益脑康胶囊对缺血再灌注模型小鼠自噬相关因子Beclin-1、LC3B和p62的影响.pdf

中 国 科 技核 心 期 刊Western Journal of Traditional Chinese Medicine,2023 Vol.36 No.9药 理 研 究方方 药药 益脑康胶囊对缺血再灌注模型小鼠自噬相关因子 Beclin-1、LC3B 和 p62 的影响邓敏贞1，2，钟晓琴2，高志杰1，彭丽霖1，2，程骁1，2，孙景波1，21 广东省中医院/广州中医药大学第二附属医院/广东省中医药科学院，广东 广州 510120；2 广州中医药大学，广东 广州 510006摘 要 目的：研究益脑康胶囊对缺血再灌注模型小鼠自噬相关因子肌球蛋白样BCL2结合蛋白（myo-sin-like BCL2 interacting protein，Beclin-1）、微管相关蛋白 1 的轻链 3B（microtubule associated protein light chain 3B，LC3B）和泛素结合蛋白62（sequestosome 1，p62）的影响。方法：采用大脑中动脉闭塞法建立小鼠脑缺血再灌注损伤模型。将造模成功的小鼠按随机数字表法分成模型组及益脑康低（1 g/kg）、中（3 g/kg）、高（9 g/kg）剂量组，每组6只，假手术组和模型组灌胃等体积生理盐水，益脑康各剂量组连续灌胃给药3天，每天2次。给药结束后观察各组小鼠神经行为学评分；采用2，3，5-氯化三苯基四氮唑染色法观察脑梗死体积；采用实时荧光定量聚合酶链式法检测Beclin-1 mRNA，LC3B mRNA和p62 mRNA表达；采用酶联免疫吸附试验检测Beclin-1，LC3B和p62含量。结果：与假手术组比较，模型组小鼠缺血区域体积、神经损伤程度、Beclin-1和LC3B表达均增加（P0.01），p62及其mRNA表达降低（P0.01）；与模型组比较，益脑康各剂量组小鼠缺血区域体积、神经损伤程度、Beclin-1和LC3B表达均降低（P0.05），p62表达增加（P0.05）。结论：益脑康胶囊对缺血再灌注模型小鼠自噬进程具有一定减缓作用，能减少Beclin-1和LC3B表达，增加p62表达。关键词 脑卒中；缺血再灌注；自噬；益脑康中图分类号 R34 文献标识码 A 文章编号 2096-9600（2023）09-0010-05Effects of Yinaokang Capsules on Autophagy-related Factors Beclin-1,LC3B and p62 in Mice Model of Ischemia Reperfusion DENG Minzhen1，2,ZHONG Xiaoqin2,GAO Zhijie1,PENG Lilin1，2,CHENG Xiao1，2,SUN Jingbo1，21 Guangdong Provincial Hospital of Chinese Medicine/The Second Affiliated Hospital of Guangzhou University of Chinese Medicine/Guangdong Academy of Traditional Chinese Medicine,Guangzhou 510120,China;2 Guangzhou University of Chinese Medicine,Guangzhou 510006,ChinaAbstractAbstract Objective:To study the effects of Yinaokang capsules on autophagy-related factors Beclin-1,LC3B and p62 in mice model of ischemia-reperfusion injury(IRI).Methods:IRI mice models were established using middle cerebral artery occlusion method.Mice models after successful modeling were divided into the model group,low(1 g/kg),moderate(3 g/kg)and high(9 g/kg)doses groups of Yinaokang capsules using random number table method,with six in each group,sham operation group and the model group were drenched with equal volume of saline,different dose groups of Yinaokang capsules were administered for three consecutive days by gavage,twice each day.By the end of medication,to observe neurobehavioral