维生素的测定PPT课件.ppt

<p><span id="_baidu_bookmark_start_0" style="display: none; line-height: 0px;">‍</span>Vitamin的一般知识l一、共同特点一、共同特点：l大多不能在体内合成（大多不能在体内合成（可少量合成）可少量合成）l大多不能大多不能大量大量储存于组织中储存于组织中l不构成组织的原料不构成组织的原料l不提供能量不提供能量l以辅酶或辅基形式参与以辅酶或辅基形式参与酶反应酶反应1.2.二、命名与分类l以以字母字母、化学结构或功能命名、化学结构或功能命名lVitamin A/视黄醇视黄醇/干眼病维生素干眼病维生素3.分类：分类：脂溶性、水溶性脂溶性、水溶性4.三、维生素缺乏l临床缺乏临床缺乏l亚临床缺乏亚临床缺乏(marginal deficiency)l降低对疾病的抵抗力、降低工作效率和降低对疾病的抵抗力、降低工作效率和生活质量。生活质量。脂溶性维生素主要储存在肝脏中，摄取过多，脂溶性维生素主要储存在肝脏中，摄取过多，可能会引起中毒。摄取过少，可缓慢出现缺可能会引起中毒。摄取过少，可缓慢出现缺乏症状。乏症状。水溶性的呢？水溶性的呢？5.6.第一节第一节 概述概述l一、一、vitamin含量和测定意义含量和测定意义l1 含量分布含量分布：lVA 0.1-300mg/100g 鱼肝鱼肝l-胡萝卜素胡萝卜素 0.1-12mg/100g 果蔬果蔬lVc 0.1-1000mg/100glVB的含量较低的含量较低7.2 测定意义测定意义A 利用性：人体需要、合理膳食利用性：人体需要、合理膳食B 贮存贮存C 加工加工8.二、维生素分析工作的特点二、维生素分析工作的特点1 个别测定。无所谓总量个别测定。无所谓总量2 稳定性差，光、热、氧、酶敏感稳定性差，光、热、氧、酶敏感3 干扰杂质多干扰杂质多4 结合态存在的问题结合态存在的问题9.二、维生素分析的一般程序二、维生素分析的一般程序1 使游离出来使游离出来2 提取（选溶剂）提取（选溶剂）3 纯化（根据待测纯化（根据待测vit与杂质的性质差异）与杂质的性质差异）4 测定测定10.维生素分析的方法有维生素分析的方法有l 化学法化学法(比色法、滴定法）比色法、滴定法）l 仪器法仪器法（紫外法、荧光法）（紫外法、荧光法）l 微生物法微生物法(水溶性维生素、水溶性维生素、B2）l 生物鉴定法生物鉴定法(VD)11.第二节第二节 水溶性维生素的测定水溶性维生素的测定 l水溶性维生素的性质水溶性维生素的性质l样品预处理样品预处理12.13.维生素名称维生素名称一般使用的化学名一般使用的化学名其他常用别称及说明其他常用别称及说明维生素维生素B1硫胺硫胺维生素维生素B2核黄素核黄素维生素维生素G维生素维生素B3烟酸烟酸维生素维生素PP、烟碱酸烟碱酸、尼古丁酸尼古丁酸维生素维生素B5泛酸泛酸遍多酸遍多酸维生素维生素B6吡哆醇吡哆醇类类包括包括吡哆醇吡哆醇、吡哆醛吡哆醛及及吡哆胺吡哆胺维生素维生素B7生物素生物素维生素维生素H、辅酶、辅酶R维生素维生素B9蝶酰谷氨酸蝶酰谷氨酸叶酸叶酸、维生素维生素M、叶精叶精维生素维生素B12钴胺素钴胺素氰钴胺氰钴胺、辅酶辅酶B1214.一、维生素一、维生素B2的测定的测定15.在食品中以游离形式或磷酸酯等结合形式。在食品中以游离形式或磷酸酯等结合形式。是机体许多重要辅酶的组成成分，对机体是机体许多重要辅酶的组成成分，对机体内糖、蛋白质、脂肪代谢起着重要作用。内糖、蛋白质、脂肪代谢起着重要作用。