第十二章 DNA合成.doc

第十二章 DNA合成【授课时间】3学时【单元目标】 1记住DNA(生物)合成的概念：包括以DNA为模板指导的DNA合成(复制)，以RNA为模板指导的DNA合成(反转录)及DNA的修复合成(损伤修复)。分别描述其概念。 2以大肠杆菌为例复述DNA复制的特点，参与复制的酶和因子(包括它们的功能)。简要叙述原核生物复制过程及真核生物DNA复制特点。 3结合反转录酶的功能，简述反转录过程及其生物学意义。记住端粒酶的概念与功能。 4列举环境因素造成DNA损伤的几种类型，写出修复合成的几种主要方式的名称，叙述切除修复过程。【授课内容】 1DNA的复制 2反转录作用 3DNA的修复合成。第十三章 RNA的合成【授课时间】3学时【单元目标】 1解释转录的概念及特点。 2简要叙述原核生物RNA聚合酶组成及功能、真核生物RNA聚合酶功能。 3扼要叙述RNA转录过程。 4写出几种RNA转录后加工过程。 5解释核酶(ribozyme)概念。【授课内容】 1转录作用 2转录后的加工过程 3核酶(酶RNA)的概念 4RNA的复制简介第十四章 蛋白质生物合成【授课时间】4学时【单元目标】 1解释翻译的概念。 2写出蛋白质生物合成体系的组成，论述mRNA、tRNA和核蛋白体的作用原理。 3复述蛋白质生物合成过程。 4. 简要写出真核与原核生物蛋白质合成异同及肽链合成后的加工过程。 5解释分子病，并举例说明。 6简要叙述蛋白质合成阻断剂作用原理。【授课内容】 1蛋白质合成体系 2蛋白质的合成过程 3蛋白质合成与某些医学问题 第十五章 基因表达调控【授课时间】4学时【单元目标】 1解释基因表达的概念，简述基因表达方式和特点。 2叙述原核生物、真核生物基因表达调控的意义。 3记住基因表达调控的要素，解释重要概念，如顺式作用元件、反式作用因子、启动子或启动序列、增强子、转录因子等。 4描述乳糖操纵子结构及调节原理，解释操纵子概念。 5写出原核、真核基因调控主要区别。【授课内容】 1基因表达与调控的概念、意义 2基因表达方式与规律(特点) 3基因表达调控原理及要素 4操纵子概念及乳糖操纵子工作原理 5真核基因结构、转录及调节特点第十六章 重组DNA技术【授课时间】2学时【单元目标】 1描述几个重要基本概念，如DNA克隆、限制性核酸内切酶、基因载体及类别、cDNA、基因组DNA、聚合酶链反应。 2写出以质粒DNA为载体进行DNA克隆的基本过程。 3写出当前分子医学主要相关内容。【授课内容】 1重组DNA技术相关概念 2DNA克隆基本过程 3分子医学简介课程名称：生物化学章节题目DNA的生物合成教学目的掌握：复制的基本规律；DNA复制的酶学和拓扑学变化；逆转录酶和逆转录过程。熟悉：DNA生物合成过程；DNA损伤（突变）与修复；了解：逆转录研究的意义；滚环复制和D环复制教 学 内 容重点（）难点（）疑点（？）时间分配（分钟）举例/教具一、复制的基本规律（一） 半保留复制的实验依据和意义 （二）双向复制 （三）复制的半不连续性二、DNA复制的酶学和拓扑学变化（一）复制的化学反应 （二）DNA聚合酶 （三）复制保真性的酶学依据 （四）复制中的解链和DNA分子拓扑学变化三、DNA生物合成过程（一）原核生物的DNA生物合成过程（二）真核生物的DNA生物合成过程 四、逆转录和其他复制方式 （一）逆转录病毒和逆转录酶 （二）逆转录研究的意义 （三）滚环复制和D环复制 五、DNA损伤（突变）与修复（一）突变的意义（二）引发突变的因素（三）突变的分子改变类型（四）DNA损伤的修复 404060 20 40多媒体课件讨论、思考题、作业：试述参与DNA复制过程主要的酶和蛋白因子的作用。参考书目：医学分子生物学原理 王琳芳、杨克恭主编 高等教育出版社 生物大分子的结构与功能 陈惠黎主编 上海医科大学出版社第十章 DNA的生物合成遗传信息从亲代DNA传递到子代DNA分子上，称为复制，这是生物体内高分子的聚合过程，即DNA的生物合成。