常见性病实验室检测原理、方法.ppt

常见性病实验室检测原理、方法荆门市疾病预防控制中心荆门市疾病预防控制中心周丽萍周丽萍性病实验室检测概述性病实验室检测概述病原体淋球菌梅毒螺旋体生殖器疱疹病毒生殖道沙眼衣原体乳头瘤病毒HIV病毒杜克雷噬血杆菌衣原体念珠菌滴虫疥虫阴虱肝炎病毒病病病病 种种种种淋病淋病淋病淋病梅毒梅毒梅毒梅毒:生殖器疱疹生殖器疱疹生殖器疱疹生殖器疱疹:生殖道沙眼衣原体感染生殖道沙眼衣原体感染生殖道沙眼衣原体感染生殖道沙眼衣原体感染:尖锐湿疣尖锐湿疣尖锐湿疣尖锐湿疣:HIVHIVHIVHIV感染感染感染感染/艾滋病艾滋病艾滋病艾滋病:软下疳软下疳软下疳软下疳:性病性淋巴肉芽肿性病性淋巴肉芽肿性病性淋巴肉芽肿性病性淋巴肉芽肿:念珠菌性阴道炎念珠菌性阴道炎念珠菌性阴道炎念珠菌性阴道炎:滴虫性阴道病滴虫性阴道病滴虫性阴道病滴虫性阴道病:疥疮疥疮疥疮疥疮:阴虱病阴虱病阴虱病阴虱病:肝炎（乙、丙）：肝炎（乙、丙）：肝炎（乙、丙）：肝炎（乙、丙）：性传播疾病(STD）梅毒梅毒淋病淋病软下疳软下疳性病性淋巴肉芽肿性病性淋巴肉芽肿非淋菌性尿道炎非淋菌性尿道炎生殖器疱疹生殖器疱疹尖锐湿疣尖锐湿疣HIV/AIDSHIV/AIDS梅毒梅毒淋病淋病软下疳软下疳性病性淋巴肉芽肿性病性淋巴肉芽肿50-6050-60年代年代经典性病经典性病80-9080-90年代年代监测性病监测性病目目 前前传染法报告病例传染法报告病例 监测性病监测性病梅毒梅毒淋病淋病沙眼衣原体感染沙眼衣原体感染生殖器疱疹生殖器疱疹尖锐湿疣尖锐湿疣我国主要流行的性传播疾病（性病）沙眼衣原体沙眼衣原体:30%:30%50%50%生殖支原体生殖支原体:10%:10%40%40%其它其它:20%:20%30%30%梅毒梅毒淋病淋病HIV/AIDSHIV/AIDS性病实验室检测方法及试剂我国性病的检测方法及试剂的现状：我国性病的检测方法及试剂的现状：我国性病的检测方法及试剂的现状：我国性病的检测方法及试剂的现状：多样、比较混乱多样、比较混乱多样、比较混乱多样、比较混乱 例例例例1 1 1 1：梅毒：梅毒：梅毒：梅毒n n产品：国产产品：国产产品：国产产品：国产54545454家、家、家、家、进口进口进口进口7 7 7 7家家家家n n种类：凝集、胶体金、种类：凝集、胶体金、种类：凝集、胶体金、种类：凝集、胶体金、ELISA ELISA ELISA ELISA、发光法、荧光法、发光法、荧光法、发光法、荧光法、发光法、荧光法性病实验室检测方法及试剂（1 1 1 1）淋球菌检测）淋球菌检测）淋球菌检测）淋球菌检测试剂盒试剂盒试剂盒试剂盒【说说说说明明明明】本试剂本试剂本试剂本试剂盒是利用淋球菌特盒是利用淋球菌特盒是利用淋球菌特盒是利用淋球菌特有的有的有的有的30%30%30%30%过氧化氢试过氧化氢试过氧化氢试过氧化氢试验，经科学放大提验，经科学放大提验，经科学放大提验，经科学放大提高该试验的灵敏度，高该试验的灵敏度，高该试验的灵敏度，高该试验的灵敏度，-【功功功功效效效效】特别适特别适特别适特别适用于分泌物少的慢用于分泌物少的慢用于分泌物少的慢用于分泌物少的慢性淋菌性尿道炎患性淋菌性尿道炎患性淋菌性尿道炎患性淋菌性尿道炎患者，只需少量尿液者，只需少量尿液者，只需少量尿液者，只需少量尿液即可检测。即可检测。即可检测。即可检测。（2）淋球菌检测试剂条【说明】n规格：25T/盒 产品注册号：粤食药管械（准）字2004第2400222号（更）n本试剂盒特点1、高灵敏度。2、操作简便，全部反应时间仅为3-5分钟。3、检测结果易于判断。4、适用于脓性、非脓性尿道炎的检测（包括隐性患者）。5、特别适用于大批量体检标本检测。例2：淋病（3 3）淋球菌抗原检测板）淋球菌抗原检测板 n n【产品名称产品名称】淋球菌抗原检淋球菌抗原检测板测板 n n【产品编号产品编号】Y70Y70n n【英文名称英文名称】NG-AgCassetNG-AgCassetn n【产品规格产品规格】25T25Tn n【检测方法检测方法】层析金标层析金标 n n【生产产商生产产商】KlysterKlystern n【商品价格商品价格】350.00350.00元元 n n【说明书说明书】下载下载=性病实验室检测方法及试剂例例3：沙眼衣原体感染：沙眼衣原体感染 快速抗原检测：快速抗原检测：5-6厂家厂家 ELISA法法 荧光抗体标记法荧光抗体标记法 