青霉素类和14代头孢菌素及单环菌素耐药，仅对头霉素类、碳青霉烯类、含酶抑制剂类抗生素敏感。（三）微生物学检验肠道外感染标本涂片、染色分离培养鉴定尿路感染时每ml尿含菌10万，有诊断价值肠道内感染用弱选择性培养基分离培养+生化反应+血清分型+毒素测定+核酸检测等大肠埃希菌检验程序1）ETEC 生化反应加血清分型加肠毒素测定2）EPEC 生化反应加血清分型，用多价抗血清检测其O抗原3）EIEC 生化反应血清分型加毒素测定4）EHEC 血清分型加生化反应各个血清型的鉴定 二、沙门菌属 是肠杆菌科中最复杂的菌属，有2000种以上血清型，对人类有致病性。肠热症伤寒沙门菌，甲型副伤寒沙门菌、乙型伤寒沙门菌、丙型伤寒沙门菌食物中毒鼠伤寒沙门菌、猪霍乱沙门菌、肠炎沙门菌败血症猪霍乱沙门菌最常见（一）生物学性状形态染色符合肠杆菌特点，多为周毛菌，有菌毛伤寒沙门菌菌落特征（伤寒沙门菌菌落特征（SSSS）培养特点无色细小菌落。有些能产生硫化氢的菌株，在SS琼脂上形成中心黑色的菌落生化反应乳糖（-），葡萄糖（+）/+，多数H2S+，动力+，尿素（-），甲基红（+），枸橼酸盐利用（+），赖氨酸脱羧酶（+），产酸产气伤寒沙门菌KIA结果（K A）MIU（）沙门菌IMViC试验（）（一）生物学性状抗原结构O抗原特异性低、稳定、分群（组）H抗原特异性高，不稳定，分型Vi抗原（毒力抗原）不稳定，可阻止“O”凝集抵抗力：不强（一）生物学性状肠热症临床过程潜伏期2周发病初期：第1W（第一次菌血症）、高热、肝脾肿大、皮疹、WBC等全身中毒症状，此期血液（80%）、骨髓90%（+）有大量细菌（二）临床意义菌毛穿入淋巴液胸导管第二次菌血症迟发型变态反应肠壁坏死、溃疡高热、肝脾肿大、玫瑰疹、白细胞等全身中毒症状肝 脾 肾 淋巴结 胆囊尿排菌 粪便排菌发病期（1-4W）潜伏期2W肠热症发病机制 伤寒沙门菌等经口吸附小肠黏膜细胞上在肠壁、肠系膜淋巴组织中繁殖（致敏）血流（第一次菌血症）肠出血、肠穿孔胃肠炎（食物中毒）潜伏期短，624小时，起病急，病程短24天，发热、恶心、呕吐、腹痛、腹泻败血症经口感染，经肠道入血，败血症症状明显而肠道症状不明显带菌者 健康带菌者，恢复期带菌者免疫性肠热症，病后免疫牢固，其它可重复感染（二）临床意义（三）微生物学检验分离培养与鉴定标本采取肠热症：第12周，血；第23周，粪便、尿；全过程骨髓培养食物中毒：粪便、呕吐物、可疑食物败血症：血带菌者：粪便分离鉴定：增菌（血、骨髓）EMB、SS生化反应血清鉴定沙门菌检验程序 、血清学诊断肥达反应（Widal）-原理 用已知伤寒沙门氏菌O抗原及H抗原，以及引起副伤寒的沙门氏菌H抗原与待检血清作凝集试验，测定待检血清中有无相应抗体及其效价。（TO、TH、PA、PB）-方法：试管凝集法（定量）-结果分析：TO80，TH160，PA、PB均80才有意义-动态观察：双份血清抗体四倍升高有诊断意义-临床意义 O抗体（IgM），H抗体（IgG）O、H抗体均升高，患伤寒的可能性大O、H抗体不升高，患伤寒的可能性小只有H升高，则可能是预防接种过或非特异性回忆反应只有O升高而H不高，则可能是感染早期或其他沙门菌的交叉反应三、志贺菌（痢疾杆菌）志贺菌形态特征（一）生物学性状形态染色符合肠杆菌特征，有菌毛，无鞭毛，无动力是本菌与其它肠道致病菌主要区别点培养特性肠道鉴别培养基上的无色透明、乳糖不发酵菌落生化反应葡萄糖（+）、乳糖（-）（宋内志贺菌迟缓发酵乳糖）、H2S（-）、尿素（-）、动力（-）志贺菌志贺菌KIAKIA结果（结果（KAKA）MIUMIU（）（）志贺菌志贺菌IMViCIMViC试验结果（）试验结果（）（一）生物学性状抗原分类根据O抗原分4群，40余型A群痢疾志贺菌（10）B群福氏志贺菌（13）C群鲍氏志贺菌（18）D群宋氏志贺菌（1）抵抗力 比其它肠杆菌弱，尤其对酸敏感（一）生物学性状（二）致病性与免疫性致病物质侵袭力 