第一节 复制的基本规律一、半保留复制（一）半保留复制的定义复制时，母链的双链DNA解开成两股单链，各自作为模板指导子代合成新的互补链。子代细胞的DNA双链，其中一股单链从亲代完整地接受过来，另一股单链则完全重新合成。由于碱基互补，两个子细胞的DNA双链，都和亲代母链DNA碱基序列一致。这种复制方式称为半保留复制（semi-conservative replication）。（二）半保留复制的实验依据把细菌放在含15NH4Cl的培养液中培养若干代，分离出的DNA是含15N的“重”DNA，密度比一般含14N的DNA高。用密度梯度离心法，15N-DNA形成的致密带位于普通14N-DNA所形成的致密带的下方。把含15NDNA的细菌放回含普通的NH4Cl培养液中培养。细菌在营养条件充足时，20分钟就可以生长成新一代。提取子一代的DNA再作密度梯度离心分析，发现其致密带介于重带与普通带之间，看不到有单独的重带或普通DNA带。实验结果说明：子一代DNA双链中有一股是15N单链，而另一股是14N单链。前者是从亲代接受和保留下来的，后者则是完全新合成的。密度梯度离心实验，完全支持半保留复制的设想。含15N-DNA的细菌在普通培养液中继续培育出子二代，其DNA则是中等密度的DNA与普通DNA各占一半这也进一步证明复制是采取半保留式的。实验还可按子3代、子4代进行下去，15NDNA则按18、116的几何级数逐渐被“稀释”掉。 （三）半保留复制的意义 1、使亲代DNA所含的信息以极高的准确度传递给子代DNA分子。 2、DNA通过复制和基因表达这两种主要功能，决定了生物的特性和类型并体现了遗传过程的相对保守性。遗传的保守性，是物种稳定性的分子基础，但不是绝对的。二、双向复制（一）双向复制的定义复制时，DNA从起始点（origin）向两个方向解链，形成两个延伸方向相反的复制叉，称为双向复制（bidirectional replication） 。（二）原核生物的双向复制环状DNA，从一个复制起始点开始，向两个相反方向延伸形成两个复制叉。A放射自显影复制中的图像 B1至B3用示意形式解释Aori：复制起始点，涂黑的半月形代表各种酶及蛋白质B3的箭头代表新生链及复制方向 （三）真核生物的双向复制真核生物每个染色体有多个起始点，每个起始点产生两个移动方向相反的复制叉，复制完成时，复制叉相遇并汇合连接。习惯上把两个相邻起始点之间的距离定为一个复制子(replicon) 。复制子是独立完成复制的功能单位。 复制子是两个复制起始点之间的DNA片段，图中黑色的倒三角形代表复制起始点。 三、复制的半不连续性DNA双螺旋的两条链是反平行的，而DNA合成的方向只能是53 。在DNA复制时，1条链的合成方向和复制叉的前进方向相同，可以连续复制，叫作前导链（leading strand）；而另一条链的合成方向和复制叉的前进方向正好相反，不能连续复制，只能分成几个片段（冈崎片段）合成，称之为滞后链（lagging strand）。领头链连续复制而随从链不连续复制，就是复制的半不连续复制。四、复制的高保真性DNA复制的精确度极高，误差率很低，以保证物种在维持遗传保守性的同时，还要通过变异不断进化。DNA复制的高度忠实性至少要依赖三种机制：1、遵守严格的碱基配对规律；2、DNA聚合酶在复制延长中对碱基的选择功能；3、复制出错时，DNA聚合酶的即时校读功能。第二节 DNA复制的酶学一、复制的化学反应（一）复制的反应体系1底物：四种 dNTP：dATP 、dTTP、dGTP、 dCTP2聚合酶：依赖DNA的DNA聚合酶，DNA-pol；3模板：指解开成单链的DNA母链；4引物：提供3OH末端，使dNP可以依次聚合；5其他酶和蛋白质因子。（二）复制的化学反应在聚合酶的作用下，一个核苷酸 5-P和相邻的核苷酸上核糖的3 -OH生成磷酸二酯键而逐一聚合的形成多核苷酸链。