植物组培的条件.doc

植物组织培养实验教学中所需要的实验条件
植物组织培养的大致过程是：在无菌条件下，将植物器官或组织（如芽、茎尖、根尖或花药）的一部分切下来，放在适当的人工培养基上进行培养，这些器官或组织就会进行细胞分裂，形成新的组织。不过这种组织没有发生分化，只是一团薄壁细胞，叫做愈伤组织。再适合的光照、温度和一定的营养物质与激素等条件下，愈伤组织便开始分化，产生出植物的各种器官和组织，进而发育成一棵完整的植株。
一、培养条件
1、温度：大多数植物23-32℃，一般25±2 ℃。低于15 ℃或高于35 ℃对植物的生长不利，其中26～27℃最适合。
2、光：包括光照强度、时间长短、光照质量等。组织培养通常在散射光线下进行。光的影响可导致不同的结果。有些植物组织在暗处生长较好，而另一些植物组织在光亮处生长较好，但由愈伤组织分化成器官时，则每日必须要有一定时间的光照才能形成芽和根。有些次生物质的形成，光是决定三因素。
3、渗透压： 渗透压对植物组织的生长和分化很有关系。在培养基中添加食盐、蔗糖、甘露醇和乙二醇等物质可以调整渗透压。通常1～2个大气压可促进植物组织生长，2个大气压以上时，出现生长障碍，6个大气压时植物组织即无法生存。
4、酸碱度： 一般植物组织生长的最适宜pH为5～6．5。在培养过程中pH可发生变化，加进磷酸氢盐或二氢盐，可起稳定作用。
5、湿度条件
   培养容器中湿度100％
   培养室的湿度一般70 ％ -80 ％的相对湿度。
6、通气： 悬浮培养中细胞的旺盛生长必须有良好的通气条件。小量悬浮培养时巨常转动或振荡，可起通气和搅拌作用。大量培养中可采用专门的通气和搅拌装置。
二、实验设备
（一）可以分为几个室
１、洗涤室（区）
   玻璃器皿和塑料器皿
２、药品室
   存放常用的化学试剂、无机盐类、有机物、生长调节剂等
３、制备室
   培养基的配制等
4、灭菌室 即消毒室，是培养基、玻璃器皿、塑料器皿和其他物品消毒灭菌的地方
5、操作室也称接种室，是开展组织培养研究包括接种、继代、细胞融合等的场所。
  要求：干爽安静，清洁明亮，墙壁光滑平整不易积污灰尘，地面平坦无缝便于清洗和灭菌。
6、培养室是将接种到培养瓶等器皿中的植物材料进行培养的场所。
   主要设备：空调机、除湿机、换气扇、培养架、灯光等
（二）设备
1、冰箱   陈列于制备室中
作用：低温保存材料，存放药品、培养基母液、激素、酶制剂。
2、灭菌锅 陈列于灭菌室中
类型：普通医用消毒锅
　　　大的高压灭菌锅
作用：培养基、水和各种器皿的消毒
3、超净工作台 陈列于操作室（接种室）中
类型：垂直式和水平式
作用：无菌操作用
4、酸度计 陈列于制备室中
作用：测定培养基及酶制剂的ｐＨ值
5、天平 陈列于制备室中
作用：称取大量元素、微量元素、酶制剂
（三）仪器
1、培养容器
培养用的器皿要求透光度好，能耐高压蒸汽灭菌。根据培养目的和要求不同，可采用不同种类和规格的玻璃容器。
（1）试管
用于茎尖、花药、幼胚培养。一般要求试管口径要大，长度稍短，便于操作，以20mm*150mm、25mm*150mm、0mm*200mm为宜。
（2）三角瓶
是植物组织培养中最常用的培养容器，适于各种培养。接种外植体时多用容积为50毫升的三角瓶，一般实验用100毫升的三角瓶，生产育苗多用150毫升的三角瓶，液体振荡培养用300毫升以上的大三角瓶。优点是瓶口小，瓶底大，培养面积大，受光好，易放置，不易失水，培养效果好。缺点是价格较贵，易破损。
（3）果酱瓶或罐头瓶
用于组培苗的大量繁殖，生产中应用较多的是200~300毫升的果酱瓶或罐头瓶。优点是成本低，瓶口大，操作方便，透光好，空间大，培养材料生长健壮。但培养基容易失水，污染率较高。
（4）培养皿
用于无菌材料分离、无菌发芽、单细胞固体平板培养、胚和花药培养、滤纸灭菌等。常用的规格有60mm、90mm和120mm。
（5）封口材料
为防止培养基干燥和污染杂菌，培养容器瓶口需要一定的封口材料包扎。可用牛皮纸、硫酸纸、耐高温聚丙烯塑料，用线绳或耐高温橡皮筋捆扎，或用塑料瓶盖。
2、玻璃器皿  
（1）试剂瓶    用于各种试剂、母液的存放，有广口和细口之分，有白色和棕色之分。见光易分解的药品用棕色瓶保存。
（2）烧杯    用于配置各种母液和培养基。
（3）量筒    配制各种溶液及培养基是测量用。
（4）容量瓶    用于配制各种溶液时定容用。
（5）移液管（吸管）    用于吸取各种母液和植物生长调节剂，有条件的可用微量可调移液器。
3、接种器械
（1）镊子    有直镊和枪镊之分，接种和转移材料常用枪镊，枪镊腰部弯曲，使用省力，枪镊规格有16cm、20cm、23cm、26cm、30cm。
（2）剪刀    有直剪和弯剪之分，用于剪取植物材料、茎段，进行继代培养的转接。
（3）解剖刀    用于切割植物材料。
（4）其他工具    包括接种针、接种铲等，用来接种花药或转移植物组织。
4、其他用品
灼烧工具的酒精灯，各种洗瓶刷，称药用的药勺，试管架，铝锅或不锈钢锅，托盘等