动物实验操作要领ppt课件.pptx

实验动物操作技术实验动物操作技术南阳市汇博生物技术有限公司研发部1.常见实验动物介绍2.实验动物的捉拿与固定3.实验动物的麻醉4.供试品的给予方法5.实验动物的安死术 6.动物实验中的安全防护实验动物实验动物（Laboratory animals）是专门培育供实验用的动物，主要指作为医学、药学、生物学、兽医学等的科研、教学、医疗、鉴定、诊断、生物制品制造等需要为目的而驯养、繁殖、育成的动物。例如小鼠和大鼠是首先按实验要求，严格进行培育的实验动物，其次如地鼠类、豚鼠、其它啮齿类、鹌鹑等亦已实验动物化。实验动物分类普普通通动动物物用用于于研研究究所所获获得得的的实实验验结结果果的的反反应应性性差差，故故主主要要用于生物医学示教或为某项研究进行探索方法的预试验。用于生物医学示教或为某项研究进行探索方法的预试验。清清洁洁动动物物是是目目前前国国内内科科研研工工作作主主要要要要求求的的标标准准实实验验动动物物，适适用用于于大大多多数数科科研研实实验验。无无特特定定病病原原体体动动物物（SPF）是是理理想想的的健健康康动动物物，用用它它来来研研究究，可可排排除除疾疾病病或或病病原原的的干干扰扰，适适用用于于所所有有科科研研实实验验、生生物物制制品品生生产产及及检检定定，是是国国际际公公认认的的标标准准实实验验动动物物。涉涉及及具具有有国国际际交交流流意意义义的的重重大大课课题题，最最好选用无特定病原体动物。好选用无特定病原体动物。无无菌菌动动物物是是一一种种非非常常规规动动物物，仅仅适适用用于于特特殊殊研研究究目目的的，如如微微生生物物与与宿宿主主、微微生生物物间间的的相相互互作作用用，免免疫疫发发生生发发展展机机制制，放放射射医医学学等等方方面面的的研研究究。由由于于无无菌菌动动物物体体内内无无任任何何可可检检出出的微生物，使实验简洁明确，给课题研究带来极大方便。的微生物，使实验简洁明确，给课题研究带来极大方便。第一部分第一部分 常用实验动物常用实验动物小鼠、大鼠、小鼠、大鼠、豚鼠豚鼠、地鼠（仓鼠）、地鼠（仓鼠）、兔兔、犬、犬、猴、猫、猴、猫、猪、鸡、猪、鸡、鱼、鱼、等。等。啮齿动物包括啮齿动物包括啮齿目啮齿目和和兔型目兔型目大鼠小鼠、豚鼠均属于大鼠小鼠、豚鼠均属于动物界动物界 脊索动脊索动物门物门 哺乳纲哺乳纲 啮齿目啮齿目；兔类属于；兔类属于兔型目兔型目，包括兔科和鼠兔科。包括兔科和鼠兔科。啮齿动物的主要特点是：啮齿动物的主要特点是：上颌上颌和和下颌下颌各两各两颗会持续生长的颗会持续生长的门牙门牙，啮齿目动物必须通，啮齿目动物必须通过啃咬来不断磨短这两对门牙。哺乳动物过啃咬来不断磨短这两对门牙。哺乳动物中百分之四十的物种都属于啮齿目，而且中百分之四十的物种都属于啮齿目，而且在除了南极洲的其他所有大陆上都可以找在除了南极洲的其他所有大陆上都可以找到其大量的踪迹。到其大量的踪迹。小鼠的生物学特性及选择应用小鼠的生物学特性及选择应用一、生物学特性一、生物学特性1.对外界环境对外界环境反应敏感，适应性差，强光反应敏感，适应性差，强光或噪声刺激时，可能导致哺乳母鼠神经紊或噪声刺激时，可能导致哺乳母鼠神经紊乱，发生食仔现象。乱，发生食仔现象。温度过高或多低时，温度过高或多低时，生殖能力下降，严重时会发生死亡；生殖能力下降，严重时会发生死亡；2.对多种毒素和病原体易感，百万分之一对多种毒素和病原体易感，百万分之一的破伤风毒素能使小鼠死亡；的破伤风毒素能使小鼠死亡；3.对致癌物敏感，自发性肿瘤多。对致癌物敏感，自发性肿瘤多。在生物医学中的选择应用在生物医学中的选择应用 在生物医学领域中，小鼠因其自身的特在生物医学领域中，小鼠因其自身的特点，是用途最广泛、使用量最大的哺乳点，是用途最广泛、使用量最大的哺乳类实验动物。类实验动物。1.