核酸检测法：核酸检测法：PCR-ELISA、实时荧光、实时荧光PCR、LCR、TMA、Prob Tec、Amplicon 快速抗体检测：快速抗体检测：4-5厂家（非正规方法）厂家（非正规方法）主要常见性病实验室检测介绍n梅毒梅毒n淋病淋病n生殖道沙眼衣原体感染生殖道沙眼衣原体感染n n生殖器疱疹生殖器疱疹 n n阴道滴虫病阴道滴虫病 n n细菌性阴道病细菌性阴道病 n n生殖器念珠菌病生殖器念珠菌病 一、梅一、梅 毒毒全国梅毒检测技术规范（送审稿）10n梅毒及其病原体n样品的采集和处理n病原学检测n血清学检测n核酸检测n实验室生物安全n梅毒血清学检测实验室质量管理常用梅毒检测方法n病原学检测病原学检测n血清学检测血清学检测病原学检查n n原理：一期、二期梅毒时，取原理：一期、二期梅毒时，取原理：一期、二期梅毒时，取原理：一期、二期梅毒时，取硬下疳、硬下疳、硬下疳、硬下疳、扁平湿疣、黏膜斑等皮损部位组织液扁平湿疣、黏膜斑等皮损部位组织液扁平湿疣、黏膜斑等皮损部位组织液扁平湿疣、黏膜斑等皮损部位组织液或淋巴结穿刺术得到的组织液，在暗或淋巴结穿刺术得到的组织液，在暗或淋巴结穿刺术得到的组织液，在暗或淋巴结穿刺术得到的组织液，在暗视野显微镜下，视野显微镜下，视野显微镜下，视野显微镜下，光线从聚光器的边缘光线从聚光器的边缘光线从聚光器的边缘光线从聚光器的边缘斜射到涂片上的梅毒螺旋体而发出亮斜射到涂片上的梅毒螺旋体而发出亮斜射到涂片上的梅毒螺旋体而发出亮斜射到涂片上的梅毒螺旋体而发出亮光，从而可根据其特殊形态和运动方光，从而可根据其特殊形态和运动方光，从而可根据其特殊形态和运动方光，从而可根据其特殊形态和运动方式进行检测。式进行检测。式进行检测。式进行检测。n n方法：病原学检查的主要方法有暗视方法：病原学检查的主要方法有暗视方法：病原学检查的主要方法有暗视方法：病原学检查的主要方法有暗视显微镜检查、镀银染色法和直接荧光显微镜检查、镀银染色法和直接荧光显微镜检查、镀银染色法和直接荧光显微镜检查、镀银染色法和直接荧光法法法法病原学检查的临床意义1.1.病原学方法直接镜检到梅毒螺旋病原学方法直接镜检到梅毒螺旋体，在临床可确诊梅毒，且具有体，在临床可确诊梅毒，且具有快速、方便、易操作的特点。快速、方便、易操作的特点。2.2.螺旋体检查是诊断早期现症梅毒螺旋体检查是诊断早期现症梅毒的最佳方法，对于患者的早期诊的最佳方法，对于患者的早期诊断、及时治疗、预后和尽早切断断、及时治疗、预后和尽早切断传染源都有十分重要的意义。传染源都有十分重要的意义。3.3.如未见到梅毒螺旋体，并不能排如未见到梅毒螺旋体，并不能排除患梅毒的可能性。除患梅毒的可能性。梅毒血清学检测分类(1)(1)非梅毒螺旋体抗体检测试验非梅毒螺旋体抗体检测试验（非特异性（非特异性梅毒抗体）梅毒抗体）(2)(2)梅毒螺旋体抗体检测试验梅毒螺旋体抗体检测试验（特异性梅毒（特异性梅毒抗体）两类方法。抗体）两类方法。非梅毒螺旋体抗体试验1 1、原理：、原理：梅毒螺旋体感染人体后，宿主会梅毒螺旋体感染人体后，宿主会产生抗类脂抗原的抗体，可检测梅毒患者产生抗类脂抗原的抗体，可检测梅毒患者血中的抗类脂抗原的抗体血中的抗类脂抗原的抗体 2 2、方法：、方法：n n 快速血浆反应素环状卡片试验快速血浆反应素环状卡片试验 (RPR)(RPR)n n 甲苯胺红不加热血清试验（甲苯胺红不加热血清试验（TRUSTTRUST）n n 性病研究实验室试验性病研究实验室试验 (VDRL)(VDRL)等。等。RPR结果非梅毒螺旋体抗体试验临床意义n非梅毒螺旋体抗原血清试验方法简单、快速、敏非梅毒螺旋体抗原血清试验方法简单、快速、敏感性和特异性较好。适用于大量人群的筛查。感性和特异性较好。适用于大量人群的筛查。n早期梅毒硬下疳出现早期梅毒硬下疳出现1 1周周-2-2周后，血清可呈阳性。周后，血清可呈阳性。n经治疗后血清滴度可下降并阴性，故可作为疗效经治疗后血清滴度可下降并阴性，故可作为疗效观察、判愈、复发或再感染的指征。观察、判愈、复发或再感染的指征。