菌毛：黏附肠黏膜上皮细胞 型分泌系统穿透上皮细胞并扩散、传播内毒素 强烈内毒素，作用于局部并可吸附入血引起全身症状外毒素A群（、型）产生志贺毒素（ST），有3种生物活性（1）肠毒素：类似ETEC毒素、霍乱肠毒素作用水样泻（2）细胞毒性：对人肝细胞、肠黏膜细胞有毒性，引起变性坏死（3）神经毒性：损伤动物神经系统（麻痹、死亡）细菌（菌毛）吸附肠黏膜上皮细胞穿入细胞并扩散周围及深入黏膜下层释放内毒素、外毒素肠局部黏膜炎症（变性、坏死、脱落）出血、坏死、溃疡脓血便/黏液血便刺激肠壁植物神经肠蠕动肠肌痉挛腺体分泌水分吸收腹痛、腹泻刺激直肠肛门括约肌里急后重便数增加吸收入血发热、白细胞高热、休克中毒性脑病、DIC毒血症中毒性菌痢死亡（二）致病性与免疫性所致疾病细菌性痢疾传染源：病人、带菌者传播途径：经口致病机制临床类型急性菌痢中毒性菌痢慢性菌痢带菌者免疫力:不牢固，易再感染（二）致病性与免疫性（三）微生物学检验在抗生素使用前采集新鲜粪便中脓、血、黏液部分，床边接种或立即送检，不能及时接种者可用卡-布运送培养基送检，昏迷不能排便病人可用肛拭取样。微生物学检查分离鉴定毒力实验快速诊断志贺菌检验程序 四、克雷伯菌属（7个种）(一）生物学特性肺炎克雷伯菌（3个亚种）的肺炎亚种，与人类感染有关G-球杆菌，无动力，有较厚的荚膜，多有菌毛普通平板呈M型菌落（易拉成丝）存在正常人体，目前为除大肠埃希菌以外最重要的条件致病菌肺炎克雷伯菌革兰染色阴性杆菌，无动力荚膜肿胀试验阳性肺炎克雷伯菌的菌落特征（左血琼脂平板，右MAC平板）克雷伯菌属鉴别菌落较大，黏稠，挑取时易拉成丝肺炎克雷伯菌黏丝试验肺炎克雷伯菌肺炎克雷伯菌KIAKIA（A AA A ）、）、MIUMIU（）（）肺炎克雷伯菌黏丝试验肺炎克雷伯菌肺炎克雷伯菌IMViCIMViC试验（）试验（）肺炎克雷伯菌粘丝试验克雷伯菌属的细菌多感染免疫力低下的人群，是医院感染中最重要的条件致病菌肺炎克雷伯菌是临床标本中常见的细菌，可引起典型的原发性肺炎该菌在正常人口咽部的带菌率为1%6%，在住院患者中可高达20%，是酒精中毒者、糖尿病和慢性阻塞性肺部疾病患者并发肺部感染的潜在的危险因素（二）临床意义所致疾病肺炎、脑膜炎、腹膜炎、泌尿系统感染、败血症肺炎克雷伯菌肺炎亚种还能引起各种肺外感染，包括肠炎和脑膜炎（婴儿），泌尿道感染（儿童和成人）及菌血症近年在一些亚洲地区（特别是台湾和韩国）由肺炎克雷伯菌引起的肝脓肿等严重社区获得性侵袭性感染有上升的趋势（二）临床意义l耐药性 对氨卞西林和羧卞西林天然耐药肺炎克雷伯菌易产生超广谱-内酰胺酶（ESBL）近年来文献报道我国产酶率已达30%左右，产酶株对青霉素类、第1、2、3代头孢菌素及单环-内酰胺类抗生素均产生耐药，而仅对头霉素类、碳青霉烯类及酶抑制剂敏感ESBL检测现已作为医院细菌室常规检测项目（二）临床意义五、变形杆菌属五、变形杆菌属变形杆菌的周身鞭毛迁徙生长 革兰阴性杆菌，有多形性，周身鞭毛，运动活泼，在普通培养基上呈扩散性生长，称为迁徙生长现象变形杆菌变形杆菌KIAKIA结果结果（K A+K A+）MIUMIU（+/-+/-+）变形杆菌苯丙氨酸脱氨酶试验（）变形杆菌苯丙氨酸脱氨酶试验（）五、变形杆菌属五、变形杆菌属迅速分解尿素，尿素（+）为本菌特征，乳糖（-）外斐试验（Weil-Felix）：变形杆菌某些特殊菌株如X19、X2、XK 的O抗原与某些立克次氏体有共同抗原成分，临床上应用OX19、OX2、OXK 代替立克次氏体抗原与斑疹伤寒或恙虫病患者血清做凝集试验，以辅助诊断立克次体病五、变形杆菌属五、变形杆菌属 