GB 31656.13-2021 食品安全国家标准 水产品中硝基呋喃类代谢物多残留的测定 液相色谱－串联质谱法.pdf

食品安全国家标准水产品中硝基呋喃类代谢物多残留的测定液相色谱-串联质谱法50中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准备案号：XXXX-XXXX67.050CCS X31656.132021National food safety standardDetermination of nitrofuran metabolites residues in aquatic productsby liquid chromatography-tandem mass spectrometry methodGB2021?09?16发布2022?02?01实施中华人民共和国国家卫生健康委员会发 布国 家 市 场 监 督 管 理 总 局中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部G B 前言本文件按照G B/T 标准化工作导则第部分: 标准化文件的结构和起草规则 的规定起草.本文件系首次发布.G B 食品安全国家标准水产品中硝基呋喃类代谢物多残留的测定液相色谱串联质谱法范围本文件规定了水产品中硝基呋喃类代谢物 氨基 唑烷基酮( a m i n o o x a z o l i d i n o n e,AO Z) 、 吗啉甲基 氨基 唑烷基酮( m o r p h o l i n o m e t h y l a m i n o o x a z o l i d i n o n e,AMO Z) 、 氨基 内酰脲( a m i n o h y d a n t o i n,AHD) 和氨基脲(s e m i c a r b a z i d e,S EM) 残留量的制样和液相色谱串联质谱测定方法.本文件适用于鱼、 海参及鳖等水产品可食组织中硝基呋喃类代谢物AO Z、AMO Z、AHD和S EM残留量的测定, 以及虾和蟹等甲壳类可食组织中AO Z、AMO Z和AHD的测定.规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中, 注日期的引用文件, 仅该日期对应的版本适用于本文件; 不注日期的引用文件, 其最新版本( 包括所有的修改单) 适用于本文件.G B/T 分析实验室用水规格和试验方法G B/T 水产品抽样规范术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义.原理试料中残留的硝基呋喃类蛋白结合态代谢物在酸性条件下水解, 经 硝基苯甲醛衍生化, 用乙酸乙酯液液萃取, 高速离心净化, 液相色谱串联质谱测定, 内标法定量.试剂与材料除另有规定外, 所有试剂均为分析纯, 水为符合G B/T 规定的一级水. 试剂 甲醇(CHOH) : 色谱纯. 乙酸铵(CHC OONH) 色谱纯. 乙酸乙酯(CHO) : 色谱纯. 二甲亚砜 (CH)S O : 色谱纯. 硝基苯甲醛(CHNO) : 色谱纯. 无水磷酸氢二钾(KHP O) . 盐酸(HC l) . 溶液配制 m o l/L盐酸溶液: 取盐酸 mL, 用水稀释至 mL, 混匀. m o l/L乙酸铵溶液: 取乙酸铵 g, 用水溶解并稀释至 mL, 混匀. m o l/L 硝基苯甲醛溶液: 取 硝基苯甲醛 g, 用二甲亚砜溶解并稀释至 mL, 混匀, 现用现配. m o l/L磷酸氢二钾溶液: 取无水磷酸氢二钾 g, 用水溶解并稀释至 mL, 混匀. 甲醇溶液: 取甲醇mL, 用水稀释至 mL, 混匀.G B 标准品 硝基呋喃类代谢物:A O Z、AMO Z、AH DH C l和S EMH C l, 含量均 , 具体内容见附录A. 内标:AO Z D、AMO Z D、AHD C和S EMHC l C, N, 含量均 , 具体内容见附录A. 标准溶液配制 标准储备液: 取AO Z、AMO Z、AHDHC l、S EMHC l标准品各适量( 相当于活性成分 m g) ,精密称定, 加甲醇适量使溶解并定容至 mL棕色容量瓶, 配制成浓度为 m g/mL标准储备液. 避光保存, 有效期个月. 混合标准中间液: 分别准确量取标准储备液适量, 用甲醇逐级稀释, 配制成浓度为 g/mL混合标准中间液.避光保存, 有效期个月. 混合标准工作液: 分别准确量取混合标准中间液各mL于 mL和 mL棕色容量瓶, 用甲醇稀释至刻度, 配制成浓度为 g/L和 g/L混合标准工作液.现用现配. 同位素内标标准储备液: 取AO Z D、AMO Z D、AHD C和S EMHC l C, N标准品各适量( 相当于活性成分 m g) , 精密称定, 加甲醇适量使溶解并稀释定容至 mL棕色容量瓶, 配制成浓度为 m g/m L内标标准储备液. 避光保存, 有效期个月. 混合内标标准工作液: 分别准确量取同位素内标标准储备液适量, 用甲醇逐级稀释, 配制成浓度为 g/L混合内标标准工作液. 避光保存, 有效期个月.仪器和设备 液相色谱串联质谱仪: 配电喷雾电离源. 分析天平: 感量 g和 g. 离心机: r/m i n. 高速离心机: r/m i n. 涡旋混合器. 恒温振荡器. 氮吹仪.试料的制备与保存 试料的制备按G B/T 附录B的要求制样.a)取均质的供试料品, 作为供试试料;b)取均质的空白样品, 作为空白试料;c)取均质的空白样品, 添加适宜浓度的标准溶液, 作为空白添加试料. 试料的保存 以下保存.测定步骤 水解与衍生化取试料g( 精确至 g) , 于 m L聚丙烯离心管中, 准确加入混合内标标准工作液 L, 涡旋混合m i n, 加盐酸溶液m L、 硝基苯甲醛溶液 m L, 涡旋混合m i n, 置于恒温振荡器中, 避光振荡 h. 