梅毒螺旋体抗体试验1 1 1 1、原理：用梅毒螺旋体特异蛋白为抗原，检测梅毒患、原理：用梅毒螺旋体特异蛋白为抗原，检测梅毒患、原理：用梅毒螺旋体特异蛋白为抗原，检测梅毒患、原理：用梅毒螺旋体特异蛋白为抗原，检测梅毒患者血中特异性抗梅毒螺旋体抗原的抗体者血中特异性抗梅毒螺旋体抗原的抗体者血中特异性抗梅毒螺旋体抗原的抗体者血中特异性抗梅毒螺旋体抗原的抗体 2 2 2 2、方法：、方法：、方法：、方法：n n 梅毒螺旋体颗粒凝集试验梅毒螺旋体颗粒凝集试验梅毒螺旋体颗粒凝集试验梅毒螺旋体颗粒凝集试验 (TPPA)(TPPA)(TPPA)(TPPA)n n 梅毒螺旋体血球凝集试验梅毒螺旋体血球凝集试验梅毒螺旋体血球凝集试验梅毒螺旋体血球凝集试验 (TPHA)(TPHA)(TPHA)(TPHA)n n 梅毒酶联免疫吸附试验（梅毒酶联免疫吸附试验（梅毒酶联免疫吸附试验（梅毒酶联免疫吸附试验（TP-ELISATP-ELISATP-ELISATP-ELISA）n n 化学发光试验化学发光试验化学发光试验化学发光试验n n 梅毒免疫层析法梅毒免疫层析法梅毒免疫层析法梅毒免疫层析法-梅毒快速检测梅毒快速检测梅毒快速检测梅毒快速检测 (TP-RT)(TP-RT)(TP-RT)(TP-RT)n n FTA-ABS FTA-ABS FTA-ABS FTA-ABSn n 梅毒梅毒梅毒梅毒IgMIgMIgMIgM抗体检测（抗体检测（抗体检测（抗体检测（TP-IgMTP-IgMTP-IgMTP-IgM）n n 梅毒螺旋体蛋白印迹试验（梅毒螺旋体蛋白印迹试验（梅毒螺旋体蛋白印迹试验（梅毒螺旋体蛋白印迹试验（TP-WBTP-WBTP-WBTP-WB）等）等）等）等 梅毒螺旋体抗体试验临床意义n作为非梅毒螺旋体抗原血清试验作为非梅毒螺旋体抗原血清试验(如如RPRRPR等等)初初筛阳性标本的确证试验。筛阳性标本的确证试验。n梅毒患者经过抗梅治疗后，梅毒患者经过抗梅治疗后，TPPATPPA等等梅毒螺旋梅毒螺旋体抗体体抗体试验试验仍可阳性，故试验仍可阳性，故TPPATPPA等试验阳等试验阳性不能作为疗效观察的指标。性不能作为疗效观察的指标。nTPPATPPA等阳性不能区分既往感染和现症感染，等阳性不能区分既往感染和现症感染，应结合非梅毒螺旋体抗原血清试验结果进行应结合非梅毒螺旋体抗原血清试验结果进行诊断。诊断。非梅毒螺旋体抗体试验结果解释示意图早期晚期一期二期早期潜伏晚期潜伏三期 治疗前治疗前治疗前治疗前 治疗后治疗后治疗后治疗后 阳性阴性梅毒螺旋体抗体试验结果解释示意图早期一期二期早期潜伏晚期晚期潜伏三期 治疗前治疗前治疗前治疗前 治疗后治疗后治疗后治疗后阳性阴性梅毒血清学试验结果的临床意义总汇 USR TPPA USR TPPA USR TPPA USR TPPA 意义意义意义意义 RPR TP-ELISARPR TP-ELISARPR TP-ELISARPR TP-ELISA VDRL TP-RT VDRL TP-RT VDRL TP-RT VDRL TP-RT _ _ _ _ _ _ _ _ 排除梅毒排除梅毒排除梅毒排除梅毒 一期梅毒的早期一期梅毒的早期一期梅毒的早期一期梅毒的早期 +现症梅毒现症梅毒现症梅毒现症梅毒(梅毒孕妇所生梅毒孕妇所生梅毒孕妇所生梅毒孕妇所生 的婴儿除外的婴儿除外的婴儿除外的婴儿除外)+-+-+-+-生物学假阳性生物学假阳性生物学假阳性生物学假阳性 -+-+-+-+早期梅毒经治疗后早期梅毒经治疗后早期梅毒经治疗后早期梅毒经治疗后梅毒血清学检测意义检测目的检测目的:临床诊断、血液筛查、流行病学监测临床诊断、血液筛查、流行病学监测n n以临床诊断为目的的检测是为了确定梅毒以临床诊断为目的的检测是为了确定梅毒感染的状况。感染的状况。n n以血液筛查为目的的检测是为了防止梅毒以血液筛查为目的的检测是为了防止梅毒的经血传播。的经血传播。n n以流行病学监测为目的的检测是为了调查以流行病学监测为目的的检测是为了调查梅毒血清学感染率和发病率。梅毒血清学感染率和发病率。梅毒血清学检测检测策略及要求检测要点检测要点n n根据目的选择检测根据目的选择检测根据目的选择检测根据目的选择检测方法及检测策略。方法及检测策略。n n可采用任何一类梅毒血清学检测方法作为可采用任何一类梅毒血清学检测方法作为筛查试验。筛查试验。检测试剂要求检测试剂要求n n所有应用于临床的检测试剂均必须是经国家食品所有应用于临床的检测试剂均必须是经国家食品所有应用于临床的检测试剂均必须是经国家食品所有应用于临床的检测试剂均必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、在有效期内的试剂，药品监督管理局注册批准、在有效期内的试剂，药品监督管理局注册批准、在有效期内的试剂，药品监督管理局注册批准、在有效期内的试剂，有批批检合格证的试剂。