六、肠杆菌属产气肠杆菌（E.aerogenes）阴沟肠杆菌（E.cloacea）日勾维肠杆菌（E.gergoviae）阪崎肠杆菌（E.sakazakii）中间型肠杆菌（E.intermedium）泰洛肠杆菌（E.taylorac）河生肠杆菌（E.amnigenus）阿氏肠杆菌（E.asburiac）致癌肠杆菌（E.cancerogenus）溶解肠杆菌（E.dissolvens）超压肠杆菌（E.nimipressualis）阴沟肠杆菌革兰染色阴沟肠杆菌革兰染色革兰阴性粗短杆菌，有周身鞭毛，无芽胞，有些菌株有荚膜（一）生物学特性阴沟肠杆菌菌落特征阴沟肠杆菌菌落特征(MAC)(MAC)兼性厌氧，营养要求不高，在普通培养基上能够生长，形成大而湿润的黏液状菌落，在血琼脂上不溶血在肠道选择培养基上形成乳糖发酵（呈红色）的菌落（一）生物学特性生化特征u IMViC试验大肠埃希菌为+-肠杆菌属细菌大多为-+u动力和鸟氨酸脱羧酶试验肺炎克雷伯菌为阴性肠杆菌属多数为阳性（二）临床意义 肠杆菌属是肠杆菌科中最常见的环境菌群，医院感染的重要病原菌。在临床微生物室检出率最高的是阴沟肠杆菌和产气肠杆菌，可引起泌尿道感染、呼吸道感染、伤口感染以及败血症 肠杆菌科细菌常产生AmpC酶，尤以阴沟肠杆菌最为突出。它是导致革兰阴性菌尤其是阴沟肠杆菌对13代头孢菌素、单环-内酰胺类、头霉素类及含酶抑制剂的复合制剂耐药的重要原因 产AmpC酶细菌的治疗，首选4代头孢（头孢吡肟）和碳青霉烯类抗生素。近年来已有质粒介导的AmpC酶出现41574157株阴沟肠杆菌对常用抗菌药物的耐药率株阴沟肠杆菌对常用抗菌药物的耐药率耐药率(%)亚胺培南头孢哌酮/舒巴坦哌拉西林/他唑巴坦氨苄西林/舒巴坦头孢曲松环丙沙星左氧沙星头孢吡肟头孢呋辛头孢唑啉七、耶尔森菌属 鼠疫耶尔森菌属肠杆菌科耶尔森菌属，俗称鼠疫杆菌，是我国法定烈性传染病鼠疫的病原体n历史：三次世界性大流行n目前：仍有散在及爆发（死亡率1030%）n监控：是我国重点监控的自然疫源性传染病（一）生物学性状 形态染色：G球杆菌，两极浓染，有荚膜，无鞭毛，无芽胞，慢性病灶，陈旧培养物，高盐培养基上呈多形性。抗原构造：复杂F1抗原荚膜抗原V/W抗原毒力抗原 外膜蛋白突破防御、增强致病性鼠毒素（外毒素）对鼠类有剧烈毒性内毒素发热、休克、DIC等抵抗力：对理化因素抵抗力弱，但在自然环境中存活时间长（二）致病性与免疫性致病物质F1、V/W、外膜抗原、鼠毒素、内毒素等，实质器官出血性炎症、组织坏死及全身中毒症状。该菌毒力强，少量细菌即可致病所致疾病烈性传染病鼠疫（黑死病）流行环节传播媒介:鼠蚤传播途径:叮咬伤口、呼吸道临床类型腺鼠疫肺鼠疫败血症鼠疫专用实验室检测警惕生物武器检测动物鼠疫动态灭鼠灭蚤接种疫苗抗菌素治疗一旦疑为本菌，应立即向本地区疾病控制中心等部门报告，并将菌种送检验中心或专业实验室作进一步鉴定。诊断确立后除对患者进行隔离治疗外，对疫区及有关人员须采取有效的预防隔离措施，防止疫情扩散（三）微生物学检验及防治鼠疫耶氏菌与小肠结肠炎耶氏菌鉴别甲基红（+），甘露醇（+），苯丙氨酸（-），丙二酸盐（-），H2S（-），37培养动力（-）鼠疫耶氏菌液体培养基中钟乳石样小肠结肠炎耶氏菌25、动力（+），嗜冷性，4生长，25、VP（+），37（-）均不发酵乳糖小肠结肠炎耶氏菌440 均能生长，2028才能表现其特征返回章内容返回章内容一、概述1.概念：非发酵革兰阴性杆菌是一群不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厌氧、无芽胞的革兰阴性杆菌2.生物学特性：氧化酶试验：除不动杆菌和个别假单胞菌外，均为阳性；O/F试验：氧化型（开管产酸，闭管不变）半固体培养基上观察动力不明显第二节 非发酵革兰阴性杆菌3.多为条件致病菌。近年来，由非发酵菌引起的感染日益增多，尤其在医院感染中铜绿假单胞菌、不动杆菌等占有重要地位，同时由于非发酵菌对抗生素的耐药率日益增高，给临床治疗带来困难，已引起临床高度重视 第二节 非发酵革兰阴性杆菌二、主要菌种1.假单胞菌属 2.不动杆菌属3.产碱杆菌属 4.无色杆菌属5.莫拉菌属 6.金氏杆菌属7.黄杆菌属 8.艾肯菌属9.