小鼠广泛用于药品的毒性试验及三致小鼠广泛用于药品的毒性试验及三致(致畸、致癌、致突变致畸、致癌、致突变)试验试验。2.小鼠常用于药物对疾病疗效筛选试验小鼠常用于药物对疾病疗效筛选试验,如如抗肿瘤药物抗肿瘤药物,抗结核药物抗结核药物,抗疟疾药物等抗疟疾药物等的筛选的筛选；大鼠的生物学特性及选择应用大鼠的生物学特性及选择应用生物学特征生物学特征一般特性一般特性1.对营养缺乏非常敏感，特别是维生素对营养缺乏非常敏感，特别是维生素A和和氨基酸供应不足时，可发生典型的缺乏症氨基酸供应不足时，可发生典型的缺乏症状。状。2.大鼠不能呕吐。大鼠不能呕吐。3.对外部环境反应敏感对外部环境反应敏感 喜静环境，夜间活动喜静环境，夜间活动，噪音和不适，噪音和不适光照对繁殖影响很大。光照对繁殖影响很大。对饲养环境中的粉尘、氨气和硫化对饲养环境中的粉尘、氨气和硫化氢等极为敏感，氢等极为敏感，如果饲养室内空气卫生条件如果饲养室内空气卫生条件较差，在长期慢性刺激下，可引起肺部大面较差，在长期慢性刺激下，可引起肺部大面积的炎症。积的炎症。对饲养环境中对饲养环境中湿度极为敏感湿度极为敏感，相对，相对湿度低于湿度低于40时，易患环尾病，还会引起哺时，易患环尾病，还会引起哺乳母鼠食仔现象发生，一般饲养室湿度应保乳母鼠食仔现象发生，一般饲养室湿度应保持在持在5065之间。之间。营养学研究营养学研究 大鼠对营养缺乏比较敏感，可发大鼠对营养缺乏比较敏感，可发生典型的症状，生典型的症状，是研究营养学的首是研究营养学的首选动物选动物。常用于蛋白质缺乏、氨基常用于蛋白质缺乏、氨基酸、维生素和无机离子代谢等研究；酸、维生素和无机离子代谢等研究；用于营养不良和饥饿对身用于营养不良和饥饿对身体发育所产生不利影响的研究；体发育所产生不利影响的研究；用于代谢性疾病的研究用于代谢性疾病的研究 自发高血压肥胖大鼠自发高血压肥胖大鼠SHR/N-CP 用于研究用于研究型糖尿病型糖尿病；自发糖尿病大鼠自发糖尿病大鼠“BB”Wistar用于研究用于研究型糖尿病型糖尿病；盐敏感大鼠盐敏感大鼠Ds用于高盐对生理用于高盐对生理因素的影响。因素的影响。药物学研究药物学研究 大鼠由于繁殖力强、易饲养、体型大小合大鼠由于繁殖力强、易饲养、体型大小合适、给药容易、采样方便、畸胎发生率低、适、给药容易、采样方便、畸胎发生率低、行为多样化，被广泛用于行为多样化，被广泛用于药物毒力、药效评药物毒力、药效评价、新药筛选等研究价、新药筛选等研究。大鼠广泛应用在各种药物的毒理学研究中，大鼠广泛应用在各种药物的毒理学研究中，如如急性、亚急性和慢性毒性试验急性、亚急性和慢性毒性试验、生殖毒性生殖毒性试验试验和和药物依赖试验药物依赖试验等等;大鼠也经常用于大鼠也经常用于“三致三致”试验研究。试验研究。药物药效研究药物药效研究 1.神神经经系系统统疾疾病病药药物物药药效效评评价价。特特别别对对影影响响副副交交感感神神经经效效应应器器接接点点的的药药物物研研究究时时，首首选大鼠。选大鼠。2.心心血血管管疾疾病病药药物物的的药药效效评评价价，大大鼠鼠的的血血管管阻阻力力和和血血压压对对药药物物的的反反应应均均很很敏敏感感，与与人人类类或或大大动动物物的的反反应应均均较较一一致致。例例如如SHR大大鼠鼠是研究高血压药物的极好的动物模型。是研究高血压药物的极好的动物模型。3.治治疗疗炎炎症症药药物物药药效效评评价价，大大鼠鼠踝踝关关节节对炎症反应敏感，用于抗关节炎药物的研究对炎症反应敏感，用于抗关节炎药物的研究。豚鼠的生物学特性及选择应用豚鼠的生物学特性及选择应用 生物学特性生物学特性1.豚鼠为草食性动物，豚鼠为草食性动物，喜食纤维素多的饲料喜食纤维素多的饲料；2.豚鼠豚鼠对外界刺激极为敏感对外界刺激极为敏感。听觉发达、易惊听觉发达、易惊-怕噪音怕噪音；短被毛紧贴皮肤短被毛紧贴皮肤-怕高温、高湿怕高温、高湿；喜活动、爱群居喜活动、爱群居-不宜单笼饲养不宜单笼饲养。