主要来源是各种动物性食品，其中以肝、主要来源是各种动物性食品，其中以肝、肾、心、蛋、奶含量最多，其次是植物性肾、心、蛋、奶含量最多，其次是植物性食品的豆类和新鲜绿叶蔬菜。食品的豆类和新鲜绿叶蔬菜。16.1原理原理荧光计法荧光计法 核核黄黄素素在在440500 nm波波长长光光照照射射下下发发出出黄黄绿色荧光。绿色荧光。在在440nm激激发发波波长长，525nm发发射射波波长长下下测测定定提提纯纯液液的的（黄黄绿绿色色）荧荧光光强强度度。之之后后，试试液液中中加加入入低低亚亚硫硫酸酸钠钠(Na2S2O4)，将将核核黄黄素素还还原原为为无无荧荧光光物物质质，再再测测定定残残余余杂杂质质的的荧荧光光强强度度，荧荧光光值值之之差差与与核核黄黄素素含含量成正比。量成正比。17.18.3测定方法测定方法l(1)样品提取样品提取l(2)氧化去杂质氧化去杂质 l(3)核黄素的吸附和洗脱核黄素的吸附和洗脱l(4)荧光测定荧光测定 样样品品经经酸酸解解、酶酶解解处处理理使使核核黄黄素素游游离离出出来来，用用高高锰锰酸酸钾钾和和过过氧氧化化氢氢氧氧化化其其它它色色素素和和杂杂质质，再再经经硅硅镁吸附剂进行柱层析，吸附镁吸附剂进行柱层析，吸附提纯提纯核黄素。核黄素。19.4 结果计算20.5 说明说明l核核黄黄素素对对光光敏敏感感，整整个个操操作作应应在在暗暗室室中进行。中进行。l核核黄黄素素可可被被低低亚亚硫硫酸酸钠钠还还原原成成无无荧荧光光型型，但但摇摇动动后后很很快快就就被被空空气气氧氧化化成成有有荧荧光物质，所以要立即测定。光物质，所以要立即测定。21.二、维生素二、维生素B1 比色法比色法硫色素荧光法硫色素荧光法液相色谱法液相色谱法以游离态，或以焦磷酸酯形式存以游离态，或以焦磷酸酯形式存在于自然界。在酵母、米糠、麦在于自然界。在酵母、米糠、麦胚、花生、黄豆以及绿色蔬菜和胚、花生、黄豆以及绿色蔬菜和牛乳、蛋黄中含量较为丰富。动牛乳、蛋黄中含量较为丰富。动物组织不如植物含量丰富。物组织不如植物含量丰富。22.23.荧光计法荧光计法1原理原理l硫胺素在硫胺素在碱性铁氰化钾碱性铁氰化钾溶液中，能被氧溶液中，能被氧化成化成硫色素硫色素，在紫外光照射下产生蓝色，在紫外光照射下产生蓝色荧光。如果不存在其它荧光物质干扰，荧光。如果不存在其它荧光物质干扰，荧光强度与硫色素含量成正比，即与溶荧光强度与硫色素含量成正比，即与溶液中硫胺素含量成正比。液中硫胺素含量成正比。24.25.4操作方法操作方法(1)样品提取样品提取 水解水解 酶解酶解(2)净化净化(3)氧化氧化(4)荧光强度的测定荧光强度的测定 26.5 结果计算27.6说明说明l一一般般食食品品中中的的维维生生素素B1有有游游离离型型的的，也也有有结结合合型型的的，即即与与淀淀粉粉、蛋蛋白白质质等等结结合合在在一一起起的的，故故需需用用酸酸和和酶酶水水解解，使使结结合型合型B1成为游离型，再采用此法测定。成为游离型，再采用此法测定。28.l可可在在加加入入酸酸性性氯氯化化钾钾后后停停止止实实验验，因因为硫胺素在此溶液中比较稳定。为硫胺素在此溶液中比较稳定。29.l样样品品与与铁铁氰氰化化钾钾溶溶液液混混合合后后，所所呈呈现现的的黄黄色色应应至至少少保保持持15秒秒，否否则则应应再再滴滴加加铁氰化钾溶液铁氰化钾溶液12滴。滴。30.l紫紫外外线线破破坏坏硫硫色色素素，所所以以硫硫色色素素形形成成后要迅速测定，并力求避光操作。后要迅速测定，并力求避光操作。31.l氧氧化化是是操操作作的的关关键键步步骤骤，操操作作中中应应保保持加试剂的迅速一致持加试剂的迅速一致32.