土壤杆菌属 10.黄单胞菌属11.丛毛单胞菌属等 第二节 非发酵革兰阴性杆菌假单胞菌属1.假单胞菌属（Pseudomonas）为严格需氧、有鞭毛、无芽胞、无荚膜的革兰阴性杆菌，氧化酶试验均阳性，是假单胞菌科的代表菌属，包括 200多个菌种2.假单胞菌属是一类无芽胞、散在排列的革兰阴性杆菌，菌体直或微弯，有单鞭毛或丛鞭毛，运动活泼，专性需氧3.与人类关系密切的有铜绿假单胞菌、荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌、产碱假单胞菌等，是医院感染的主要病原菌第二节 非发酵革兰阴性杆菌一、生物学性状1.形态染色：革兰阴性细长杆菌，有荚膜，单鞭毛，运动活泼2.培养特性：营养要求不高，专性需氧，4不生长，42可生长铜绿假单胞菌革兰染色鞭毛电镜观察3.普通培养基上生长，8090产生各种水溶性色素，如绿脓素和荧光素铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌荧光素铜绿假单胞菌绿脓素铜绿假单胞菌4.生化反应氧化酶阳性氧化分解葡萄糖、木糖产酸不产气液化明胶还原硝酸盐为亚硝酸盐并产生氮气吲哚阴性利用枸橼酸盐精氨酸双水解酶阳性铜绿假单胞菌5.抗原构造与分型菌体（O）抗原鞭毛（H）抗原外膜蛋白：具有属的特异性脂多糖：具有型特异性铜绿假单胞菌6.6.抵抗力抵抗力抵抗力强对干燥、紫外线有抵抗力对热抵抗力不强，56 30min 可被杀死对某些消毒剂敏感，1%石炭酸处理5min 即被杀死临床分离菌株对多种抗生素不敏感铜绿假单胞菌二、微生物学检查1.标本采集：血液、痰液、脑脊液、胸（腹）水、尿液、脓液、分泌液、粪便等；医院环境监控，可采集空气、水、物品表面等2.直接镜检：涂片、革兰染色3.分离培养：直接接种或增菌后接种血平板和MAC4.鉴定：根据菌落特征、色素、菌体形态、生化反应等作出鉴定。对无色素菌株应与其他假单胞菌鉴别铜绿假单胞菌三、铜绿假单胞菌鉴定程序标本 增菌 分离培养（血平板）最后鉴定可疑菌落（性状、色素）初步鉴定 涂片染色镜检血标本涂片镜检氧化酶菌落特征绿脓素气味42生长分型生化鉴定：O/F O枸櫞酸盐利用精氨酸双水解乙酰胺酶明胶液化铜绿假单胞菌四、铜绿假单胞菌与其他假单胞菌的鉴别铜绿假单胞菌荧光假单胞菌恶臭假单胞菌韦龙氏假单胞菌产碱假单胞菌氧化酶999710010096溴化-16-烷基-3-甲胺生长948987ND156.5%氯 化 钠 生长6543100ND4142生长1000000硝酸盐还原9819010054青脓素6596931000精氨酸双水解酶1009710010012尿素水解575275250明胶水解821000130葡萄糖产酸971001001000枸橼酸盐9593100ND65铜绿假单胞菌五、铜绿假单胞菌鉴定依据1.革兰阴性杆菌，动力阳性，单鞭毛2.菌落特征、色素、生姜气味3.4不生长，42生长4.氧化酶（+）、氧化分解葡萄糖5.乙酰胺水解（+）、还原硝酸盐生成氮气6.精氨酸双水解（+）铜绿假单胞菌六、临床意义1.主要致病物质：铜绿假单胞菌有多种致病因子，包括结构成分、毒素和酶，如粘附素、多糖荚膜样物质、内毒素、外毒素A、弹性蛋白酶、磷脂酶C等2.所致疾病条件致病菌：免疫力低下者易感染医院内感染的主要菌之一临床表现多样，引起化脓性感染，如烧伤感染、呼吸道感染、中耳炎、眼角膜炎等，合并败血症者死亡率高3.药物敏感性：对抗假单胞菌青霉素类、氨基糖苷类、环丙沙星、头孢吡肟、头孢他定、美罗培能、亚胺培南敏感。医院获得性铜绿假单胞菌较社区分离株有较高的耐药性，常显示多重耐药铜绿假单胞菌七、防治原则1.铜绿假单胞菌可由各种途径传播，但主要是通过污染医疗器械、用具及带菌医护人员引起医源性感染2.结合临床感染症状，如果无临床症状则为正常菌群3.临床治疗严格遵循药敏试验结果用药铜绿假单胞菌1.