推荐使用临床质量评估有批批检合格证的试剂。推荐使用临床质量评估有批批检合格证的试剂。推荐使用临床质量评估有批批检合格证的试剂。推荐使用临床质量评估敏感性和特异性高的试剂。敏感性和特异性高的试剂。敏感性和特异性高的试剂。敏感性和特异性高的试剂。附：附：20092009年度梅毒血清学年度梅毒血清学检测试剂评估结果检测试剂评估结果2009年参评试剂厂家(非梅毒螺旋体抗原血清学试验)n n试剂名称试剂名称 生产厂家生产厂家(试剂简称试剂简称)批号批号 有效期有效期n n梅毒快速血浆反应素环状卡片梅毒快速血浆反应素环状卡片 上海科华生物技术有限上海科华生物技术有限 20090901 2010090620090901 20100906n n试验诊断试剂盒试验诊断试剂盒(RPR)(RPR)公司公司(科华科华RPR)RPR)n n梅毒甲苯胺红不加热血清试验梅毒甲苯胺红不加热血清试验 上海荣盛生物技术有限上海荣盛生物技术有限 20090901 2010090320090901 20100903n n诊断试剂盒诊断试剂盒(TRUST)(TRUST)公司公司(荣盛荣盛TRUST)TRUST)n n n n梅毒甲苯胺红不加热血清试验梅毒甲苯胺红不加热血清试验 北京金豪制药有限公司北京金豪制药有限公司 200909098 20100704 200909098 20100704 n n诊断试剂盒诊断试剂盒(TRUST)(TRUST)(金豪金豪TRUST)TRUST)n n n n梅毒甲苯胺红不加热血清试验梅毒甲苯胺红不加热血清试验 北京万泰生物药业有限北京万泰生物药业有限 M20090803 20100806M20090803 20100806n n诊断试剂盒诊断试剂盒(TRUST)(TRUST)公司公司(万泰万泰TRUST)TRUST)n n n n梅毒甲苯胺红不加热血清试验梅毒甲苯胺红不加热血清试验 英科新创英科新创(厦门厦门)科技有限科技有限 2009057602 201005212009057602 20100521n n诊断试剂盒诊断试剂盒(TRUST)(TRUST)公司公司(英科英科TRUST)TRUST)n n n n梅毒甲苯胺红不加热血清试验梅毒甲苯胺红不加热血清试验 郑州安图绿科生物工程郑州安图绿科生物工程 20090818 20100817 20090818 20100817 n n诊断试剂盒诊断试剂盒(TRUST)(TRUST)有限公司有限公司(安图安图TRUST)TRUST)参评试剂厂家(梅毒螺旋体抗原血清学试验梅毒螺旋体抗原血清学试验)试剂名称试剂名称试剂名称试剂名称 生产厂家生产厂家生产厂家生产厂家(试剂简称试剂简称试剂简称试剂简称)批号批号批号批号 有效期有效期有效期有效期 n n梅毒螺旋体抗体诊断试剂梅毒螺旋体抗体诊断试剂(双抗双抗 上海科华生物技术有限公司上海科华生物技术有限公司 20090517 2010051520090517 20100515n n夹心法夹心法)(ELISA-TP)()(ELISA-TP)(科华科华ELISA)ELISA)n n梅毒螺旋体抗体胶体金诊断梅毒螺旋体抗体胶体金诊断 艾康生物技术艾康生物技术(杭州杭州)有限公有限公 200911208 09-200911208 09-20112011n n试剂试剂 (TP-RTTP-RT)司司(艾康艾康RTRT)n n梅毒螺旋体抗体酶联免疫诊断试剂梅毒螺旋体抗体酶联免疫诊断试剂 北京华大吉比爱生物技术有北京华大吉比爱生物技术有 20091005 2010.10.0520091005 2010.10.05n n盒盒(双抗原夹心法双抗原夹心法)(ELISA-TP)(ELISA-TP)限公司限公司(华大华大ELISA)ELISA)n n梅毒螺旋体抗体诊断试剂梅毒螺旋体抗体诊断试剂(双抗双抗 北京金豪制药有限公司北京金豪制药有限公司 200909105 200909105 2010/09/092010/09/09n n夹心法夹心法)(ELISA-TP)()(ELISA-TP)(金豪金豪ELISA)ELISA)n n梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒(化学化学 北京科美东雅生物技术有限北京科美东雅生物技术有限 