三、维生素三、维生素C的测定的测定l1 Vc的性质的性质l已糖醛基酸已糖醛基酸 l易溶于水、醇，不溶于易溶于水、醇，不溶于乙醚、氯仿等乙醚、氯仿等l干燥状态较稳定、酸性干燥状态较稳定、酸性介质中较稳定介质中较稳定l对光、氧、铜离子敏感对光、氧、铜离子敏感33.34.35.2 测定方法测定方法(一一)2，4二硝基苯肼比色法二硝基苯肼比色法(二二)2，6二氯靛酚滴定法二氯靛酚滴定法(三三)荧光法荧光法36.(一一)2,4二硝基苯肼比色法二硝基苯肼比色法1原理原理l 用用活活性性炭炭（其其中中吸吸附附的的氧氧）将将还还原原型型抗抗坏坏血血酸酸氧氧化化为为脱脱氢氢抗抗坏坏血血酸酸，然然后后与与2，4二二硝硝基基苯苯阱阱作作用用生生成成红红色色的的脎脎。在在浓浓硫硫酸酸的的脱脱水水作作用用下下，可可转转变变为为桔桔红红色色的的无无水水化化合合物物双双2，4二二硝硝基基苯苯。在在硫硫酸酸溶溶液液中中显显色色稳稳定定，最最大大吸吸收收波波长长为为500nm，吸吸光光度度与与总总抗抗坏坏血血酸酸含含量成正比，故可进行比色。量成正比，故可进行比色。37.3测定步骤测定步骤l样品提取样品提取 l氧化氧化 l显色反应显色反应 l85硫酸处理硫酸处理 l比色比色 l标准曲线的绘制标准曲线的绘制 38.4 结果计算39.5、说明、说明l活活性性炭炭对对抗抗坏坏血血酸酸的的氧氧化化作作用用，是是基基于于其其表表面面吸吸附附的的氧氧进进行行界界面面反反应应，加加入入量量过过低低，氧氧化化不不充充分分，测测定定结结果果偏偏低低，加加入入量量过过高高，对对抗抗坏坏血血酸酸有有吸吸附附作作用用，使结果也偏低。使结果也偏低。40.l对对无无色色或或已已脱脱色色样样品品，也也可可用用溴溴液液作作氧氧化化剂剂。还还可可用用2，6二二氯氯靛靛酚酚作作氧氧化化剂。剂。41.(二二)2,6二氯靛酚滴定法二氯靛酚滴定法1、原理、原理 还还原原型型抗抗坏坏血血酸酸可可以以还还原原染染料料2，6二二氯氯靛靛酚酚。该该染染料料在在酸酸性性溶溶液液中中呈呈粉粉红红色色(在在中中性性或或碱碱性性溶溶液液中中呈呈蓝蓝色色)，被被还还原原后后颜颜色色消消失失。还还原原型型抗抗坏坏血血酸酸还还原原染染料料后后，本本身身被被氧氧化化成成脱脱氢氢抗抗坏坏血血酸酸。在在没没有有杂杂质质干干扰扰时时，一一定定量量的的样样品品提提取取液液还还原原标标准准染染料料液液的的量量，与与样样品品中中抗抗坏坏血血酸酸含含量量成成正正比。比。42.43.3测定步骤测定步骤(1)提取提取l 鲜样制备鲜样制备l 干样制备干样制备 (2)滴定滴定 44.4 结果计算45.5说明说明所有试剂最好用重蒸馏水配制。所有试剂最好用重蒸馏水配制。样样品品采采取取后后，应应浸浸泡泡在在已已知知量量的的2草草酸酸溶溶液液中中，以以防防止止维维生生素素C氧氧化化损损失失。测测定定时时整整个个操操作作过过程程要要迅迅速速，防防止止抗抗坏坏血血酸酸被氧化。被氧化。46.l若若测测动动物物性性样样品品，须须用用10三三氯氯醋醋酸酸代代替替2草酸溶液提取。草酸溶液提取。l若若样样品品滤滤液液颜颜色色较较深深，影影响响滴滴定定终终点点观观察察，可可加加入入白白陶陶土土再再过过滤滤。白白陶陶土土使使用用前前应应测测定定回回收率。收率。l若若样样品品中中含含有有Fe2+、Cu2+、Sn2+、亚亚硫硫酸酸盐盐、硫化硫酸盐等还原性杂质时，会使结果偏高。硫化硫酸盐等还原性杂质时，会使结果偏高。47.第三节第三节 脂溶性维生素的测定脂溶性维生素的测定l维生素维生素A的测定的测定l胡萝卜素的测定胡萝卜素的测定l维生素维生素D的测定的测定l维生素维生素E的测定的测定48.