不动杆菌属为一群不发酵糖类，氧化酶阴性，无动力的革兰阴性杆菌2.广泛存在于自然界，是引起医院感染的病原菌之一3.已命名的有六个种，即醋酸钙不动杆菌（A.calcoaceticus）、洛菲不动杆菌（A.lwoffi）、溶血不动杆菌（A.haemolytius）、鲍曼不动杆菌（A.baumanii）、琼氏不动杆菌（A.junii）、约翰逊不动杆菌（A.johnsonii）4.临床标本中分离到的不动杆菌绝大多数是鲍曼不动杆菌，其他菌种引起的感染相对较少不动杆菌属一、生物学性状1.形态与染色：革兰阴性杆菌，常成双排列，多数有荚膜、无芽孢、无鞭毛2.培养特性：专性需氧，营养要求不高最适温度：35，鲍曼不动杆菌42 可生长不动杆菌属不动杆菌属一、生物学性状3.菌落：血平板上菌落圆形凸起，中等大小，光滑、边缘整齐、灰白色的菌落，部分菌落呈黏液状，不产色素4.麦康凯平板上形成粉红色菌落5.生化反应：氧化酶阴性，触媒阳性，O/F为氧化型，动力阴性，硝酸盐还原试验阴性不动杆菌属醋酸钙不动杆菌菌落（MAC）鲍曼不动杆菌菌落（MAC）不动杆菌属二、微生物学检查1.标本采集：血液、尿液、痰液、脓液、脑脊液等2.直接镜检：标本涂片革兰染色镜检，为革兰阴性球杆菌，常成双排列3.分离培养：血平板和MAC4.初步鉴定：革兰染色阴性球杆菌，成双排列，氧化酶（），O/F试验为氧化型，动力（），硝酸盐还原试验（）5.符合上述试验结果即可判定为不动杆菌属的细菌，再进行属内细菌鉴别不动杆菌属不动杆菌属主要菌种的鉴别要点醋酸钙不动杆菌鲍曼不动杆菌溶血不动杆菌琼氏不动杆菌约翰逊不动杆菌洛菲不动杆菌葡萄糖氧化木糖氧化乳糖氧化精氨酸双水解酶鸟氨酸脱羧酶苯丙氨酸脱氨酶丙二酸盐利用试验柠檬酸盐利用试验明胶液化37生长42生长不动杆菌属三、临床意义1.致病物质：致病机制尚不完全清楚，未发现不动杆菌能分泌毒素或细胞溶解素，其致病力主要由荚膜、菌毛、产物酶、脂质及载体等组成2.所致疾病：本属细菌为条件致病菌，在非发酵菌中本菌的分离率仅次于铜绿假单胞菌，也是医院感染的主要病原菌之一，常引起呼吸道、消化道及泌尿生殖道感染3.药物敏感性：对青霉素、氨苄西林和头孢拉啶耐药；多数菌株对氯霉素耐药；对复方新诺明、哌拉西林/他唑巴坦、多西环素、和氟喹诺酮类较敏感产碱杆菌属1.产减杆菌属为一群有动力，专性需样，不分解糖类的革兰阴性杆菌2.包括粪产碱杆菌（A.faecalis）和木糖氧化产碱杆菌两个种3.广泛存在于自然界，水、土壤和人体皮肤黏膜均有其存在4.典型菌种是粪产碱杆菌产碱杆菌属一、生物学特性1.形态与染色：革兰阴性短杆菌，成对或链状排列，有周鞭毛，无芽胞，多数无荚膜2.培养特性：专性需氧，最适生长温度2535，营养要求不高，在普通培养基上生长良好，麦康凯和SS平板亦可生长产碱杆菌属一、生物学特性3.生化反应：氧化酶阳性，触酶阳性，不分解糖类，O/F为产碱型，利用枸橼酸盐，部分菌株能还原硝酸盐产碱杆菌属二、微生物学检验1.标本采集：血液、尿液、痰液、脓汁、脑脊液等2.显微镜检查：脑脊液、尿液离心取沉淀涂片，脓汁和痰液可直接涂片革兰染色镜检，为革兰阴性短杆菌，有周鞭毛3.分离培养：血平板和MAC4.生化反应：不分解任何糖类，O/F不分解糖类呈碱性，氧化酶阳性，触酶阳性，分解胺类产碱产碱杆菌属常见产碱杆菌的特性鉴别要点粪产碱杆菌皮乔特产碱杆菌粪产碱杆菌型木糖氧化产碱杆菌42生长亚硝酸盐还原硝酸盐还原丙二酸盐木糖产碱杆菌属三、临床意义1.致病物质：本属中临床分离最常见的是粪产碱杆菌，大部分感染是条件致病，主要来自潮湿环境，如雾化器、呼吸机和灌洗液等，血、痰、尿、脑脊液等是常见的发现部位，是医院感染的病原菌之一。其致病物质主要是菌体成分如内毒素等2.所致疾病：可致抵抗力低下的患者发生菌血症，也可引起呼吸道、泌尿道及中枢神经系统感染3.药物敏感性：药物敏感试验的药物选择与假单胞菌相同。