20091026 2010102520091026 20101025n n发光法发光法)公司公司(科美发光科美发光)n n梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒(酶联酶联 北京现代高达生物技术有限北京现代高达生物技术有限 200908003 20100817200908003 20100817n n免疫法免疫法)(ELISA-TP)(ELISA-TP)责任公司责任公司(现代现代ELISA)ELISA)n n梅毒螺旋体抗体诊断试剂梅毒螺旋体抗体诊断试剂(双抗双抗 北京万泰生物药业有限北京万泰生物药业有限 N20090302 20100304N20090302 20100304n n夹心法夹心法)(ELISA-TP)(ELISA-TP)公司公司(万泰万泰ELISA)ELISA)n n梅毒螺旋体抗体诊断试纸盒梅毒螺旋体抗体诊断试纸盒 北京万泰生物药业有限公司北京万泰生物药业有限公司 O20090903 2011-02-07O20090903 2011-02-07n n(TP-RTTP-RT)()(万泰万泰RTRT)n n梅毒螺旋体抗体酶联免疫诊断试盒剂梅毒螺旋体抗体酶联免疫诊断试盒剂 英科新创英科新创(厦门厦门)科技有限公司科技有限公司 2009097513 201009032009097513 20100903n n(双抗原夹心酶联免疫法双抗原夹心酶联免疫法)(ELISA-TP)()(ELISA-TP)(厦门英科新创厦门英科新创ELISA)ELISA)n n梅毒螺旋体抗体检测试纸条梅毒螺旋体抗体检测试纸条(胶体金胶体金)英科新创英科新创(厦门厦门)科技有限公司科技有限公司 2009040919 20101024 2009040919 20101024 n n(TP-RTTP-RT)()(厦门英科厦门英科RTRT)n n梅毒螺旋体抗体诊断试剂梅毒螺旋体抗体诊断试剂(双抗夹心双抗夹心 珠海丽珠试剂有限公司珠海丽珠试剂有限公司 20090702 2010070120090702 20100701n n法法)(ELISA-TP)()(ELISA-TP)(丽珠丽珠ELISA)ELISA)结 果(非梅毒螺旋体抗原血清学试验非梅毒螺旋体抗原血清学试验)试剂简称试剂简称 敏感性敏感性 (%)(%)特异性特异性(%)Kappa(%)Kappa值值 金豪金豪TRUST 96.2 94.9 0.899 TRUST 96.2 94.9 0.899 荣盛荣盛TRUST 94.3 96.9 0.912TRUST 94.3 96.9 0.912新创新创TRUST 92.5 95.9 0.883 TRUST 92.5 95.9 0.883 安图安图TRUST 92.5 95.4 0.876 TRUST 92.5 95.4 0.876 万泰万泰TRUST 91.5 95.9 0.876TRUST 91.5 95.9 0.876结 果(梅毒螺旋体抗原血清学试验梅毒螺旋体抗原血清学试验)试剂简称试剂简称试剂简称试剂简称 敏感性敏感性敏感性敏感性(%)(%)特异性特异性特异性特异性(%)(%)功效率功效率功效率功效率 (%)Kappa(%)Kappa值值值值科美发光科美发光 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 1.000 1.000 万泰万泰ELISA ELISA 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 1.000 1.000 新创新创ELISA 97.6 100.0 ELISA 97.6 100.0 99.0 99.0 0.979 0.979 丽珠丽珠ELISA 96.7 100.0 ELISA 96.7 100.0 98.7 98.7 0.972 0.972 华大华大ELISA 96.7 100.0 ELISA 96.7 100.0 98.7 98.7 0.972 0.972 科华科华ELISA ELISA 100.0 98.9 100.0 98.9 99.3 99.3 0.986 0.986 现代现代ELISA ELISA 100.0 98.3 100.0 98.3 99.0 99.0 0.979 0.979 金豪金豪ELISA 99.2 98.3 ELISA 