血浆脂蛋白检测.ppt

1 1第十一章第十一章血脂及血血脂及血浆脂蛋白脂蛋白检验2 2动脉粥脉粥样硬化硬化(atherosclerosis,AS)冠心病急性事件冠心病急性事件（不（不稳定型心定型心绞痛、急性心肌梗死和冠脉猝死）痛、急性心肌梗死和冠脉猝死）n血脂、血血脂、血浆脂蛋白及脂蛋白及载脂蛋白脂蛋白检验的重要性的重要性 3 3n临床常床常规血脂和脂蛋白血脂和脂蛋白测定定项目目:总胆固醇（胆固醇（totalcholesteroltotalcholesterol，TCTC，包括，包括FCFC和和CECE）甘油三甘油三酯(TG)高密度脂蛋白胆固醇高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)(HDL-C)低密度脂蛋白胆固醇低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)(LDL-C)载脂蛋白等。脂蛋白等。4 4第一第一节 概述概述第二第二节 血脂、脂蛋白及血脂、脂蛋白及载脂蛋白脂蛋白测定定n本章内容概要本章内容概要5 5n教学目教学目标和要求和要求1、掌握掌握胆固醇、甘油三胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、低密、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白的常用脂蛋白的常用测定方法及其定方法及其临床床应用。用。2、熟悉熟悉脂脂类、脂蛋白、脂蛋白受体的分、脂蛋白、脂蛋白受体的分类与与组成，高脂血症成，高脂血症的定的定义、分型、生化、分型、生化诊断要点，断要点，临床血脂分析床血脂分析项目的目的选择与与注意事注意事项。3、了解了解脂蛋白代脂蛋白代谢紊乱与紊乱与动脉粥脉粥样硬化的关系。硬化的关系。6 6第一第一节概概述述n血脂及血血脂及血浆脂蛋白脂蛋白n脂蛋白代脂蛋白代谢n脂蛋白代脂蛋白代谢紊乱紊乱n临床血脂分析床血脂分析项目目7 7一、血脂及血一、血脂及血浆脂蛋白脂蛋白血脂：是血血脂：是血浆中脂中脂类（脂（脂质）物）物质的的总称。称。包括中性脂肪（甘油三包括中性脂肪（甘油三酯）和）和类脂（胆固醇、胆脂（胆固醇、胆固醇固醇酯、磷脂、糖脂、游离脂肪酸）。、磷脂、糖脂、游离脂肪酸）。n定定义：脂蛋白：脂脂蛋白：脂类难溶于水，正常血溶于水，正常血浆脂脂类物物质与蛋白与蛋白质结合成脂蛋白的形式运合成脂蛋白的形式运输和代和代谢。8 8大致大致为球形球形颗粒，由两大部分粒，由两大部分组成，即成，即疏水性的内核和疏水性的内核和亲水性的外壳水性的外壳。内内核由不同量的核由不同量的CE与与TG组成成，表表层由由载脂蛋白、脂蛋白、PL及及FC组成，成，FC及及PL的极性的极性基基团向外露在血向外露在血浆中中，载脂蛋白是兼性化合物，它的疏水部分掩蔽在脂蛋白中，脂蛋白是兼性化合物，它的疏水部分掩蔽在脂蛋白中，而而亲水部分突出于脂蛋白水部分突出于脂蛋白颗粒的表面。粒的表面。9 9（一）血（一）血浆脂蛋白的分脂蛋白的分类超速离心法：超速离心法：根据根据各种脂蛋白中蛋白各种脂蛋白中蛋白质和脂和脂质含量不同所含量不同所导致致的密度不同的密度不同。电泳法：泳法：根据脂蛋白根据脂蛋白颗粒大小粒大小不同不同和和所含蛋白所含蛋白质的的表面表面电荷不同，利用荷不同，利用电泳将其分离泳将其分离。分离方法分离方法1010u超速离心法：超速离心法：乳糜微粒乳糜微粒（chylomicron,CM）极低密度脂蛋白极低密度脂蛋白（very low density lipoprotein,VLDL）中中间密度脂蛋白（密度脂蛋白（intermediate density lipoprotein,IDL）低密度脂蛋白低密度脂蛋白（low density lipoprotein，LDL）高密度脂蛋白高密度脂蛋白（high density lipoprotein，HDL脂蛋白（脂蛋白（a）lipoprotein(a),Lp(a)乳糜微粒、前乳糜微粒、前-、和和 四条脂蛋白区四条脂蛋白区带 u电泳法泳法 1111+-Lp(a)1212（二）血（二）血浆脂蛋白的脂蛋白的组成与特征成与特征u组成：成：蛋白质、甘油三酯、磷脂（蛋白质、甘油三酯、磷脂（phospholipidphospholipid，PLPL）、游离胆固醇（）、游离胆固醇（free free cholesterol cholesterol，FCFC）及胆固醇酯（）及胆固醇酯（cholesterol estercholesterol ester，CECE）等成分组成。）