临床治疗可用哌拉西林及替卡西林其他非发酵革兰阴性杆菌常见的有莫拉菌属、金黄杆菌属、伯克霍尔德菌属、丛毛菌属、食醋菌属、寡养单胞菌属等莫拉菌属金黄杆菌属伯克霍尔德菌属丛毛菌属食醋菌属寡养单胞菌属氧化酶100100721001000麦康凯生长40909110010010042生长335035685048硝酸盐还原5533659610039硝酸盐产气00330330精氨酸双水解酶00500670赖氨酸脱羧酶00200093鸟氨酸脱羧酶010015001H2S6798v010095水解尿素1060607833水解明胶0607003393葡萄糖产酸080100010085乳糖产酸070670060枸橼酸盐利用060v473334动力0077100100100案例分析【病例资料】患者，男，50岁。12天前因劳累后突起畏寒、发热39.7，伴有咳嗽咯痰，食欲减退，伴乏力。20小时前突然咳出大量黄绿色脓痰，伴咯血，立即转院。体格检查：体温38.7，发热面容。右下肺扣诊浊音，可闻及罗音。胸片示右中下肺野有一5cm4cm空洞，并可见厚液平，空洞四周为浓密的炎症浸润阴影。【问题】请问该患者可能患何种疾病？可能是什么细菌感染？如何进行微生物检验辅助诊断病情？返回章内容返回章内容一、弧菌科共同特征1.革兰阴性菌，短小弯曲弧状,无芽胞，多数有鞭毛，有菌毛，具有一端单鞭毛、运动迅速2.需氧或兼性厌氧3.氧化酶试验（）4.发酵葡萄糖产酸不产气，许多菌株生长需要2%3%氯化钠5.弧菌科细菌广泛分布于自然界，以水中最为多见第三节 弧菌科二、弧菌科分类非O1群霍乱弧菌弧菌属弧菌科气单胞菌属邻单胞菌属发光杆菌属O1群霍乱弧菌副溶血弧菌拟态弧菌第三节 弧菌科三、弧菌科三个属的特性特性弧菌属气单胞菌属邻单胞菌属氧化酶葡萄糖发酵甘露醇产酸/明胶液化鸟氨酸/精氨酸/O/129敏感SRSTCBS生长嗜盐性/第三节 弧菌科弧菌属1.弧菌属共有36个种，分为四大类：O1群霍乱弧菌，不典型O1群 霍乱弧菌，非O1群霍乱弧菌，其他弧菌2.多为非致病菌，但有部份为强致病菌3.霍乱弧菌-引起霍乱4.副溶血弧菌-引起食物中毒概要1.霍乱弧菌（V.cholera）分为古典生物型和埃尔托（Eltor）生物型两个生物型，2.引起霍乱的病原体。霍乱为一种烈性肠道传染病，发病急，传染性强，死亡率高。3.1992年在印度、孟加拉等国发现一个新的流行株O139群。霍乱弧菌霍乱弧菌一、生物学特性1.形态与染色：革兰阴性，呈弧形、月牙形或逗点状，无芽胞，有菌毛，有单端鞭毛，运动活泼。取患者米泔水样粪便作悬滴观察，可见该菌呈穿梭样或流星状运动霍乱弧菌霍乱弧菌霍乱弧菌霍乱弧菌在TCBS琼脂平板上形成发酵蔗糖的较大的黄色菌落一、生物学特性2.培养特性：耐碱不耐酸，营养要求不高。生长迅速,pH8.8 9.0的碱性蛋白胨水/碱性琼脂平板上生长良好霍乱弧菌霍乱弧菌在含亚碲酸钾的琼脂平板上将碲离子还原成原子态的碲，形成有灰褐色中心的菌落霍乱弧菌3.抗原构造与分型：根据O抗原的不同将霍乱弧菌分为155个血清群，其中O1群、O139群引起霍乱，O2群O138群只引起人类胃肠炎，不引起霍乱流行，称之非O1群霍乱弧菌4.抵抗力：霍乱弧菌在淡水及海水中存活13周。对热、干燥、日光、酸、消毒剂敏感，耐碱力较强。100，12min即死亡；在正常胃酸中仅能生存4min；0.5ppm氯15min能杀死；对链霉素、氯霉素和四环素敏感，对庆大霉素耐药霍乱弧菌二、微生物学检验1.标本采集：采集粪便标本，采集的标本应及时接种于碱性蛋白胨水增菌。不能及时接种者，应将标本置于文-腊二氏保存液或卡-布运送培养基中由专人运送2.涂片染色镜检：取标本直接涂片革兰染色，油镜下观察到呈鱼群状排列的革兰阴性弧菌可初步报告3.动力及制动试验：取患者粪便制成悬滴（或压滴）标本，观察细菌动力，见穿梭或流星样运动，O1群霍乱弧菌多价血清制动试验阳性，可早期报告霍乱弧菌二、微生物学检验4.