99.2 98.3 98.7 98.7 0.972 0.972 万泰万泰RT RT 100.0 99.4 100.0 99.4 99.7 99.7 0.993 0.993 英科英科RT 96.7 99.4 RT 96.7 99.4 98.3 98.3 0.965 0.965 艾康艾康RT 91.1 99.4 RT 91.1 99.4 96.0 96.0 0.916 0.916 二、淋二、淋 病病常用淋病检测方法n直接显微镜检查直接显微镜检查n分离培养淋球菌分离培养淋球菌直接显微镜检查n n原理原理原理原理：男性：男性：男性：男性淋菌性尿道炎患者淋菌性尿道炎患者淋菌性尿道炎患者淋菌性尿道炎患者常有大量黄白色脓性分泌物，常有大量黄白色脓性分泌物，常有大量黄白色脓性分泌物，常有大量黄白色脓性分泌物，其多形核白细胞内可找到革兰其多形核白细胞内可找到革兰其多形核白细胞内可找到革兰其多形核白细胞内可找到革兰染色阴性的双球菌。染色阴性的双球菌。染色阴性的双球菌。染色阴性的双球菌。n n方法：革兰染色为一传统方法，方法：革兰染色为一传统方法，方法：革兰染色为一传统方法，方法：革兰染色为一传统方法，革兰染色将菌分为二大类，即革兰染色将菌分为二大类，即革兰染色将菌分为二大类，即革兰染色将菌分为二大类，即染成紫色的革兰阳性菌及染成染成紫色的革兰阳性菌及染成染成紫色的革兰阳性菌及染成染成紫色的革兰阳性菌及染成红色的革兰阴性菌。红色的革兰阴性菌。红色的革兰阴性菌。红色的革兰阴性菌。直接显微镜检查的临床意义n n男性淋菌性尿道炎的尿道标本男性淋菌性尿道炎的尿道标本男性淋菌性尿道炎的尿道标本男性淋菌性尿道炎的尿道标本 敏感性及特异性可高达敏感性及特异性可高达敏感性及特异性可高达敏感性及特异性可高达95%95%95%95%99%99%99%99%，具诊断价值。，具诊断价值。，具诊断价值。，具诊断价值。n n宫颈标本、无症状男性尿拭子及取自直肠的涂片时宫颈标本、无症状男性尿拭子及取自直肠的涂片时宫颈标本、无症状男性尿拭子及取自直肠的涂片时宫颈标本、无症状男性尿拭子及取自直肠的涂片时 敏感性仅敏感性仅敏感性仅敏感性仅4040404070%70%70%70%。不不不不推推推推荐荐荐荐直直直直接接接接显显显显微微微微镜镜镜镜检检检检查查查查诊诊诊诊断断断断直直直直肠肠肠肠和和和和咽咽咽咽部部部部淋淋淋淋球球球球菌菌菌菌感感感感染染染染。亦亦亦亦不不不不能能能能用用用用于于于于疗疗疗疗后后后后判判判判愈愈愈愈。如如如如果果果果在在在在多多多多形形形形核核核核细细细细胞胞胞胞外外外外见见见见到到到到形形形形态态态态典典典典型的革兰阴性双球菌，需做培养进行确证。型的革兰阴性双球菌，需做培养进行确证。型的革兰阴性双球菌，需做培养进行确证。型的革兰阴性双球菌，需做培养进行确证。淋球菌培养1原理：淋球菌在适宜的培养基上可生长出特征原理：淋球菌在适宜的培养基上可生长出特征原理：淋球菌在适宜的培养基上可生长出特征原理：淋球菌在适宜的培养基上可生长出特征性的菌落，根据菌落大小、形态、光泽、边缘、性的菌落，根据菌落大小、形态、光泽、边缘、性的菌落，根据菌落大小、形态、光泽、边缘、性的菌落，根据菌落大小、形态、光泽、边缘、颜色等情况，可以作为淋球菌的鉴定依据之一。颜色等情况，可以作为淋球菌的鉴定依据之一。颜色等情况，可以作为淋球菌的鉴定依据之一。颜色等情况，可以作为淋球菌的鉴定依据之一。2、方法特点：、方法特点：、方法特点：、方法特点：n n敏感性敏感性敏感性敏感性 81100%81100%。n n 特异性特异性特异性特异性 100%100%淋球菌培养n n培培培培养养养养条条条条件件件件 ：35 35 3636，含含含含5%5%10%10%CO2CO2，湿润（湿润（湿润（湿润（70%70%湿度）的环境。湿度）的环境。湿度）的环境。湿度）的环境。CO2CO2环环环环境境境境可可可可由由由由CO2CO2培培培培养养养养箱箱箱箱、CO2CO2产产产产气气气气袋袋袋袋及及及及烛烛烛烛缸缸缸缸提提提提供供供供。使使使使用用用用烛烛烛烛缸缸缸缸时时时时，应应应应使使使使用用用用白白白白色色色色、无无无无芳芳芳芳香香香香味味味味的的的的无无无无毒毒毒毒性性性性蜡蜡蜡蜡烛烛烛烛。在在在在烛烛烛烛缸缸缸缸底底底底部部部部放放放放些些些些浸浸浸浸水水水水棉棉棉棉球球球球以以以以保保保保持持持持一一一一定定定定的的的的湿湿湿湿度。