3.身体短粗，尾巴只有残迹，胃壁簿，盲身体短粗，尾巴只有残迹，胃壁簿，盲肠发达；肠发达；4.晚成动物，孕期比大、小鼠长，产仔少，晚成动物，孕期比大、小鼠长，产仔少，所以品系少；所以品系少；5.自身不能合成维生素自身不能合成维生素C；6.自动调节体温能力较差，饲养最适温度自动调节体温能力较差，饲养最适温度为为1822；7.易引起变态反应，产生大量补体。染色易引起变态反应，产生大量补体。染色体为体为32对对.在生物医学中的选择应用在生物医学中的选择应用免疫学研究免疫学研究 豚鼠血清中含有丰富的补体，豚鼠血清中含有丰富的补体，是所有实验动物中补体含量最多的一种是所有实验动物中补体含量最多的一种动物动物,其补体非常稳定，免疫学实验中所其补体非常稳定，免疫学实验中所用补体多来源于豚鼠。用补体多来源于豚鼠。豚鼠是过敏性休克和变态反应豚鼠是过敏性休克和变态反应研究的首选动物，特别是迟发型超敏反研究的首选动物，特别是迟发型超敏反应与人相似。应与人相似。兔的生物学特性及选择应用兔的生物学特性及选择应用生物学特性生物学特性1.草食性动物，草食性动物，性情温顺，群居性差性情温顺，群居性差。2.家家兔兔喜喜干干怕怕热热，适适宜宜的的环环境境温温度度因因年年龄龄而而异异，初初生生仔仔兔兔窝窝内内温温度度3032，成成年年兔兔202。3.有有食食粪粪特特性性：软软粪粪在在晚晚上上排排出出，含含有有较较丰丰富富的的粗粗蛋蛋白白和和维维生生素素，家家兔兔直直接接由由肛肛门吞食软粪。门吞食软粪。皮肤反应试验皮肤反应试验 兔对刺激反应敏感，反应近似于人，兔对刺激反应敏感，反应近似于人，常用兔作为毒物、药物、化妆品等对皮肤局部常用兔作为毒物、药物、化妆品等对皮肤局部作用的研究。作用的研究。胆固醇代谢和动脉粥样硬化症研究胆固醇代谢和动脉粥样硬化症研究 兔对致病胆固醇的敏感性高，造型兔对致病胆固醇的敏感性高，造型时间短，成型快。家兔模型的病变与人类基本时间短，成型快。家兔模型的病变与人类基本相似。相似。在生物医学中的选择应用在生物医学中的选择应用第二部分第二部分 动物实验前的准备动物实验前的准备一、动物实验室的选择一、动物实验室的选择二、实验动物的购买二、实验动物的购买三、实验动物编号与标记三、实验动物编号与标记 动物动物实验室的选择实验室的选择1.根据实验目的选择合适的实验室及饲养室。根据实验目的选择合适的实验室及饲养室。2.动物实验室要与实验动物同等级别。动物实验室要与实验动物同等级别。3.饲养室应符合实验动物的生活习性及国家实饲养室应符合实验动物的生活习性及国家实验动物设施各项标准。验动物设施各项标准。实验实验动物的购买动物的购买1.应购买有应购买有实验动物生产供应许可证实验动物生产供应许可证的单位所的单位所生产繁殖的实验动物，并应索取相应生产繁殖的实验动物，并应索取相应实验实验动物的质量合格证明动物的质量合格证明。2.如果从外地购买的动物，应考虑运输中的各如果从外地购买的动物，应考虑运输中的各种因素对实验动物的影响，并种因素对实验动物的影响，并应查阅运输应查阅运输检疫证明检疫证明。3.购买的动物需要经过购买的动物需要经过3-7天天的隔离检疫、观的隔离检疫、观察。察。实验实验动物编号与标记方法动物编号与标记方法（一）（一）染色法染色法：1 1、单单色色涂涂染染法法：在在每每组组动动物物不不超超过过l0l0只只或或一个实验不超过一个实验不超过4040只的情况下适用。只的情况下适用。实验动物：实验动物：大鼠、小鼠。大鼠、小鼠。常用染色剂：常用染色剂：3-53-5苦味酸溶液，苦味酸溶液，可染成黄色。可染成黄色。方法步骤：方法步骤：(1)(1)涂染原则：从左到右、从上到下。涂染原则：从左到右、从上到下。(2)(2)左前肢为左前肢为l l号、左侧腹部号、左侧腹部2 2号、号、左后肢左后肢3 3号。号。