脂溶性维生素的理化性质脂溶性维生素的理化性质l主要有下列方面：主要有下列方面：l1、溶解性、溶解性l2、耐酸、耐酸/碱性碱性l3、耐热性、耐氧化性、耐热性、耐氧化性49.l1、溶溶解解性性：脂脂溶溶性性维维生生素素不不溶溶于于水水，易易溶溶于于脂脂肪肪、乙乙醇醇、丙丙酮酮、氯氯仿仿、乙乙醚醚、苯等有机溶剂。苯等有机溶剂。50.2、耐酸碱性：、耐酸碱性：l维维生生素素E对对碱碱不不稳稳定定，但但在在抗抗氧氧化化剂剂存存在在下下或或惰性气体保护下，也能经受碱的煮沸。惰性气体保护下，也能经受碱的煮沸。酸酸碱碱维生素维生素A、D不稳定不稳定稳定稳定维生素维生素E稳定稳定不稳定不稳定51.3、耐热性、耐氧化性：、耐热性、耐氧化性：耐热性耐热性耐氧化性耐氧化性维生素维生素A好，能经受煮沸好，能经受煮沸分子中有双链，分子中有双链，易被氧化，光、易被氧化，光、热促进其氧化热促进其氧化维生素维生素D好，能经受煮沸好，能经受煮沸不易被氧化不易被氧化维生素维生素E好，能经受煮沸好，能经受煮沸空空气气中中能能慢慢慢慢被被氧氧化化，光光、热热、碱碱能能促促进进其其氧氧化化作用。作用。52.一、维生素一、维生素A的测定的测定l（一）概述（一）概述l（二）三氯化锑比色法（二）三氯化锑比色法l（三）紫外分光光度法（三）紫外分光光度法l（四）高效液相色谱法（四）高效液相色谱法53.概述概述54.55.56.测定方法测定方法l三氯化锑比色法三氯化锑比色法l紫外分光光度法紫外分光光度法l荧光法荧光法l气相色谱法气相色谱法l高效液相色谱法高效液相色谱法57.三氯化锑比色法（三氯化锑比色法（GB第二法）第二法）1原理原理l 在在氯氯仿仿溶溶液液中中，维维生生素素A与与三三氯氯化化锑锑可可生生成成蓝蓝色色可可溶溶性性络络合合物物，在在620nm波波长长处处有有最最大大吸吸收收峰峰，其其吸吸光光度度与与维维生生素素A的的含含量量在在一一定定的的范范围围内内成成正正比比，故故可可比比色测定。色测定。58.2适用范围及特点适用范围及特点本本法法适适用用于于维维生生素素A含含量量较较高高的的各各种种样样品品(高高于于5一一l0gg)，对对低低含含量量样样品品，因因受受其他脂溶性物质的干扰，不易比色测定。其他脂溶性物质的干扰，不易比色测定。59.3测定方法测定方法(1)样品处理样品处理 皂化皂化（氢氧化钾，乙醇）（氢氧化钾，乙醇）提取提取（乙醚）（乙醚）洗涤洗涤（水，氢氧化钾）（水，氢氧化钾）浓缩浓缩（无水硫酸钠，三氯甲烷）（无水硫酸钠，三氯甲烷）60.l(2)标准曲线的绘制标准曲线的绘制 l(3)样品测定样品测定 61.结果计算62.l所用氯仿中不应含有水分，因三氯化锑所用氯仿中不应含有水分，因三氯化锑遇水会出现沉淀，干扰比色测定。遇水会出现沉淀，干扰比色测定。故故在在每每m1氯氯仿仿中中应应加加入入乙乙酸酸酐酐1滴滴，以以保保证脱水。证脱水。说明与注意点说明与注意点63.l维维生生素素A见见光光易易分分解解，整整个个实实验验应应在在暗暗处处进进行行，防防止止阳阳光光照照射射，或或采采用用棕棕色色玻玻璃璃避光避光。64.l测测定定结结果果也也可可以以每每100g食食品品中中所所含含维维生生素素A的的国国际际单单位位表表示示，每每国国际际单单位位维维生生素素A相当于相当于0.3g维生素维生素A。1g胡萝卜素胡萝卜素=0.167g视黄醇当量。以往视黄醇当量。以往VA的量常用的量常用国际单位（国际单位（IU）表示。）表示。1IUVA=0.33gVA=0.33g视黄醇当量。视黄醇当量。65.l三三氯氯化化锑锑腐腐蚀蚀性性强强，不不能能沾沾在在手手上上；三三氯氯化化锑锑遇遇水水生生成成白白色色沉沉淀淀，因因此此用用过过的的仪器要先用稀盐酸浸泡后再清洗。仪器要先用稀盐酸浸泡后再清洗。