度。度。度。n n培养时间：培养时间：培养时间：培养时间：24482448小时小时小时小时淋球菌的初步鉴定 初步鉴定淋球菌的依据初步鉴定淋球菌的依据初步鉴定淋球菌的依据初步鉴定淋球菌的依据n n菌落特征菌落特征菌落特征菌落特征n n氧化酶试验氧化酶试验氧化酶试验氧化酶试验n n革兰染色革兰染色革兰染色革兰染色淋球菌培养的临床意义n培养法为诊断淋病的金标准培养法为诊断淋病的金标准.n n用用于于女女性性感感染染者者、亚亚临临床床感感染染者者、以以及及来来自自直直肠肠和和咽咽部部的的感感染染的的确确诊诊试验。试验。生殖道沙眼衣原体感染生殖道沙眼衣原体感染生殖道沙眼衣原体感染简介5050年代年代8080年代年代梅毒梅毒淋病淋病软下疳软下疳性病性淋巴肉芽肿性病性淋巴肉芽肿梅毒梅毒淋病淋病软下疳软下疳性病性淋巴肉芽肿性病性淋巴肉芽肿非淋菌性尿道炎非淋菌性尿道炎生殖器疱疹生殖器疱疹尖锐湿疣尖锐湿疣HIV/AIDSHIV/AIDS20072007年后年后梅毒梅毒淋病淋病生殖道沙眼衣原体感染生殖道沙眼衣原体感染生殖器疱疹生殖器疱疹尖锐湿疣尖锐湿疣HIV/AIDSHIV/AIDS常用生殖道衣原体感染检测方法n抗原检测抗原检测 酶联免疫吸附试验（酶联免疫吸附试验（ELISAELISA）免疫层析快速检测免疫层析快速检测n核酸检测核酸检测酶联免疫吸附试验1、原理：于衣原体特异性单克隆抗体形成抗原抗体复合原理：于衣原体特异性单克隆抗体形成抗原抗体复合物，通过酶联显色反应检测衣原体抗原。物，通过酶联显色反应检测衣原体抗原。2、方法特点、方法特点 敏感性：敏感性：79799797 特异性特异性:97:979999n试验结果阴性时，不能完全排除沙眼衣原体感染，有可试验结果阴性时，不能完全排除沙眼衣原体感染，有可能是沙眼衣原体数量不足或标本采集不当的缘故能是沙眼衣原体数量不足或标本采集不当的缘故n n结果判读客观性强，适宜于大样本沙眼衣原结果判读客观性强，适宜于大样本沙眼衣原结果判读客观性强，适宜于大样本沙眼衣原结果判读客观性强，适宜于大样本沙眼衣原体感染的检测。体感染的检测。体感染的检测。体感染的检测。n n在沙眼衣原体高流行率的人群临床和健康体在沙眼衣原体高流行率的人群临床和健康体在沙眼衣原体高流行率的人群临床和健康体在沙眼衣原体高流行率的人群临床和健康体检；低流行率（小于检；低流行率（小于检；低流行率（小于检；低流行率（小于5%5%）的人群中应用时，）的人群中应用时，）的人群中应用时，）的人群中应用时，结果解释应慎重。结果解释应慎重。结果解释应慎重。结果解释应慎重。酶联免疫吸附试验临床意义抗原快速检测1 1、原理：原理：利用免疫层析法原理，采用胶体金标记的沙眼衣利用免疫层析法原理，采用胶体金标记的沙眼衣原体抗体滤纸条或卡，快速检测标本中的沙眼衣原体抗原体抗体滤纸条或卡，快速检测标本中的沙眼衣原体抗原。原。2 2、方法特点、方法特点n简易，方便，快速，尤其适用于基层单位简易，方便，快速，尤其适用于基层单位n标本中需要足够数量的沙眼衣原体抗原，否则有假阴性标本中需要足够数量的沙眼衣原体抗原，否则有假阴性结果结果抗原快速检测临床意义n该方法主要适用于女性患者宫颈标本的该方法主要适用于女性患者宫颈标本的检测，敏感性较低。检测，敏感性较低。n该法快速、简便，无需特殊仪器，因此，该法快速、简便，无需特殊仪器，因此，较适合基层实验室开展。较适合基层实验室开展。核酸扩增检测1 1、原理：核酸扩增技术是通过扩增沙眼衣原体的多原理：核酸扩增技术是通过扩增沙眼衣原体的多拷贝基因（如隐蔽性质粒、染色体和拷贝基因（如隐蔽性质粒、染色体和RNA）检测）检测病原体。病原体。2、方法包括聚合酶链反应（、方法包括聚合酶链反应（PCR）、连接酶链反）、连接酶链反应（应（LCR）、等温链置换扩增技术（）、等温链置换扩增技术（SDA）、转）、转录介导扩增技术（录介导扩增技术（TMA）等。目前国内广泛使用）等。目前国内广泛使用的有实时荧光的有实时荧光PCR。核酸扩增检测临床意义n核酸扩增检测具有很高的敏感性和特异性，世核酸扩增检测具有很高的敏感性和特异性，世界卫生组织已推荐为扩大的生殖道沙眼衣原体界卫生组织已推荐为扩大的生殖道沙眼衣原体感染实验室诊断的感染实验室诊断的“金标准金标准”。n核酸扩增检测不仅可用于宫颈、尿道标本中沙核酸扩增检测不仅可用于宫颈、尿道标本中沙眼衣原体的检测，也可用于男女性尿液标本的眼衣原体的检测，也可用于男女性尿液标本的检测。