(3)(3)两耳后部两耳后部4 4号、背中部号、背中部5 5号、号、后肢背部后肢背部6 6号。号。(4)(4)右前肢右前肢7 7号、号、右侧腹部右侧腹部8 8号、号、右后肢右后肢9 9号。号。(5)(5)尾巴根为尾巴根为1010号。号。（6 6）额部为）额部为2020号号 2 2、双色涂染法双色涂染法：在每组动物不超过在每组动物不超过100100只的情况下只的情况下 适用。适用。实验动物：大鼠、小鼠。实验动物：大鼠、小鼠。常用染色剂常用染色剂：(1)3-51)3-5苦味酸溶液苦味酸溶液，可染成，可染成黄色黄色 作为作为“个个”位数。位数。(2)0.5%(2)0.5%中性红或品红溶液中性红或品红溶液，可染，可染 成成红色红色作为作为“十十”位数。位数。方法步骤：方法步骤：(1)(1)用两种颜色同时进行染色标记。用两种颜色同时进行染色标记。(2)(2)用苦味酸用苦味酸(黄色黄色)染色标记作为个染色标记作为个位数，个位数的染色标记方法同单位数，个位数的染色标记方法同单色涂染法。色涂染法。(3)(3)用品红用品红(红色红色)染色标记作为十位染色标记作为十位数，数，第三部分第三部分 实验动物的捉拿与固定实验动物的捉拿与固定大小鼠的捉拿与固定大小鼠的捉拿与固定豚鼠的捉拿与固定豚鼠的捉拿与固定兔的捉拿与兔的捉拿与固定固定 一、小鼠的一、小鼠的抓取：抓取：器材：小鼠饲养盒器材：小鼠饲养盒+面罩面罩1 1套。套。方法步骤：方法步骤：1 1、用右手拇指和食指捏、用右手拇指和食指捏 住小鼠尾巴中部将小鼠提住小鼠尾巴中部将小鼠提 起，放在起，放在饲养盒的饲养盒的面罩上。面罩上。2 2、用左手拇指和食指迅速、用左手拇指和食指迅速、准确地捏住小鼠的两耳后及准确地捏住小鼠的两耳后及 颈背部的皮肤，将小鼠提起。颈背部的皮肤，将小鼠提起。3 3、翻翻转转左左手手掌掌，以以左左手手掌掌心心和和中中指指夹夹 小小鼠鼠背背部部的的皮皮肤肤，使使小小鼠鼠整整个个呈呈一一条条 直线。直线。4 4、用左手无名指、用左手无名指 压住小鼠背部的压住小鼠背部的 皮肤，小指压住皮肤，小指压住 小鼠的尾巴根部。小鼠的尾巴根部。5 5、松开捏住小鼠尾、松开捏住小鼠尾 巴的右手拇指和食指。巴的右手拇指和食指。此法适用于肌注、腹腔注射、灌胃等此法适用于肌注、腹腔注射、灌胃等 1243大大鼠的鼠的抓取抓取大鼠的抓取保定：大鼠的抓取保定：器材器材：大鼠饲养盒：大鼠饲养盒 +面罩面罩 1 1套。套。方法方法步骤：步骤：4-54-5周内的大鼠，方法同小鼠。周内的大鼠，方法同小鼠。周龄较大的，则：周龄较大的，则：1 1、首先戴好防护手套首先戴好防护手套。2 2、用右手拇指和食指抓住大鼠尾巴、用右手拇指和食指抓住大鼠尾巴中部中部将大将大鼠提起，放在大鼠饲养盒的面罩上。鼠提起，放在大鼠饲养盒的面罩上。3 3、左手顺势按、卡在大鼠躯干、左手顺势按、卡在大鼠躯干背部，稍加压力向头颈部滑行。背部，稍加压力向头颈部滑行。4 4、以左手拇指和食指捏住大鼠两耳、以左手拇指和食指捏住大鼠两耳后部的头颈皮肤，其余三指和手掌后部的头颈皮肤，其余三指和手掌握住大鼠背部皮握住大鼠背部皮肤，完成抓取保定。肤，完成抓取保定。1243豚鼠豚鼠的的抓取抓取器材器材：大鼠饲养盒：大鼠饲养盒+带面罩带面罩 l l套。套。方法步骤方法步骤：1 1、先用左手轻轻扣、先用左手轻轻扣、按住、按住豚鼠背部豚鼠背部。2 2、顺势抓紧其肩胛上方皮肤，、顺势抓紧其肩胛上方皮肤，拇指和食指环箍其颈部拇指和食指环箍其颈部。3 3、用右手轻轻托住其臀部、用右手轻轻托住其臀部，即可即可将豚鼠抓取保定将豚鼠抓取保定。1243567注意注意：1.豚鼠豚鼠较为胆小易惊，不宜强烈刺较为胆小易惊，不宜强烈刺激和受惊，所以在抓取时，必须激和受惊，所以在抓取时，必须稳、稳、准和迅速准和迅速；2.2.抓豚鼠时，抓豚鼠时，也也不能单纯抓取背不能单纯抓取背腹腹部部，否则易造成肝破裂而引起死亡。