等成分组成。1313（三）（三）载脂蛋白脂蛋白脂蛋白的蛋白部分称脂蛋白的蛋白部分称为载脂蛋白脂蛋白(apolipoprotein，Apo)u定定义：u种种类：按按1972年年Alaupovic建建议的命名方法，用英文字母的命名方法，用英文字母顺序序编码，分，分为ApoA、B、C、D、E、F、G、H、J等。由于氨基酸等。由于氨基酸组成的差异，每一型成的差异，每一型又可分若干又可分若干亚型。型。u来源来源：肝肝脏小小肠粘膜粘膜细胞胞1414u功能：功能：构成并构成并稳定血定血浆脂蛋白脂蛋白结构，作构，作为脂脂类的运的运输载体体。调解脂蛋白代解脂蛋白代谢关关键酶的活性的活性作作为脂蛋白受体的配体脂蛋白受体的配体，参与脂蛋白与，参与脂蛋白与细胞表面脂蛋白受体的胞表面脂蛋白受体的识别、结合及其代合及其代谢过程程1515（四）脂代（四）脂代谢有关的有关的酶类与特殊蛋白与特殊蛋白质胆固醇胆固醇酯转运蛋白、磷脂运蛋白、磷脂转运蛋白、微粒体甘油三运蛋白、微粒体甘油三酯转运蛋白运蛋白参与几种脂蛋白的参与几种脂蛋白的转换和清除。和清除。u酶：u蛋白蛋白质：LPLLPL、肝脂肪、肝脂肪酶（HLHL或或HTGLHTGL）、）、LCATLCAT、HMG-CoAHMG-CoA还原原酶参与参与TGTG分解、分解、FCFC合成和合成和酯化化1616脂代脂代谢转运蛋白运蛋白u定定义：血血浆中脂蛋白部分含有一种特殊的中脂蛋白部分含有一种特殊的转运蛋白，能促运蛋白，能促进血血浆各脂蛋白各脂蛋白间胆固醇胆固醇酯、甘油三、甘油三酯和磷脂的和磷脂的单向或双向向或双向转运和交运和交换，这类特殊特殊转运运蛋白称脂蛋白称脂质转运蛋白（运蛋白（lipid transfer protein,LTP）。）。u组成：成：胆固醇胆固醇酯转运蛋白（运蛋白（cholesterol ester transfer protein,CETP）磷脂磷脂转运蛋白（运蛋白（phospholipid transfer protein,PTP）甘油三甘油三酯转运蛋白（运蛋白（triglyceride transfer protein,TTP）1717（五五）脂蛋白受体）脂蛋白受体u定定义：脂蛋白受体是存在于脂蛋白受体是存在于细胞膜上与相胞膜上与相应的脂蛋白配体特异的脂蛋白配体特异结合的一合的一类糖蛋白。糖蛋白。u功能功能：在决定脂在决定脂类代代谢途径、参与脂途径、参与脂类代代谢、调节血血浆脂蛋白水平、清除潜在致脂蛋白水平、清除潜在致动脉脉粥粥样硬化的脂蛋白等方面起着重要的作用硬化的脂蛋白等方面起着重要的作用1818u种种类：LDLLDL受体受体（LDLLDL receptorreceptor）VLDL受体（受体（remnantreceptorremnantreceptor）清道夫受体（清道夫受体（scavengerreceptorscavengerreceptor）。）。1919LDLLDL受体（受体（ApoBApoB，E E受体）：受体）：分布于分布于肝肝细胞、胞、动脉壁平滑肌脉壁平滑肌细胞等胞等细胞膜表面胞膜表面识别结合合ApoB100ApoB100、E E的脂蛋白如的脂蛋白如LDLLDL、VLDLVLDL、-VLDL-VLDL。合成受体内胆固醇的合成受体内胆固醇的负反反馈调节LDLLDL受体途径受体途径：LDLLDL受体介受体介导的、通的、通过细胞膜吞胞膜吞饮作用而作用而摄入入LDLLDL等。等。各种脂蛋白受体功能各种脂蛋白受体功能VLDLVLDL受体（受体（ApoEApoE受体受体或或残粒受体残粒受体）：分布在分布在代代谢活活跃的心肌、骨骼肌、脂肪等的心肌、骨骼肌、脂肪等组织细胞胞。