提取净化取出离心管冷却至室温, 用磷酸氢二钾溶液调p H至 , 加乙酸乙酯mL, 涡旋振荡 s, r/m i n离心m i n, 取上清液至 mL玻璃离心管, 氮气吹干.加甲醇溶液 mL溶解残G B 留物, 再将溶液转移至 mL离心管中, 以 r/m i n的转速离心 m i n, 取清液过 m滤膜, 供液相色谱串联质谱分析. 标准曲线的制备分别准确移取 g/L和 g/L混合标准工作液各 mL、 mL、 mL于个 mL离心管中, 除不加试料外, 按 和 步骤操作, 使最终浓度分别为 g/L、 g/L、 g/L、 g/L、 g/L、 g/L, 按 测定.以测得特征离子质量色谱峰外标和内标峰面积比值为纵坐标, 对应的标准溶液浓度为横坐标, 绘制标准曲线, 求回归方程和相关系数. 测定 液相色谱参考条件a)色谱柱:C 色谱柱( mm mm, m) , 或相当者.b)柱温: ;c)进样量: L;d)流速: mL/m i n;e)流动相:A为 m o l/L乙酸铵溶液,B为甲醇.梯度洗脱条件见表.表流动相梯度洗脱条件时间m i nAB 质谱参考条件a)离子源: 电喷雾离子源;b)扫描方式: 正离子扫描;c)检测方式: 多反应离子监测(MRM) ;d)脱溶剂气、 锥孔气、 碰撞气均为高纯氮气或其他合适气体;e)喷雾电压、 碰撞能等参数应优化至最优灵敏度;f)监测离子参数情况见表.表硝基呋喃类代谢物特征离子参考质谱条件化合物定性离子对m/z定量离子对m/z去簇电压V碰撞能e VAO Z AO Z D AMO Z AMO Z D AHD AHD C S EM S EM C, N G B 测定法 定性测定在同样测试条件下, 试料溶液中硝基呋喃类代谢物的保留时间与标准溶液中硝基呋喃类代谢物的保留时间之比, 偏差在 以内, 且检测到的相对离子丰度, 应当与浓度相当的校正标准溶液相对丰度一致.其允许偏差应符合表的要求.表定性确证时相对离子丰度的最大允许误差单位为百分号相对离子丰度允许偏差 定量测定取试料溶液和相应的标准溶液, 作单点或多点校准, 以色谱峰面积定量, 按内标法计算, 标准溶液及试料溶液中的硝基呋喃类代谢物响应值均应在仪器检测的线性范围内.在上述液相色谱质谱条件下, 硝基呋喃类代谢物标准溶液的液相色谱质谱图见附录B. 空白试验取空白试料, 除不加标准溶液外, 采用相同的测定步骤进行平行操作.结果计算和表述试料中硝基呋喃类代谢物的残留量按标准曲线法或公式() 计算.XAiA iSCSCiSVAiSASC iSm()式中:X 试料中硝基呋喃类代谢物的残留量的数值, 单位为微克每千克(g/k g) ;CiS 试料溶液中硝基呋喃类代谢物内标浓度的数值, 单位为微克每升(g/L) ;CS 对照溶液中硝基呋喃类代谢物浓度的数值, 单位为微克每升(g/L) ;C iS 对照溶液中硝基呋喃类代谢物内标浓度的数值, 单位为微克每升(g/L) ;Ai 试料溶液中硝基呋喃类代谢物的峰面积;AiS 试料溶液中硝基呋喃类代谢物内标的峰面积;AS 对照溶液中硝基呋喃类代谢物的峰面积;A iS 对照溶液中硝基呋喃类代谢物内标的峰面积;V 定容体积的数值, 单位为毫升(mL) ;m 试料质量的数值, 单位为克(g) . 检测方法的灵敏度、 准确度和精密度 灵敏度本方法AO Z、S EM、AMO Z、AHD的检测限均为 g/k g, 定量限均为 g/k g. 准确度本方法在 g/k g g/k g添加浓度水平上的回收率为 . 精密度本方法的批内相对标准偏差 , 批间相对标准偏差 .G B 附录A( 资料性)药物中英文名称、 化学分子式和C A S号药物中英文名称、 化学分子式和C A S号见表A .表A 种硝基呋喃类代谢物及内标中英文名称、 化学分子式和C A S号中文通用名称英文名称化学分子式C A S号 氨基 唑烷基酮(AO Z) Am i n o o x a z o l i d i n o n eCHNO 吗啉甲基 氨基 唑烷基酮(AMO Z) M o r p h o l i n o m e t h y l a m i n o o x a z o l i d i n o n eCH NO 氨基 内酰脲盐酸盐(AHDHC l) Am i n o h y d a n t o i nh y d r o c h l o r i d eCHNOHC l 氨基脲盐酸盐(S EMHC l)S e m i c a r b a z i d eh y d r o c h l o r i d eCHNOHC l 氨基 唑烷基酮 D(AO Z D) Am i n o o x a z o l i d i n o n e DCHDNO 吗啉甲基 氨基 唑烷基酮 D(AMO Z D) Am i n o m o r p h o l i n o m e t h y l o x a z o l i d i n o n e DCH DNO 氨基 内酰脲 C(AHD C) Am i n o h y d a n t o i n C CHNO 氨基脲盐酸盐 C, N(S EMHC l C, N)S e m i c a r b a z i d eh y d r o c h l o r i d e C, N CHN NOHC l G B 附录B( 资料性)特征离子质量色谱图硝基呋喃类代谢物标准溶液特征离子质量色谱图见图B .图B 硝基呋喃类代谢物标准溶液特征离子质量色谱图( g/L)31656.132021GBGB31656.132021书 书 书1 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?