，否则易造成肝破裂而引起死亡。步骤步骤：1 1、用右手抓住、用右手抓住兔兔颈部颈部的被毛和皮肤的被毛和皮肤，轻轻轻轻把兔提起。把兔提起。2 2、用左手托住、用左手托住兔兔的的臀部。臀部。兔的抓取兔的抓取1243注意：注意：不能单纯抓双耳或抓提背腹部的不能单纯抓双耳或抓提背腹部的毛皮。毛皮。盒式固定，适用于兔耳采血、盒式固定，适用于兔耳采血、耳耳 血管注射等情况。血管注射等情况。实验动物的麻醉实验动物的麻醉动物麻醉是消除动物手术疼痛，便于实验动物麻醉是消除动物手术疼痛，便于实验操作，保证动物安全，为手术创造良好的操作，保证动物安全，为手术创造良好的条件。条件。动物全身麻醉分四期：动物全身麻醉分四期：1.第一期：第一期：随意兴奋期，出现运动与运动失随意兴奋期，出现运动与运动失调；调；2.第二期：第二期：不随意兴奋期，由意识完全丧失不随意兴奋期，由意识完全丧失至规则的自动呼吸开始时止。至规则的自动呼吸开始时止。3.第三期：第三期：外科麻醉期，外科麻醉期，4.第四期：第四期：延髓麻醉期，进入此期，麻醉已延髓麻醉期，进入此期，麻醉已严重过量。严重过量。麻醉方法与麻醉药麻醉方法与麻醉药麻醉方法：全身麻醉和局部麻醉，通过吸麻醉方法：全身麻醉和局部麻醉，通过吸入、注射（静脉、皮下、肌肉、腹腔）、入、注射（静脉、皮下、肌肉、腹腔）、口服、灌胃等方法使动物麻醉。口服、灌胃等方法使动物麻醉。常用麻醉药物：常用麻醉药物：乙醚（吸入），戊巴比妥乙醚（吸入），戊巴比妥钠、硫贲妥钠、氯胺酮（静脉），普鲁卡钠、硫贲妥钠、氯胺酮（静脉），普鲁卡因、利多卡因（局麻因、利多卡因（局麻）。）。麻醉药物应用原则：l依据动物体重计算麻醉药物的剂量；l依据动物生命体征变化控制给药速度；l掌握宁少勿多、分阶段给药的方式。针对不同的动物，选择不同的麻醉药物、实施不同的麻醉方法。常用麻醉药的剂量及注射途径常用麻醉药的剂量及注射途径种种类类戊巴比妥戊巴比妥硫贲妥钠硫贲妥钠盐酸氯胺酮盐酸氯胺酮水合氯醛水合氯醛乌拉坦乌拉坦mg/kg途径途径mg/kg途径途径mg/kg途径途径mg/kg途径途径mg/kg小鼠小鼠3550IVIP2550I.V.IP22-44IM400IP-大鼠大鼠2550IVIP2040IVIP22-44IM300IP0.75IP豚鼠豚鼠3040IVIP2055IVIP22-44IM200-300IP1.5IP家兔家兔3040IVIP20IV22-441.0IVIP狗狗30IV25IV125IV1.0IV猪猪45kg30-2015IVIV10-95IVIV10-1510-15IMIM麻醉注意事项麻醉注意事项麻醉前应麻醉前应禁食禁食8 h以上以上麻醉前应麻醉前应准确称体重准确称体重注意注意麻醉剂量麻醉剂量麻醉过程中麻醉过程中注意观察动物的反应情况注意观察动物的反应情况注意保温注意保温静脉注射时必须缓慢静脉注射时必须缓慢，在寒冷冬季，麻醉剂在注射前应加热至动在寒冷冬季，麻醉剂在注射前应加热至动物体温水平物体温水平第四部分第四部分 供试品给予方法供试品给予方法实验动物常用的给药方法有实验动物常用的给药方法有口服、注射、口服、注射、吸入等吸入等一、经口给药一、经口给药1.自动口服给药：自动口服给药：2.灌胃给药灌胃给药:是借器械将药物是借器械将药物直直接接灌入动物胃内的方法灌入动物胃内的方法。此此法可以准确控制给药量法可以准确控制给药量，但但如果操作不当易造成动物如果操作不当易造成动物死亡。死亡。方法步骤：方法步骤：1 1、将灌胃针连接在注射器上，吸入一定量的药液。、将灌胃针连接在注射器上，吸入一定量的药液。2.2.操操作作前前，大大致致量量一一下下从从口口到到胃胃的的距距离离，估估计计灌灌胃针头插入的深度。胃针头插入的深度。3.3.左手捉持动物，使头部向上。左手捉持动物，使头部向上。