环丙唑醇的高效液相色谱分析.doc

环丙唑醇的高效液相色谱分析
项军1 王胜翔2 姜宜飞2
（1.湖南化工研究院，湖南 长沙 410017；2.农业部农药检定所，北京 100125）
Analysis of Cyproconazole by HPLC
Xiang Jun (Hunan Research Institute of Chemical Industry,Hunan Changsha 410017 )
Wang Shengxiang Jiang Yifei(Institute for the Control of Agrochemicals, Ministry of Agriculture, Beijing 100125，China)
Abstract: A method for separation and quantitative analysis of Cyproconazole by HPLC with methanol and water as mobile phase, ZORBAX Extend-C18 column and DAD at 222nm wavelength was described. The result showed that the linear correlation coefficient was 0.99996, the standard deviation was 0.41, the variation coefficient was 0.42%, the average recovery was 99.97%.
Key words: Cyproconazole; HPLC

摘要：本文采用高效液相色谱法，以甲醇+水为流动相，使用以ZORABX Extend-C18、5um为填料的不锈钢柱和二极管阵列检测器，在222 nm波长下对试样进行分离和定量分析。结果表明环丙唑醇的线性相关系数为0.99996；标准偏差为0.41；变异系数为0.42%；平均回收率为99.97%。
关键词：环丙唑醇；高效液相色谱
1　 前言
环丙唑醇 (Cyproconazole)化学名称为( 2RS, 3RS; 2RS, 3SR ) -2-( 4氯苯基)-3环丙基-1-( 1H -1, 2, 4-三唑-1基)丁-2-醇。它是麦角甾醇脱甲基化抑制剂，可防治谷类和咖啡锈病，谷类、果树和葡萄白粉病，花生、甜菜叶斑病，苹果黑星病和花生白腐病[1-2]。环丙唑醇具有高效、低毒、广谱性等特点。目前环丙唑醇原药具体的分析方法未见报道。本文采用高效液相色谱法，对试样中环丙唑醇进行定量分析。该方法操作简便、快速、准确，分离效果好，准确度和精密度均能达到定量分析的要求，可以作为企业生产过程质量控制和质检机构质量检测的参考方法。
2　 试验部分
2.1 试剂和溶液 甲醇：色谱纯；水：新蒸2次蒸馏水；环丙唑醇标样：已知质量分数， 99.7%（农业部农药检定所）；试样：环丙唑醇原药（由某公司提供）。
2.2 仪器 高效液相色谱仪：Agilent 1100，具有二极管阵列检测器和自动进样器；Agilent 1100色谱工作站；Millipore超纯水制备系统；色谱柱：250 mm×4.6 mm(id)不锈钢柱，内装ZORBAX Extend-C18、5 μm填充物；过滤器：滤膜孔径约0.45μm。
2.3 液相色谱操作条件 流动相：甲醇:水＝65:35（V/V）；流量：1.3mL/min；柱温：35℃；检测波长：222 nm；进样体积：5μL；保留时间：环丙唑醇(2RS,3RS)体约7.4min和环丙唑醇(2RS,3SR)体约 8.7min
上述液相色谱操作条件，系典型操作参数，可根据不同仪器特点，对给定的操作参数作适当调整，以期获得最佳效果。环丙唑醇标样和试样的高效液相色谱图（图1、2）。
min
0
2
4
6
8
10
12
14
mAU
0
50
100
150
200
250
DAD1 A, Sig=222,4 Ref=360,100 (XJ\10191001.D)
8.104
min
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2
4
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8
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mAU
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100
150
200
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DAD1 A, Sig=222,4 Ref=360,100 (XJ\10191003.D)
8.107

图1 环丙唑醇标样高效液相色谱图 图2环丙唑醇原药高效液相色谱图
2.4 测定步骤
2.4.1标样溶液的配制 称取环丙唑醇标样40mg (精确至0.1mg)，置于50mL容量瓶中，用甲醇溶解并用流动相稀释至刻度，摇匀。
2.4.2试样溶液的配制 称取含环丙唑醇40m g的试样（精确至0.1mg），用甲醇溶解并用流动相稀释至刻度，摇匀。
2.4.3测定 在上述操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，直至相邻2针标样溶液的响应值相对变化＜1.5%后，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。
2.4.4计算 将测得的2针试样溶液以及试样前后2针标样溶液中环丙唑醇峰面积分别进行平均。试样溶液中环丙唑醇的质量分数X%，按式（1）计算。
A1·m2
A2·m1·P