识别、结合含合含ApoEApoE的脂蛋白的脂蛋白如如CMCM残粒残粒和和-VLDL-VLDL残粒残粒清道夫受体：清道夫受体：存在于存在于巨噬巨噬细胞及血管内皮胞及血管内皮细胞表面胞表面 识别、结合合修修饰的的LDLLDL如氧化型如氧化型LDLLDL（oxLDL)oxLDL)。2020二、二、血血浆脂蛋白代脂蛋白代谢u分分类：外源性代外源性代谢途径：途径：指食物中指食物中摄入的胆固醇和甘油三入的胆固醇和甘油三酯在在小小肠中合成中合成CM及及CM代代谢的的过程程。内源性代内源性代谢途径：途径：指指肝肝脏合成合成VLDLVLDL，然后，然后转变为IDLIDL和和LDLLDL，LDL被肝被肝脏或其它器官代或其它器官代谢的的过程程，以及以及HDLHDL的代的代谢过程程胆固醇的逆向胆固醇的逆向转运：运：HDL参与将胆固醇从外周参与将胆固醇从外周组织运运输到肝到肝脏的的过程。程。21212222（一）（一）CM 小肠粘膜细胞合成小肠粘膜细胞合成 新生的新生的CM 成熟的成熟的CM CM残粒残粒 结合结合VLDL受体受体摄入肝细胞摄入肝细胞（二）（二）VLDL肝脏合成和分泌肝脏合成和分泌 成熟的成熟的VLDL VLDL残粒（残粒（IDL）结合结合VLDL受体受体摄入肝细胞摄入肝细胞LDL LDL受体途经代谢受体途经代谢 （三）（三）LDLLDL：运运输肝合成的内源性胆固醇从肝内至肝外的主要形式肝合成的内源性胆固醇从肝内至肝外的主要形式与与LDL受体受体（肝或肝外细胞肝或肝外细胞）结合结合经经LDL受体途径受体途径代谢代谢LDLLDL氧化后生成的氧化后生成的oxLDL经清道夫受体清除经清道夫受体清除（四）（四）HDLHDL：参与胆固醇逆向参与胆固醇逆向转运运肝脏肝脏、小肠合成小肠合成 新生的新生的HDL 成熟的成熟的HDL 结合结合HDL受体受体摄入肝细胞摄入肝细胞2323三三、脂蛋白代、脂蛋白代谢紊乱紊乱（一）高脂蛋白血症（一）高脂蛋白血症（多（多见）u定定义：高脂血症（高脂血症（hyperlipidemiahyperlipidemia，HLP）是指血）是指血浆中胆固醇中胆固醇和和（或或）甘油三甘油三酯浓度异常度异常升高。血升高。血浆脂脂类以血以血浆脂蛋白形式存在，因此，脂蛋白形式存在，因此，高脂血症一般指高脂蛋白血症（高脂血症一般指高脂蛋白血症（hyperlipoproteinemiahyperlipoproteinemia）。）。近年来，已逐近年来，已逐渐认识到血到血浆中中HDL降低也是一种脂代降低也是一种脂代谢紊乱。紊乱。成人空腹成人空腹1214h血清（浆）血清（浆）TG2.26mmol/L(200mg/dl)，胆固醇胆固醇6.21mmol/L(240mg/dl)，儿童胆固醇，儿童胆固醇4.14mmol/L(160mg/dl)2424u 分型分型：1970年世界卫生组织（年世界卫生组织（WHO）建议将高脂蛋白血症分为五型六类）建议将高脂蛋白血症分为五型六类目前从临床上，可将高脂血症简易地分为目前从临床上，可将高脂血症简易地分为4类：类：高胆固醇血症（血清高胆固醇血症（血清TC水平增高）水平增高）混合型高脂血症（血清混合型高脂血症（血清TC与与TG水平增高）。水平增高）。高甘油三酯血症（血清高甘油三酯血症（血清TG水平增高）水平增高）低高密度脂蛋白血症（血清低高密度脂蛋白血症（血清HDL-C水平减低）水平减低）。按病因原发性高脂血症和继发性高脂血症按病因原发性高脂血症和继发性高脂血症2525表型分型法表型分型法 主要是基于各种血主要是基于各种血浆脂蛋白升高的程度不同而脂蛋白升高的程度不同而进行分型。行分型。该分分类法不包括病因法不包括病因学，故称表型分学，故称表型分类。（1）型高脂蛋白血症：又称家族性高乳糜微粒血症型高脂蛋白血症：又称家族性高乳糜微粒血症（2）a型高脂白血症型高脂白血症（3）b型高脂蛋白血症型高脂蛋白血症（4）型高脂蛋白血症型高脂蛋白血症（5）型高脂蛋白血症型高脂蛋白血症（6）型高脂蛋白血症型高脂蛋白血症 2626按是否按是否继发于全身性疾病分于全身性疾病分类 继发性高脂血症：性高脂血症：原原发性：性：继发性者由一些全身性疾病引起血脂异常，如糖尿病、性者由一些全身性疾病引起血脂异常，如糖尿病、肾病病综合征、合征、肾功能衰竭、甲状腺功能减退症、肝胆疾病、系功能衰竭、甲状腺功能减退症、肝胆疾病、系统性性红斑狼斑狼疮、肥胖症、肥胖症、饮酒等。