3 3、右手持针，把灌胃针头的前端放进动物的口腔，右手持针，把灌胃针头的前端放进动物的口腔，顺着上腭部插入咽部，顺咽后壁轻轻往下推，灌顺着上腭部插入咽部，顺咽后壁轻轻往下推，灌胃针会顺着食管滑入动物的胃内，胃针会顺着食管滑入动物的胃内，此时没有抵触此时没有抵触感。感。4 4、用右手食指将针栓慢慢往下压，将注射器中的、用右手食指将针栓慢慢往下压，将注射器中的药液灌入动物的胃中。药液灌入动物的胃中。（1）大小鼠灌胃：剂量：剂量：小鼠约小鼠约0.1-0.5 mL/10g体重。最体重。最大体积为大体积为1.0mL/只只 大鼠约大鼠约1-2 mL100g体重，最大体积体重，最大体积为为4.0mL/只只注意：注意：在灌胃过程中，避免误插入气管。在灌胃过程中，避免误插入气管。1243（二）注射给药（二）注射给药 1.1.皮下注射皮下注射给给药药 原理：将药液注入皮下结缔组织，经原理：将药液注入皮下结缔组织，经毛细血管、淋巴管吸收进入血液循环。毛细血管、淋巴管吸收进入血液循环。器材：器材：1mL1mL注射器注射器1 1支、生理盐水、烧支、生理盐水、烧 杯、酒精、碘酒、棉球。杯、酒精、碘酒、棉球。方法步骤：方法步骤：(1)(1)注射部位：颈背部、腋下、腹侧和后肢的皮下注射部位：颈背部、腋下、腹侧和后肢的皮下 (2)(2)常规消毒注射部位的皮肤，用注射针头取一常规消毒注射部位的皮肤，用注射针头取一锐锐 角角度角角度刺入皮下刺入皮下.(3)(3)将针头轻轻向左右将针头轻轻向左右 摆动，摆动，易摆动易摆动则表示已则表示已 刺入皮下，再轻轻刺入皮下，再轻轻抽吸抽吸，如无回血，可缓慢地将如无回血，可缓慢地将 药物注入皮下。药物注入皮下。注射量：注射量：0.1mL0.1mL-0.3mL0.3mL/10g g 体重体重。2.皮内注射皮内注射此法用于此法用于观察皮肤血管通透性变化或皮肤观察皮肤血管通透性变化或皮肤反应。反应。注射部位：动物背部注射部位：动物背部脱毛，用针头平直进入皮脱毛，用针头平直进入皮内内注射药液后，皮肤表面鼓起小泡，停片刻注射药液后，皮肤表面鼓起小泡，停片刻拔出针头。拔出针头。3.3.肌肉注射给药肌肉注射给药 原理：将药液注入动物的肌肉组织，经原理：将药液注入动物的肌肉组织，经毛细血管吸收进入血液循环。毛细血管吸收进入血液循环。器材：器材：1mL1mL注射器注射器1 1支、生理盐水、烧支、生理盐水、烧杯、酒精、碘酒、棉球。杯、酒精、碘酒、棉球。注射部位：一般选择肌肉丰富而无注射部位：一般选择肌肉丰富而无大血管通大血管通过过的臀部或大腿外测的臀部或大腿外测，回抽无血即可注射。，回抽无血即可注射。4.腹腔注射原理：将药液注入小鼠的腹腔。原理：将药液注入小鼠的腹腔。器材：注射器器材：注射器1 1支、生理盐水、烧杯、支、生理盐水、烧杯、酒精、碘酒、棉球。酒精、碘酒、棉球。方法步骤：方法步骤：(1)(1)用左手将小鼠捉持保定，使鼠腹部用左手将小鼠捉持保定，使鼠腹部 朝上，鼠头略低于尾部。朝上，鼠头略低于尾部。(2)(2)右手持注射器将针头在下腹部靠近右手持注射器将针头在下腹部靠近 腹白线的两侧进行穿刺。腹白线的两侧进行穿刺。5.5.静脉注射给药静脉注射给药 (1)1)大小大小鼠尾静脉注射鼠尾静脉注射 原理：将药液注入小鼠的尾静脉。原理：将药液注入小鼠的尾静脉。器材：器材：1m11m1注射器注射器1 1支、生理盐水、烧支、生理盐水、烧 杯、金属笼或大小鼠器杯、金属笼或大小鼠器 、酒精、碘酒、棉球。酒精、碘酒、棉球。方法步骤：方法步骤：(1)(1)将将大大小小鼠鼠放放在在金金属属笼笼或或小小鼠鼠固固定定器器 中中，通通过过金金属属笼笼或或大大小小鼠鼠固固定定器器的的孔孔拉拉出鼠尾巴。出鼠尾巴。(2)(2)用左手捏住鼠尾巴中下部，用用左手捏住鼠尾巴中下部，用7575 酒精棉球反复擦拭尾部。酒精棉球反复擦拭尾部。