scores of the mice in different groups;2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride staining method was used to observe the volume of cerebral infarction;real-time fluorescence quantitative polymerase chain method was adopted to detect the expressions of Beclin-1 mRNA,LC3B mRNA and p62 mRNA;ELISA to measure the contents of Beclin-1,LC3B and p62.Results:Compared with sham operation group,volume ratio of ischemic area,degree of nerve damage,the expressions of Beclin-1 and LC3B increased in the model group(P0.01),the expression of p62 and p62 mRNA reduced(P0.01);compared with the model group,volume ratio of ischemic area,degree of nerve damage,the expressions of Beclin-1 and LC3B lowered in different doses groups of Yinaokang capsules(P0.05),the expressions of p62 increased(P0.05).Conclusion:Yinaokang capsule has a certain effects on slowing down the autophagy process of IRI mice,manifested by reducing the expressions of Beclin-1,LC3B,and increasing the expressions of p62.KeywordsKeywords stroke;ischemia-reperfusion;autophagy;Yinaokang capsulesDOI：10.12174/j.issn.2096-9600.2023.09.0310中 国 科 技核 心 期 刊药 理 研 究方方 药药 2023年第36卷第9期脑卒中的病因主要是由于机体脑组织受到急性期或慢性期局部供血不足或供血中断而引起的局灶性损伤，其中缺血性脑卒中（ischemic stroke，IS）占 80%，具有发病率高、致残率高和致死率高等特点1-2。急性期IS西医主要采用溶栓治疗，具有局限性大和风险性高的特点，容易进一步引发缺血再灌注损伤，多数患者无法获得满意治疗，如超过治疗时间窗或严重肝肾功能不全等禁忌症3。由于目前可以改善IS患者脑循环的西药较少，且毒副作用明显；中医活血化瘀类中药具有改善脑循环作用，能整体调节患者机能，并有助于恢复患者的神经功能，可见中医治疗恢复期IS具有明显优势4。自噬具有各细胞成分更新功能，主要表现在降解及再循环异常的蛋白质或细胞器5。研究发现，生理状态下，自噬具有双向调节作用，一定程度的自噬可保护细胞生理功能，但脑缺血再灌注会过度激活自噬，严重者导致神经细胞死亡6。还有研究指出，抑制自噬可一定程度减少氧糖剥夺刺激作用下神经元的死亡7。益脑康是广东省名老中医刘茂才教授的经验方，是治疗动脉粥样硬化性急性缺血中风的常用院内制剂8。研究证明益脑康胶囊具有促进微血管再生，抑制新血管生成，修复损伤的内皮细胞并调节其功能恢复和抑制炎性反应功能9-10。本研究通过观察益脑康胶囊对脑缺血再灌注损伤小鼠脑组织及自噬相关因子表达的影响，探讨益脑康胶囊防治缺血性中风的作用机制。1 材料与方法1.1动物C57BL/6小鼠50只，雄性，SPF级，体质量（202）g，由广东省医学实验动物中心提供，实验动物许可证号：SYXK（粤）2018-0094，饲养于广东省中医药科学院实验动物中心，温度（232）C，相对湿度（455）%。小鼠适用性环境饲养3天后进行后续实验。1.2药物与试剂益脑康胶囊（广东省中医院院内制剂，批号：180804，规格：0.5 g/粒）；水合氯醛（上海麦克林生化科技有限公司，批号：C10232286，规格：100 g/瓶，纯度99.0%）；2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC，美国sigma公司，货号：T8877）；MCAO栓线（北京西浓科技有限公司，货号：1620A4）；Trizol试剂（美国thermo公司，货号：191012）；逆转录反应试剂盒（日本TAKARA公司，货号：RR047A）；扩 增 反 应 试 剂 盒（日 本 TAKARA 公 司，货 号：RR086A）；肌球蛋白样 BCL2 结合蛋白（myosin-like BCL2 interacting protein，Beclin-1）、微管相关蛋白1的轻链3B（microtubule associated protein light chain 3B，LC3B）和泛素结合蛋白62（sequestosome 1，p62）ELISA 试剂盒（南京草本源生物科技有限公司，批号：07/2018）。