此外，某些酒等。此外，某些药物如物如-受体阻断受体阻断剂、降、降压药等也可引起血脂异常。等也可引起血脂异常。在排除在排除继发性高脂血症后，可性高脂血症后，可诊断断为原原发性。已知部分原性。已知部分原发性高性高脂血症由先天性基因缺陷所致脂血症由先天性基因缺陷所致 2727高脂血症的基因分型法高脂血症的基因分型法 表表10-5 家族性高脂血症的家族性高脂血症的临床特征床特征常常 用用 名名基因缺陷基因缺陷临床特征临床特征表型分类表型分类家族性高胆固醇血症家族性高胆固醇血症L LDLL LDL受体缺陷受体缺陷以胆固醇升高为主，可伴轻度甘油三酯升以胆固醇升高为主，可伴轻度甘油三酯升高，高，LDLLDL明显增加，可有肌腱黄色瘤，多有明显增加，可有肌腱黄色瘤，多有冠心病和高脂血症家族史。冠心病和高脂血症家族史。aabb家族性家族性Apo BApo B100100缺陷症缺陷症 ApoBApoB100100缺陷缺陷同上同上同上同上家族性混合型高脂血症家族性混合型高脂血症不清楚不清楚胆固醇和甘油三酯均升高，胆固醇和甘油三酯均升高，VLDLVLDL和和LDLLDL都增都增加，无黄色瘤，家族成员中有不同型高脂加，无黄色瘤，家族成员中有不同型高脂蛋白血症，有冠心病家族史。蛋白血症，有冠心病家族史。bb家族性异常家族性异常脂蛋白血脂蛋白血症症ApoEApoE异常异常胆固醇和甘油三酯均升高，乳糜微粒和胆固醇和甘油三酯均升高，乳糜微粒和VLDLVLDL残粒以及残粒以及IDLIDL明显增加，可有掌皱黄色明显增加，可有掌皱黄色瘤，多为瘤，多为Apo E2Apo E2（2/22/2）表型。）表型。家族性高甘油三酯血症家族性高甘油三酯血症不清楚不清楚以甘油三酯升高为主，可有轻度胆固醇升以甘油三酯升高为主，可有轻度胆固醇升高，高，VLDLVLDL明显增加。明显增加。2828（二）低脂蛋白血症（二）低脂蛋白血症 一般将血清一般将血清TC3.3mmol/L，或，或TG0.45mmol/L，或，或LDL-C2.1mmol/L者，称为低脂蛋白血症者，称为低脂蛋白血症。脂质如。脂质如TC和和TG同时降低或脂蛋白同时降低或脂蛋白如如HDL、LDL和和VLDL同时降低多见。同时降低多见。u定定义：u原因原因：因某种原因使脂蛋白合成减少，另外分解代因某种原因使脂蛋白合成减少，另外分解代谢旺盛也可旺盛也可导致。致。u分分类：原原发性和性和继发性性（三）高脂血症与（三）高脂血症与动脉粥脉粥样硬化硬化致致AS的因素的因素抗抗AS的因素的因素2929第二第二节血脂、脂蛋白及血脂、脂蛋白及载脂蛋白脂蛋白测定定 目前目前临床上开展的血脂床上开展的血脂测定定项目包括目包括TCTC、TGTG、HDLHDL及其及其亚类胆固醇、胆固醇、LDL-CLDL-C、LpLp（a a）以及部分）以及部分载脂蛋白如脂蛋白如ApoAIApoAI、ApoBApoB等。等。TCTC、TGTG、HDL-CHDL-C、LDL-CLDL-C测定是血脂定是血脂测定的四个定的四个基本指基本指标。血血浆44冰箱中冰箱中过夜夜观察其分察其分层现象及清澈度象及清澈度可可初步估初步估计各种脂蛋白的各种脂蛋白的变化状化状况。况。血血浆脂蛋白脂蛋白电泳泳结合合TCTC、TGTG水平水平有助于有助于高脂血症分型高脂血症分型。n概况：概况：3030n血脂血脂测定定标准化：准化：血脂分析前血脂分析前变异来源于：异来源于：生物因素，如年生物因素，如年龄、性、性别、种族等因素的个体差异。、种族等因素的个体差异。生活方式，包括生活方式，包括饮食食习惯、吸烟、运、吸烟、运动及及应激等。激等。临床方面包括疾病或床方面包括疾病或药物引起的脂代物引起的脂代谢改改变。血血标本采集与本采集与处理方面理方面 准确准确测定定应从分析前的准从分析前的准备开始，包括受开始，包括受试者的准者的准备，标本本采集，合格的采集，合格的试剂、校准物的、校准物的选用，用，检测方法方法选择。方法学上方法学上应该采用美国疾病控制中心（采用美国疾病控制中心（CDC）或中）或中华医学会医学会检验分会推荐的操分会推荐的操作方法。