分离培养：将粪便标本经过碱性蛋白胨水增菌后，用TCBS琼脂和碱性琼脂平板分离培养，挑取可疑菌落进行鉴定5.鉴定：与01群和O139群抗血清(多价和单价）凝集，菌落和菌体形态、氧化酶试验等作出初步报告。根据纯培养后全面生化反应、血清学分群及分型霍乱弧菌三、临床意义1.致病物质：菌毛定植、霍乱肠毒素2.所致疾病：引起霍乱，为肠道烈性传染病，主要是通过污染的水源或食物经口摄入。临床表现为剧烈上吐下泻，严重脱水、酸中毒、痉挛、尿闭、休克、死亡霍乱弧菌四、免疫性1.感染霍乱弧菌后，机体可获得牢固免疫力2.SIgA起主要作用3.O1群的免疫对O139无保护作用五、防治原则1.控制传染源2.切断传播途径：改善社区环境，加强水源管理3.提高易感者免疫力：疫苗预防接种4.治疗：及时补充液体和电解质副溶血性弧菌一、生物学性状1.形态与染色：为革兰阴性菌、直或微弯的杆菌，在不同培养基上菌体形态差异较大，有卵圆形、棒状、球杆状、梨状、弧形等多种形态。无芽胞、无荚膜副溶血性弧菌TCBS琼脂上显绿色（蔗糖不发酵）菌落一、生物学性状2.培养特性：本菌营养要求不高，需氧或兼性厌氧，具有嗜盐性。在3.5NaCl琼脂平板上呈蔓延生长，菌落边缘不整齐。在TCBS琼脂上形成12mm、不发酵蔗糖而呈蓝绿色的菌落，与霍乱弧菌相区别副溶血性弧菌3.神奈川现象：从粪便中分离的致病菌株能使人或兔红细胞发生溶血，对马红细胞不溶血4.抵抗力：本菌抵抗力弱，不耐热，90，1min即死亡。耐碱不耐酸，在1醋酸或50食醋中1min死亡。在淡水中生存不超过2天，但在海水中能存活47天以上副溶血性弧菌二、微生物学检验1.标本采集：可采集患者的粪便、肛门拭子和可疑食物。采集的标本应及时送检，如不能及时送检，应将标本置于3.5NaCl蛋白胨水或卡-布运送培养基中送检2.增菌培养：取标本0.51ml接种于3.5NaCl蛋白胨水中，35培养，若有本菌存在，一般数h后会出现明显混浊，即可分离培养副溶血性弧菌二、微生物学检验3.分离培养：将标本或增菌培养物接种于TCBS平板或3.5NaCl琼脂培养基，35培养1824h观察结果。副溶血性弧菌在TCBS平板上因不发酵蔗糖，形成12mm、绿色或蓝绿色、不透明的菌落4.鉴定：根据其形态、染色性、多形性、运动活泼等特点，以及在选择培养基上的菌落特征，取可疑菌落通过生化试验进行鉴定副溶血性弧菌三、临床意义1.致病物质：耐热直接溶血素、耐热相关溶血素、黏附素与黏附素酶2.所致疾病：人因食入烹饪不当的海产品或污染本菌的盐腌渍食物而感染，导致食物中毒。主要症状有腹痛、腹泻，呕吐和低热，粪便呈水样或糊状，偶有血便，病程23d，恢复较快气单胞菌属一、生物学性状1.形态染色：革兰阴性杆菌，或球杆状、丝状，极端鞭毛，无芽胞2.生长条件：兼性厌氧，营养要求不高，生长温度较宽，045，嗜冷菌37以下生长，嗜温菌1042生长气单胞菌属一、生物学性状3.生长现象：TCBS上不生长，血平板：灰白、光滑、凸起菌落，肠道选择平板：形成不发酵乳糖菌落4.生化反应：氧化酶、触酶、发酵葡萄糖产酸产气、6.5NaCl不生长、O129耐受5.耐药性：多数菌株产-内酰胺酶，对青霉素耐药气单胞菌属二、微生物学检验1.标本采集：腹泻患者采集粪便或肛门拭子，肠道外感染采集血液、脓液、脑脊液或尿液标本2.直接涂片：取标本直接涂片革兰染色镜检，可见革兰阴性短杆菌。悬滴法可见细菌运动活泼气单胞菌属二、微生物学检验3.分离培养：血液标本经肉浸液或胰化酪蛋白大豆肉汤增菌后转种血琼脂平板；脓汁、分泌物等直接接种血琼脂平板；粪便标本接种肠道选择培养基4.鉴定：根据形态、染色性、动力等特点，以及在培养基上的菌落特征，取可疑菌落做氧化酶、吲哚、硝酸盐还原及O/F等生化试验进行鉴定气单胞菌属三、临床意义1.致病物质：溶血毒素、细胞毒素2.所致疾病：（1）肠道内感染：是夏季腹泻常见病原菌（2）肠道外感染：主要为皮肤及软组织感染，机体免疫力低下时，也可引起眼部感染、脑膜炎、肺炎、骨髓炎、胸膜炎、腹膜炎、关节炎、血栓性静脉炎和胆囊炎等邻单胞菌属一、生物学性状1.