1.3仪器ME403电子天平 梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司；T10匀浆机（艾卡仪器设备公司）；5804R 冷冻离心机（德国艾本德公司）；EonC 全波长酶标仪（美国伯腾仪器有限公司）；Nanodrop2000 超微量紫外/可见光光度计（美国Thermo 公司）；CFX96 荧光定量 PCR 仪（美国 Bio-Rad公司）。1.4动物造模脑缺血再灌注损伤小鼠模型按照大脑中动脉栓塞（middle cerebral artery occlusion，MCAO）法建立11。小鼠用 10%水合氯醛（350 mg/kg）腹腔注射后仰卧位固定，对颈部手术部位进行备皮消毒，颈部正中切口，分离右侧颈总动脉、颈内动脉和颈外动脉，颈总动脉暂时阻断血流，然后将颈外动脉结扎并游离。在颈外动脉游离端处剪一小口，将MCAO线栓由剪口处插入，经颈总动脉拐向颈内动脉的大脑中动脉起始处。栓塞1 h后拔出线栓（栓塞期间注意小鼠保暖），结扎颈外动脉，形成缺血再灌注损伤模型，颈部切口处结扎缝合。假手术组小鼠按造模方法进行血管分离操作但不插入MCAO线栓。1.5分组与给药造模结束小鼠苏醒后，将神经评分不小于1的小鼠随机分为模型组及益脑康低（1 g/kg）、中（3 g/kg）、高（9 g/kg）剂量组，每组10只，连续灌胃给药3天，每天2次。假手术组和模型组小鼠（各10只）给予等体积生理盐水，连续3天，每天2次。1.6观察指标1.6.1脑梗死体积 采用2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色法，末次给药结束后，小鼠麻醉过量致死，将脑迅速取出，置于预冷脑槽中以每片2 mm厚度进行冠状切片，将切片置于TTC溶液中37 浸泡30 min，每15 min翻转切片1次，其中白色部分为脑梗死区域，正常组织染色为红色。用照相机拍照后，再用Image J软件进行分析。脑梗死体积比例（%）=白色脑梗死体积/大脑体积100%1.6.2神经损伤情况末次给药结束后对各组小鼠进行神经行为学评分11，评分标准：0分行动自如，无明显功能障碍；1分造模对侧前肢不能伸展，如握拳状；2分向健侧旋转圈，呈追尾状；3分行走身体倾倒；4分无行动欲望伴意识障碍。11Western Journal of Traditional Chinese Medicine,2023 Vol.36 No.9中 国 科 技核 心 期 刊药 理 研 究方方 药药 1.6.3Beclin-1 mRNA，LC3B mRNA 和 p62 mRNA表达实时荧光定量聚合酶链式（real-time PCR，RT-PCR）法检测半暗带区域组织 Beclin-1 mRNA，LC3B mRNA和 p62 mRNA表达。将各组小鼠的第2个脑片半暗带区组织，按100 mg重量加入1 mL Trizol 比例提取总 RNA。测量总 RNA 浓度后，使用逆转录试剂盒在以下条件下合成 cDNA：42 2 min，温度降至 4 取出。按扩增试剂盒操作在CFX96 PCR仪中进行RT-PCR，PCR反应条件：95 1 min，40 个循环的 95 10 s 和60 30 s。用2-Ct数值表示目的基因相对表达量。引物序列由广州真知生物有限公司设计与合成，引物序列：Beclin-1：上游5-GCTGTAGCCAGCCTCTGAAA-3，下游5-AATGGCTCCTGTGAGTTCCTG-3，长度80 bp；LC3B：上 游 5-GGGACCCTAACCCCATAGGA-3，下游5-TCTCCCCCTTGTATCGCTCT-3，长度111 bp；p62：上游 5-ACTGCTCAGGAGGAGACGAT-3，下游5-CCGGGGATCAGCCTCTGTAG-3，长度77 bp；-actin：上游 5-CACTGTCGAGTCGCGTCC-3，下游5-CGCAGCGATATCGTCATCCA-3，长度102 bp。1.6.4半暗带区组织Beclin-1，LC3B和p62含量检测酶联免疫吸附法（Enzyme-linked immu-nosorbent assay，ELISA）检测半暗带区组织Beclin-1，LC3B 和 p62 含量。将各组小鼠第 3 个脑片半暗带区组织，按100 mg重量加入9 mL生理盐水进行冰上匀浆，经离心半径10 cm，3500 r/min 15 min低温离心后得上清液，按ELISA试剂盒步骤操作，最后在450 nm处检测各组吸光度。1.7统计学方法采用 SPSS 22.0软件分析数据，计量资料以x s表示，采用单因素方差分析，P0.05为差异有统计学意义。