(3)(3)注射时，以左手拇指和中指捏住鼠尾注射时，以左手拇指和中指捏住鼠尾 两侧，用食指从下面托起尾巴，以无两侧，用食指从下面托起尾巴，以无 名指夹住尾巴的末梢。名指夹住尾巴的末梢。(4)(4)右手持右手持4 4号针头的注射器，使针头与号针头的注射器，使针头与 静脉平行（小于静脉平行（小于3030度角）。度角）。(5)(5)从鼠尾巴下从鼠尾巴下1/41/4处进针，仔细观察，处进针，仔细观察，如果无阻力，无白色皮丘出现，说明如果无阻力，无白色皮丘出现，说明 已刺入血管，即可注入药物。已刺入血管，即可注入药物。(6)(6)拔出针头后，用干棉球压住注射部位拔出针头后，用干棉球压住注射部位 约约l l、2min2min，防止出血。，防止出血。注射量：小鼠注射量：小鼠 0.05m10.05m1-0.1m10.1m1/10g g体重。体重。大鼠大鼠1.0-2.0m11.0-2.0m1/100g g体重体重（2 2）兔耳缘静脉给药）兔耳缘静脉给药原理：穿刺兔的耳缘静脉原理：穿刺兔的耳缘静脉器材：兔保定架、注射器器材：兔保定架、注射器1 1支、生理盐水、支、生理盐水、烧杯、酒精、碘酒、棉球。烧杯、酒精、碘酒、棉球。方法步骤：方法步骤：(1)(1)将兔放在保定架内保定。将兔放在保定架内保定。(2)(2)酒精消毒并揉搓血管，酒精消毒并揉搓血管，使使兔的耳缘静脉兔的耳缘静脉充盈。充盈。(3)(3)用用左左手手食食指指和和中中指指夹夹住住兔兔的的耳耳缘缘静静脉脉 的的近近端端，拇拇指指绷绷紧紧静静脉脉的的远远端端，无无名名指指和和小指放在小指放在耳廓下作耳廓下作垫。垫。(4)(4)右右手手拿拿注注射射器器，针针尖尖的的斜斜面面朝朝上上，将将针针头头从从远远心心端端插插入入血血管管，放放松松对对静静脉脉近近心心端端的的压压迫迫，回回抽抽有有血血即即可可注注射射，拔拔针针后后用用棉球止血。棉球止血。第五部分第五部分 实验实验动物的安死术动物的安死术 实验实验动物的处死必须遵循实验动物的伦理动物的处死必须遵循实验动物的伦理要求和动物福利法按照人道主义原则处死要求和动物福利法按照人道主义原则处死实验动物。实验动物。一、一、“安死术安死术”的概念：即安乐死术，是指的概念：即安乐死术，是指以人道的方法处死动物过程。在处死动物以人道的方法处死动物过程。在处死动物的过程中尽量减少动物的惊慌、焦虑，使的过程中尽量减少动物的惊慌、焦虑，使其安静地、无痛苦地死亡。其安静地、无痛苦地死亡。二、采用安死术必须符合的标准。二、采用安死术必须符合的标准。安死术的常用方法安死术的常用方法颈椎脱位法颈椎脱位法 是将实验动物的颈椎脱臼，断离脊髓是将实验动物的颈椎脱臼，断离脊髓 致死，为大、小鼠最常用的处死方法。致死，为大、小鼠最常用的处死方法。空气栓塞法空气栓塞法 处死兔、猫、犬常用此法，兔、猫为处死兔、猫、犬常用此法，兔、猫为20-40ml,20-40ml,犬为犬为80-80-150ml.150ml.过量麻醉处死过量麻醉处死 此法多用于处死大鼠、豚鼠和家兔此法多用于处死大鼠、豚鼠和家兔,吸入乙醚或腹腔注吸入乙醚或腹腔注射巴比妥钠。射巴比妥钠。二氧化碳吸入法二氧化碳吸入法 让实验动物吸入大量让实验动物吸入大量C0C02 2等气体而中毒死亡等气体而中毒死亡。断头处死法、击打头盖骨处死法断头处死法、击打头盖骨处死法第六部分第六部分 动物实验中的安全防护动物实验中的安全防护 主要是指在实验过程中可能对实验人员造成主要是指在实验过程中可能对实验人员造成的危害和对公共环境造成的污染等各种不安全的危害和对公共环境造成的污染等各种不安全因素进行的防护。因素进行的防护。包括防火、防毒、防爆、防包括防火、防毒、防爆、防触电、防辐射、防外伤、防动物咬伤、防动物触电、防辐射、防外伤、防动物咬伤、防动物传染。传染。