（dNMP）ndNTP（dNMP）n+l ppiDNA链生成过程，DNA 新链生成需引物和模板； 只能从5-端向3-端延长。二、参与复制的主要酶类（一）DNA聚合酶全称：依赖DNA的DNA聚合酶（DDDP） 缩写：DNApol活性： 1. 53 的聚合活性 2. 核酸外切酶活性1原核生物的DNA聚合酶DNA-pol I DNA-pol II DNA-pol （1）DNA聚合酶：结构特点：单一多肽链，从N端到C端有3个酶促活性结构域依次排列：53外切酶、35外切酶和DNA聚合酶。DNA Pol I在蛋白酶的作用下，可分为大、小两个片段。小片段具有53外切酶活性。大片段（又称为Klenow片段）具有聚合酶活性及35 外切酶活性，它对核酸技术十分有用。DNA-pol I在活细胞内的功能1）53聚合酶的活性：对复制和修复中出现的空隙进行填补。2）35外切酶活性：对复制中错误进行即时校读，保证复制的准确性。3）53外切酶活性：可去除RNA引物和突变碱基。DNA-pol（109kD） （2）DNA-pol II 具有53聚合酶活性和35外切酶活性，无53外切酶活性，它只是在无pol I及pol 的情况下才起作用，其真正的功能也未完全清楚，可能在损伤修复中有特殊作用。（3）DNA pol-结构特点由10种亚基（ ）组成不对称异源二聚体。核心酶（） 亚基：53 聚合酶活性 亚基：3 5外切酶活性和碱基选择功能，是复制保真性所必需 亚基可能起组装作用亚基：夹稳模板链并使酶沿模板链滑动复合物（、）：促进全酶组装至模板及增强核心酶活性 DNA-pol 在活细胞内的功能53聚合酶的活性：是在复制延长中真正催化新链核苷酸聚合的酶。35外切酶活性：对复制中错误进行即时校读，保证复制的准确性。DNA-pol (250kD) 2真核生物的DNA聚合酶DNApol ，。DNApo1：延长领头链和随从链；DNApoI：合成RNA引物；DNApol：校读、修复和填补缺口。DNApol：在没有其他DNApol时发挥催化功能。DNApo1：催化线粒体DNA的合成。（二）与复制起始及解链解旋相关的酶类在复制起始时需要多种酶和蛋白因子，共同起解开、理顺DNA链，维持DNA在一段时间内处于单链状态的作用。1. 与复制起始及解链相关的酶类及蛋白（1）DnaA蛋白DnaA蛋白是由相同亚基组成的四聚体。复制起始时， DnaA蛋白辨认并结合E.coli上复制起始点oriC，1020个DnaA蛋白相互靠近形成DNA蛋白质复合体结构，促使oriC局部解链。（2）DnaB蛋白解螺旋酶、复制蛋白rep ，利用ATP供能，作用于氢键，使DNA双链解开成为两条单链。（3） DnaC蛋白Dna C蛋白的作用是将具有解链酶活性的Dna B蛋白运送到复制模板，并协同Dna B 蛋白的作用。2DNA拓扑异构酶（DNA topoisomerase）DNA拓扑异构酶，改变DNA分子构象，理顺DNA链，使复制能顺利进行。分类：拓扑酶和拓扑酶作用特点：对DNA分子的作用是既能水解，又能连接磷酸二酯键。拓扑酶是在复制全过程中都是有作用的。作用机制拓扑酶I切断DNA双链中一股，使DNA解链旋转不致打结，适当时候又把切口封闭，使DNA变为松弛状态。拓扑酶的催化反应不需ATP。拓扑酶在无ATP时，切断处于超螺旋状态的DNA分子双链某一部位，断端通过切口使超螺旋松弛；在利用ATP供能情况下，断端在拓扑酶催化下恢复连接松弛状态的DNA又进入负超螺旋状态。 3单链DNA结合蛋白（single stranded DNA binding protein，SSB）模板的DNA总要处于单链状态，而DNA分子只要符合碱墓配对，又总会有形成双链的倾向，以使分子达到稳定状态和免受胞内广泛存在的核酸酶降解。单链DNA结合蛋白的作用是在复制中维持模板处于单链状态并保护单链的完整。它不像聚合酶那样沿着复制方向向前移动，而是不断地与模板结合、脱离的。