66.l比比色色法法除除用用三三氯氯化化锑锑作作显显色色剂剂外外，还还可可用用三三氟氟乙乙酸酸、三三氯氯乙乙酸酸作作显显色色剂剂。其其中中三三氟氟乙乙酸酸没没有有遇遇水水发发生生沉沉淀淀而而使使溶溶液液混混浊的缺点。浊的缺点。67.(二二)紫外分光光度法紫外分光光度法1.原理原理 维维生生素素A的的异异丙丙醇醇溶溶液液在在325nm波波长长下下有有最最大大吸吸收收峰峰，其其吸吸光光度度与与维维生生素素A的的含量成正比。含量成正比。68.2适用范围及特点适用范围及特点l 本本法法的的灵灵敏敏度度较较比比色色法法高高，可可测测定定维维生生素素A含含量量低低于于5gg的的样样品品。主主要要缺缺点点是是在在维维生生素素A最最大大吸吸收收波波长长325nm附附近近许许多其他化合物也有吸收，干扰测定，多其他化合物也有吸收，干扰测定，69.l故故本本法法适适用用于于透透明明鱼鱼油油，维维生生素素A的的浓浓缩缩物物等等纯纯度度较较高高的的样样品品。对对于于一一般般样样品品，测测定定前前必必须须先先将将脂脂肪肪抽抽提提出出来来进进行行皂皂化化，萃萃取取其其不不皂皂化化部部分分，再再经经柱柱层层析析除除去去干干扰物。扰物。70.（三）高效液相色谱法（三）高效液相色谱法l1、原理（、原理（GB/T5009.82-2003第一法）第一法）皂皂化化、提提取取样样品品中中的的维维生生素素A和和维维生生素素E后后，用用高高效效液液相相色色谱谱法法C18反反相相柱柱将将两两者者分离，用紫外检测器检测，内标法定量。分离，用紫外检测器检测，内标法定量。71.l 测定步骤测定步骤l（1）样品处理（皂化、提取、洗涤、浓缩）样品处理（皂化、提取、洗涤、浓缩）l（2）标准曲线的制备）标准曲线的制备72.二、二、胡萝卜素的测定胡萝卜素的测定450nm波长处有最大吸收HPLC法（GB/T5009.83）纸层析、柱层析薄层层析法 l-胡萝卜素含有两个维生素胡萝卜素含有两个维生素A1的结构，的结构，称为维生素称为维生素A原。原。73.74.一、高效液相色谱法一、高效液相色谱法1原理原理l试样中的试样中的-胡萝卜素，用石油醚胡萝卜素，用石油醚+丙酮丙酮(80+20)混合液提取，经三氧化二铝柱纯混合液提取，经三氧化二铝柱纯化，然后以高效液相色谱法测定，以保化，然后以高效液相色谱法测定，以保留时间定性，峰高或峰面积定量。留时间定性，峰高或峰面积定量。75.二、纸层析法二、纸层析法1原理：原理：以以丙丙酮酮和和石石油油醚醚提提取取食食物物中中的的胡胡萝萝卜卜素素及及其其他他植植物物色色素素；以以石石油油醚醚为为展展开开剂剂进进行行纸纸层层析析。胡胡萝萝卜卜素素极极性性最最小小，移移动动速速度度最最快快，从从而而与与其其它它色色素素分分开开。剪剪下下含含胡胡萝萝卜卜素素的的区区带带，洗洗脱脱后后于于450nm波波长长下进行比色，测定。下进行比色，测定。76.4、测定步骤、测定步骤l（1）样品提取与洗涤）样品提取与洗涤(石油醚）石油醚）l（2）浓缩与定容）浓缩与定容l（3）纸层析）纸层析l（4）比色测定）比色测定l（5）标准曲线的绘制）标准曲线的绘制77.l点样：带状点样点样：带状点样l展开展开l洗洗脱脱：剪剪下下位位于于展展开开剂剂前前沿沿的的胡胡萝萝卜卜素层析带，石油醚素层析带，石油醚78.79.5、结果计算、结果计算80.6说明与讨论说明与讨论l此此法法也也为为国国家家标标准准方方法法，方方法法简简便便，色带清晰，最小检出限为色带清晰，最小检出限为0.11g。l 样样品品和和标标准准液液的的提提取取一一定定要要注注意意避避免免丢失。丢失。