2 结果2.1小鼠脑梗死（缺血区域）体积与假手术组比较，模型组小鼠缺血区域体积增加（P0.01）；与模型组比较，益脑康各剂量组小鼠缺血区域体积减少（P0.05）。见表1。2.2小鼠神经损伤情况与假手术组比较，模型组小鼠神经损伤程度增加（P0.01）；与模型组比较，益脑康各剂量组小鼠神经损伤程度减少（P0.05）。见表2。2.3小鼠半暗带组织Beclin-1 mRNA、LC3B mRNA和p62 mRNA表达与假手术组比较，模型组小鼠Beclin-1 mRNA 和 LC3B mRNA 增加（P0.01），p62 mRNA减少（P0.01）；与模型组比较，益脑康各剂量组小鼠Beclin-1 mRNA和LC3B mRNA减少（P0.01），p62 mRNA增加（P0.05）。见表3。2.4小鼠半暗带组织Beclin-1，LC3B和p62蛋白含量与假手术组比较，模型组小鼠Beclin-1和LC3B蛋白含量增加（P0.01），p62蛋白含量减少（P0.01）；与模型组比较，益脑康各剂量组小鼠Beclin-1和LC3B蛋白含量减少（P0.01），p62蛋白含量增加（P0.01）。见表4。表1各组小鼠脑梗死（缺血区域）体积比例（x s）组别假手术组模型组益脑康低剂量组益脑康中剂量组益脑康高剂量组鼠数1010101010剂量（g/kg）-139脑梗死（缺血区域）体积比例（%）3.000.3545.623.65*38.622.53*#30.602.06*#21.651.36*#注：与假手术组比较，*表示P0.01；与模型组比较，#表示P0.05，#表示P0.01；-表示等体积生理盐水表2各组小鼠神经评分（x s）组别假手术组模型组益脑康低剂量组益脑康中剂量组益脑康高剂量组鼠数1010101010剂量（g/kg）-139神经评分（分）0.000.003.200.16*2.000.11*#1.800.09*#1.400.10*#注：与假手术组比较，*表示P0.01；与模型组比较，#表示P0.05，#表示P0.01；-表示等体积生理盐水表3各组小鼠半暗带组织Beclin-1 mRNA，LC3B mRNA和p62 mRNA表达（x s）组别假手术组模型组益脑康低剂量组益脑康中剂量组益脑康高剂量组鼠数1010101010剂量（g/kg）-139Beclin-1 mRNA1.020.5112.321.55*7.670.46*#6.140.42*#4.270.50*#LC3B mRNA1.000.1110.580.61*6.330.60*#4.190.38*#2.340.19*#p62 mRNA1.030.040.300.03*0.420.03*#0.570.05*#0.840.08*#注：与假手术组比较，*表示P0.05，*表示P0.01；与模型组比较，#表示P0.05，#表示P0.01；-表示等体积生理盐水12中 国 科 技核 心 期 刊药 理 研 究方方 药药 2023年第36卷第9期3 讨论脑卒中通常与严重神经功能下降和死亡率有关，其高致残率为患者带来了沉重的经济和社会负担12。IS是脑卒中死亡的首要原因，其发病机制尚不明确13。中药复方具有多靶点、多成分、多机制的特点，治疗脑缺血具有较好的疗效14-15。益脑康胶囊被列入国家科技部“十五”攻关课题“急性缺血中风辨证规范与疗效评价的示范研究”中医综合方案16。但益脑康胶囊对脑卒中的作用机制尚不明确，因此本研究探讨益脑康胶囊对IS模型小鼠的作用机制。中风事件大多归因于大脑中动脉阻塞，最近研究说明较为理想的局灶性脑缺血模型是采用线栓法制备的小鼠局灶性脑缺血模型，有利于脑血管疾病的基础研究17。TTC是一种无色水溶性染料，主要在活细胞的线粒体中还原为深红色水不溶性化合物（甲酰胺），用TTC对新鲜脑切片进行浸没染色是实验性卒中模型中检测梗死的一种简单且流行的方法，可区分中风后的存活和梗死的脑组织18。本研究发现，模型组小鼠脑梗死体积较假手术组明显增加，神经功能评分升高，提示造模成功。益脑康各剂量组小鼠神经功能评分较模型组减少，提示益脑康胶囊对IS模型小鼠有较好保护作用。自噬是维持细胞内环境稳态的生理过程，其中Beclin-1是自噬的调控基因和特异性基因，它是自噬启动的关键因子，关键蛋白是LC3，具有控制自噬膜形成和自噬体与溶酶体融合的功能，LC3B的产生是自噬的标志，能间接反映自噬程度与水平，其含量与自噬强度呈正相关19-20。p62是能在自噬溶酶体内发生降解可特异性识别泛素化的蛋白，研究发现其表达水平的高低与自噬水平呈负相关21。本研究表明，通过线栓法制备的局灶性脑缺血模型小鼠的 Beclin-1 和 LC3 表达增加，p62表达减少，提示IS自噬程度显著增加。益脑康胶囊各剂量组小鼠 Beclin-1 和 LC3 表达减少，p62表达增加，提示益脑康胶囊有一定减缓自噬激活的作用。综上所述，益脑康胶囊对IS模型小鼠具有神经保护作用，其机制主要是抑制自噬过度激活，表现为减少 Beclin-1和 LC3表达及增加 p62表达。这可为益脑康胶囊的进一步临床研究和基础研究提供依据。