作方法。3131一、血清（一、血清（浆）静置）静置试验将患者空腹将患者空腹12h后采集静脉血分离出血清置后采集静脉血分离出血清置4冰箱中冰箱中过夜，然后夜，然后观察其分察其分层现象及清澈度。象及清澈度。空腹血清混空腹血清混浊，表示，表示TGTG升高，可放在升高，可放在44冰箱冰箱过夜后夜后进一步一步观察，察，如果如果上上层出出现奶油奶油样且下且下层清澈，表明清澈，表明CMCM升高，升高，VLDLVLDL正常，可能正常，可能为I I型高脂血型高脂血症。症。如果上如果上层出出现奶油奶油样且下且下层混混浊，表明，表明CMCM及及VLDLVLDL均升高，可能是均升高，可能是、V V型。型。再做再做电泳若出泳若出现宽带即即为型高脂血症型高脂血症空腹血清混空腹血清混浊，44冰箱中冰箱中过夜后仍夜后仍为均匀混均匀混浊，表明，表明VLDLVLDL升高，此升高，此时应进一步一步测定定TCTC，TCTC升高者可能是升高者可能是IIIIII或或IIbIIb型，而型，而TCTC正常者正常者则可能可能为型。型。IIaIIa型高脂血症血清也清澈透明。型高脂血症血清也清澈透明。正常空腹血清正常空腹血清应清澈透明。清澈透明。3232 二、血清（二、血清（浆）总胆固醇胆固醇测定定化学法化学法酶法法血清中血清中TCTC包括包括CECE和和FCFC，其中其中CECE占占7070，FCFC占占3030。血清中胆固醇在。血清中胆固醇在LDLLDL中中最多，其次是最多，其次是HDLHDL3333（一）化学（一）化学测定法定法化学化学测定法通常需定法通常需抽提抽提、皂化、皂化、纯化、化、显色色四个四个步步骤。显色色剂主要有两主要有两类：醋酸醋酸-醋醋酐-硫酸硫酸（L-BL-B反反应）高高铁硫酸硫酸（ZakZak反反应）n特点：特点：3434 1Liberman-Burchard反反应 1885年年Liberman发现胆固醇在硫酸、醋胆固醇在硫酸、醋酐溶液中溶液中显色色，1890年年Burchard用此用此反反应测定胆固醇称定胆固醇称为L-B反反应。1953年年Zak提出用提出用硫酸、醋酸和硫酸、醋酸和Fe3+等与胆固醇作用生成紫等与胆固醇作用生成紫红色化合物色化合物来来测定胆固醇，称定胆固醇，称为Zak反反应。2Zak反反应条件要求严格、试剂腐蚀性强、对FC与CE的显色强度不一致、呈色不稳定比L-B反应的灵敏度高，呈色稳定不需要皂化，反应特异性差3、AbellAbell法（法（ALBKALBK法）法）：公公认的参考方法的参考方法皂化（皂化（KOHKOH乙醇溶液水解乙醇溶液水解CECE成成为FCFC）、抽提（正己）、抽提（正己烷或石油或石油醚提取提取FCFC）、）、显色（色（L-BL-B反反应）。）。3535(二二)酶测定法定法(常常规方法）方法）CEH-COD-PAP法法 n原理：原理：CECEH H2 2OFCOFCFFAFFAFCFCO O2 24-4-胆甾胆甾烯酮H H2 2O O2 2HH2 2O O2 24-AAP4-AAP苯苯酚酚醌亚胺胺H H2 2O O 试剂：胆固醇胆固醇酶测定法的定法的试剂中，除了上述三种中，除了上述三种酶、酚和、酚和4-4-氨基安氨基安替比林外，替比林外，还有有维持持pHpH恒定的恒定的缓冲液、胆酸冲液、胆酸钠、表面活性、表面活性剂以及以及稳定定剂等。胆酸等。胆酸钠是是为了提高胆固醇了提高胆固醇酯酶的活性，表面活性的活性，表面活性剂的作用是促的作用是促进胆胆固醇从脂蛋白中固醇从脂蛋白中释放出来放出来 500nm3636n特点：特点：优点点：特异性好，精密度和灵敏度都能很好地特异性好，精密度和灵敏度都能很好地满足足临床床实验室的要求，室的要求，操作操作简便，便，试剂无腐无腐蚀性性，手工手工和和自自动分析分析皆可，皆可，终点法与速率法皆可。点法与速率法皆可。缺点缺点：某些胆固醇某些胆固醇酯酶对胆固醇胆固醇酯的水解不完全，不能用的水解不完全，不能用纯胆固醇胆固醇结晶以有机晶以有机溶溶剂配制的溶液作配制的溶液作为TC分析的校准液，而分析的校准液，而应以准确定以准确定值的血清作的血清作为标准准。