实验人员的安全管理人员安全教育实验人员的健康管理以外损伤的防护动物实验常用手术器械动物实验常用手术器械 粗剪粗剪 用于蛙类实验中的剪骨、肌肉和用于蛙类实验中的剪骨、肌肉和皮肤等粗硬组织以及家兔等实验动物皮肤等粗硬组织以及家兔等实验动物的剪毛。的剪毛。剪毛时，剪毛剪自然落下逆毛方剪毛时，剪毛剪自然落下逆毛方向一次次将毛剪下即可，加力下压或向一次次将毛剪下即可，加力下压或一手提起被毛，均易剪破皮肤。剪下一手提起被毛，均易剪破皮肤。剪下的毛应集中放入加有清水的污物盒内，的毛应集中放入加有清水的污物盒内，避免到处飞扬。避免到处飞扬。手术剪手术剪用于剪线和剪开、分离组织。用于剪线和剪开、分离组织。有直、弯、尖头、圆头、大、有直、弯、尖头、圆头、大、小之分，根据不同用途选用。小之分，根据不同用途选用。手术操作中用于沿组织间隙手术操作中用于沿组织间隙进行分离和剪断组织者称组进行分离和剪断组织者称组织剪，一般为弯形，尖端较织剪，一般为弯形，尖端较钝圆；用于剪断缝扎线、引钝圆；用于剪断缝扎线、引流物或敷料等用品者称剪线流物或敷料等用品者称剪线剪，为直形。剪，为直形。眼科剪眼科剪 主要用于剪血管或神经等柔主要用于剪血管或神经等柔软组织，眼科剪也有直头与弯头软组织，眼科剪也有直头与弯头之分，正确的执剪姿势与手术剪之分，正确的执剪姿势与手术剪相同，即用拇指与无名指持剪，相同，即用拇指与无名指持剪，食指置于手术剪上方。食指置于手术剪上方。手术刀手术刀l由由刀刀片片和和刀刀柄柄组组成成，可可分分为为大大、中、小号不同类型。中、小号不同类型。l大号大号切开皮肤；切开皮肤；l中号中号切割脏器组织；切割脏器组织；l小号小号切割特殊部位。切割特殊部位。l安安装装：先先用用持持针针器器（或或直直型型止止血血钳钳）夹夹住住刀刀片片，左左手手握握住住刀刀柄柄，按按刀刀片片上上的的空空隙隙对对准准刀刀柄柄上上的的槽槽隙隙，顺顺势势推推入入即可即可。手术刀握持方法执执笔笔式式：即即以以持持笔笔的的手手法法握握住住刀刀柄柄，适适用用于于小小范范围围内内的的组组织织切切开开，随随意意性性强，可作垂直或水平切割强，可作垂直或水平切割。持持弓弓式式：右右手手中中指指、无无名名指指按按压压在在手手术术刀刀柄柄的的外外侧侧缘缘，拇拇指指放放在在刀刀柄柄内内侧侧缘缘，食食指指按按压压在在刀刀片片后后13处处。适用于切开皮肤。适用于切开皮肤。组织镊组织镊l组织镊和眼科组织镊和眼科镊镊l组组织织镊镊钳钳夹夹组组织织，分分离离组组织和筋膜。织和筋膜。l眼科镊眼科镊分离分离血管血管l使使用用手手法法：以以食食指指、中中指指放放于于器器械械的的外外侧侧缘缘，拇拇指指放放于于内内侧侧缘缘，集集3指指的的力力量量实实施施操操作作动动作作，而而且且适适用用于于左左右右手手的同时操作。的同时操作。止血钳止血钳l止血和分离组织。止血和分离组织。l使使用用方方法法：以以拇拇指指、中中指指（或或无无名名指指）分分别别套套人人止止血血钳钳的的套套扣扣内内，控控制制止止血血钳钳展展开开的的力力度度，以以食食指指放放在在止止血血钳钳的的关关节节部部位位，控控制制止止血血钳钳的的方方向向和和钳钳夹夹组组织织部位的准确性。部位的准确性。l切切忌忌左左右右手手分分别别抓抓住住止止血血钳钳的的套套扣扣部部位位，用用两两手手的的合合力力进进行行止血或分离组织。止血或分离组织。缝合针缝合针l有圆针和角针两种，圆针用于缝合组织结构；有圆针和角针两种，圆针用于缝合组织结构；l角针边缘锋利，除具有穿刺功能外，还具有角针边缘锋利，除具有穿刺功能外，还具有 切割的作用；缝合针需配合持针器同时使用。切割的作用；缝合针需配合持针器同时使用。探针探针包包括括金金属属探探针针和和玻玻璃璃分分针针；用用于于对对精精细细部部位位的的分分离离和和游游离离等等操操作作。有有时时，在在实实施施血血管管插插管管技技术术时时，切切开开血血管管壁壁后后往往往往借借助助于于探探针针先先将将切切口口挑挑起起，然然后插入导管。后插入导管。