（三）引物酶DNA聚合酶不能从头合成DNA链，只能延长已有的DNA或RNA引物链。引物酶（primase）在复制起始时催化引物（primer）合成，提供3-OH末端，使DNA-pol能够催化dNTP聚合。引物酶属DNA指导的RNA 聚合酶，但不同于催化转录过程的RNA聚合酶。在E.coli，引物酶是dnaG基因的产物DnaG。（四）DNA连接酶 （DNA ligase） 连接DNA链3-OH末端和相邻DNA链的5 P末端，使二者生成磷酸二酯键，从而把两段相邻的DNA链连成完整的链。特点：连接酶连接碱基互补基础上的双链中的单链缺口，它并没有连接单独存在的DNA单链或RNA单链的作用。功能：在复制中起最后接合缺口的作用，在DNA修复、重组、剪接中也起缝合缺口作用，也是基因工程的重要工具酶之一。第三节 DNA生物合成过程一、原核生物DNA生物合成（一）复制的起始1、DNA解链 DnaA蛋白辨认起始点oriC的重复序列，并与DNA形成起始复合物；DnaB蛋白在DnaC蛋白协助解开双螺旋；SSB维持单链模板稳定2、引发体的形成并合成引物DnaB蛋白和DnaA、DnaC蛋白，还有其他复制因子，一起形成复合体，结合引物酶，形成较大的聚合体，再结合到模板DNA上，这种复合物称为引发体。引发体的蛋白质部分在DNA链上可以移动，并需由ATP供给能量。引发体到达适当位置就可按照模板的配对序列，催化NTP（不是dNTP）的聚合，生成引物。DNA复制是半不连续，一股链是可以连续进行的，另一股链是不连续复制的，在不连续复制的链上，引发体需多次生成。3、超螺旋的转型 解链将导致下游发生打结现象或DNA超螺旋的其他部分过度拧转，拓扑酶通过切断、旋转和再连结的作用，实现DNA超螺旋的转型，即把正超螺旋变为负螺旋。 （二）复制的延长脱氧单核苷酸逐个加入而延长DNA新链，其化学反应本质是生成磷酸二酯键。催化此反应的酶：原核生物：DNA-pol 1、复制延长的生化过程复制起始时，母链即已解开，两股单链都是模板，其作用是按碱基配对规律指引核苷酸加入到新链。每次加入的单个核苷酸，都是以dNTP为原料，复制时子链从5向3延长。复制延长速度相当快。E.coli每秒钟能加入的核苷酸数达2500个。2、复制的半不连续性和冈崎片段在形成双螺旋结构时，DNA双链的走向是相反的。复制经解链后，两股单链在复制叉上也是走向相反。复制，包括引物合成，只能从5向3延伸。而在同一复制叉上，解链的方向只可能有一个。复制方向与解链方向不一致，可以理解不连续复制的成因。（1）领头链连续复制顺着解链方向而生成的子链，复制是连续进行的，这股链称为领头链（leading strand）。（2）随从链不连续复制复制的方向与解链方向相反生成的子链称为随从链（ lagging strand） 。随从链的复制必须等待模板链解开至足够长度，才能从53方向生成引物然后复制。随从链在延长时，又要等到下一段暴露出足够长而度的模板，再次生成引物而延长。这就是不连续复制。（3）冈崎片段随从链不连续复制的片段称为冈崎片段，其大小在10002000个核苷酸。每一个不连续复制的片段5-端都带有一个RNA引物。片段的复制完成后，RNA引物会被除去而代之以DNA片段，因此复制至最后，两股子链都是DNA链。 领头链连续复制随从链不连续复制 （三）复制的终止原核生物基因是环状DNA，双向复制的复制片段在复制的终止点(ter)处汇合。复制的起始点和终止点刚好把环状DNA分为两个半圆，两个方向各进行180，同时在终止点汇合。为了定位方便，习惯把E.coli的DNA分为100等分。E.coli复制起始点oriC在82位点，复制终点ter（termination）在32位点。 二、真核生物的DNA生物合成（一）复制的起始真核生物每个染色体有多个起始点，是多复制子复制。复制有时序性，即复制子以分组方式激活而不是同步起动。 复制的起始需要DNA-pol（引物酶活性）和pol（解螺旋酶活性）参与。