检测。n开展核酸检测的实验室应通过有关部门考核取开展核酸检测的实验室应通过有关部门考核取得开展临床核酸检测技术资格证。得开展临床核酸检测技术资格证。方法评价n n核酸检测核酸检测核酸检测核酸检测 是目前为止最好的检测方法但存在检测敏感性是目前为止最好的检测方法但存在检测敏感性是目前为止最好的检测方法但存在检测敏感性是目前为止最好的检测方法但存在检测敏感性 上的局限性上的局限性上的局限性上的局限性n nELISAELISA抗原检测抗原检测抗原检测抗原检测 严格按操作说明进行操作是非常好的检测方法严格按操作说明进行操作是非常好的检测方法严格按操作说明进行操作是非常好的检测方法严格按操作说明进行操作是非常好的检测方法 高通量，自动化高通量，自动化高通量，自动化高通量，自动化n n快速抗原检测快速抗原检测快速抗原检测快速抗原检测 操作时间短，单人份操作，但敏感性极低操作时间短，单人份操作，但敏感性极低操作时间短，单人份操作，但敏感性极低操作时间短，单人份操作，但敏感性极低生殖器疱疹 常用生殖器疱疹检测方法n抗原检测抗原检测n抗体检测抗体检测抗原检测1、原理：将、原理：将HSV特异性单克隆抗体包被在酶特异性单克隆抗体包被在酶标板微孔壁上，捕获标本中的标板微孔壁上，捕获标本中的HSV抗原，抗原，形成抗原抗体复合物，继而与酶标记的二形成抗原抗体复合物，继而与酶标记的二抗结合，通过酶联显色反应检测抗结合，通过酶联显色反应检测HSV。2、方法：、方法：ELISA为目前临床上为目前临床上HSV抗原检测抗原检测的常用方法之一的常用方法之一抗原检测临床意义 生殖器疱疹感染的临床表现变化多样，生殖器疱疹感染的临床表现变化多样，临床诊断的准确性不足临床诊断的准确性不足50%70%，通，通过实验室检测手段可确证过实验室检测手段可确证HSV感染感染抗体检测n n原理：将原理：将HSV特异性抗原包被在酶标板微特异性抗原包被在酶标板微孔底上，捕获标本中的孔底上，捕获标本中的HSV抗体，形成抗抗体，形成抗原抗体复合物，通过酶联显色反应检测原抗体复合物，通过酶联显色反应检测HSV抗体。抗体。n n方法：有检测方法：有检测IgG 和和IgM 两种两种ELISA方法方法抗体检测临床意义n n检测抗检测抗HSV抗体的血清学试验可用于证实抗体的血清学试验可用于证实既往既往HSV感染、回顾性诊断原发性感染，感染、回顾性诊断原发性感染，对恢复期或复发性生殖器疱疹的诊断意义对恢复期或复发性生殖器疱疹的诊断意义不大。不大。n nHSV型特异性血清学抗体检测是发现亚临型特异性血清学抗体检测是发现亚临床无症状生殖器床无症状生殖器HSV感染者的手段之一。感染者的手段之一。显微镜检查：显微镜检查：l l生生理理盐盐水水湿湿片片法法（幻幻灯）灯）l l染色法染色法特点特点:简便、快速、价廉简便、快速、价廉 敏敏 感感 性性 只只 有有 38%38%82%82%滴滴虫虫培培养养是是诊诊断断滴滴虫虫病病的的金金标准，敏感性达标准，敏感性达95%95%阴道滴虫病细菌性阴道病l l均质稀薄的白色阴道分泌物均质稀薄的白色阴道分泌物均质稀薄的白色阴道分泌物均质稀薄的白色阴道分泌物l lpH4.5pH4.5l l胺臭味试验阳性胺臭味试验阳性胺臭味试验阳性胺臭味试验阳性l l线索细胞阳性线索细胞阳性线索细胞阳性线索细胞阳性l l符符符符合合合合上上上上述述述述4 4项项项项中中中中3 3项项项项为为为为阳阳阳阳性性性性可可可可诊诊诊诊断断断断BVBVAmsel综合临床体征指标生殖器念珠菌病n n直接涂片直接涂片直接涂片直接涂片 镜镜镜镜下下下下见见见见念念念念珠珠珠珠菌菌菌菌略略略略带带带带绿绿绿绿色色色色折折折折光光光光的的的的假假假假菌菌菌菌丝丝丝丝和和和和成成成成群群群群的的的的卵卵卵卵圆圆圆圆形形形形孢孢孢孢子子子子或或或或芽芽芽芽生生生生孢孢孢孢子子子子，直直直直径径径径约约约约3 35m5m。假假假假菌菌菌菌丝丝丝丝节节节节间间间间有有有有明明明明显显显显的的的的狭狭狭狭窄窄窄窄部部部部，芽芽芽芽孢孢孢孢往往往往往往往往集集集集中中中中于于于于菌菌菌菌丝丝丝丝分分分分隔隔隔隔处处处处，偶偶偶偶尔尔尔尔可见到分隔的真菌丝。可见到分隔的真菌丝。可见到分隔的真菌丝。可见到分隔的真菌丝。n n培养（菌种鉴定）培养（菌种鉴定）培养（菌种鉴定）培养（菌种鉴定）谢谢 谢谢!