参考文献1ZHANG W F，JIN Y C，LI X M，et al.Protective effects of leptin against cerebral ischemia/reperfusion injury J.Exp Ther Med，2019，17（5）：3282-3290.2汪继涛，刘天龙，李玉文.Z-没药甾酮联合11-羰基-乙酰乳香酸对脑缺血再灌注损伤模型大鼠的改善作用研究 J.中国药房，2019，30（24）：3354-3359.3李佳娜，郭苏兰，肖水秀.莪术二酮对脑缺血再灌注损伤小鼠认知功能及神经功能的保护作用研究 J.中国比较医学杂志，2020，30（2）：84-89.4中国中西医结合学会神经科专业委员会.中国脑梗死中西医结合诊治指南：2017 J .中国中西医结合杂志，2018，38（2）：136-144.5HUANG Z X，LIU Y F，HUANG X P.Formononetin may pro-tect aged hearts from ischemia/reperfusion dam-age by enhancing autophagic degradationJ.Mol Med Rep，2018，18（6）：4821-48306TAO J H，SHEN C，SUN Y C，et al.Neuroprotective effects of pinocembrin on ischemia/reperfusion-induced brain injury by inhibiting autophagyJ.Biomed Pharma-cother，2018，106：1003-10107HOU Y，WANG J，FENG J.The neuroprotective effects of curcumin are associated with the regulation of the reciprocal function between autophagy and HIF-1in cerebral ischemia-reperfusion injury J.Drug Des Devel Ther，2019，13：1135-11448李跃，孙景波，黄燕.益脑康胶囊对脑梗死大鼠溶栓后血脑屏障的保护作用及对ZO-1蛋白表达的影响 J.中国实验方剂学杂志，2013，19（11）：268-271.9GUO J W，CHEN C，HUANG Y，et al.Combinatorial effects of naomai yihao capsules and vascular endothelial growth factor gene-transfected bone marrow mesen-chymal stem cells on angiogenesis in cerebral ischemic tissues in ratsJ.J Tradit Chin Med，2012，32（1）：87-92.10 朱磊，张彦红，时光，等.益脑康对动脉粥样硬化性急性脑缺血大鼠血清NO、VEGF及PDGF-BB含量的影响 J.中华中医药杂志，2012，27（8）：2048-2051.11 YIN K J，DENG Z，HAMBLIN M，et al.Peroxisome prolif-表4各组小鼠半暗带组织Beclin-1，LC3B和p62蛋白含量（x s）组别假手术组模型组益脑康低剂量组益脑康中剂量组益脑康高剂量组鼠数1010101010剂量（g/kg）-139Beclin-1（ng/g）8.540.6543.042.76*30.231.35*#22.351.68*#15.120.74*#LC3B（ng/g）12.550.8167.503.75*55.623.01*#43.462.53*#30.291.64*#p62（ng/g）90.565.5021.292.75*36.111.95*#52.592.65*#64.433.47*#注：*表示与假手术组比较，P0.01；#表示与模型组比较，P0.01；-表示等体积生理盐水13Western Journal of Traditional Chinese Medicine,2023 Vol.36 No.9中 国 科 技核 心 期 刊药 理 研 究方方 药药 erator-activated receptor delta regulation of miR-15a in ischemia-induced cerebral vascular endothe-lial injury J.J Neurosci，2010，30（18）：6398-6408.12 YU J，WANG W N，MATEI N，et al.Ezetimibe Attenuates Oxidative Stress and neuroinflammation via the AMPK/Nrf2/TXNIP PAthway after MCAO in rats J.Ox-id Med Cell Longev，2020，2020：1-14.13 LU C，DU X，HE X L，et al.Neuroprotective effect of active components of Xiaoxuming decoction on focal cerebral ischemia/reperfusion injury in rats during early recovery period J.Chin Pharmocol Bull，2016，32（7）：938-94414 张艾嘉，王爽，王萍，等.