表面活性表面活性剂，如吐温，如吐温-40可以干可以干扰胆固醇胆固醇酯酶的作用，而聚乙的作用，而聚乙烯醇醇6000可使可使结果提高果提高12；本法具有本法具有氧化氧化酶反反应途径的共同缺陷途径的共同缺陷，易受到一些，易受到一些还原性物原性物质如尿酸、如尿酸、胆胆红素、素、维生素生素C和谷胱甘和谷胱甘肽等的干等的干扰。成人：成人：2.855.69mmol/L（110220mg/dl）n参考参考范范围：3737TC除了作除了作为高胆固醇血症的高胆固醇血症的诊断指断指标之外，不能作之外，不能作为其它任何疾病的其它任何疾病的诊断指断指标，对于于动脉粥脉粥样硬化和冠心病而言，硬化和冠心病而言，TC是一个明确的危是一个明确的危险因子，与冠因子，与冠心病的心病的发病率呈正相关。病率呈正相关。n临床意床意义：u高高TCTC血症：血症：原发和继发原发和继发（了解）u低低TCTC血症：血症：原发和继发原发和继发（了解）3838三、血清（三、血清（浆）甘油三）甘油三酯测定定化学法化学法酶法法3939n基本操作：基本操作：（一）化学（一）化学测定法定法1 1、抽提抽提：关关键是是选用合适的抽提用合适的抽提剂，既要使甘油三，既要使甘油三酯提取完全，又要消除磷提取完全，又要消除磷脂、游离甘油和葡萄糖等干脂、游离甘油和葡萄糖等干扰物物质的影响。的影响。正壬正壬烷、异丙醇和稀硫酸混合溶、异丙醇和稀硫酸混合溶剂2 2、皂化皂化：甘油三甘油三酯水解生成甘油，水解生成甘油，这一步大都采用一步大都采用KOHKOH作皂化作皂化剂 3 3、氧化氧化：过碘酸碘酸在酸性溶液中将甘油氧化成甲在酸性溶液中将甘油氧化成甲醛和甲酸和甲酸 4 4、显色色：甲：甲醛的定量主要有两种方法：的定量主要有两种方法：甲醛与变色酸甲醛与变色酸(4，5-二羟二羟-2，7-萘二磺酸萘二磺酸)在硫酸溶液中加热生成紫色化合物在硫酸溶液中加热生成紫色化合物 甲醛与乙酰丙酮在铵离子甲醛与乙酰丙酮在铵离子(NH4+)存在下生成黄色的二乙酰二氢二甲基吡啶存在下生成黄色的二乙酰二氢二甲基吡啶 nVan Handel法法（参考方法）（参考方法）氯仿抽提氯仿抽提TG、硅酸吸附掉磷脂、硅酸吸附掉磷脂、KOH皂化、过碘酸氧化、变色酸显紫红色皂化、过碘酸氧化、变色酸显紫红色4040(二二)酶测定法定法1 1、磷酸甘油氧化、磷酸甘油氧化酶法（法（GPO-PAPGPO-PAP法）法）n原理原理：TG+3H2O LPL 甘油甘油（Glycerol）+脂肪酸脂肪酸（3RCOOH）Glycerol+ATP GK+Mg2+G-3-P+ADP G-3-P+O2 GPO 磷酸二羟丙酮磷酸二羟丙酮 +H2O2 2 H2O2+4-AAP+4-氯酚氯酚 POD 红色醌亚胺红色醌亚胺（Chromogen）+4H2O500nm特异性和特异性和 准确性好但是血清中游离准确性好但是血清中游离甘油甘油明显升高时要考虑其影响明显升高时要考虑其影响n特点：特点：4141n去除去除FG干干扰可用下列方法：可用下列方法：1、外空白法：同、外空白法：同时用不含用不含LPL的的酶试剂测定定FG 作空白。作空白。2、内空白法：又称两步法或双、内空白法：又称两步法或双试剂法法将将LPL和和4-AAP组成成试剂2，其余部分，其余部分为试剂1。此法。此法目前目前为中中华医学会医学会检验分会推荐方法。分会推荐方法。4242 2乳酸脱乳酸脱氢酶法法 n原理：原理：TG+3H2O LPL Glycerol+3RCOOH Glycerol+ATP GK+Mg2+G-3-P+ADP ADP+磷酸烯醇式丙酮酸磷酸烯醇式丙酮酸 丙酮酸激酶丙酮酸激酶 丙酮酸丙酮酸 +ATP丙酮酸丙酮酸+NADH LDH NAD+乳酸乳酸 由于反由于反应消耗消耗NADH，故可利用，故可利用NADH在在340nm吸光度降低来吸光度降低来测定甘油三脂的定甘油三脂的浓度度。4343n评价：评价：本法本法结果准确，但灵敏度果准确，但灵敏度较低，低，试剂也也不太不太稳定。由于血清本身存在游离甘油和丙定。