还需拓扑酶和复制因子(replication factor, RF)。 增殖细胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen, PCNA)在复制起始和延长中起关键作用。复制起始也是打开复制叉，形成引发体和合成RNA引物。但详细机制尚未明了。 （二）复制的延长在复制叉及RNA引物生成后，DNA-pol通过PCNA的协同作用，逐步取代DNA-pol，在引物的3OH基础上分别合成领头链和随从链。复制子复制完成后，除去引物。（三）复制的终止染色体DNA呈线状，复制在末端停止。复制中岡崎片段的连接，复制子之间的连接。染色体两端DNA子链上最后复制的RNA引物，去除后留下空隙。留下的空隙如没法填补，细胞染色体DNA将面临复制一次就缩短一些的问题。这的确在某些低等生物的特殊生活条件下观察到，但只是少数特例。事实上染色体虽经多次复制，却不会越来越短的。因为真核生物染色体线性DNA分子末端存在着特殊的结构称为端粒。1端粒（telomere）（1）端粒的定义：是一段DNA序列和蛋白质形成的一种复合体，是真核生物染色体线性DNA分子末端的结构。形态学上，染色体末端膨大成粒状，这是因为DNA和它的结合蛋白紧密结合，像两顶帽子那样盖在染色体两端，因而得名。（2）端粒的结构特点对多种不同生物端粒的DNA序列测定，发现其共同特点都是富含G碱基的短序列多次重复。例如，哺乳类动物仓鼠和人类，端粒DNA都有（TTAGGG）n重复可多达数十甚至上百次，并且形成反折式的二级结构。 （3）端粒的功能：维持染色体的稳定性；维持DNA复制的完整性 2端粒酶（telornerase）20世纪的80年代中期发现了端粒酶，它是一种RNA-蛋白质复合物。端粒酶中的RNA序列常可与端粒区的重复序列互补并作为端粒区重复序列延长的模板。端粒酶中的蛋白质部分具有逆转录酶活性，能以其自身携带的RNA为模板逆转录合成端粒DNA。3合成端粒的过程复制终止时，染色体线性DNA末端确有可能缩短，但通过端粒的合成可以补偿这种由除去引物引起的末端缩短。（图11-21） （1）端粒DNA的3末端和端粒酶所含的RNA分子的3端形成碱基配对。（2）端粒酶利用RNA为模板，将dNTP加到端粒DNA的3端，这个逆转录过程一直进行到RNA模板的第35位。（3）DNA-RNA杂交链之间发生相对滑动，端粒DNA链3端和RNA下游（3端）形成新的碱基配对，并暴露出部分RNA模板序列。（4）重复（2）（3），周而复始直至足够长度。在上述过程中，离开RNA模板的端粒DNA3端可反折为双链，并常出现两个G之间的配对，以有利于DNA-RNA杂交链之间的相对滑动。虽然端粒酶不能直接填补引物去除后留下的空隙，而是在模板链的3端添加末端重复序列，这样仍能保持染色体的平均长度。4端粒和端粒酶的生物学意义端粒特别是端粒酶的活性与细胞的生长、繁殖、衰老凋亡以及肿瘤的发生密切相关。端粒的平均长度随细胞分裂次数的增多及年龄的增长而逐渐变短至消失，可导致染色体稳定性下降，导致细胞衰老凋亡。体细胞几乎没有端粒酶活性，随多次细胞分裂端粒逐渐缩短，细胞失去增殖能力。而端粒酶活性较高的胚原细胞，端粒长度未缩短。肿瘤细胞端粒酶重新获得活性，以维持端粒结构致使染色体稳定而成为永生细胞。肿瘤细胞的端粒比正常人同类细胞显著缩短。第四节 逆转录和其他复制方式 一、逆转录在逆转录酶的作用下以RNA为模板合成DNA的过程。此过程中，核酸合成与转录（DNARNA）过程遗传信息的流动方向相反（RNADNA），故称为逆转录（reverse transcription） 。二、逆转录病毒RNA病毒的基因组是RNA而不是DNA，其复制方式是逆转录，故称为逆转录病毒（retrovirus）。RNA病毒感染活细胞后，要先经逆转录成为双链DNA，通过基因重组方式，参加入宿主细胞基因组，并随宿主细胞复制和表达。这种重组方式称为整合。