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玉米提取物中多酚含量和抗氧化性

摘要：对15种塞尔维亚共重要的玉米杂交种的玉米须中各种多酚含量和抗氧化性进行了评估。在室温条件下，将植物材料与70％丙酮水溶液混合，用超声波进行提取，然后用分光光度计对总多酚、单宁酸和花青素的含量进行测定，此外，用FRAP法对丙酮水溶液提取物中的类黄酮的含量和抗氧化活性进行了评价。在所调查的抗氧化活性及茶多酚之间成立了一个积极的线性关系。在NS640杂交种提取物中发现了最高的抗氧化活性，其中检测出有高水平多酚类物质存在。结果表明多酚含量应该作为研究要用玉米须的重要特征。由于多酚含量大大依赖于植物材料的来源，这种药物的生物来源需要更精确的定义。

关键词：玉米须；玉米；抗氧化性；FRAP法；茶多酚

1.0引言
无论是在传统医学或者官方医学都已经确认了药用玉米须的作用（禾本科植物玉蜀黍的干燥花柱及柱头），玉米须作为一个温和的利尿剂，有利于膀胱碎石排出肾脏，对良性前列腺增生症，膀胱炎，痛风，慢性肾炎和类似疾病都有一定作用。类似的研究结果已发表在各地区普遍使用的药用植物调查的几个民族药理研究机构，或专门用于治疗泌尿系统疾病的机构。（巴斯蒂，1983年；卡塞雷斯等，1987；耶希拉达等，1995）。

已经有研究表明，脂质体对药用玉米须的甲醇提取过程有影响，这是由一种Fe2 + /抗坏血酸体系所诱导的（MAKSIMOVIC和和科瓦切维奇，2003年）。作者认为这是对玉米须的抗氧化活性的第一次报告。在追求对这一药物可能有用的药用药理作用的研究中观察到，抗氧化活性可能依赖于它的生物源。玉米即不能作为一个野生物种，也没办法在无人看管护理的条件下生存的观点已经被普遍接受（耶夫蒂奇，1986；拉多维奇和耶洛瓦茨，1995年）。这是为了满足人类需要而对植物物种的一项长期、持久、具体的饲养过程，。考虑到多酚含量大大依赖于植物材料的来源，研究过程应用系统化的几个品种。
某些重要的基因型被纳入本次研究：所有选择的都是塞尔维亚玉米田普遍品种，总产量都差不多。从我们的角度来看，要研究草塞尔维亚草药玉米须潜在的全部特性和生物来源，应选择此设置。
2.方法

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2.1植物材料
泽蒙波列玉米研究所从野外收集的15个玉米杂交种成熟的玉米须（表1）。收集的植物材料保存在阴暗干燥且通风良好的地方，冷藏保存所有玻璃容器，直到提取。

2.2提取程序
植物材料（每个样品1克）粉碎成精细粉末，然后和70％丙酮水（50毫升）混合，在超声波中提取20分钟，提取物迅速的通过烧结玻璃漏斗进行真空过滤，并在检测前冷冻收藏。

2.3多酚类物质的定性分析
2000年，哈格曼等人用双向纤维素薄层色谱法对提取物中单宁酸进行定性分析。根据瓦格纳和Bladt（1996年）所描述的程序，用硅胶薄层色谱法对总黄酮提取物原花青素进行定性分析。

2.4总多酚含量的测定
2000年，哈格曼等人通过福林-乔卡尔泰乌程序，测定了总多酚的含量。将能被0.1毫升整除的丙酮提取物转移到试管，加入0.5ml蒸馏水。加入0.25毫升福林-乔卡尔泰乌试剂和1.25毫升20％的水钠除碳酸盐溶液，40分钟后在725nm处测定吸光值。根据标准曲线测定总多酚的含量（包括0.1和1.0mg/mL时之间的浓度范围内）。所有的测量都做一式三份。

2.5测定单宁
用福林-乔卡尔泰乌程序测定总单宁酸含量。去除不溶性基质。将不溶性，交联PVPP（Kollidon氯，巴斯夫，德国; 100毫克）移到试管，补充1.0ml水。静置15分钟，然后在4摄氏度，4350转/min下离心10分钟。将浮在表面的液体（能被0.2 毫升整除的体积）转移进测试管，在分光光度计中测定。计算值减去总多酚含量表示总单宁酸含量。所有的测量都做一式三份。

2.6原花青素的测定

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2010年，哈格曼等用丁醇盐酸法测定了原花青素含量。简言之，将提取物（能被0.5毫升整除的体积）转入试管。经过3.0毫升丁醇盐酸试剂（丁醇：盐酸，95:5）和0.1毫升铁试剂2％。将测试管放入沸腾的水浴锅内旋转放置60分钟。冷却后，在550nm处做空白对照试验。用leucoanthocyanidin/100g表示。所有的测量都做一式三份。