由于血清本身存在游离甘油和丙酮酸等干酸等干扰物物质，所以，所以测定定时除了要做除了要做试剂空白外，空白外，还要做要做标本空白（外空白）本空白（外空白）44443甘油氧化甘油氧化酶法法 第一步：第一步：FG+O2 甘油氧化甘油氧化酶甘油甘油醛+H2O2 H2O2+EMAE POD 无色物无色物质消除游离甘油的影响，消除游离甘油的影响，3-5min后后进行第二步反行第二步反应：TG+3H2O LPL Glycerol+3RCOOHFG+O2 甘油氧化甘油氧化酶甘油甘油醛+H2O2H2O2+4-AAP+EMAE POD 有色化合物有色化合物注：注：EMAE作用与酚相似，是作用与酚相似，是还原原剂，但灵敏度比酚高。，但灵敏度比酚高。n原理原理：该法分两步完成。法分两步完成。4545血清甘油三血清甘油三酯一般随年一般随年龄增加而升高，体重超增加而升高，体重超过标准者往往偏高。准者往往偏高。成人：成人：0.451.69mmol/L（40150mg/dl）。）。参考参考值4646临床意床意义 原原发性高性高TGTG血症多有血症多有遗传因素，包括家族性高因素，包括家族性高TGTG血症与家族性型高脂血症与家族性型高脂（蛋白）血症等。（蛋白）血症等。继发性高性高TGTG血症血症见于糖尿病、糖原累于糖尿病、糖原累积病、甲状腺机能减病、甲状腺机能减退、退、肾病病综合征、妊娠、口服避孕合征、妊娠、口服避孕药、酗酒等。、酗酒等。大量前瞻性的研究大量前瞻性的研究证实，富含富含TGTG的脂蛋白是的脂蛋白是CHDCHD的独立的危的独立的危险因子因子，TGTG增增加表明患者存在代加表明患者存在代谢综合症，需合症，需进行治行治疗。甘油三。甘油三酯降低比降低比较少少见，甲状腺甲状腺功能亢功能亢进、肾上腺皮上腺皮质功能减退和肝功能功能减退和肝功能严重重损伤时可以可以见到甘油三到甘油三酯降低降低 4747血清（血清（浆）脂蛋白）脂蛋白测定定(一一)血清脂蛋白血清脂蛋白电泳泳 脂蛋白脂蛋白电泳分析可分泳分析可分为预染法和染法和电泳后染色法两大泳后染色法两大类。预染法染法的操作比的操作比较简单，分离效果直，分离效果直观。其操作。其操作过程是先程是先将待将待测血清和血清和苏丹黑染料按一定比例混合丹黑染料按一定比例混合进行行预染染处理，离心后取上清液理，离心后取上清液进行行电泳分泳分析。析。电泳后染色法泳后染色法为用用电泳方法先将血泳方法先将血浆脂蛋白各成份分开，再用脂蛋白各成份分开，再用苏丹黑或油丹黑或油红O进行染色。行染色。临床上比床上比较常用的是常用的是预染法染法电泳。泳。4848血清脂蛋白血清脂蛋白琼脂糖凝胶脂糖凝胶电泳：泳：-脂蛋白：脂蛋白：0.30-0.40，前前-脂蛋白：脂蛋白：0.13-0.25，-脂蛋白：脂蛋白：0.50-0.60，乳糜微粒：阴性。乳糜微粒：阴性。【参考参考值】4949（二）高密度脂蛋白（二）高密度脂蛋白测定定 常以常以测定定HDL-C含量代表含量代表HDL水平。水平。n参考方法参考方法:超速离心分离超速离心分离HDL，然后用化学法（，然后用化学法（ALKB法）法）或或酶法法测定其胆固醇含量，此法需特殊定其胆固醇含量，此法需特殊设备，而且不，而且不易常握。易常握。5050n常常规方法方法:1磷钨酸磷钨酸-镁法镁法 2HDL直接测定法直接测定法 HDL直接直接测定法大致分三定法大致分三类，分，分别是是:聚乙二醇聚乙二醇/抗体包裹法抗体包裹法酶修修饰法法选择性抑制法，又称掩蔽法，性抑制法，又称掩蔽法，5151成人：男性成人：男性1.161.42mmol/L(4555mg/dl)女性女性1.291.55mmol/L(5060mg/dl)1.04mmol/L(40mg/dl),0.91mmol/L(35mg/dl)为减低。为减低。【参考【参考范范围】【临床意床意义】流行病学与流行病学与临床研究床研究证明，明，HDL-CHDL-C与冠心病与冠心病发病呈病呈负相关，相关，HDL-CHDL-C低于低于0.90.9mmol/Lmmol/L是冠心病危是冠心病危险因素。因素。HDL-CHDL-C大于大于1.55mmol/L1.55mmol/L被被认为是冠心病的是冠心病的“负”危危险因因素素。HDL-CHDL-C下降下降还多多见于于脑血管病、糖尿病、肝炎、肝硬化病人。血管病、糖尿病、肝炎、肝硬化病人。