病毒基因的整合可能是病毒致癌的重要方式。三、逆转录酶能催化以单链RNA为模板合成双链DNA的反应的酶称为逆转录酶（reverse transcriptase)。它兼有三种酶的活性：RNA指导的DNA聚合酶，DNA指导的DNA聚合酶和RNase H活性。RNase H活性是指除去杂合分子中的RNA。它可以从53和35两个方向水解DNARNA。逆转录酶和其他DNA聚合酶一样，合成DNA的方向为53，并且不能从头合成DNA，也需要引物，是病毒本身的一种tRNA。四、逆转录过程1以单链RNA的基因组为模板，在逆转录酶(RNA指导的DNA聚合酶)的催化下，合成一条单链DNA；2产物与模板生成RNADNA杂化双链，杂化双链中的RNA被逆转录酶(RNase H)水解；2以新合成的单链DNA为模板，逆转录酶(DNA指导的DNA聚合酶)催化合成第二链的DNA。 五、逆转录酶和逆转录现象的生物学意义 （一）逆转录酶和逆转录现象是分子生物学研究中的重大发现 RNA同样兼有遗传信息传代与表达功能。 （二）对逆转录病毒的研究，拓宽了病毒致癌理论。（三）分子生物学研究应用逆转录酶（cDNA法），作为获取基因工程目的基因的重要方法之一。第五节 DNA损伤（突变）与修复一、突变的定义：个别脱氧核糖核苷酸残基甚至片段DNA在构成、复制或表型功能上的异常变化，称为突变（ Mutation），也称为DNA损伤（DNA damage）。即遗传物质结构改变引起遗传信息的改变。二、突变的意义（）突变是进化、分化的分子基础自发突变或自然突变 （二）突变导致基因型改变多态性：个体之间的基因型差别。（三）突变导致死亡突变发生在对生命过程至关重要的基因上，可导致个体、细胞的死亡。（四）突变是某些疾病的发病基础 有害的突变三、引发突变的因素（一）自发突变大量的突变属于自发突变，发生频率只不过10-9左右。但考虑到高等生物基因组庞大，细胞繁殖速度快，就不难理解它起的作用是不可低估的。（二）诱发突变1物理因素：主要指紫外线和各种辐射，如紫外线可引起DNA链上相邻的两个嘧啶碱基发生共价结合，生成嘧啶二聚体。2化学因素：化工原料、化工产品和副产品，各种工业的排放物、农药、食品防腐剂或添加剂，以至汽车排放的废气。四、突变分子改变的类型 （一）错配（mismatch）DNA分子上的碱基错配称点突变(point mutation)。点突变发生在基因的编码区域，可导致氨基酸的改变。 1. 转换：发生在同型碱基之间，即嘌呤代替另一嘌呤，或嘧啶代替另一嘧啶。2. 颠换：发生在异型碱基之间，即嘌呤变嘧啶或嘧啶变嘌呤。（二）缺失、插入和框移突变缺失：一个碱基或一段核苷酸链从DNA大分子上消失。插入：原来没有的一个碱基或一段核苷酸链插入到DNA大分子中间。框移突变：三联体密码的阅读方式改变，造成蛋白质氨基酸排列顺序发生改变，其后果是翻译出的蛋白质可能完全不同。（三）重排（rearrangement）DNA分子内发生较大片段的交换，称为重组或重排。移位的DNA可以在新位点上颠倒方向反置（倒位），也可以在染色体之间发生交换重组。四、DNA损伤的修复（DNA repairing）修复是指针对已发生了的缺陷而施行的补救机制。修复的主要类型：光修复(light repairing)、切除修复(excision repairing)、重组修复(recombination repairing)和SOS修复 （一）光修复光修复过程是通过光修复酶（photolyase）催化而完成的，仅需300600nm波长照射即可活化，普遍存在于各种生物，人体细胞中也有发现。通过此酶作用，可使嘧啶二聚体分解为原来的非聚合状态，DNA完全恢复正常。（二）切除修复（excision repairing）细胞内最重要的修复机制，包括去除损伤DNA，填补空隙和连接。1、原核生物DNA损伤修复：UvrA，UvrB辨认及结合DNA损伤部位；UvrC在解螺旋酶的协助下切除损伤部位。