缺血性脑卒中的病理机制研究进展及中医药防治 J.中国实验方剂学杂志，2020，26（5）：227-240.15 朱根福,叶譞斐,陈根成.益气活血法治疗中风恢复期临床疗效观察 J.西部中医药，2014，27(7):64-66.16 张彥红，朱磊，陈杰，等.益脑康对动脉粥样硬化性缺血中风大鼠脑组织和血液ICAM-1表达的影响 J.中医药临床杂志，2013，25（7）：568-570.17 缪培，张通，米海霞.基于线栓法大鼠大脑中动脉闭塞的局灶性脑缺血模型的比较研究 J.中国康复理论与实践，2016，22（10）：1190-1195.18 SUN Y Y，YANG D，KUAN C Y.Mannitol-facilitated per-fusion staining with 2，3，5-triphenyltetrazolium chloride（TTC）for detection of experimental cere-bral infarction and biochemical analysis J.J Neu-rosci Methods，2012，203（1）：122-129.19 武岳，于卉影.自噬对持续性正加速度暴露大鼠Beclin-1、LC3-表达水平及学习记忆、行为能力影响研究 J.临床军医杂志，2020，48（2）：137-140.20 孔志伟，姚婷婷.自噬相关基因Beclin1和LC3与子宫内膜异位症的研究进展 J.医学综述，2019，25（21）：4166-4173.21 LIPPAI M，LW P.The role of the selective adaptor p62 and ubiquitin-like proteins in autophagyJ.Biomed Res Int，2014，2014：832704-832714.收稿日期：2023-02-18*基金项目：国家自然科学基金（81904104）；广东省中医药局科研基金（20211203）；广州中医药大学2017年高水平大学建设计划（A1-AFD018171Z11096）；广东省中医院中医药科学技术研究专项（YN2018ZD07）。作者简介：邓敏贞（1987），女，博士学位，副研究员。研究方向：脑病的中医药治疗。通讯作者：孙景波（1962），男，博士学位，研究员。研究方向：脑病的中医药治疗。益气养阴活血法对特发性肺纤维化大鼠血管新生的影响陈炜，张念志，胡梦娟安徽中医药大学第一附属医院，安徽 合肥 230031摘 要 目的：研究益气养阴活血法对特发性肺纤维化（idiopathic pulmonary fibrosis，IPF）大鼠血清低氧诱导因子1（hypoxia inducible factor-1，HIF-1）、血小板源性生长因子（platelet-derived growth factor，PDGF）、色素上皮衍生因子（pigment epithelium derived factor，PEDF）和内皮生长抑制素（end-ostatin，ES）的影响。方法：将128只大鼠随机分为空白组、模型组、泼尼松组、参七虫草组，每组32只，采用气管滴注博来霉素方法进行IPF造模，第7、14、21、28天检测大鼠血清HIF-1、PDGF、PEDF、ES含量。结果：造模后第 7、14、21、28 天，模型组、泼尼松组、参七虫草组大鼠血清 HIF-1、PDGF、PEDF、ES 含量高于空白组（P0.01）；与模型组比较，泼尼松组与参七虫草组各时间点大鼠血清HIF-1、PDGF含量降低（P0.01），PEDF、ES表达升高（P0.01）；各时间点大鼠血清各指标泼尼松组与参七虫草组比较差异无统计学意义（P0.05）。结论：益气养阴活血法可干预IPF大鼠肺纤维化进程，机制可能与调节血管新生相关因子从而抑制血管新生有关。关键词 特发性肺纤维化；血管新生；益气养阴活血法中图分类号 R223.1+1 文献标识码 A 文章编号 2096-9600（2023）09-0014-05The Effects of Benefiting-Qi Nourishing-Yin Activating-blood Method on Angiogenesis in Rats with Idiopathic Pulmonary Fibrosis CHEN Wei,ZHANG Nianzhi,HU Mengjuan The First Affiliated Hospital of Anhui University of CM,Hefei 230031,ChinaAbstractAbstract Objective:To discuss the influence of benefiting-Qi nourishing-Yin activating-blood method on DOI：10.12174/j.issn.2096-9600.2023.09.0414