高高TGTG血症往往伴血症往往伴以低以低HDL-CHDL-C，肥胖者的，肥胖者的HDL-CHDL-C也多偏低。吸烟可使也多偏低。吸烟可使HDL-CHDL-C下降，适量下降，适量饮酒、酒、长期体力期体力劳动和运和运动会使会使HDL-CHDL-C升高。升高。5252（二）低密度脂蛋白（二）低密度脂蛋白测定定1Friedewald公式法公式法LDL-CTCHDL-CTG/5（以（以mg/dl为单位位时），或），或LDL-CTCHDL-CTG/2.2（以（以mmol/L为单位位时）。）。2聚乙聚乙烯硫酸硫酸盐沉淀法沉淀法本法并非本法并非对LDL-C作直接作直接测定，而是用聚乙定，而是用聚乙烯硫酸硫酸（PVS）选择性沉淀血清中性沉淀血清中LDL，再以血清，再以血清TC减去上清液（含减去上清液（含HDL与与VLDL）胆）胆固醇即得固醇即得LDL-C值。3直接直接测定法定法:两两类目前各目前各类方法方法测定的定的LDL-C值都包括都包括IDL和和LP(a)的的chol在内在内 5353 LDL-C合适范合适范围：3.12mmol/L(120mg/dl)，边缘升高：升高：3.153.61mmol/L(121139mg/dl)升高：升高：3.64mmol/L(140mg/dl)。【参考参考值】【临床意床意义】LDL-C增高是增高是动脉粥脉粥样硬化硬化发生生发展的主要脂展的主要脂类危危险因素。由于因素。由于TC水平同水平同时也受也受HDL-C水平的影响，所以最好以水平的影响，所以最好以LDL-C代替代替TC作作为冠心病危冠心病危险因素指因素指标。美国国家胆固醇教育美国国家胆固醇教育计划成人治划成人治疗专业组规定以定以LDL-C水平作高脂蛋白血症的治水平作高脂蛋白血症的治疗决策及其需要达到的治决策及其需要达到的治疗目目标。5454（三）脂蛋白（三）脂蛋白(a)测定定 nLp(a)测定有两定有两类方法方法 一是以免疫化学原理一是以免疫化学原理测定其所含定其所含Apo(a)，结果以果以Lp(a)质量表示，也有以量表示，也有以Lp(a)颗粒数粒数mmol/L表示的。表示的。另一另一类方法方法测定其所含的胆固醇，定其所含的胆固醇，结果以果以 Lp(a)-C表示。目前大都用免疫学方表示。目前大都用免疫学方法法测定。定。5555 正正常常人人群群的的Lp(a)水水平平呈呈明明显的的正正偏偏态分分布布，大大多多在在200mg/L以以下下，平平均均数数在在120 180 mg/L，中中 位位 数数 约 100mg/L。Lp(a)水水 平平 高高 于于 医医 学学 决决 定定 水水 平平（300mg/L），冠心病危），冠心病危险性明性明显增高。增高。【参考参考值】【临床意床意义】血血清清Lp(a)水水平平是是动脉脉粥粥样硬硬化化性性疾疾病病的的独独立立危危险因因素素,与与动脉脉粥粥样硬硬化化成成正正相相关。关。5656五、血清五、血清载脂蛋白脂蛋白测定定n免疫化学法：免疫化学法：单向免疫向免疫扩散（散（RID）电免疫分析（如火箭免疫分析（如火箭电泳法）泳法）放射免疫分析（放射免疫分析（RIA）酶联免疫吸附分析（免疫吸附分析（ELISA）等）等 早期早期目前：目前：目前比目前比较适合于适合于临床床实验室的是室的是免疫免疫浊度法度法，包括，包括免疫散射比免疫散射比浊法（法（INA）和免疫透射比）和免疫透射比浊法（法（ITA）。）。5757【参考参考值】：Apo AI：1.001.50g/L，Apo B：0.801.00g/L。【临床意床意义】ApoAI是是HDL的主要的主要结构蛋白，构蛋白，ApoB是是LDL的主要的主要结构蛋白，因此，构蛋白，因此，ApoAI和和ApoB可直接反映可直接反映HDL和和LDL的含量。在某些病理情况下，的含量。在某些病理情况下，ApoAI与与HDL和和ApoB与与LDL并非成正相关，因此，同并非成正相关，因此，同时测定定载脂蛋白及脂蛋白脂蛋白及脂蛋白HDL和和LDL对病理病理发生状生状态的分析很有帮助。冠心病、的分析很有帮助。冠心病、肾病病综合征和糖尿病等都有合征和糖尿病等都有ApoAI下降和下降和ApoB升高。升高。临床上常将床上常将ApoAI和和ApoB比比值作作为冠心病的危冠心病的危险指指标。