只有一个菌种：类志贺邻单胞菌2.革兰阴性杆菌，单鞭毛或丛鞭毛，无芽胞，无荚膜3.兼性厌氧，营养要求不高。在SS平板形成不发酵乳糖菌落4.氧化酶，葡萄糖发酵5.O/129：S6.TCBS：不生长，6.5NaCl不生长7.赖氨酸、鸟氨酸、精氨酸双水解均8.多数菌株产-内酰胺酶，对青霉素耐药邻单胞菌属二、微生物学检验1.与志贺菌属鉴别：氧化酶、动力、血清学2.与气单胞菌属鉴别：O/129S，肌醇试验3.与弧菌属鉴别：Mac、SS生长，TCBS、6.5NaCl不生长三、临床意义1.腹泻、食物中毒，多见于夏季2.败血症、脑膜炎等，多见于免疫力低下者，感染率低，但死亡率高返回章内容返回章内容第四节 其他革兰阴性苛养菌内容：1.嗜血杆菌属2.鲍特菌属3.军团菌属4.布鲁菌属5.弯曲菌属6.螺杆菌属革兰阴性苛养菌概述1.苛养菌概念 是指对生长环境、营养要求比较苛刻，在一般培养基上不生长或难以生长，体外培养需添加特殊因子或其他营养成分才能生长的一类细菌2.革兰阴性苛养菌的共同特点 生长缓慢，且需要CO2环境第四节 其他革兰阴性苛养菌革兰阴性苛养菌概述3.临床上常见革兰阴性苛养菌流感嗜血杆菌鲍特菌军团菌布鲁菌弯曲菌螺杆菌第四节 其他革兰阴性苛养菌一、嗜血杆菌属嗜血杆菌属（Haemophilus）的细菌因在人工培养时必须提供新鲜血液或血液成分才能生长，故名“嗜血杆菌”代表菌为流感嗜血杆菌第四节 其他革兰阴性苛养菌（一）生物学特性形态与染色 G-小杆菌，呈球形、短丝状或多形态培养特性 营养要求较高，生长需要X因子、V因子或两者之一，最佳培养基是巧克力平板抵抗力 较弱，在人工培养基上易死亡，室温保存比4保存存活时间长第四节 其他革兰阴性苛养菌流感嗜血杆菌分型生化型：根据其对吲哚、脲酶及鸟氨酸脱羧酶试验的反应分8个型血清型：根据荚膜多糖抗原的不同分为a、b、c、d、e、f 6个型，b型致病性最强，f型次之第四节 其他革兰阴性苛养菌（二）微生物学检验1.标本 血液、脑脊液、鼻咽分泌物、痰、脓液等。2.直接镜检 直接涂片或离心后取沉渣(脑脊液）涂片，革兰染色显微镜检查第四节 其他革兰阴性苛养菌3.分离培养加入万古霉素、杆菌肽的巧克力平板，可提高嗜血杆菌的检出阳性率菌落特点形成直径为12mm、灰白色、圆形、光滑、半透明的小菌落第四节 其他革兰阴性苛养菌 卫星现象 当流感嗜血杆菌与金黄色葡萄球菌一起培养时，可见到靠近葡萄球菌菌落的流感嗜血杆菌菌落较大，而远离葡萄球菌菌落的流感嗜血杆菌菌落较小或不生长ATCC25923嗜血杆菌第四节 其他革兰阴性苛养菌嗜血杆菌因子-溶血XV流感嗜血杆菌埃及嗜血杆菌溶血嗜血杆菌杜克雷嗜血杆菌副流感嗜血杆菌嗜沫嗜血杆菌w嗜血杆菌属菌种的培养特性第四节 其他革兰阴性苛养菌4.抗原检查 检测标本中的抗原成分5.核酸检查 采用DNA杂交的方法检查核酸，在囊性纤维化病人的痰中，可用DNA杂交及单克隆标记法检查流感嗜血杆菌的外膜蛋白第四节 其他革兰阴性苛养菌（三）临床意义嗜血杆菌属细菌存在于正常人上呼吸道，在健康儿童中定植约 35。该菌属可引起上呼吸道、泌尿道感染及脑膜炎、菌血症等感染性疾病治疗因-内酰胺酶阴性流感嗜血杆菌引起的感染性疾病，首选氨卞西林、阿莫西林第四节 其他革兰阴性苛养菌二、鲍特菌属 鲍特菌属(Bordetella)中百日咳鲍特菌、副百日咳鲍特菌、支气管败血鲍特菌是临床常见的致病菌，可引起急性呼吸道感染，主要引起人类感染的是百日咳鲍特菌。第四节 其他革兰阴性苛养菌（一）生物学特性形态与染色 G-小球杆菌培养特性 专性需氧，营养要求较高，用鲍-金培养基培养抵抗力 抵抗力不强，对一般消毒剂和抗生素敏感第四节 其他革兰阴性苛养菌抗原O抗原：菌体抗原，耐热，鲍特菌属共同抗原K抗原：荚膜抗原，不耐热，由多种凝集因子组成u凝集因子7为百日咳鲍特菌、