DNA-pol和连接酶填补空隙和连接。2、真核生物DNA损伤修复：XP类蛋白辨认和切除损伤DNA部位，切除后留下的空隙，则由DNA-pol 及加以修复。 （三）重组修复（recombination repairing）当DNA分子的损伤面较大，还来不及修复完善就进行复制时，损伤部位因无模板指引，复制出来的新子链会出现缺口，这时，就靠重组蛋白RecA的核酸酶活性将另一股健康的母链与缺口部分进行交换，以填补缺口。损伤链移到己完成复制的链上，如果损伤又只发生在双链DNA中的一股单链，则下一轮的复制损伤链就只占DNA的14，不断复制后，其比例就越来越低，称为把损伤链“稀释”掉。 （四）SOS修复是一类应急性的修复方式。由于DNA损伤广泛至难以继续复制，由此而诱发出一系列复杂的反应。在E. coli，各种与修复有关的基因，组成一个称为调节子(regulon)的网络式调控系统。特点：反应特异性低，对碱基的识别、选择能力差。通过SOS修复，复制如能继续，细胞是可存活的。然而，DNA保留的错误会较多，引起较广泛、长期的突变。附录练习题简答题1参与DNA复制的主要酶类有哪些?各有何功能？2比较真核细胞与原核细胞DNA复制的异同点。3何为分子生物学中心法则?4试比较DNA复制，DNA损伤修复及逆转录过程中DNA合成的异同。2 提示 名词解释1半保留复制2逆转录3岡崎片断 4端粒5端粒酶6cDNA 3 提示 英汉互译1基因2中心法则3端粒4点突变5领头链6DNA损伤7Semi-conservative replication8Rolling circle replication9Primosome10the lagging strand11Okazaki fragment12telomerase 13Reverse transcription14cDNA15Replication fork4 提示 选择题1关于原核生物DNA-pol，哪项是正确的ADNA-pol III是细胞内数量最多的聚合酶B都具有53聚合活性和35外切酶活性C都具有基因突变后的致死性DDNA-pol I是主要的聚合酶EDNA-pol III有切除引物的功能2关于真核生物DNA-pol，哪项是正确的ADNA-pol 与DNA-pol I相类似BDNA-pol 在复制中起切除修复作用CDNA-pol 是复制延长中主要起催化作用的酶DDNA-pol 是线粒体DNA复制的酶EDNA-pol 具有引物酶活性3在DNA复制中，RNA引物A使DNA-pol III活化B使DNA双链解开C提供5末端作合成新DNA链起点D提供3末端作合成新DNA链起点E提供3末端作合成新RNA链起点4DNA复制中，下列哪种酶不需要ADNA指导的DNA聚合酶BDNA指导的RNA聚合酶CDNA连接酶D拓扑异构酶E限制性核酸内切酶5关于端粒酶的叙述不正确的是：A端粒酶具有逆转录酶的活性B端粒酶是DNA与蛋白质的聚合体C维持真核生物DNA的完整性D端粒酶活性下降可能与老化有关E端粒酶的催化机制为爬行模型6关于冈崎片段的叙述正确的是：A两条子链上均有冈崎片段B原核生物的冈崎片段长于真核生物C冈崎片段的生成不需要RNA引物D冈崎片段是由DNA聚合酶I催化生成的E滚环复制中不出现冈崎片段7逆转录是以ARNA为模板合成DNA的过程BDNA为模板合成RNA的过程CRNA为模板合成蛋白质的过程DDNA为模板合成蛋白质的过程E蛋白质为模板合成RNA的过程8DNA拓扑异构酶的作用是A解开DNA的双螺旋B解决解链中的打结缠绕现象C水解引物，延伸并连接DNA片段D辨认复制起始点E稳定分开的双螺旋9DNA连接酶的作用是A解决解链中的打结缠绕现象B合成RNA引物C使DNA形成超螺旋结构D使DNA双链模板的单链缺口的两个末端相连接E去除引物，填补空缺10遗传信息传递的中心法则是：ADNARNA蛋白质BRNADNA蛋白质C蛋白质DNARNADDNA蛋白质RNAERNA蛋白质DNA