81.l浓浓缩缩提提取取液液时时，一一定定要要防防止止蒸蒸干干，避避免免胡胡萝萝卜卜素素在在空空气气中中氧氧化化或或因因高高温温、紫紫外外线线直直射射等等破破坏坏。定定容容、点点样样、层层析析后后剪样点等操作环节一定要迅速。剪样点等操作环节一定要迅速。82.三、维生素三、维生素D的测定的测定83.84.85.7-脱氢胆固醇经光照可转变为脱氢胆固醇经光照可转变为VD386.87.维生素维生素D的测定方法有：的测定方法有：l比色法、比色法、l紫外分光光度法、紫外分光光度法、l气相色谱法、气相色谱法、l液相色谱法液相色谱法l薄层层析法薄层层析法88.（一）HPLC法l试样经皂化后，用苯提取不皂化物，馏试样经皂化后，用苯提取不皂化物，馏去苯后，使用第一阶段的分取型去苯后，使用第一阶段的分取型HPLC，分取维生素分取维生素D组分，以去除大部分干扰物组分，以去除大部分干扰物质。得到的维生素质。得到的维生素D组分，用于第二阶段组分，用于第二阶段分析型分析型HPLC，得样品色谱图，与按同样，得样品色谱图，与按同样操作条件得到的维生素操作条件得到的维生素D标准品的色谱图标准品的色谱图比较进行定量。比较进行定量。89.l本法对维生素本法对维生素D2和和D3不加区别，两者混不加区别，两者混合存在时，以总维生素合存在时，以总维生素D定量。定量。l按国际单位，每按国际单位，每1IU相当于相当于0.025 g维生维生素素D。90.(二二)三氯化锑比色法三氯化锑比色法1、原理、原理 在在三三氯氯甲甲烷烷溶溶液液中中，维维生生素素D与与三三氯氯化化锑锑结结合合生生成成一一种种橙橙黄黄色色化化合合物物，呈呈色色强强度度与维生素与维生素D的含量成正比。的含量成正比。91.3、测定步骤、测定步骤 l(1)样品处理样品处理l(2)测定测定 92.4 结果计算93.5说明与讨论说明与讨论 食食品品中中维维生生素素D的的含含量量一一般般很很低低，而而维维生生素素A、维维生生素素E、胆胆固固醇醇，甾甾醇醇等等成成分分的的含含量量往往往往都都大大大大超超过过维维生生素素D、严严重重干干扰扰维维生生素素D的的测测定定，因因此此测测定定前前必必须须经经过过层析除去这些干扰成分。层析除去这些干扰成分。94.可参考柱层析图95.l此法不能区分此法不能区分D2和和D3，测定值是两者的，测定值是两者的总量。总量。96.四、维生素四、维生素E的测定的测定97.98.99.100.101.测定方法l比色法l荧光法lGC法lHPLC法（VA、VE）102.（一）HPLC法（VE）l1原理原理试样中的维生素试样中的维生素E经皂化提取处理后，将其经皂化提取处理后，将其从不可皂化部分提取至有机溶剂中。用从不可皂化部分提取至有机溶剂中。用高效液相色谱法高效液相色谱法C18反相柱将维生素反相柱将维生素E分分离，经紫外检测器检测，并用内标法定离，经紫外检测器检测，并用内标法定量测定。量测定。103.维生素维生素A和维生素和维生素E色谱图色谱图104.(二二)比色法比色法1原理原理 维维生生素素E能能将将高高铁铁离离子子还还原原为为低低铁铁离离子子，低低铁铁离离子子与与，联联氮氮苯苯发发生生颜颜色色反反应应，可以进行比色测定。可以进行比色测定。500nm105.3、测定步骤、测定步骤l(1)样品处理样品处理 皂化皂化 纯化纯化 l(2)样品测定样品测定l(3)标准曲线的绘制标准曲线的绘制106.5说明与讨论说明与讨论l维维生生素素E在在碱碱性性条条件件下下与与空空气气接接触触易易被被氧氧化化，因因此此在在皂皂化化时时，用用氮氮气气流流保保护护，也也可可加加入入焦焦性性没没食食子子酸酸作作为为抗抗氧氧化化剂剂，防止维生素防止维生素E的氧化。的氧化。107.</p>