X ＝ ……………………………（1）

式中：
A1── 标样溶液中环丙唑醇峰面积的平均值；
A2── 试样溶液中环丙唑醇峰面积的平均值；
m1── 标样的质量，g；
m2── 试样的质量，g；
P ── 标样中环丙唑醇的质量分数，%。
3　 结果与讨论
3.1　 色谱条件的选择 通过Agilent1100高效液相色谱仪的光谱数据采集功能，获得环丙唑醇(2RS,3RS)体和环丙唑醇(2RS,3SR)体的紫外波长扫描图（图3、4）。从图中可以看到环丙唑醇的最大吸收波长在200 nm附近，在222nm附近吸收也比较大，为避免溶剂干扰，因此将检测波长定为222 nm。
nm
200
225
250
275
300
325
350
375
mAU
0
100
200
300
400
*DAD1, 7.380 (481 mAU, - ) Ref=8.167 & 7.887 of 10191003.D
nm
200
225
250
275
300
325
350
375
mAU
0
100
200
300
400
*DAD1, 8.567 (484 mAU, - ) Ref=8.167 & 7.887 of 10191003.D

图3 环丙唑醇(2RS,3RS)体的紫外吸收谱图 图4 环丙唑醇(2RS,3SR)体的紫外吸收谱图

色谱柱选择常用的反相填料ZORBAX Extend -C18柱。依据环丙唑醇物化性质，选择甲醇作为溶剂溶解样品。流动相的选择则根据化合物的特点，对甲醇和水按不同比例，在色谱柱上进行选择比较。经测定，选择甲醇:水＝65:35（V/V）为流动相，当流速为1.3 mL/min时，有效成分与杂质能得到很好的分离，峰形对称，基线平稳，并且分析时间较短，提高了工作效率。
3.2　 分析方法的线性相关性试验 准确称取环丙唑醇标样约10mg、25mg、40mg、60mg、80mg，分别置于50mL容量瓶中，用甲醇溶解并用流动相稀释至刻度，摇匀。在上述色谱操作条件下进行分析，以环丙唑醇浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线环丙唑醇线性方程为y＝8318.3808x+31.3144，其线性相关系数为0.99996。线性相关性的测定结果（表1、图5）。

表1　 分析方法的线性相关性试验结果
编号
1
2
3
4
5
环丙唑醇质量浓度，mg/mL
0.2182
0.4535
0.7779
1.1574
1.5491
环丙唑醇峰面积
1849.9
3809.3
6576.2
9592.9
12914.5

图5 环丙唑醇线性关系图
3.3　 分析方法的精密度试验 从同一产品中准确称取5个试样，在上述色谱操作条件下进行分析，测得环丙唑醇的标准偏差为0.41，变异系数为0.42%（表2）。
表2　 分析方法的精密度试验结果
编号
1
2
3
4
5
平均值，%
标准偏差
变异系数，%
环丙唑醇质量分数，%
97.02
95.78
96.54
96.76
96.50
96.52
0.41
0.42

3.4　 分析方法的准确度试验 在已知含量的样品中，加入一定量的标样，在上述色谱操作条件下进行分析，测得环丙唑醇的平均回收率为99.97%（表3）。
表3　 分析方法的准确度试验结果
编号
理论值，mg
实测值，mg
回收率，%
平均回收率，%
1
41.40
41.34
99.86
99.97
2
44.50
44.51
100.02
3
40.91
40.82
99.78
4
45.16
44.91
99.45
5
45.88
46.21
100.72

4　 结论
试验结果表明，本方法的准确度和精密度较高，线性关系良好，具有简便、快速、准确及分离效果好的优点，是一种可行的分析方法。

参考文献
[1]游华南. 杀菌剂环唑醇的合成研究[J]. 现代农药, 2004, 3(4): 10-12.
[2]李鸿波, 郝梦安, 范谦等. 环丙唑醇的新合成方法[J]. 化学研究与应用, 2009, 21(9): 1351-1354.