2.7黄酮类化合物的测定
将粉状植物材料（1g）与提取溶剂（甲醇，水，醋酸，140:50:10，20毫升）混合。转入能被2.5毫升整除数的50毫升容量瓶，并测量他们的体积（分析解决方案）。为了分析的解决方案，每10毫升，水和三氯化铝试剂各增加5毫升、2毫升（133mg结晶氯化铝和400mg结晶醋酸钠溶解在溶剂中提取100毫升），在430nm处做空白试验（分析的解决方案，再加水和三氯化铝5毫升、10毫升）。黄酮类化合物的含量为从芦丁标准曲线相对应的量，用毫克rutin/100g（(Mimica-Dukic´，1992）表示。

2.8总抗氧化活性测定
2000年，雷希纳评估植物提取物中抗氧化活性的几种方法至今仍可使用。对于本次调查， FRAP法（铁离子还原/抗氧化能力）是一个简单而可靠的测试。这取决于在低pH值下还原铁的2,4,6-tripyridyl-s-triazine [Fe(III)-TPTZ]到2,4,6-tripyridyl-s-triazine [Fe(II)-TPTZ] 是一个复杂的还原剂。这种反应具有强烈的颜色变化，可在593nm监测。初步阐述了生物样品中的总抗氧化活性，该方法已成功地修改了常规分析抗氧化活性化学物质和纯植物提取物（Tsai 等人， 2002; Niemeyer 和 Metzler， 2003)。FRAP分析检测提供了一种快速，方便的评估程序，特别是在植物提取物的抗氧化能力，适合加工大量的样品。

用FRAP法对丙酮水溶液提取物抗氧化活性进行了测定。(Szollosi and Varga-Szollosi, 2002)。在此之前的分析，将提取物（1ml）转移到10ml容量瓶中，以同样的溶剂稀释。加入3.0毫升新配制的FRAP分析摊薄试剂（25毫升醋酸缓冲液，在300mmol /升，pH值3.6 +2.5毫升10mmol /升TPTZ在40mmol / L的HCl +2.5毫升为20mmol / L的氯化铁）。5分钟后在593nm做空白试验。计算出相对应的L -抗坏血酸标准曲线（0.1 - 1mmol / L ）。AAE意味着每减少1mg的样本相当于减少1nmol抗坏血酸。所有的测量都做一式三份。

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2.9统计分析
结果表示为平均值±标准误差。在小组之间的统计的比较与学生的t-测试为独立的观察测试。认为在P <0.05时差异最显著。用他们之间的多酚含量和抗氧化活性的相关性建立回归分析。

3. 结果和讨论
测定总酚，单宁，原花青素和类黄酮含量证实了我们最初的假设，即在塞尔维亚玉米并不是一成不变的。检测出了高水平多酚类物质存在，其中以NS640最高。其次由ZP 434和ZP 704,而茶多酚含量低，特别是在NS6666，巴尔干和NS 663（表1）。虽然在不同阶层的多酚含量差异很大，但观察组在一定范围内发现，不同的群体之间的Zp的手段和NS杂交并没有在概率水平显着提高。

正如表1，为在大范围内变化之间的79.8和160.8 AAE/mg调查提取FRAP测试值。增加抗氧化活性的多酚含量比例：总多酚，单宁，原花青素和黄酮含量在FRAP还原值之间的线性关系成立（图1-4）。在调查中多酚含量相对较高，NS640，434和ZP 704 Zp上的玉米须测试中最重要的抗氧化活性杂种。此外，走向一种杂交组合趋势符合多酚含量和抗氧化活性显然成立（图1）。第一，多酚高剂量组，包括与杂种总多酚含量高于2500mg/100g：NS640，Zp的434和ZP 704。第二，总多酚含量2500mg/100g的：NS606，NS607，Zp 680、 Zp 539、 Zp 599 Zp 677，501和NS444。多酚低杂交组包括含有总多酚1200mg/100g比Zp360，NS6666，巴尔干和NS663少。

这一结果表明，多酚含量应被视为药用玉米须的一种重要特征，其药理作用（例如抗氧化，抗发炎或利尿活动）可以归因于许多药用植物中有效成分的存在。由于观察抗氧化活性和多酚含量均大大依赖于植物材料的来源，这种药物的生物来源需要更精确的定义。

总之，虽然范围有限（仅本地玉米杂交种的研究），但这项调查明确指出具有普遍重要性的一些事实。考虑到在粮食生产过程中作为玉米的副产品，玉米须便宜，易于在大规模使用。 因此，玉米须作为制药工业的原料有十分广阔的前景。所以，在工业生产过程中必须建立一致的系统和必要的常规质量控制。进一步调查这些因素将支持并帮助建立未来生产的最适当的标准，才能有效的利用药用玉米须。

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鸣谢

该调查被塞尔维亚技术及发展科学部授与 1568 号。

来源 ：贝尔格莱德大学药学研究所药学院，塞尔维亚和黑山农学部，诺维萨德大学。

爱思唯尔在线，生物资源技术96（2005）873-877
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